一種肌紅蛋白定量檢測的磁微粒化學發光微流控芯片的制作方法
【專利摘要】本實用新型提供一種肌紅蛋白定量檢測的磁微粒化學發光微流控芯片，其結構主要包括蓋片(1)和底片(11)，其中蓋片(1)上的空氣泵(3)，氣流微通道(5)，加樣口(2)，樣本液流通道(6)，第一生物標記物存儲池(4)，微混合器(7)以及過渡區(10)依次連接；底片(11)上的過濾器(12)，反應池(13)，清洗池(14)，檢測池(15)，溶液釋放通道(18)依次連接；底片(11)上的檢測池(15)通過溶液釋放通道(18)與清洗液存儲池(16)和發光液存儲池(17)連接；所述蓋片(1)和底片(11)用膠帶(20和22)密封；本實用新型提供的微流控芯片檢測結果靈敏度高，準確可靠，重復性好，成本低。
【專利說明】
一種肌紅蛋白定量檢測的磁微粒化學發光微流控芯片
技術領域
[0001]本發明涉及臨床醫學檢驗領域，具體涉及一種肌紅蛋白定量檢測的磁微粒化學發光微流控芯片，能夠在數分鐘內實現對生物樣品中肌紅蛋白的定量檢測，該檢測方法具有操作簡單，靈敏度高，低成本等特點。【背景技術】[00〇2] 肌紅蛋白(myoglobin，MY0，Mb)是由一條肽鏈和一個血紅素輔基組成的結合蛋白， 是肌肉內儲存氧的蛋白質，它的氧飽和曲線為雙曲線型。肌肉中運載氧的蛋白質，由153個氨基酸殘基組成，分子量為16.7KD，含有血紅素，和血紅蛋白同源，與氧的結合能力介于血紅蛋白和細胞色素氧化酶之間，可幫助肌細胞將氧轉運到線粒體。肌紅蛋白是組成骨骼肌和心肌的主要蛋白質，當肌肉損傷時，可以從肌肉組織中漏到循環血液中，使血清肌紅蛋白濃度增加。因此，該指標用于判斷是否發生肌肉損傷。在健康人體內，正常值，男性20?80y g/L;女性10?70iig/L;急性心肌梗死早期、急性肌損傷、肌營養不良、肌萎縮、多發性肌炎、 急性或慢性腎功能衰竭、嚴重充血性心力衰竭和長期休克等都可能導致肌紅蛋白含量升高。測定血清肌紅蛋白可作為急性心肌梗死(AMI)診斷的早期最靈敏的指標。但特異性差， 骨骼肌損傷、創傷、腎功能衰竭等疾病，都可導致其升高。Myo陽性雖不能確診AMI，但可用于早期排除AMI診斷的重要指標。
[0003]目前用于檢測肌紅蛋白的主要方法為酶聯免疫法(e n z y m e - 1 i n k e d immunosorbent assay，ELISA)和化學發光免疫分析法(chemiluminescence immunoassay, CLIA) ALISA則由于方法間差異較大，導致結果不均一，且線性范圍較窄，操作復雜，不適于做單人份或少量標本的檢測。化學發光技術興起于上個世紀80年代是繼酶聯免疫技術和放免技術之后發展起來的新興技術，由于其高靈敏度、高特異性，同時方法簡便、快速，標記結合物穩定，無放射性同位素損傷和污染等特點，在近些年得到了飛速發展。中國專利(CN 103033627 A)，公開了一種人肌紅蛋白酶促化學發光免疫檢測方法，具體做法為:在固定有抗人肌紅蛋白單克隆抗體的聚苯乙烯微孔板上，加入待檢測樣本和辣根過氧化物酶標記的抗人肌紅蛋白單克隆抗體，孵育一定時間，經過洗滌，再加入發光試劑，在化學發光儀測定發光值，根據抗原濃度和發光強度間的關系，得出待檢樣品中肌紅蛋白的含量。本方法用于肌紅蛋白的定量檢測靈敏度高，穩定性好，但檢測時操作步驟繁瑣，需要專業人員操作，不適合中小醫院和基層醫療單位，同時檢測時間長，不能用于及時快速診斷。
