專(zhuān)利名稱(chēng)：復(fù)方雙黃連片的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，具體涉及一種復(fù)方雙黃連片的質(zhì)量控制方法。
中藥復(fù)方雙黃連片是本發(fā)明人創(chuàng)制的新藥，該藥劑是由金銀花、連翹與黃芩的提取物作為活性成份與藥用輔料組成的。該發(fā)明創(chuàng)造已由本發(fā)明人于2000年10月25日申請(qǐng)了發(fā)明名稱(chēng)“復(fù)方雙黃連制劑及制備方法”的發(fā)明專(zhuān)利，申請(qǐng)?zhí)枮?0125764.1。由于中藥的成分比較復(fù)雜，復(fù)方中藥制劑的質(zhì)量控制更是一大難題。本發(fā)明人對(duì)該中藥制劑的質(zhì)量控制進(jìn)行了探討和研究。
本發(fā)明的目的在于研究和設(shè)計(jì)復(fù)方雙黃連片的質(zhì)量控制方法。
本發(fā)明提供了復(fù)方雙黃連片的質(zhì)量控制方法，該方法包括下列特征(1)藥材金銀花、連翹、黃芩指紋譜測(cè)試；(2)雙黃連中間體質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試；(3)雙黃連中間體指紋譜測(cè)試；(4)雙黃連制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試；(5)雙黃連制劑指紋譜測(cè)試。
取以上供試液在上述色譜條件下進(jìn)行HPLC分析，按雙點(diǎn)校正法計(jì)算樣品中所含組分的含量，計(jì)算公式如下CX＝C1(C2-C1)*(AX-A1)/(A2-A1)C1、C2分別為標(biāo)準(zhǔn)品的量；A1、A2分別為標(biāo)準(zhǔn)品峰面積；CX、AX為樣品的量和峰面積。(2)金銀花和連翹提取物中連翹甙含量測(cè)定儀器與材料同上述連翹甙含量測(cè)定。樣品金銀花和連翹提取物(國(guó)家中藥制藥技術(shù)工程中心提供)色譜條件色譜柱Inertsil ODS-3，5μm，4.6mm*250mm(made in Japan).保護(hù)柱phenomenex C18(ODS)，4mmL*3.0mmID流動(dòng)相乙腈∶水＝28∶72，流速1ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm，柱溫室溫。標(biāo)準(zhǔn)曲線同上。樣品測(cè)定供試液的制備取金銀花和連翹提取物粉末，精密稱(chēng)取292mg，置于離心管中，加甲醇/水4ml置漩渦混合器上混旋1分鐘，再超聲振蕩提取15分鐘，離心，取上清液，殘?jiān)偌?ml甲醇/水超聲15分鐘，離心，取上清液，殘?jiān)?.5ml甲醇/水洗，洗液與上清液合并，定容至10ml容量瓶中。進(jìn)樣前用0.45um濾膜過(guò)濾。
取以上供試液在上述色譜條件下進(jìn)行HPLC分析，按雙點(diǎn)校正法計(jì)算樣品中所含組分的含量，計(jì)算公式如下CX＝C1+(C2-C1)*(AX-A1)/(A2-A1)C1、C2分別為標(biāo)準(zhǔn)品的量；A1、A2分別為標(biāo)準(zhǔn)品峰面積；CX、AX為樣品的量和峰面積。(3)黃芩提取物中黃芩甙含量測(cè)定儀器與材料。同上述黃芩甙含量測(cè)定。樣品黃芩提取物(國(guó)家中藥制藥技術(shù)工程中心提供)色譜條件色譜柱Inertsil ODS-3，5μm，4.6mm*250mm(made in Japan).保護(hù)柱phenomenex C18(ODS)，4mmL*3.0mmID流動(dòng)相甲醇∶水(含2％醋酸)＝65∶35，流速1ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm，柱溫室溫。標(biāo)準(zhǔn)曲線同上樣品測(cè)定供試液的制備取黃芩提取物，精密稱(chēng)取10mg，置于100ml容量瓶，加甲醇/水超聲振蕩，定容。進(jìn)樣前用0.45um濾膜過(guò)濾。
