專利名稱：：一種用于存放液氮冷凍材料的凍存袋的制作方法
技術領域：
：本實用新型屬于低溫冷凍保存
技術領域：
，涉及存放液氮冷凍材料的凍存容器°
背景技術：
：在植物和動物科學實驗研究中，一些特殊材料常常需要進行快速冷凍予以保存和使用。因為液氮的液相溫度可達-196°C，而且快速氣化過程中可以吸收大量的熱量，使需冷凍材料在極短時間內能夠迅速降溫，所以，液氮冷凍保存是科學研究中最常用的快速冷凍和保存特殊材料的方法。在快速冷凍過程中，為了避免不同材料之間的污染或機械混雜，就需要采取一定的隔離措施。現在主要使用的隔離措施有凍存管(塑料螺口專用凍存管或安瓿瓶)、袋子(包括紙袋、食品冷凍袋、食品保鮮袋等)和凍存罐三種類型。其中，凍存管一般體積只有15ml，不能用于體積較大的材料。當需冷凍材料的體積較大時，雖然可以選擇體積較大的凍存罐(40172L)，但是不同材料間仍需進行分裝與嚴格隔離。目前，冷凍材料間的隔離措施使用最多的是普通紙袋、食品冷凍袋或保鮮袋等，這些袋子雖然價格低廉、體積大小可隨意選擇，并可經受-7(TC甚至-196T:的低溫環境，但是尚存在以下諸多弊端第一，在-196'C液氮液相環境中這些袋體會變硬、變脆而易破損，也容易被袋內的經液氮冷凍后變硬的材料所割裂或刺破；第二，這些材料的通透性較差，一方面導致氣相以及液相的液氮向袋體內滲透較慢，降低了材料的冷凍速度，另一方面，冷凍時間越長，液相液氮的氣化損耗越大，液氮的使用效率就越低；第三，因為液氮是反復高壓冷卻形成的，溫度上升15。C時液氮由液相轉化為氣相的同時體積將膨脹680倍，有巨大的膨脹性，所以，當冷凍結束后，在袋體離開液氮液相面的瞬間，袋體內殘留的液氮隨著環境溫度的升高會快速氣化致使袋體迅速鼓脹而破裂，進而造成材料浪費和液氮污染；為避免上述情況的出現，通常采用袋口松扎，有意留些空隙利于排氣，但是這樣的措施也同時容易使液氮冷凍后破碎的材料從松扎的袋口漏出，同樣易發生材料浪費和液氮污染的危險；第四，以往冷凍開始和結束時均需用長臂鑷子把袋體浸入或夾離液相液氮，既操作不便，又易發生凍傷危險而不安全。因此，尋找一種適宜的液氮凍存所需的隔離措施，使得各類固態材料能夠快速、高效、安全的進行液氮冷凍，是低溫冷凍保存
技術領域：
急需解決的一個難題。
發明內容本實用新型目的是，針對上述目前液氮凍存過程中各種類型的袋子所存在的袋體在低溫下易變硬、變脆而破損；通透性較差導致冷凍速度較慢、袋內殘留液相液氮氣化后易脹裂袋體；及操作不便、存在不安全隱患等缺陷，提出一種具有良好的耐低溫與耐高溫性能，可用于存放各種形狀與大小的固體材料、袋體不易破損、液氮通透性好、冷凍速度快、無殘留液相液氮氣化鼓氣、存入或取出液氮罐方便、熱導率低、操作安全、能有效減少液相液氮氣化損耗和提高液氮使用效率、抗菌和抗微生物、不易發生霉變和蟲蛀的用于存放液氮冷凍材料的凍存袋。