專利名稱：用生化酶標多功能分析儀測試生化超微量檢測技術的方法
技術領域：
本發明屬醫學生物化學檢驗領域。具體說是一種用生化酶標多功能分析儀測試生化超微量快速檢測技術的方法。
生化檢驗是醫學檢驗的重要組成部分。生化分析朝著微量、快速、準確、方便的方向發展是當前國內外醫學檢驗的必然趨勢。
目前國內生化檢驗多數仍以靜脈抽血、應用常量法、手工比色讀取吸光度后再進行計算得出含量；而國外生產的先進的全自動生化分析儀，測試樣品微量化、無需人工計算即可得出結果，但同樣脫離不了靜脈抽血，還存在著標本量很少的情況下開機浪費試劑的不足。為了避免病人靜脈抽血，就必須要求每項測定的樣品盡可能少，但又不影響結果的準確性是當前國內外生化檢驗存在的難點。
半自動生化分析儀，存在著在大批量標本檢測中，因標準品與被測樣品前后測試的時間差而直接影響測定結果的準確性，尤其是常量法手工比色測試速度慢而存在此缺點。
除上述因素外，還存在采樣、檢測儀器、檢測方法不太過關，更重要的是沒有一整套適應生化超微量和快速比色分析的配套儀器和相應的技術方法。若能實現采用指血替代靜脈抽血；一滴血查肝功、一滴血查血糖、一滴血查血脂等；實現快速比色分析測試結果的技術方法，則具有更大的技術上的優越性和應用上的實際意義。
本發明的目的在于避免上述現有技術中存在的不足之處而采用現有的微孔板代替試管和比色杯，并在孔內直接進行試驗操作，達到無需靜脈抽血的一種用生化酶標多功能分析儀測試生化超微量檢測技術的方法。
本發明的目的可以通過以下措施來達到一種用生化酶標多功能分析儀測試生化超微量檢測技術的方法，其特征在于a．按末梢血常規采集方法將聚乙烯塑料微量采血管上端口接觸血滴，下端放低，邊輕擠邊進血至需要量后燒熔下端，用鑷子捏緊封固或不封口，將微量采血塑料管折成“V”型插入一次性注射器的針頭塑料套內，在針頭塑料套管或采血塑料管上貼上不干膠序號，離心分離血清備用；b．取潔凈8×12標準96微孔板一塊；c．采用微量定量加樣器，取標準品和被測樣品，定量加入微孔板各孔內；d．用微量可調移液器，按所需試劑用量，定量加入上述各孔內；e．將微孔板置37℃恒溫箱或水浴箱，達到試驗項目所需反應時間后取出微孔板；f．將微孔板置生化酶標多功能分析儀測量室內，在90s內同時打印出1～90份結果報告。
本發明的目的還可以通過以下措施來達到本發明采用1μl．2μl．3μl．5μl．10μl、20μl．25μl微量定量加樣器，取標準品和被測樣品，定量加入微孔板各孔內。
本發明采用50-25μl、100-500μl微量可調移液器。
本發明采用內徑2-3mm的聚乙烯塑料管制成5-7cm規格的微量采血塑料管。
本發明相比現有技術方法具有如下優點1．取樣方便。本發明采用一整套適應生化超微量檢測的生化酶標多功能分析儀和相應的技術方法，不僅用指血替代了靜脈抽血，減輕了患者的痛苦，而且與目前的常量法、全自動、半自動及其它各種型號的生化分析儀和現有技術方法比較，大大節省了用血量、幾十倍地提高了比色測試速度。
2．檢測速度快。與半自動生化分析儀以1份樣品／30s計算，做各項生化檢測平均快30倍以上。例如用半自動做葡萄糖測定90份樣品需45min以上，而本發明技術方法僅用90s即可測試打印出結果報告。
3．同批結果誤差小。目前因常量法手工比色和半自動生化分析儀測試速度慢，存在著比色時間段(如上所述的從1份樣品／30s到測定90份樣品需45min以上)之間對結果的誤差。而用本發明的技術方法在大批量標本檢測中，避免了因標準品與被測樣品前后測試的時間差而直接影響測定結果的準確性。
4．結果準確，重復性好。用生化酶標多功能分析儀和本發明的技術方法，用終點法所做生化項目的精密度、線性、相關系數、標準差、變異系數等都優于進口、國產的半自動生化分析儀。
5．樣品超微量。采用現有的一整套適應生化超微量檢測的生化酶標多功能分析儀和檢測技術的方法，僅用半自動生化分析儀的1／5～1／20樣本量，指血一滴即可做肝功、血脂檢驗，而全自動、半自動生化分析儀則不能。
6．試劑用量成本低。如做同樣項目檢測，所需試劑的成本僅為常量和半自動生化分析儀的5～30分之一。
7．各種耗材少。從取血液到發出報告，無需注射器、試管、吸管、比色杯。減少了清洗工作，節省人力，提高了工作效率。
實施例1葡萄糖氧化酶法測定(終點法)1．末梢血采集(1)采血部位成人以左手無名指為宜，半歲以下嬰幼兒通常以拇指或足跟采血。
(2)輕輕按摩采血部位，使其自然充血，用75％乙醇棉球消毒局部皮膚、待干。
(3)緊捏刺血部位，用無菌采血針穿刺取血。動作應迅速，深度約2-3mm，以稍加擠壓血液能流出為宜。
(4)取內徑2-3mm長5-7cm規格的聚乙烯塑料管(微量采血塑料管)上端口接觸血滴，下端放低，邊輕擠邊進血，約采1滴血后燒熔下端，用鑷子捏緊封固或不封口，將微量采血塑料管折成“V”型插入一次性注射器的針頭塑料套內，在針頭塑料套管或采血塑料管上貼上不干膠序號，離心分離血清備用。