取以上供試液在上述色譜條件下進(jìn)行HPLC分析，按雙點(diǎn)校正法計(jì)算樣品中所含組分的含量，計(jì)算公式如下CX＝C1+(C2-C1)*(AX-A1)/(A2-A1)
C1、C2分別為標(biāo)準(zhǔn)品的量；A1、A2分別為標(biāo)準(zhǔn)品峰面積；CX、AX為樣品的量和峰面積。(4)超臨界萃取物的定性控制材料本實(shí)驗(yàn)所用復(fù)方連翹與金銀花提取物為超臨界二氧化碳共提物。儀器日本島津GC-9A氣相色譜儀Chromatopac C-E1B數(shù)據(jù)處理機(jī)實(shí)驗(yàn)方法氣相色譜條件選用SE-54石英彈性毛細(xì)管色譜柱，柱長(zhǎng)30m，內(nèi)徑0.32mm；氣化室250℃，柱溫為程序升溫50～230℃，4℃/min；載氣氮?dú)猓皦?.7kg/cm2；柱流量2ml/min，進(jìn)樣量0.4μl，檢測(cè)器FID。超臨界提取物(揮發(fā)油)GC批指紋譜，見(jiàn)圖4。3、中間體指紋譜(1)金銀花和連翹提取物指紋譜儀器與材料儀器同上述金銀花和連翹提取物測(cè)定。標(biāo)準(zhǔn)品綠原酸(Chlorogenic acid)連翹甙(Phillyrin)購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所樣品金銀花和連翹提取物(國(guó)家中藥制藥技術(shù)工程中心提供)色譜條件同上色譜柱Inertsil ODS-3，5μm，4.6mm*250mm(made in Japan).保護(hù)柱phenomenex C18(ODS)，4mmL*3.0mmID流動(dòng)相乙腈∶1％醋酸水溶液(V/V)溫度室溫(室內(nèi)空調(diào)18～22℃)檢測(cè)器PDA檢測(cè)器，210～400nm全波長(zhǎng)掃描。供試液的制備取金銀花和連翹提取物，研磨成粉末，過(guò)40目篩，精密稱(chēng)取107.5mg，置于離心管中，加甲醇/水4ml置漩渦混合器上混旋1分鐘，再超聲振蕩提取15分鐘，離心，取上清液，殘?jiān)偌?ml甲醇/水超聲15分鐘，離心，取上清液，殘?jiān)?.5ml甲醇/水洗，洗液與上清液合并，定容至10ml容量瓶中。進(jìn)樣前用0.45um濾膜過(guò)濾。取以上供試液在上述色譜條件下進(jìn)行HPLC分析。結(jié)果見(jiàn)圖5金銀花和連翹提取物HPLC-3D圖6金銀花和連翹提取物HPLC-2D，峰數(shù)有20-23個(gè)(Area＞2.0×106)(2)黃芩提取物指紋譜儀器與材料同上述黃芩提取物測(cè)試。標(biāo)準(zhǔn)品黃芩甙(baicalin)購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所色譜條件同上。供試液的制備取黃芩提取物，研磨成粉末，過(guò)40目篩，精密稱(chēng)取20mg，置于離心管中，加甲醇/水4ml置漩渦混合器上混旋1分鐘，再超聲振蕩提取15分鐘，離心，取上清液，殘?jiān)偌?ml甲醇/水超聲15分鐘，離心，取上清液，殘?jiān)?.5ml甲醇/水洗，洗液與上清液合并，定容至10ml容量瓶中。進(jìn)樣前用0.45um濾膜過(guò)濾。黃芩提取物指紋譜(HPLC-FPS)結(jié)果見(jiàn)圖7黃芩提取物HPLC-3D圖8黃芩提取物HPLC-2D，峰數(shù)有4-5個(gè)(Area＞2.0×106)4、雙黃連制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(1)雙黃連制劑中綠原酸含量測(cè)定儀器與材料同上述綠原酸含量測(cè)定。