本實用新型目的通過以下技術方案得以實現一種用于存放液氮冷凍材料的凍存袋，該袋包括兩側與下端密封的袋體和上端敞開的袋口，其中，所述袋體以耐-196'C超低溫和耐12(TC高溫的100-500目的錦綸單絲篩絹或100-400目的滌綸單絲篩絹為材料，其兩側與下端經縫制密封而成；在該袋體任一面距離頂邊0.51.0厘米處，設置一長12厘米、寬0.5厘米的鎖眼口；所述袋口由袋體上端邊沿向外朝下翻拆、并與袋體縫制成一帶有鎖眼口的環形孔道后所形成；其中，鎖眼口位于袋體一面環形孔道外側的中軸線處；在該環形孔道內設置一根與袋體材料相一致的可抽拉的繩子。一種用于存放液氮冷凍材料凍存袋的制備方法，按以下步驟進行(1)根據固體冷凍材料形狀、大小設計各類規格的凍存袋；(2)以耐-196。C超低溫和耐12(TC高溫的100-500目錦綸單絲篩絹或100-400目滌綸單絲篩絹為材料，裁剪成各類規格凍存袋袋體的毛料；并將每片毛料的四邊用鎖邊機進行鎖邊；(3)將兩片鎖邊毛料疊合后，將其兩側與下端縫制成縫邊在外、袋內光滑的袋體；并在袋體的任一面距離頂邊0.51.0厘米處，用鎖眼機加工一長12厘米、寬0.5厘米的鎖眼口；(4)將袋體上端邊沿向外朝下翻拆1.52.0厘米，并將該下翻邊沿的底邊與袋體縫制后形成一帶有鎖眼口和環形孔道的袋口；其中，鎖眼口位于袋體一面環形孔道外側的中軸線處；(5)選擇直徑0.20.4厘米，長度100250厘米的錦綸或滌綸繩子；將該繩子一端通過步驟(3)鎖眼口的一側孔口穿入環形孔道，再從該鎖眼口的另一側孔口穿出，露在鎖眼口外的兩個繩頭打結，即成凍存袋半成品；(6)將步驟(5)凍存袋半成品經水清洗；再將錦綸凍存袋用堿性清洗劑，滌綸凍存袋用酸性清洗劑清洗515分鐘后，再用水清洗2-3次；以12(TC高壓滅菌消毒20分鐘、6(TC烘箱烘干；(7)按照袋體不同材料與規格，分別用塑料袋貼標簽、包裝、抽真空、封口，即成凍存袋產品。所述堿性清洗劑為decon堿性清洗劑(使用濃度為0.10.5%)、S0D0SILRM03/003(使用濃度為15%)或deconex12BASIC(使用濃度為23%)、中的任一種；所述酸性清洗劑為decon酸性清洗劑(使用濃度為0.51.0%)、PT-Roclean121(使用濃度為1015%)或S0D0SILRAM05(使用濃度為l5%)中的任一種。本實用新型的有益效果是-一、本實用新型凍存袋采用了既能耐-196"C的超低溫，又可耐120'C高溫的錦綸單(長)絲篩絹(網)或滌綸單(長)絲篩絹(網)為材料，故袋體輕薄、柔滑、透明或半透明；在低溫下不會變硬、變脆，不易被液氮凍硬的材料刺破，牢固耐用；經高溫消毒后可多次、反復利用，提高了凍存袋的利用率，降低了成本；且錦綸與滌綸的質地性能有所區別，能分別用堿性或酸性清洗劑清洗，故能廣泛用于含脂肪、油脂、血、糖分或蛋白質等各類動植物組織材料的存放。二、本實用新型所選擇的袋體材料滲透性強、透氣性好，浸入液氮液相后能使袋內樣品迅速冷凍；離開液氮液相面時袋內液氮能夠快速從袋內流出，少量殘留液相液氮氣化后也易透出袋體，故既提高了樣品的冷凍速度，又避免了袋體因液氮氣化而脹裂的問題；通過與普通紙袋、加厚紙袋、食品冷凍袋、食品保鮮袋、棉布袋、紗布袋等比較，本實用新型的凍存袋能夠有效地減少液相液氮氣化損耗和提高液氮使用效率，以及其它良好的使用性能(表l)。