2．原理葡萄糖氧化酶能催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并產生一分子過氧化氫。
葡萄糖+O2 葡萄糖酸+H2O2在過氧化物酶和色原性氧受體的存在下，過氧化氫分解，釋放出初生太氧，氧化色素原，生成有色化合物。
3．試劑葡萄糖氧化酶≥10500U／L 過氧化物酶 ≥11000U／L4-氨基安替吡啉 50mg／L 苯酚0．5g／L葡萄糖標準液5．6mmol／L4．加樣取潔凈8×12標準96微孔板一塊按下表加樣 混勻，置37℃保溫15分鐘。
5．測試
將試驗微孔板置生化酶標多功能快速分析儀測量室內，用505nm雙波長、設空白孔和標準孔位，確認Au／As*C公式，設置標準品單位含量，例如標準品為5．6mmol／L即設置C=OO5．6，啟動測量打印各孔葡萄糖含量的結果報告。
6．結果血液葡萄糖測定葡萄糖氧化酶法試劑 上海科欣生物技術研究所生產批號 991101標準液(品)5．6mmol／L(100mg／dl)波長方式 雙波長測量波長 505nm報告方式 1、生化測定結果2、吸光度測試結果使用公式 Au／As*C標準品單位含量設置C=OO56(5．6mmol／L)1、生化測試結果 A行01孔為空白調“O”孔，02、03、04、05孔為標準品測定結果，其余為標本測定結果。
2、吸光度測試結果 與生化測定結果相對應的各孔吸光度值
實施例2血清膽固醇測定-酶比色法1．末梢血采集同實施例1。
2．原理膽固醇酯酶水解膽固醇酯之后，以膽固醇氧化酶氧化膽固醇，產生H2O2，然后以Trinder反應測定，從而求其含量。
3．試劑北京北化精細化學品有限責任公司生產試劑盒組成膽固醇脂酶400U／L膽固醇氧化酶 500U／L過氧化物酶200U／L4-氨基安替吡啉 1mmol／L苯酚10mmol／L磷酸鹽緩沖液(PH7．0±0．1)膽固醇標準液 5．17mmol／L(200mg／dl)應用前根據包裝規格溶解，配成酶應用液。
4．加樣取潔凈8×12標準96微孔板一塊按下表加樣 混勻，在37℃中保溫15分鐘。
5．測試將試驗微孔板置生化酶標多功能分析儀測量室內，用505nm雙波長、設空白孔和標準孔位，確認Au／As*C公式，設置標準品單位含量，例如標準品為5．17mmol／L即設置C=OO5．2)，啟動測量打印各孔膽固醇含量的結果報告。
6．結果血清膽固醇測定 酶比色法試劑 北京北化精細化學品有限責任公司生產批號 000601波長方式 雙波長測量波長 505nm標準液(品) 5．17mmol／L(200mg／dl)報告方式 1、生化測定結果2、吸光度測試結果使用公式 Au／As*C標準品單位含量設置 C=0052(5．17mmol／L)兩種報告方式如下1、生化測定結果A行01、02孔為空白調“0”孔，03、04、孔為標準品測定結果，其余為標本測定孔結果2、吸光度測試結果 與生化測定結果相對應的各孔吸光度值
權利要求
1．一種用生化酶標多功能分析儀測試生化超微量檢測技術的方法，其特征在于a．按末梢血常規采集方法將聚乙烯塑料微量采血管上端口接觸血滴，下端放低，邊輕擠邊進血至需要量后燒熔下端，用鑷子捏緊封固或不封口，將微量采血塑料管折成“V”型插入一次性注射器的針頭塑料套內，在針頭塑料套管或采血塑料管上貼上不干膠序號，離心分離血清備用；b．取潔凈8×12標準96微孔板一塊；c．采用微量定量加樣器，取標準品和被測樣品，定量加入微孔板各孔內；d．用微量可調移液器，按所需試劑用量，定量加入上述各孔內；e．將微孔板置37℃恒溫箱或水浴箱，達到試驗項目所需反應時間后取出微孔板；f．將微孔板置生化酶標多功能分析儀測量室內，在90s內同時打印出1～90份結果報告。
2．根據權利要求1所述的用生化酶標多功能分析儀測試生化超微量檢測技術的方法，其特征在于采用1μl．2μl．3μl．5μl．10μl、20μl．25μl微量定量加樣器，取標準品和被測樣品，定量加入各孔內。
3．根據權利要求1所述的用生化酶標多功能分析儀測試生化超微量檢測技術的方法，其特征在于采用50-250μl、100-500μl微量可調移液器。
4．根據權利要求1所述的用生化酶標多功能分析儀測試生化超微量檢測技術的方法，其特征在于采用內徑2-3mm的聚乙烯塑料管制成5-7cm規格的微量采血塑料管。
全文摘要
本發明提供了一種利用現有的微孔板代替試管和比色杯,并在孔內直接進行試驗操作。采用聚乙烯塑料管制成不同規格的微量采血管和應用定量加樣(移液)器,達到無需靜脈抽血、試劑用量少、樣品超微量,使之在生化檢測項目中,微量血液與相應的試劑作用一定時間后,再結合相應配套的生化酶標多功能分析儀測試,完善了自動檢測、自動分析、自動打印出試驗項目結果報告的微量快速檢測系統。
文檔編號G01N21/27GK1295244SQ00134388
公開日2001年5月16日 申請日期2000年12月12日 優先權日2000年12月12日
發明者吳斌, 張紅寧, 梁立森, 韓明倫 申請人:吳斌