一種表面等離子體共振(spr)傳感芯片及其制備方法和應用的制作方法
【專利摘要】本發明涉及一種表面等離子體共振(SPR)傳感芯片及其制備方法和應用，屬于醫學檢測領域。所述SPR傳感芯片的結構為，先在基質玻璃片表面依次鍍上鉻膜和金膜，在所鍍的金膜表面修飾生物素-miRNA探針；所述修飾生物素-miRNA探針用三(2-羧乙基)膦(TCEP)還原巰基，用6-巰基1-己醇(MCH)封堵。本發明的有益技術效果為，本發明公開了一種表面等離子體共振(SPR)傳感芯片，此芯片可用于直接檢測低分子量、超低濃度分子；并且公開了此SPR傳感芯片的制備方法，此方法制備成本低、測試效果穩定；并公開了此傳感芯片的應用，此芯片的使用方法簡單、不需要特殊設備、并且測試原料可再生并且重復使用，而且測試效果良好。
【專利說明】—種表面等離子體共振(SPR)傳感芯片及其制備方法和應
用
【技術領域】
[0001]本發明屬于醫學檢測領域，尤其涉及一種HIiCT0RNA (miRNA)的檢測方法，具體是基于表面等離子體共振(SPR)以及金納米棒信號放大的超靈敏和無標記快速microRNA(miRNA)檢測方法，屬于醫學檢測領域。
[0002]
技術背景
[0003]MicroRNAs (miRNAs)是一類在進化上高度保守的非編碼小分子單鏈RNA，在基因轉錄后調控中發揮至關重要的作用，廣泛存在于動植物體內，越來越多的證據表明，miRNAs參與很多重要的生理和病理過程，例如發育、器官形成、調亡、細胞增殖、腫瘤發生等。因此，miRNAs分析檢測就成了我們進一步研究其生物功能，疾病診斷和治療以及相關基因藥物開發的關鍵技術。
[0004]貴金屬納米材料由于其獨特的光物理及化學性質、良好的生物相容性、低毒性，在miRNA分析中扮演者重要的角色并且被廣泛應用于各種生物傳感器。
[0005]SPR技術是一種基于芯片表面折射率或質量變化的光學檢測技術，具有靈敏、快速、免標記等優點，可實時在線跟蹤固液界面上的反應，在蛋白質和核酸等生物分子檢測方面具有廣闊的應用前景。但是傳統的SPR檢測方法難以直接檢測低分子量、超低濃度的分子。miRNAs序列短、缺乏共同的特征、含量少、在細胞中表達豐度低，因此直接利用傳統的SPR技術很難檢測。大部分SPR傳感器都是基于球形金納米顆粒的，有關金納米棒(GNRs)的研究較少。
【發明內容】
[0006]本發明解決的技術問題為，傳統的SPR方法難以直接檢測低分子量、超低濃度分子，本發明公開一種表面等離子體共振(SPR)傳感芯片及其制備方法和應用，目的在于提供一種低成本、速度快的測試方法，及一種可再生并且重復使用、效果好的SPR傳感芯片。
[0007]為實現上述目的本發明采取如下的技術方案。
[0008]本發明涉及一種表面等離子體共振(SPR)傳感芯片，所述SPR傳感芯片的結構為，先在基質玻璃片表面依次鍍上鉻膜和金膜，在所鍍的金膜表面修飾生物素-miRNA探針。
[0009]所述SPR傳感芯片的優選技術方案為，所述修飾生物素-miRNA探針用三(2_羧乙基)膦(TCEP)還原巰基，用6-巰基1-己醇(MCH)封堵。
[0010]本發明還涉及上述傳感芯片的制備方法，首先在基質玻璃片上制備厚度為I?3nm的鉻膜，在其上制備厚度為40?60 nm的金膜；然后在金膜上固定探針，將包含三(2-羧乙基)膦(TCEP)的磷酸緩沖液(PBS)的生物素-miRNA探針滴到金膜上，過夜；固定探針后，用PBS溶液洗去未結合的探針，將得到的金膜用6-巰基1-己醇(MCH)封堵后沖洗，得到SPR傳感芯片。[0011]所述傳感芯片制備方法的優選技術方案為，所述金膜上固定探針的方法為，將25 UL 0.1 μ M的生物素-miRNA探針滴到金膜上，其中包含0.1 M，pH 7.4磷酸緩沖液(PBS)，在PBS中含有2 μ M三(2-羧乙基)膦(TCEP)。
[0012]所述傳感芯片制備方法的優選技術方案為，固定探針經過清洗后，用1.45Χ10_6Μ的6-巰基1-己醇(MCH)封堵。