三、本實用新型凍存袋的袋口配有可抽拉的繩子，該繩子除可用于扎緊袋口外，更能方便地將存有樣品的凍存袋沉入或離開液氮面，從而提高了液氮冷凍工作的操作效率與安全性。四、本實用新型凍存袋可成批地存入裝有少量或微量樣品的凍存管，扎緊袋口后即能方便液氮冷凍保存，可經濟高效地代替凍存管架。圖1本實用新型凍存袋結構示意圖具體實施方式以下通過實施例并結合附圖對本實用新型作進一步的詳細說明，但本實用新型并不受這些內容所限制。實施例1:(錦綸凍存袋的制備)一種用于存放液氮冷凍材料的凍存袋，該袋包括兩側與下端密封的袋體1和上端敞開的袋口2，其中，所述袋體1以耐-196X:超低溫和耐12(TC高溫的100-500目的錦綸單(長)絲篩絹(網)為材料，其兩側與下端經縫制密封而成；在該袋體1任一面距離頂邊0.8厘米處，設置一長1.5厘米、寬0.5厘米的鎖眼口3;所述袋口2由袋體1上端邊沿向外朝下翻拆、并與袋體1縫制成一帶有鎖眼口3并上端敞開的環形孔道4后所形成；其中，鎖眼口3位于袋體一面環形孔道4外側的中軸線處；在該環形孔道4內設置一根與袋體1材料相一致的可抽拉的繩子5。該凍存袋的制備方法，按以下步驟進行(1)根據固體冷凍材料形狀、大小設計各類規格的凍存袋；(2)以耐-196。C超低溫和耐120。C高溫的100-500目錦綸單(長)絲篩絹(網)為材料，裁剪成各類規格凍存袋袋體的毛料；并將每片毛料的四邊用鎖邊機進行鎖邊；(3)將兩片鎖邊毛料疊合后，將其兩側與下端縫制成縫邊在外、袋內光滑的袋體1;并在袋體1的任一面距離頂邊0.6厘米處，用鎖眼機加工一長1.5厘米、寬0.5厘米的鎖眼口3;(4)將袋體1上端邊沿向外朝下翻拆1.6厘米，并將該下翻邊沿的底邊與袋體縫制后形成一帶有鎖眼口3和環形孔道4的袋口2;其中，鎖眼口3位于袋體1一面環形孔道4外側的中軸線處；(5)選擇直徑0.3厘米，長度150厘米的錦綸繩子；將該繩子5—端通過步驟(3)鎖眼口3的一側孔口穿入環形孔道4，再從該鎖眼口3的另一側孔口穿出，露在鎖眼口3外的兩個繩頭打結，即成凍存袋半成品；(6)將步驟(5)凍存袋半成品經水清洗；再將錦綸凍存袋在超聲波清洗機中用2.0%deconex12BASIC清洗劑水溶液超聲波浸泡5分鐘并清水清洗3次；以120。C高壓滅菌消毒20分鐘、60。C烘箱烘干；(7)按照袋體不同規格，分別用塑料袋貼標簽、包裝、抽真空、封口，即成凍存袋產品。實施例2:(滌綸凍存袋的制備)本例以100-400目滌綸單(長)絲篩絹(網)為材料；在袋體的任一面距離頂邊0.8厘米處，用鎖眼機加工一長2厘米、寬0.5厘米的鎖眼口；將袋體上端邊沿向外朝下翻拆2.0厘米；選擇直徑0.4厘米，長度200厘米的滌綸為繩子；凍存袋半成品采用1.0%SODOSILRAM05清洗劑水溶液超聲波浸泡8分鐘并清水清洗3次；其余工藝、步驟同于實施例l。