色譜條件色譜柱Inertsil ODS-3，5μm，4.6mm*250mm(made in Japan).保護(hù)柱phenomenex C18(ODS)，4mmL*3.0mmID流動(dòng)相甲醇∶水(含2％醋酸)＝25∶75，流速1ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm，柱溫室溫。標(biāo)準(zhǔn)曲線同上述。樣品測(cè)定供試液的制備取雙黃連片劑，去衣后研磨成粉末，過(guò)40目篩，精密稱(chēng)取0.5g，置于離心管中，加甲醇/水4ml置漩渦混合器上混旋1分鐘，再超聲振蕩提取15分鐘，離心，取上清液，殘?jiān)偌?ml甲醇/水超聲15分鐘，離心，取上清液，殘?jiān)?.5ml甲醇/水洗，洗液與上清液合并，定容至10ml容量瓶中。進(jìn)樣前用0.45um濾膜過(guò)濾。
取以上供試液在上述色譜條件下進(jìn)行HPLC分析，按雙點(diǎn)校正法計(jì)算樣品中所含組分的含量，計(jì)算公式如下CX＝C1+(C2+C1)*(AX-A1)/(A2-A1)C1、C2分別為標(biāo)準(zhǔn)品的量；A1、A2分別為標(biāo)準(zhǔn)品峰面積；CX、AX為樣品的量和峰面積。
圖9雙黃連片劑測(cè)綠原酸。(2)制劑中連翹甙含量測(cè)定儀器與材料同上述連翹甙含量測(cè)定。樣品批號(hào)為000912雙黃連薄膜包衣片色譜條件色譜柱Inertsil ODS-3，5μm，4.6mm*250mm(made in Japan).保護(hù)柱phenomenex C18(ODS)，4mmL*3.0mmID流動(dòng)相乙腈∶水＝28∶72，流速1ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm，柱溫室溫。標(biāo)準(zhǔn)曲線同上。樣品測(cè)定供試液的制備取雙黃連片劑，去衣后研磨成粉末，過(guò)40目篩，精密稱(chēng)取0.5g，置于離心管中，加甲醇/水4ml置漩渦混合器上混旋1分鐘，再超聲振蕩提取15分鐘，離心，取上清液，殘?jiān)偌?ml甲醇/水超聲15分鐘，離心，取上清液，殘?jiān)?.5ml甲醇/水洗，洗液與上清液合并，定容至10ml容量瓶中。進(jìn)樣前用0.45um濾膜過(guò)濾。
取以上供試液在上述色譜條件下進(jìn)行HPLC分析，按雙點(diǎn)校正法計(jì)算樣品中所含組分的含量，計(jì)算公式如下CX＝C1+(C2-C1)*(AX-A1)/(A2-A1)C1、C2分別為標(biāo)準(zhǔn)品的量；A1、A2分別為標(biāo)準(zhǔn)品峰面積；CX、AX為樣品的量和峰面積。
圖10雙黃連片劑測(cè)連翹甙。(3)制劑中黃芩甙含量測(cè)定儀器與材料同上述黃芩甙含量測(cè)定。樣品批號(hào)為000912雙黃連薄膜包衣片色譜條件色譜柱Inertsil ODS-3，5μm，4.6mm*250mm(made in Japan).保護(hù)柱phenomenex C18(ODS)，4mmL*3.0mmID流動(dòng)相甲醇∶水(含2％醋酸)＝65∶35，流速1ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm，柱溫室溫。標(biāo)準(zhǔn)曲線同上。樣品測(cè)定供試液的制備取雙黃連片劑，去衣后研磨成粉末，過(guò)40目篩，精密稱(chēng)取0.1g，，置50ml容量瓶中，加甲醇/水置漩渦混合器上混旋1分鐘，再超聲振蕩提取15分鐘，定容。進(jìn)樣前用0.45um濾膜過(guò)濾。