[0004]近年來，生物分析技術領域得到了快速的發展，出現了很多重要的研究方向。微流控芯片分析技術是其中最活躍的一支，在科研和實際應用領域都獲得了廣泛的重視。微流控芯片作為一種新型的分析檢測平臺，具有高通量、集成化、便攜式、易操作、低成本等優點，已經在眾多領域中得到了廣泛的應用，尤其是在免疫分析領域已嶄露頭角。
[0005]表面功能化的磁性微球作為固相載體，可以用來有效地捕獲核酸、蛋白分子、病毒顆粒甚至細胞，已經被廣泛地應用于各種生化指標的臨床診斷等領域。而微流控芯片系統具有快速、高效、集成化等特點，兩者相結合，將成為一種新型的高性能檢測方法，以解決當前檢測方法中存在的靈敏度低，檢測過程復雜，難以實現微量樣本檢測的問題，有望進一步推動臨床檢測儀器向便攜化和微型化發展。
[0006]免疫磁珠的生物微流控芯片是將磁顆粒技術，免疫分析集成到微流控芯片上的一種分析檢測方法，目前這種綜合性的檢測方法的主要難點表現為:1)液體在芯片內部微流動的智能控制，目前常采用的方法是在芯片內部設置多個微栗和微閥，使得微流控體系變得更加復雜化;2)反應體系的混合不充分，導致反應不充分;3)集成化程度不高，導致非特異性背景高。
【發明內容】
[0007]本發明針對現有技術的不足，提出一種肌紅蛋白定量檢測的磁微粒化學發光微流控芯片，臨床檢驗人員只需經過簡單操作，即可在數分鐘內快速實現樣品中肌紅蛋白濃度的定量檢測。檢測結果靈敏度高，準確可靠，重復性好，成本低。
[0008]本發明涉及的技術問題所采用的技術方案如下為:
[0009]—種肌紅蛋白定量檢測的磁微粒化學發光微流控芯片，其特征在于，所述微流控芯片結構主要包括蓋片(1)和底片(11)，其中蓋片(1)上空氣栗(3)，氣流微通道(5)，加樣口 (2)，樣本液流通道(6)，第一生物標記物存儲池(4)，微混合器(7)以及過渡區(10)依次連接;底片(11)上過濾器(⑵，反應池(13)，清洗池(14)，檢測池(15)，溶液釋放通道(18)依次連接;底片(11)上檢測池(15)通過溶液釋放通道(18)與清洗液存儲池(16)和發光液存儲池 (17)連接；
[0010]所述第一生物標記物存儲池(4)存儲預封裝酶或發光劑標記抗肌紅蛋白抗體溶液;所述反應池(13)存儲預封裝磁顆粒標記抗肌紅蛋白抗體;所述清洗液存儲池(14)和和發光液存儲池(17)分別存儲預封裝清洗液和發光液;所述蓋片(1)和底片(11)用膠帶(20和 22)密封;所述微流控芯片測試流程中，用磁鐵操控磁顆粒移動或聚集。
[0011]具體地，本發明所述第一生物標記物存儲池(4 )、清洗液存儲池(14)和發光液存儲池(17)體積為10?500yl，優選10?300yl，為液囊或腔體;所述微流控芯片的微混合器是寬度為20?300_，深度為10?lOOwii的蛇形，折線形或方形結構;所述微流控芯片的過濾器由腔體和濾血膜組成。
[0012]優選地，所述微流控芯片的微混合器寬度為150WI1，深度為50WI1的方形結構，在外部壓力作用下，可使樣本和試劑充分混合，提高反應效率。
[0013]優選地，所述微流控芯片的過濾器的腔體體積為樣本體積的3?10倍，優選腔體體積為樣本體積的4?6倍。
[0014]具體地，所述微流控芯片底片中過濾器內的濾血膜材質可以為玻璃纖維膜，聚酯纖維膜或CytoS印膜等，優選地，以玻璃纖維膜作為濾血膜。