實施例3:(新鮮大白菜葉片的液氮冷凍)冷凍材料選擇完整無損的新鮮大白菜葉片；檢測指標硫代葡萄糖苷組分與含量；冷凍目的避免組織失水和破損導致硫代葡萄糖苷發生降解；凍存袋選用實施例1或2的200目錦綸凍存袋或滌綸凍存袋;，冷凍步驟及凍存袋具體使用方法(1)選取32X23cm2的凍存袋；(2)準備好標簽(帶掛繩)、鋁箔、液氮(罐)、冷凍手套、護目鏡、聚乙烯泡沬板、一個500目錦綸凍存袋、保溫罐(冷凍材料較少)或高密度聚乙烯泡沬保溫箱(冷凍材料較多)；(3)將大白菜葉片用鋁箔包好；(4)放入凍存袋后，袋口繩子一端系上標簽，抽緊袋口繩子，扎緊袋口；通過繩子將該凍存袋放入保溫罐(箱)中；(5)帶上冷凍手套、護目鏡，輕輕把液氮罐中的液氮倒入保溫罐(箱)中，至液氮液相面淹沒凍存袋，蓋上保溫罐(箱)蓋子(留有一定的空隙)，袋口繩子系標簽的一端留在罐(箱)蓋外；(6)當保溫罐(箱)中不再吱吱響時，打開蓋子，用絕熱板或聚乙烯泡沫板輕壓凍存袋以檢測大白菜葉片的冷凍效果；當大白菜葉幫部位輕壓即碎時，牽拉凍存袋口繩子拉出凍存袋，要求凍存袋在離開液氮液相面后停頓5秒，讓袋內多余液相液氮流回保溫罐(箱)中，冷凍處理結束；(7)冷凍好的大白菜葉片連同凍存袋迅速放入超低溫冰箱保存或直接放入真空冷凍干燥機上進行冷凍干燥處理；(8)將保溫罐(箱)中剩余液氮流經一個500目錦綸凍存袋(過慮殘渣)緩慢倒入液氮罐中；(9)用完后的凍存袋先用清洗預洗，再根據臟污程度用適合的清洗劑清洗，然后清水漂洗干凈后經高壓滅菌消毒、烘箱烘干后備下次使用。實施例4:(新鮮黃瓜功能葉片的液氮冷凍)冷凍材料完整無損的新鮮黃瓜功能葉片；檢測指標酶活性；冷凍目的當葉片采后來不及迅速檢測時，避免組織失水與破損使組織酶活性發生改變；凍存袋選用實施例1或2的300目錦綸凍存袋或滌綸凍存袋；冷凍步驟以及凍存袋具體使用方法(1)根據需冷凍材料的大小和特性，選取20X15ci^的凍存袋；(2)冷凍好的黃瓜葉片連同凍存袋迅速放入超低溫冰箱保存；(3)其它步驟與實施例3相同。實施例5:(新鮮小白鼠骨骼肌的液氮冷凍)冷凍材料新鮮小白鼠骨骼肌；檢測指標RNA活性；冷凍目的為了徹底破碎組織和避免RNA降解，一般對組織材料進行液氮快速冷凍和超低溫保存；凍存袋選用實施例1的500目錦綸凍存袋；冷凍步驟以及凍存袋具體使用方法(1)根據需冷凍材料的大小和特性，選取30X30cr^的凍存袋；(2)在液氮環境中輔助敲擊使骨骼肌凍碎；(3)冷凍好的材料連同凍存袋迅速放入超低溫冰箱保存；(3)其它步驟與實施例3相同。實施例6:(新鮮甘藍花粉的液氮冷凍)冷凍材料甘藍花粉；冷凍目的處于完全休眠狀態，達到長期保存的目的；凍存袋實施例1或2的100目錦綸或滌綸凍存袋；冷凍步驟以及凍存袋具體使用方法(1)準備凍存管、體積大小適宜的凍存袋、標簽、實心細木棒；(2)在無菌操作條件下，將準備好的待凍存材料(含保護劑)注入凍存管，立即封口，凍存管上標注材料名稱和日期；(3)凍存管放入凍存袋中，裝入凍存管的總體積不能超過凍存袋體積的三分之二，使凍存管容易進出袋體；(4)袋口繩子一端系上標簽，抽緊袋口繩子，再用袋口繩子捆緊袋口；(5)凍存袋依照4。