取以上供試液在上述色譜條件下進(jìn)行HPLC分析，按雙點(diǎn)校正法計(jì)算樣品中所含組分的含量，計(jì)算公式如下CX＝C1+(C2-C1)*(AX-A1)/(A2-A1)C1、C2分別為標(biāo)準(zhǔn)品的量；A1、A2分別為標(biāo)準(zhǔn)品峰面積；CX、AX為樣品的量和峰面積。
圖11雙黃連片劑測(cè)黃芩甙。5、雙黃連制劑指紋譜儀器與材料儀器同上述雙黃連制劑。標(biāo)準(zhǔn)品綠原酸(Chlorogenic acid)連翹甙(Phillyrin)黃芩甙(baicalin)購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所色譜條件同上述色譜柱Inertsil ODS-3，5μm，4.6mm*250mm(made in Japan).保護(hù)柱phenomenex C18(ODS)，4mmL*3.0mmID流動(dòng)相乙腈∶1％醋酸水溶液(V/V)溫度室溫(室內(nèi)空調(diào)18～22℃)檢測(cè)器PDA檢測(cè)器，210～400nm全波長(zhǎng)掃描。供試液的制備取雙黃連片劑，去衣后研磨粉末，過(guò)40目篩，精密稱(chēng)取200mg，置于離心管中，加甲醇/水4ml置漩渦混合器上混旋1分鐘，再超聲振蕩提取15分鐘，離心，取上清液，殘?jiān)偌?ml甲醇/水超聲15分鐘，離心，取上清液，殘?jiān)?.5ml甲醇/水洗，洗液與上清液合并，定容至10ml容量瓶中。進(jìn)樣前用0.45um濾膜過(guò)濾。
雙黃連制劑指紋譜(HPLC-FPS)。
結(jié)果見(jiàn)圖12雙黃連制劑HPLC-3D圖13雙黃連制劑HPLC-2D，峰數(shù)有25-30個(gè)(Area＞3.0×106)。
雙黃連制劑中超臨界提取物的定性控制，見(jiàn)圖14。實(shí)例1、取金銀花和連翹提取物測(cè)定綠原酸結(jié)果為1.63％。實(shí)例2、取金銀花和連翹提取物測(cè)定綠原酸結(jié)果為1.62％。實(shí)例3、取金銀花和連翹提取物測(cè)定綠原酸結(jié)果為2.15％。實(shí)例4、取金銀花和連翹提取物測(cè)定得結(jié)果為0.17％。實(shí)例5、取金銀花和連翹提取物測(cè)定得結(jié)果為0.27％。實(shí)例6、取金銀花和連翹提取物測(cè)定得結(jié)果為0.38％。實(shí)例7、取黃芩提取物測(cè)定黃芩甙結(jié)果為93.4％。實(shí)例8、取黃芩提取物測(cè)定黃芩甙結(jié)果為92.2％。實(shí)例9、取黃芩提取物測(cè)定黃芩甙結(jié)果為91.3％。實(shí)例10、連翹與金銀花超臨界萃取物測(cè)得絕對(duì)峰面積766933(為幾個(gè)成分GC面積之和)。實(shí)例11、連翹與金銀花超臨界萃取物測(cè)得絕對(duì)峰面積1138138(為幾個(gè)成分GC面積之和)。實(shí)例12、連翹與金銀花超臨界萃取物測(cè)連翹與金銀花超臨界萃取物測(cè)得絕對(duì)峰面積906224(為幾個(gè)成分GC面積之和)。實(shí)例13、取雙黃連片劑測(cè)定綠原酸結(jié)果為1.64％。實(shí)例14、取雙黃連片劑測(cè)定綠原酸結(jié)果為1.05％。實(shí)例15、取雙黃連片劑測(cè)定綠原酸結(jié)果為1.28％。實(shí)例16、取雙黃連片劑測(cè)定連翹甙結(jié)果為0.14％。實(shí)例17、取雙黃連片劑測(cè)定連翹甙結(jié)果為0.22％。實(shí)例18、取雙黃連片劑測(cè)定連翹甙結(jié)果為0.15％。實(shí)例19、取雙黃連片劑測(cè)定黃芩甙結(jié)果為10.41％。實(shí)例20、取雙黃連片劑測(cè)定黃芩甙結(jié)果為9.04％。