[0013]本發明還涉及上述傳感芯片的應用，所述SPR傳感芯片與金納米棒(GNRs)-鏈霉親和素用于檢測miRNA、DNA、蛋白質、抗原的含量。
[0014]所述傳感芯片應用的優選技術方案為，所述miRNA含量的檢測，是將SPR傳感芯片置于SPR檢測通道上、將不同濃度的目標miRNA注射到流動分析池，miRNA與生物素-miRNA探針雜交形成雙鏈使生物素暴露出來，記錄其對應的SPR信號響應。然后在低濃度miRNA時，注入GNRs-鏈霉親和素，記錄其對應的SPR信號響應，根據標準曲線，確定miRNA的濃度。
[0015]所述傳感芯片應用的優選技術方案為，在低濃度miRNA時所用的緩沖液為10 mMPBS (ρΗ=7.4)。
[0016]所述傳感芯片應用的優選技術方案為，所述檢測結束后，向SPR檢測通道中分別注射2 mM的NaOH和2 mM的HCl，用于洗脫結合的GNRs-鏈霉親和miRNA，即可測試下一個樣品。
[0017]所述傳感芯片應用的優選技術方案為，所述方法可測量的miRNA低濃度為0.1~100 pM。
[0018]所述傳感芯片應用的優選技術方案為，所述金納米棒、(GNRs)-鏈霉親和素的制備步驟為:
(I)GNRs合成:將19.5 mL十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)溶液(0.1 M, 30 °C溶解)和0.5 mL四氯金酸水合物(HAuCl4.3Η20)溶液(0.01 Μ)混合好后，加入1.2 mL配置好的硼氫化鈉溶液(0.01 M)，快速攪拌混合2分鐘，然后在25°C_27°C下熟化5-10分鐘，即得種子溶液；將19 mL CTAB溶液和0.16 mL硝酸銀溶液(0.01 M，現配現用)在25°C -27°C下混合10分鐘，將I mLHAuCl4.3H20溶液加入其中，約5_10分鐘后加入抗壞血酸溶液(0.1M)，手搖混勻，即得生長溶液。最后將0.032 mL種子溶液加入生長溶液中，攪動I分鐘左右，放入25 °C -27 °C水浴中生長，不要任何攪拌靜置17個小時，生長后將金納米棒在13000rpm下離心12分鐘，重復三次除去多余的CTAB，最后將金納米棒分散在等濃度的CTAB里；
(2)GNRs-鏈霉親和素制備:用1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽(EDC)來活化硫辛酸(TA)的羧基，然后與鏈霉親和素的胺基結合，將GNRs與鏈霉親和素進行端部結合的步驟是:首先將3 mL再分散的GNRs溶液逐滴加入6 mL稀釋的鏈霉親和素(2 X 10_8M)溶液中，輕搖4小時；反應后，將結合的金棒在12000 rpm下離心10分鐘，重復三次，每次離心都用含0.1%聚乙二醇(PEG)的CTAB (0.005 M ,pH 3.8)溶液進行懸浮，最后將修飾的GNRs重新分散在300 μ L含0.1%PEG的CTAB (0.005 M，pH 3.8)溶液中，4°C下保存，制得GNRs-鏈霉親和素。
[0019]本發明中，所述GNRs-鏈霉親和素用于信號放大。
[0020]所述的MCH溶液為MCH原液用純乙醇稀釋配制而成的。
[0021]所述的磷酸緩沖液(PBS)，是將儲備溶液Na2HPO4 (0.2 M)與NaH2PO4 (0.2 M)以大約81/19的比例混合，使其pH值為7.4，然后加入0.9%的NaCl配置成的。
[0022]上述方法中鏈霉親和素的活化方法為將6mL TA (0.0026 M，乙醇配置)與8mL鏈霉親和素(2 X 10_7M)混合，然后逐滴加入1.5 mL EDC并慢慢倒轉混合，在室溫下反應4小時。反應后，將其在PBS溶液(0.01 Μ, pH7.4)中4°C下透析三天，每天更換三次透析液。
[0023]所述的CTAB (0.005 M , pH 3.8)是用 IM HCl 來調節 pH 值。