C、-20°C、-7(TC梯度逐漸冷卻，每個梯度預冷3小時左右；(6)—手打開液氮罐的蓋子，一手提凍存袋口繩子，輕輕把凍存袋投放到液氮液相中，要求液氮液相面能夠淹沒凍存袋，袋口繩子系標簽的一端留在罐外；(7)用實心細木棒定期檢測液氮罐中的液氮，及時添加液氮，始終保持液氮液相面能夠淹沒凍存袋；(8)在使用冷凍材料時，提前準備好保溫罐(箱)、冷凍手套、護目鏡、長柄鑷子；(9)帶上冷凍手套、護目鏡，輕輕把液氮罐中的液氮倒入保溫罐(箱)中，要求液氮液相面能夠淹沒凍存袋，蓋上保溫罐(箱)的蓋子，留有一定的空隙；(10)打開液氮罐蓋子，一手打開保溫罐(箱)的蓋子，一手提凍存袋口繩子，迅速把凍存袋拉出液氮罐，并立即投放到保溫罐(箱)的液氮液相中，袋口繩子系標簽的一端留在罐(箱)夕卜；(11)提袋口一端繩子提離液氮液相面(此過程要求保證全部凍存管浸沒在液氮液相中)，解開袋口，用長柄鑷子夾出需要的冷凍管；(12)系好凍存袋，順袋口繩立即投入液氮罐液相中，袋口繩子系標簽的一端留在罐(箱)夕卜；(13)保溫罐(箱)中剩余液氮流經一只500目錦綸凍存袋(過濾)緩慢倒入液氮罐中；(14)用過的凍存袋先洗凈、清洗劑清洗、再經高壓滅菌消毒、烘箱烘干后備下次使用。試驗例(不同材料凍存袋冷凍大白菜葉片效率比較)表1不同包裝袋冷凍大白菜葉片效率比較<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>注凍存袋1和2的材料分別為滌綸150目和300目，凍存袋3和4的材料為錦綸25Q目和3Q0目。權利要求1、一種用于存放液氮冷凍材料的凍存袋，該袋包括兩側與下端密封的袋體(1)和上端敞開的袋口(2)，其特征在于，其中，所述袋體(1)以耐-196℃超低溫和耐120℃高溫的100-500目的錦綸單絲篩絹或100-400目的滌綸單絲篩絹為材料，其兩側與下端經縫制密封而成；在該袋體(1)任一面距離頂邊0.5～1.0厘米處，設置一長1～2厘米、寬0.5厘米的鎖眼口(3)；所述袋口(2)由袋體(1)上端邊沿向外朝下翻拆、并與袋體(1)縫制成一帶有鎖眼口(3)的環形孔道(4)后所形成；其中，鎖眼口(4)位于袋體(1)一面環形孔道(4)外側的中軸線處；在該環形孔道(4)內設置一根與袋體材料相一致的可抽拉的繩子(5)。專利摘要本實用新型公開了一種用于存放液氮冷凍材料的凍存袋，屬于低溫冷凍保存
技術領域：
。該袋包括袋體(1)和袋口(2)，袋體(1)以耐-196℃超低溫和耐120℃高溫的錦綸或滌綸篩絹為材料；在袋體(1)任一面距離頂邊0.5～1.0厘米處，設置一鎖眼口(3)；袋口(2)由袋體(1)上端邊沿向外朝下翻拆，縫制成一帶有鎖眼口(3)的環形孔道(4)后所形成；在該環形孔道(4)內設置可抽拉的繩子(5)即成。該凍存袋既能耐超低溫，又可耐高溫消毒；滲透性強、透氣性好，提高了樣品的冰凍速度，避免了袋體脹裂的問題；提高了液氮冷凍工作的操作效率與安全性。可用于涉及有關材料需液氮存放的科研或生產領域。文檔編號F17C3/04GK201193776SQ20082008287公開日2009年2月11日申請日期2008年1月31日優先權日2008年1月31日發明者孫高林,楊悅儉,阮美穎,陳新娟申請人:浙江省農業科學院