[0015]具體地，本發明所述微流控芯片的過濾器具有濾除樣本雜質的功能外，還可以將液體引導進入下一級微結構和微通道。
[0016]具體地，本發明所述微流控芯片的反應池為一毛細管微通道，該毛細管微通道為管狀通道或矩形通道，允許微液體流進或通過。
[0017]優選地，所述反應池為管狀通道，直徑為0.5?10mm;更優選微通道的直徑為5mm， 進一步優選2mm或1mm。
[0018] 優選地，所述反應池為矩形通道，寬為0.1?5mm，深度為0.01?2mm，長為5?40mm。 [〇〇19]具體地，本發明所述毛細管通道的體積小于150yl，作為優選，毛細管通道的體積小于lOOiil，進一步優選，毛細管通道體積小于50yl，低于30yl甚至更好，低于20yl甚至更好，如小于15yl，小于lOyl甚至小于5yl。
[0020]具體地，本發明所述磁顆粒標記抗肌紅蛋白抗體使用的磁顆粒為超順磁性顆粒， 可為順磁性的Fe3〇4或y _Fe2〇3化合物，優選Fe3〇4化合物，磁顆粒粒徑為0.1?10圓。優選磁顆粒粒徑為1?3ym，更優選粒徑為2.0ym的磁顆粒。
[0021]具體地，本發明所述微流控芯片蓋片和底片內除上述主要微通道和微結構外還有許多透氣孔和用于組裝固定的讓位孔和立柱。
[0022]具體地，所述微流控芯片蓋片上的空氣栗(3)主要是通過氣流通道(5)傳遞壓力， 主要作用是用于樣本和第一生物標記物的混合，提高一級孵育效果。[0〇23]具體地，本發明所述微流控芯片的氣流通道尺寸為0.1?lOOwn，進一步優選2?50 ym〇
[0024]具體地，本發明所述微流控芯片蓋片的過渡區是蓋片和底片連接的樞紐，一級反應混合物經過渡區流入過濾器，實現了液體在微流控芯片的上下片層間的流動。[〇〇25]本發明所述微流控芯片的反應池內部需進行一定的表面改性處理，所述表面改性處理方法可為化學反應，表面涂層，等離子處理等，從而獲得良好的親水性，促使液體樣本在毛細管作用力下流動，快速填充微通道。
[0026]本發明中所述酶，包含但不限定于過氧化氫酶(HRP)和堿性磷酸酶(ALP)。發光基底液為酶對應的發光底物(如魯米諾或金剛烷)和發光增強液(如苯衍生物等增強劑)，其中發光底物和發光增強液可合并，如圖2所示混合均勻后注入一個發光基底液存儲池(17);但當混合液保質期少于1年時應分開，如圖4所示分別注入發光基底液存儲池(17)和發光基底液存儲池(24 )，通過預混合通道(23)混合均勻。
[0027]本發明所述微流控芯片的組裝，蓋片和底片通過密封膠帶進行黏合，密封膠帶可為普通雙面膠，熱敏膠和壓敏膠等，作為優選密封膠帶為熱敏膠或壓敏膠。
[0028]具體地，本發明所述清洗液，用于清洗磁顆粒，去除未參與反應的雜質物質。清洗液主要包含緩沖體系、蛋白質、表面活性劑和防腐劑，其中緩沖體系包含但不限于硼酸鹽、 磷酸鹽、Tris-HCl和醋酸鹽等。其中蛋白質包含但不限于牛血清白蛋白、酪蛋白等；其中表面活性劑包含但不限于吐溫20、吐溫80、曲拉通X-100、聚乙二醇和聚乙烯基吡咯烷酮等。
[0029]本發明提供一種使用上述微流控芯片對待測樣本進行檢測的方法，具體操作步驟包括:
[0030]步驟1)從加樣口加入樣本，將微流控芯片放入配套儀器中，從第一生物標記物存儲池釋放酶或發光劑標記抗肌紅蛋白抗體溶液后，按壓空氣栗，氣流通過氣流微通道推進樣本流經樣本液流通道，在微混合器與酶或發光劑標記抗肌紅蛋白抗體溶液混合均勻反應，形成一種免疫復合物，然后流入過渡區進入底板過濾器中；