實(shí)例21、取雙黃連片劑測(cè)定黃芩甙結(jié)果為11.08％。實(shí)例22、超臨界共提物儀器日本島津GC-9A氣相色譜儀Chromatopac C-ELB數(shù)據(jù)處理機(jī)實(shí)驗(yàn)方法氣相色譜條件選用SE-54石英彈性毛細(xì)管色譜柱，柱長(zhǎng)30m，內(nèi)徑0.32mm；氣化室250℃，柱溫為程序升溫50～230℃，4℃/min；載氣氮?dú)?，柱前?.7kg/cm2；柱流量2ml/min，進(jìn)樣量0.4μl，檢測(cè)器FID。
與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，在tR＝8.551處得到β-蒎烯峰，在tR＝12.926處得到芳樟醇峰。實(shí)例23、方法同上，與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，在tR＝8.575處得到β-蒎烯峰，在tR＝12.919處得到芳樟醇峰。實(shí)例24、方法同上，與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，在tR＝8.539處得到β-蒎烯峰，在tR＝12.930處得到芳樟醇峰。實(shí)例25、雙黃連制劑中超臨界提取物方法同中間體部分取雙黃連片劑，與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，在tR＝8.476處得到β-蒎烯峰，在tR＝12.925處得到芳樟醇峰。實(shí)例26、取雙黃連片劑，與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，在tR＝8.513處得到β-蒎烯峰，在tR＝12.945處得到芳樟醇峰。
實(shí)例27、取雙黃連片劑，與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，在tR＝8.524處得到β-蒎烯峰，在tR＝12.828處得到芳樟醇峰。
權(quán)利要求
1.一種復(fù)方雙黃連片的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括(1)藥材金銀花、連翹、黃芩指紋譜測(cè)試；(2)雙黃連中間體質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試；(3)雙黃連中間體指紋譜測(cè)試；(4)雙黃連制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試；(5)雙黃連制劑指紋譜測(cè)試。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種復(fù)方雙黃連片的質(zhì)量控制方法，其特征在于其所述的藥材金銀花、連翹、黃芩指紋譜測(cè)試方法是(1)金銀花藥材指紋譜色譜條件色譜柱Inertsil ODS-3，5μm，4.6mm*250mm(made in Japan).保護(hù)柱phenomenex C18(ODS)，4mmL*3.0mmID流動(dòng)相乙腈1％醋酸水溶液(V/V)溫度室溫(室內(nèi)空調(diào)18～22℃)檢測(cè)器PDA檢測(cè)器，210～400nm全波長(zhǎng)掃描；供試液的制備取藥材金銀花，研磨成粉末，過(guò)40目篩，精密稱(chēng)取187.5mg，置于離心管中，加甲醇/水4ml置漩渦混合器上混旋1分鐘，再超聲振蕩提取15分鐘，離心，取上清液，殘?jiān)偌?ml甲醇/水超聲15分鐘，離心，取上清液，殘?jiān)?.5ml甲醇/水洗，洗液與上清液合并，定容至10ml容量瓶中，進(jìn)樣前用0.45um濾膜過(guò)濾，取以上供試液在上述色譜條件下進(jìn)