[0024]所述的鏈霉未和素分子量約為60 kDa。
[0025]所述的加入的GNRs-鏈霉親和素用10 mM PBS (pH=7.4)進行稀釋。
[0026]所述的GNRs-鏈霉親和素與生物素-miRNA探針有強的相互親和作用。
[0027]上述方法的優點還在于，完成一個樣品測試后，向SPR檢測通道中分別注射2 mMNaOH和2 mM HCl洗脫結合的GNRs-鏈霉親和素和miRNA后，即可測試下一個樣品。
[0028]所述的不同濃度的目標miRNA濃度分別位于0.1?100 nM和低濃度0.1?100 pM范圍內。
[0029]上述方法中檢測miRNA的流速為8 μ L/min,檢測GNRs-鏈霉親和素的流速為12μ L/min。
[0030]本發明還可用于特異性檢測，在生物素-miRNA探針修飾的表面分別注射20 nM目標miRNA序列、單堿基錯配序列和三堿基錯配序列，記錄其對應的SPR信號。
[0031]本發明的有益技術效果為，本發明公開了一種表面等離子體共振(SPR)傳感芯片，此芯片可用于直接檢測低分子量、超低濃度分子；并且公開了此SPR傳感芯片的制備方法，此方法制備成本低、測試效果穩定；并公開了此傳感芯片的應用，此芯片的使用方法簡單、不需要特殊設備、并且測試原料可再生并且重復使用，而且測試效果良好。
[0032]
【專利附圖】
【附圖說明】
[0033]圖1為miRNA基于SPR檢測方法的示意圖；
圖2為未與鏈霉親和素結合的GNRs透射電子顯微鏡照片及粒徑分布圖；
圖3為與鏈霉親和素結合的GNRs透射電子顯微鏡照片及粒徑分布圖；
圖4為GNRs (紅色曲線)和GNRs-鏈霉親和素(黑色曲線)的紫外吸收光譜；
圖5為GNRs，GNRs-鏈霉親和素和鏈霉親和素樣品的紅外吸收光譜；
圖6為經1.45X KT6M MCH封堵I小時后，先后注入2 nM目標片段(a)和2X1(T9 MGNRs-鏈霉親和素(b)后的SPR響應圖；插圖:兩種情況下a與b的SPR響應柱狀圖，PBS為緩沖液；
圖7為SPR響應與不同目標片段濃度(0.1 nM, I nM, 2 nM, 10 nM, 50 nM, 100 nM)對數的柱狀圖；插圖=SPR響應值與目標濃度對數的線性圖；
圖8為在不同濃度miRNA (0.1 pM, 5 pM, 10 pM, 50 pM, 100 pM )存在下加入固定濃度的GNRs-鏈霉親和素的SPR響應圖，直線代表沒加入GNRs-鏈霉親和素前的基線；插圖:SPR響應值與目標濃度對數的線性圖；
圖9為在金膜表面分別組裝0.1 μ M生物素-miRNA探針后注射20 nM不同目標片段(完全互補鏈，單堿基錯配鏈，三堿基錯配鏈)的SPR響應圖；插圖:三種情況下的SPR柱狀圖。[0034]
【具體實施方式】
[0035]實施例1
1.在載玻片上噴鍍厚度為為40?60 nm金膜的方法為:
(1)將BK7載玻片在80°C水虎魚(H2O2與濃H2SO4體積比為1:3的混合液)中清洗30分鐘，待冷卻到室溫后，載玻片用去離子水沖洗干凈，N2吹干；
(2)將清洗干凈后的載玻片置于真空鍍膜機中鍍膜:
a)先鍍一層2nm厚的鉻膜；
b)在鉻膜上繼續鍍一層50nm厚的金膜。
[0036]2.芯片的制備:
(I)將干凈的金膜用100%的乙醇沖洗然后再用去離子水洗凈，最后用N2氣吹干備用。
[0037](2)配制0.1 μ M的生物素-miRNA探針溶液，其中包含2 μ M TCEP的PBS溶液(0.1 Μ, pH 7.4)。
[0038](3)將25 μ L生物素-miRNA探針溶液滴到準備好的金膜上，在4°C下過夜。
[0039](4)固定探針后，用少量PBS溶液洗去未結合的探針并用N2氣吹干，將得到的金膜用1.45 X IO-6M的MCH封堵I個小時，最后去離子水沖洗，N2氣吹干以備SPR檢測。
[0040]3.SPR儀器校準步驟:
(I)裝上修飾好的金膜后，將注射閥搬到Load模式，模式選擇閥搬到Serial模式，裝上含去離子水的注射器進行校準。