[0031]步驟2)樣本經過濾器后，到達反應池，復溶包被在該區域的磁顆粒標記抗肌紅蛋白抗體，且與之發生反應，接著磁鐵收集磁顆粒并移動至清洗池，從清洗液存儲池釋放清洗液，磁顆粒經充分洗滌后，在磁鐵作用下移至檢測池，從發光液存儲池釋放發光基底液，根據相對發光強度(RLU)與肌紅蛋白抗原濃度間的比例關系，檢測系統可自動換算，可快速報告測試結果，從而實現肌紅蛋白的定量檢測。
[0032]具體地，本發明所用的檢測樣品包括來自人體的全血，血清和血漿，所用樣本體積為5?200yl，優選150yl，進一步優選50yl。
[0033]具體地，所述配套儀器為小型便攜設備，所述設備主要包括控制裝置和檢測裝置。
[0034]具體地，所述配套小型便攜設備的控制裝置主要作用為對放置其內部的微流控芯片可實施包含控制液體流動，樣本混合，釋放存儲池內試劑，磁鐵移動，檢測裝置的主要作用為采集發光信號并對其進行分析，最終顯示檢測結果。
[0035]具體地，所述磁鐵運動為相對于反應池的勾速直線運動或加速運動或減速運動， 勾速運動的速度為lmm/s?50mm/s，優選磁鐵運動速度為2mm/s?30mm/s。
[0036]具體地，本發明所述便攜設備的控制裝置主要作用為對微流控芯片實施擠壓空氣栗實現樣本和生物標記物的混合，控制磁鐵的運動實現磁性微球標記抗體和一級反應物的充分混合和磁珠的收集，控制磁鐵的運動實現反應混合物依次在反應池，清洗池，檢測池間的移動，有效降低非特異性干擾。
[0037]本發明所述微流控芯片的制備方法如下:
[0038]步驟1)酶或發光劑標記抗肌紅蛋白抗體，磁顆粒標記抗肌紅蛋白抗體，這兩種標記抗體可為同一種抗體或不同抗體；
[0039]步驟2)將酶或發光劑標記抗體溶液放入蓋片的標記抗體存儲池中，密封，將磁顆粒標記抗體溶液放入底片的反應池中，干燥，將清洗液和發光基底液分別注入清洗液存儲池和發光基底液存儲池中，密封，用膠帶(20和22)密封蓋片和底片，并組裝形成一個完整的微流控芯片。
[0040]本發明與現有技術相比，所獲得的有益效果為:
[0041]1)測試前無需對樣本進行復雜的預處理工作，且對樣本類型無局限性，全血，血清，血衆都在本方法中適用；
[0042]2)將磁免疫技術集成到微流控芯片上，綜合了兩種技術的優勢，使整個檢測過程具有操作簡單，結果準確可靠，靈敏度高的特點。[〇〇43]3)配合小型檢測設備和芯片內部的簡單處理，無需復雜的栗閥和電場就能夠有效地在微流控芯片內部實現液流的智能控制。
[0044]4)具有多步混合功能，在一定程度上可提高免疫反應效率。
[0045]5)在微流控芯片上的各種反應、清洗和檢測過程分區域進行，集成化程度高，可有效降低非特異性干擾，提高檢測的靈敏度。
[0046]6)采用本發明所涉及微流控芯片進行檢測，能夠快速報告檢測結果，可進一步用于床旁檢測和各種便攜設備。[〇〇47]本發明的核心技術是將磁微粒技術、化學發光免疫檢測技術和微流控芯片技術三者相結合，其中磁顆粒的種類、大小、通道形狀、大小等參數的細微改變都會極大影響檢測結果的準確性。本發明通過微流控芯片的精細設計和加工，并配合小型便攜設備，成功實現了微流體在微流控芯片內部的智能控制，通過磁鐵的作用使得磁微粒能夠在微流控芯片內部實現可控的運動，混合，收集和清洗，提高反應效率，降低了非特異性干擾，從而增強了檢測信號，提高了檢測靈敏度。本發明的技術并非三者的簡單疊加，而是集成了三者的優勢， 在現有技術基礎上進行了完善和改進的一種新的用于肌紅蛋白快速定量的方法。【附圖說明】