行HPLC分析；(2)連翹藥材指紋譜供試液的制備取藥材連翹，研磨成粉末，過(guò)40目篩，精密稱(chēng)取375mg，置于離心管中，加甲醇/水4ml置漩渦混合器上混旋1分鐘，再超聲振蕩提取15分鐘，離心，取上清液，殘?jiān)偌?ml甲醇/水超聲15分鐘，離心，取上清液，殘?jiān)?.5ml甲醇/水洗，洗液與上清液合并，定容至10ml容量瓶中，進(jìn)樣前用0.45um濾膜過(guò)濾取以上供試液在上述色譜條件下進(jìn)行HPLC分析；(3)黃芩藥材指紋譜供試液的制備取藥材黃芩，研磨成粉末，過(guò)40目篩，精密稱(chēng)取187mg，置于離心管中，加甲醇/水4ml置漩渦混合器上混旋1分鐘，再超聲振蕩提取15分鐘，離心，取上清液，殘?jiān)偌?ml甲醇/水超聲15分鐘，離心，取上清液，殘?jiān)?.5ml甲醇/水洗，洗液與上清液合并，定容至10ml容量瓶中，進(jìn)樣前用0.45um濾膜過(guò)濾，取以上供試液在上述色譜條件下進(jìn)行HPLC分析。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種復(fù)方雙黃連片的質(zhì)量控制方法，其特征在于其所述的雙黃連中間體質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的測(cè)試方法是(1)金銀花和連翹提取物中綠原酸含量測(cè)定色譜條件色譜柱Inertsil ODS-3，5μm，4.6mm*250mm(made in Japan).保護(hù)柱phenomenex C18(ODS)，4mmL*3.0mmID流動(dòng)相甲醇∶水(含2％醋酸)＝25∶75，流速1ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm，柱溫室溫，樣品測(cè)定供試液的制備取金銀花和連翹提取物粉末，精密稱(chēng)取170.5mg，置于離心管中，加甲醇/水4ml置漩渦混合器上混旋1分鐘，再超聲振蕩提取15分鐘，離心，取上清液，殘?jiān)偌?ml甲醇/水超聲15分鐘，離心，取上清液，殘?jiān)?.5ml甲醇/水洗，洗液與上清液合并，定容至10ml容量瓶中，進(jìn)樣前用0.45um濾膜過(guò)濾，取以上供試液在上述色譜條件下進(jìn)行HPLC分析，按雙點(diǎn)校正法計(jì)算樣品中所含組分的含量；(2)金銀花和連翹提取物中連翹甙含量測(cè)定色譜條件色譜柱Inertsil ODS-3，5μm，4.6mm*250mm(made in Japan).保護(hù)柱phenomenex C18(ODS)，4mmL*3.0mmID流動(dòng)相乙腈∶水＝28∶72，流速1ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm，柱溫室溫，樣品測(cè)定供試液的制備取金銀花和連翹提取物粉末，精密稱(chēng)取292mg，置于離心管中，加甲醇/水4ml置漩渦混合器上混旋1分鐘，再超聲振蕩提取15分鐘，離心，取上清液，殘?jiān)偌?ml甲醇/水超聲15分鐘，離心，取上清液，殘?jiān)?.5ml甲醇/水洗，洗液與上清液合并，定容至10ml容量瓶中，進(jìn)樣前用0.45um濾膜過(guò)濾；取以上供試液在上述色譜條件下進(jìn)行HPLC分析，按雙點(diǎn)校正法計(jì)算樣品中所含組分的含量；(3)黃芩提取物中黃芩甙含量測(cè)定色譜條件色譜柱Inertsil ODS-3，5μm，4.6mm*250mm(made in Japan).