[0041](2)調整流速為50 μ L/min，向樣品環中注入150 μ L 1%的乙醇，將閥搬到inject模式，使其SPR響應為60.0 mDeg,重復幾次。
[0042]4.miRNA傳感器性能檢測實驗步驟為:
(I)校準后，將注射器緩沖液換為PBS (0.1 M, pH 7.4)，調整流速為8 μ L/min，待基線平穩后，分別注入150 UL 0.1、1、2、10、50、100 nM的目標片段溶液(PBS，0.1M)，調整反應時間為10分鐘，同時記錄SPR響應信號。
[0043](2)測完一個濃度片段后向SPR檢測通道中注射2 mM鹽酸溶液2分鐘，將(I)中結合到芯片上的目標片段洗脫，為檢測下一個樣品做準備。
[0044](3)實驗準備和儀器校準步驟與上面相同，調整流速為8 μ L/min，然后用緩沖液PBS (10 mM, pH7.4)跑基線，待基線穩定后，分別注入0.1、5、10、50、100 pM的目標片段，調整反應時間為10分鐘，記錄SPR響應信號，接著緩沖液沖洗5分鐘，待基線平穩后流動注射等濃度的GNRs-鏈霉親和素溶液(2X I(T9M)，反應時間為5分鐘，緩沖液沖洗，記錄SPR響
應信號。
[0045]a) (3)中檢測miRNA時所用的緩沖液為10 mM PBS (pH=7.4)。
[0046]b)用10 mM的PBS (pH=7.4)將制備好的GNRs-鏈霉親和素(2 X I(T8M)稀釋10倍。
[0047](4)測完一個濃度片段后向SPR檢測通道中先后注射2 mM氫氧化鈉溶液和鹽酸溶液各2分鐘，將(3)中結合到芯片上的GNRs-鏈霉親和素和目標片段洗脫，為檢測下一個樣品做準備。[0048](5)從圖7和圖8中可以看出，在0.1?100 nM和0.1?100 pM的范圍內，miRNA濃度與SPR的信號成線性關系。
[0049]5.miRNA傳感器選擇性檢測步驟為:
在生物素-miRNA探針修飾的表面分別注射20 nM目標miRNA序列、單堿基錯配序列和三堿基錯配序列，步驟與上述相同，分別記錄其對應的SPR響應信號。
[0050]圖1:生物素-miRNA探針首先修飾到金膜上形成發卡結構，當與其互補的目標片段存在時，兩者雜交形成雙鏈使生物素暴露出來，產生一個SPR信號，接著GNRs-鏈霉親和素與生物素識別并結合到DNA*RNA復合物上，加強了傳感器對miRNA的響應，從而導致了SPR信號增強。
[0051]如圖2所示:GNRs的平均長度為42.1±1.2 nm,寬為14.3±0.9 nm，根據粒徑分布圖可知它的縱橫比為3.5，約占全部粒子的36%。
[0052]從圖3可以看出修飾了鏈霉未和素后，GNRs邊緣與圖2相比更I旲糊，說明鏈霉未和素對金棒的形貌有一定影響。從粒徑分布圖可以看出GNRs的縱橫比有所增加。
[0053]從圖4可以看出GNRs在修飾了鏈霉親和素后縱向吸收峰藍移了大約18 nm，表明了縱向吸收峰比橫向吸收峰敏感，說明了 GNRs表面附近折射率發生了變化并且GNRs沒有發生聚集現象。
[0054]從圖5可以看出，鏈霉親和素-金棒和鏈霉親和素在1638 cm'1左右時有一個明顯的特征峰，即C=C、C=N鍵的振動峰，而GNRs沒有，表明鏈霉親和素已成功修飾在GNRs上。
[0055]從圖6可以看出加入GNRs-鏈霉親和素后，由于生物素與親和素的強相互作用，SPR響應大大增加，當注射的GNRs-鏈霉親和素完全流出流動分析池后，GNRs-鏈霉親和素從金膜表面洗脫下來，信號開始下降(?3567s)，可能是由于金膜在長時間沖洗下遭到破壞，因而導致了 SPR信號的不斷下降，從小圖兩種情況的比較可以看出，加入GNRs-鏈霉親和素后的SPR信號變化b比不加時a增加了 16倍。
[0056]由圖7可以看出在GNRs-鏈霉親和素不存在時，可以觀察到目標片段濃度大于0.1nM的SPR響應，隨著目標片段濃度的增加對應的SPR響應逐漸上升，在0.1?100 nM之間表現出很好的線性關系。