保護(hù)柱phenomenex C18(ODS)，4mmL*3.0mmID流動(dòng)相甲醇∶水(含2％醋酸)＝65∶35，流速1ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm，柱溫室溫，樣品測(cè)定供試液的制備取黃芩提取物，精密稱(chēng)取10mg，置于100ml容量瓶，加甲醇/水超聲振蕩，定容，進(jìn)樣前用0.45um濾膜過(guò)濾，取以上供試液在上述色譜條件下進(jìn)行HPLC分析，按雙點(diǎn)校正法計(jì)算樣品中所含組分的含量；(4)超臨界萃取物的含量測(cè)定氣相色譜條件選用SE-54石英彈性毛細(xì)管色譜柱，柱長(zhǎng)30m，內(nèi)徑0.32mm；氣化室250℃，柱溫為程序升溫50～230℃，4℃/min；載氣氮?dú)?，柱前?.7kg/cm2；柱流量2ml/min，進(jìn)樣量0.4μl，檢測(cè)器FID。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種復(fù)方雙黃連片的質(zhì)量控制方法，其特征在于其所述的雙黃連片中間體指紋譜測(cè)方法是(1)金銀花和連翹提取物指紋譜色譜條件同上色譜柱Inertsil ODS-3，5μm，4.6mm*250mm(made in Japan).保護(hù)柱phenomenex C18(ODS)，4mmL*3.0mID流動(dòng)相乙腈∶1％醋酸水溶液(V/V)溫度室溫(室內(nèi)空調(diào)18～2℃)檢測(cè)器PDA檢測(cè)器，210～400nm全波長(zhǎng)掃描，供試液的制備取金銀花和連翹提取物，研磨成粉末，過(guò)40目篩，精密稱(chēng)取107.5mg，置于離心管中，加甲醇/水4ml置漩渦混合器上混旋1分鐘，再超聲振蕩提取15分鐘，離心，取上清液，殘?jiān)偌?ml甲醇/水超聲15分鐘，離心，取上清液，殘?jiān)?.5ml甲醇/水洗，洗液與上清液合并，定容至10ml容量瓶中，進(jìn)樣前用0.45um濾膜過(guò)濾，取以上供試液在上述色譜條件下進(jìn)行HPLC分析，(2)黃芩提取物指紋譜色譜條件同上，供試液的制備取黃芩提取物，研磨成粉末，過(guò)40目篩，精密稱(chēng)取20mg，置于離心管中，加甲醇/水4ml置漩渦混合器上混旋1分鐘，再超聲振蕩提取15分鐘，離心，取上清液，殘?jiān)偌?ml甲醇/水超聲15分鐘，離心，取上清液，殘?jiān)?.5ml甲醇/水洗，洗液與上清液合并，定容至10ml容量瓶中，進(jìn)樣前用0.45um濾膜過(guò)濾。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種復(fù)方雙黃連片的質(zhì)量控制方法，其特征在于其所述的雙黃連制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的測(cè)試方法是(1)雙黃連制劑中綠原酸含量測(cè)定色譜條件色譜柱Inertsil ODS-3，5μm，4.6mm*250mm(made in Japan).保護(hù)柱phenomenex C18(ODS)，4mmL*3.0mmID流動(dòng)相甲醇∶水(含2％醋酸)＝25∶75，流速1ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm，柱溫室溫，樣品測(cè)定供試液的制備取雙黃連片劑，去衣后研磨成粉末，過(guò)40目篩，精密稱(chēng)取0.5g，置于離心管中，加甲醇/水4ml置漩渦混合器上混旋1分鐘，再超聲振蕩提取15分鐘，離心，取上清液，殘?jiān)偌?ml甲醇/水超聲15分鐘，離心，取上清液，殘?jiān)?.5ml甲醇/水洗，洗液與上清液合并，定容至10ml容量瓶中，進(jìn)樣前用0.45um濾膜過(guò)濾，取以上供試液在上述色譜條件下進(jìn)行HPLC分析，按雙點(diǎn)校正法計(jì)算樣品中所含組分的含量，(2)制劑中連翹甙含量測(cè)定色譜條件色譜柱Inertsil ODS-3，5μm，4.6mm*250mm(made in Japan).