[0057]從圖8可以看出加入GNRs-鏈霉親和素后檢測濃度達到了 0.1 pM，并且在低濃度目標片段0.1?IOOpM間有線性關系。
[0058]從圖9可以看出，單堿基錯配序列(紅色)的SPR響應是完全互補序列(黑色)SPR響應值的63%，而完全互補序列的SPR響應值是三堿基錯配序列(綠色)SPR響應值的2.96倍。
[0059]實施例2
1.金I吳的制備:
(1)將BK7載玻片在80°C水虎魚(H2O2與濃H2SO4體積比為1:3的混合液)中清洗30分鐘，待冷卻到室溫后，載玻片用去離子水沖洗干凈，N2吹干；
(2)將清洗干凈后的載玻片置于真空鍍膜機中鍍膜:
a)先鍍一層2nm厚的鉻膜；
b)在鉻膜上繼續鍍一層50nm厚的金膜。
[0060]2.芯片的制備:同實施例1。[0061]3、GNRs-鏈霉親和素的制備
用1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽(EDC)來活化硫辛酸(TA)的羧基，然后與鏈霉親和素的胺基結合，將GNRs與鏈霉親和素進行端部結合的步驟是:首先將3mL再分散的GNRs溶液逐滴加入6 mL稀釋的鏈霉親和素(2 X 10_8M)溶液中，輕搖4小時；反應后，將結合的金棒在12000 rpm下離心10分鐘，重復三次，每次離心都用含0.1%聚乙二醇(PEG)的CTAB (0.005 M ,pH 3.8)溶液進行懸浮，最后將修飾的GNRs重新分散在300yL含0.1%PEG的CTAB (0.005 M ,pH 3.8)溶液中，4°C下保存，制得GNRs-鏈霉親和素。
[0062]4、測試步驟
(1)將制備好的生物素-miRNA探針芯片置于分析池上，參照實施例1進行校準；
(2)分別注入150yL 0.1、1、2、10、50、100 nM的目標片段溶液(PBS, 0.1M)，調整反應時間為10分鐘，同時記錄SPR響應信號；
(3)測完一個濃度片段后向SPR檢測通道中注射2 mM鹽酸溶液2分鐘，將(2)中結合到芯片上的目標片段洗脫，為檢測下一個樣品做準備。
[0063](4)分別注入0.1、5、10、50、100 pM的目標片段，調整反應時間為10分鐘，記錄SPR響應信號，接著緩沖液沖洗5分鐘，待基線平穩后分別注射等濃度的GNRs-鏈霉親和素溶液(2X 10_9M)，反應時間為5分鐘，緩沖液沖洗，記錄SPR響應信號。
[0064]a) (4)中檢測miRNA時所用的緩沖液為10 mM PBS (pH=7.4)。
[0065]b)用10 mM的PBS (pH=7.4)將制備好的GNRs-鏈霉親和素(2 X I(T8M)稀釋10倍。
[0066](5)測完一個濃度片段后向SPR檢測通道中先后注射2 mM氫氧化鈉溶液和鹽酸溶液各2分鐘，將(4)中結合到芯片上的GNRs-鏈霉親和素和目標片段洗脫，為檢測下一個樣品做準備。
[0067]實施例3
利用實施例1得到的miRNA傳感器進行特異性檢測的步驟為:
(I)在生物素-miRNA探針修飾的表面分別注射20 nM目標miRNA序列、單堿基錯配序列和三堿基錯配序列，步驟與實施例2中的4相同，分別記錄其對應的SPR響應信號。
[0068](2)傳感器的再生步驟參照實施例2。
【權利要求】
1.一種表面等離子體共振(SPR)傳感芯片，其特征在于，所述SPR傳感芯片的結構為，先在基質玻璃片表面依次鍍上鉻膜和金膜，在所鍍的金膜表面修飾生物素-miRNA探針。
2.根據權利要求1所述SPR傳感芯片，其特征在于，所述修飾生物素-miRNA探針用三(2-羧乙基)膦(TCEP)還原巰基，用6-巰基1-己醇(MCH)封堵。
3.如權利要求1所述傳感芯片的制備方法，其特征在于，首先在基質玻璃片上制備厚度為I~3 nm的鉻膜，在其上制備厚度為40~60 nm的金膜；然后在金膜上固定探針，將包含三(2-羧乙基)膦(TCEP)的磷酸緩沖液(PBS)的生物素-miRNA探針滴到金膜上，過夜；固定探針后，用PBS溶液洗去未結合的探針，將得到的金膜用6-巰基1-己醇(MCH)封堵后沖洗，得到SPR傳感芯片。
4.根據權利要求3所述傳感芯片的制備方法，其特征在于，所述金膜上固定探針的方法為，將25 μ L 0.1 μ M的生物素-miRNA探針滴到金膜上，其中包含0.1 M，pH 7.4磷酸緩沖液(PBS)，在PBS中含有2 μ M三(2-羧乙基)膦(TCEP)。
5.根據權利要求3所述傳感芯片的制備方法，其特征在于，固定探針經過清洗后，用1.45X IO-6M的6-巰基1-己醇(MCH)封堵。
6.如權利要求1所述傳感芯片的應用，其特征在于，所述SPR傳感芯片與金納米棒(GNRs)-鏈霉親和素用于檢測miRNA、DNA、蛋白質、抗原的含量。
7.根據權利要求6所述傳感芯片的應用，其特征在于，所述miRNA含量的檢測，是將SPR傳感芯片置于SPR檢測通道上、 將不同濃度的目標miRNA注射到流動分析池，miRNA與生物素-miRNA探針雜交形成雙鏈使生物素暴露出來，記錄其對應的SPR信號響應；然后在低濃度miRNA時，注入GNRs-鏈霉親和素，記錄其對應的SPR信號響應，根據標準曲線，確定miRNA的濃度；低濃度miRNA時所用的緩沖液為10 mM PBS (pH=7.4)。
8.根據權利要求7所述傳感芯片的應用，其特征在于，所述檢測結束后，向SPR檢測通道中分別注射2 mM的NaOH和2 mM的HC1，用于洗脫結合的GNRs-鏈霉親和miRNA，即可測試下一個樣品。
9.根據權利要求7所述傳感芯片的應用，其特征在于，所述方法可測量的miRNA低濃度為 0.1 ~100 pM。
10.根據權利要求6所述傳感芯片的應用，其特征在于，所述金納米棒、(GNRs)-鏈霉親和素的制備步驟為: (1)GNRs合成:將19.5 mL十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)溶液(0.1 M, 30 °C溶解)和0.5 mL四氯金酸水合物(HAuCl4.3Η20)溶液(0.01 Μ)混合好后，加入1.2 mL配置好的硼氫化鈉溶液(0.01 M)，快速攪拌混合2分鐘，然后在25°C_27°C下熟化5-10分鐘，即得種子溶液；將19 mL CTAB溶液和0.16 mL硝酸銀溶液(0.01 M，現配現用)在25°C -27°C下混合10分鐘，將I mLHAuCl4.3H20溶液加入其中，約5_10分鐘后加入抗壞血酸溶液(0.1M)，手搖混勻，即得生長溶液，最后將0.032 mL種子溶液加入生長溶液中，攪動I分鐘左右，放入25 °C -27 °C水浴中生長，不要任何攪拌靜置17個小時，生長后將金納米棒在13000 rpm下離心12分鐘，重復三次除去多余的CTAB，最后將金納米棒分散在等濃度的CTAB里； (2)GNRs-鏈霉親和素制備:用1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽(EDC)來活化硫辛酸(TA)的羧基，然后與鏈霉親和素的胺基結合，將GNRs與鏈霉親和素進行端部結合的步驟是:首先將3 mL再分散的GNRs溶液逐滴加入6 mL稀釋的鏈霉親和素(2 Xl(T8M)溶液中，輕搖4小時；反應后，將結合的金棒在12000 rpm下離心10分鐘，重復三次，每次離心都用含0.1%聚乙二醇(PEG)的CTAB (0.005 M ,pH 3.8)溶液進行懸浮，最后將修飾的GNRs重新分散在300 μ L含0.1%PEG的CTAB (0.005 M，pH 3.8)溶液中，4°C下保存，制得GNRs-鏈霉親和素。
【文檔編號】B82Y40/00GK103698303SQ201310718451
【公開日】2014年4月2日 申請日期:2013年12月23日 優先權日:2013年12月23日
【發明者】郝開紅, 董海峰, 金時, 代文浩 申請人:北京科技大學