保護(hù)柱phenomenex C18(ODS)，4mmL*3.0mmID流動(dòng)相乙腈∶水＝28∶72，流速1ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm，柱溫室溫，樣品測(cè)定供試液的制備取雙黃連片劑，去衣后研磨成粉末，過(guò)40目篩，精密稱(chēng)取0.5g，置于離心管中，加甲醇/水4ml置漩渦混合器上混旋1分鐘，再超聲振蕩提取15分鐘，離心，取上清液，殘?jiān)偌?ml甲醇/水超聲15分鐘，離心，取上清液，殘?jiān)?.5ml甲醇/水洗，洗液與上清液合并，定容至10ml容量瓶中，進(jìn)樣前用0.45um濾膜過(guò)濾，取以上供試液在上述色譜條件下進(jìn)行HPLC分析，按雙點(diǎn)校正法計(jì)算樣品中所含組分的含量；(3)制劑中黃芩甙含量測(cè)定色譜條件色譜柱Inertsil ODS-3，5μm，4.6mm*250mm(made in Japan).保護(hù)柱phenomenex C18(ODS)，4mmL*3.0mmID流動(dòng)相甲醇∶水(含2％醋酸)＝65∶35，流速1ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm，柱溫室溫，樣品測(cè)定供試液的制備取雙黃連片劑，去衣后研磨成粉末，過(guò)40目篩，精密稱(chēng)取0.1g，，置50ml容量瓶中，加甲醇/水置漩渦混合器上混旋1分鐘，再超聲振蕩提取15分鐘，定容，進(jìn)樣前用0.45um濾膜過(guò)濾，取以上供試液在上述色譜條件下進(jìn)行HPLC分析，按雙點(diǎn)校正法計(jì)算樣品中所含組分的含量。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種復(fù)方雙黃連片的質(zhì)量控制方法，其特征在于其所述的雙黃連制劑指紋譜測(cè)試方法是色譜條件同上述色譜柱Inertsil ODS-3，5μm，4.6mm*250mm(made in Japan).保護(hù)柱phenomenex C18(ODS)，4mmL*3.0mmID流動(dòng)相乙腈∶1％醋酸水溶液(V/V)溫度室溫(室內(nèi)空調(diào)18～22℃)檢測(cè)器PDA檢測(cè)器，210～400nm全波長(zhǎng)掃描，供試液的制備取雙黃連片劑，去衣后研磨成粉末，過(guò)40目篩，精密稱(chēng)取200mg，置于離心管中，加甲醇/水4ml置漩渦混合器上混旋1分鐘，再超聲振蕩提取15分鐘，離心，取上清液，殘?jiān)偌?ml甲醇/水超聲15分鐘，離心，取上清液，殘?jiān)?.5ml甲醇/水洗，洗液與上清液合并，定容至10ml容量瓶中，進(jìn)樣前用0.45um濾膜過(guò)濾。
全文摘要
本發(fā)明提供了復(fù)方雙黃連片的質(zhì)量控制方法,該方法包括藥材金銀花、連翹、黃芩指紋譜測(cè)試;雙黃連中間體質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試;雙黃連中間體指紋譜測(cè)試;雙黃連制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試;雙黃連制劑指紋譜測(cè)試。
文檔編號(hào)G01N33/15GK1370992SQ01105429
公開(kāi)日2002年9月25日 申請(qǐng)日期2001年2月27日 優(yōu)先權(quán)日2001年2月27日
發(fā)明者沈平孃, 洪筱坤, 王智華, 王新宏, 王玉蘭, 王成榮 申請(qǐng)人:上海復(fù)星實(shí)業(yè)股份有限公司, 國(guó)家中藥制藥工程技術(shù)研究中心