[0048]圖1為微流控芯片的蓋片結構示意圖，其中2為加樣口，3為空氣栗，4為第一生物標記物存儲池，5為氣流通道，6為樣本液流通道，7為微混合器，8為儲液池讓位孔，9為磁鐵運動滑槽，10為過渡區。
[0049]圖2為微流控芯片的底片結構示意圖，其中12為過濾器，13為反應池，14為清洗池， 15為檢測池，16為清洗液存儲池，17為發光液存儲池，18為清洗液和發光試劑釋放通道，19 為廢液回收池。
[0050]圖3為微流控芯片的完整結構示意圖，其中1為蓋片，11為底片，20為頂部膠帶，22 為底部膠帶。[0051 ]圖4為三個液體存儲池的底片結構示意圖，其中16為清洗液存儲池，17和24為發光液存儲池，18為清洗液，23為發光液釋放通道。【具體實施方式】:[〇〇52]本發明公開了一種肌紅蛋白定量檢測的磁微粒化學發光微流控芯片，本領域技術人員可以借鑒本文內容，適當改進工藝參數實現。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領域技術人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發明。本發明的方法及應用已經通過較佳實施例進行了描述，相關人員明顯能在不脫離本
【發明內容】
、精神和范圍內對本文所述的方法和應用進行改動或適當變更與組合，來實現和應用本發明技術。[〇〇53]為了使本領域的技術人員更好地理解本發明的技術方案，下面對照附圖并結合優選【具體實施方式】對本發明進行詳細的闡述。
[0054]實施例1:辣根過氧化物酶-魯米諾(HRP-luminol)系統用于肌紅蛋白的檢測 [〇〇55]1.微流控芯片的制作[0〇56]1)抗體標記:i)酶標抗體:稱取5mg HRP溶解于lml蒸餾水中；于上液中加入0.2ml新配的0.1M NalO 4溶液，室溫下避光攪拌20分鐘;將上述溶液裝入透析袋中，對ImM pH4.4 的醋酸鈉緩沖液透析，4°C過夜；加20yl 0.2M pH9.5碳酸鹽緩沖液，使以上醛化HRP的pH升高到9.0?9.5，然后立即加入10mg肌紅蛋白抗體，在lml 0.01M碳酸鹽緩沖液中，室溫避光輕輕攪拌2小時；加0.lml新配的4mg/ml NaBH4液，混勻，再置4°C2小時;將上述液裝入透析袋中，對0.15M pH7.4PBS透析，4 °C過夜;在攪拌下逐滴加入等體積飽和硫酸銨，置4 °C 1小時；3000rpm離心半小時，棄上清；沉淀物用半飽和硫酸銨洗二次，最后沉淀物溶于少量 0.15M pH7.4的PBS中；將上述溶液裝入透析袋中，對0.15M pH7.4的PBS緩沖液透析，去除銨離子后，10,000rpm離心30分鐘去除沉淀，上清液即為酶結合物，分裝后，2-4°C保存。ii)磁標抗體:準確移取30yl濃度為lmg/ml的鏈霉親和素標記磁珠，其中該功能化磁顆粒是以 Fe3〇4為核，聚苯乙烯為殼，粒徑為2.0wn，于2ml離心管中，渦旋震蕩30min。再加入30yl濃度為1 Oyg/ml的生物素標記的人肌紅蛋白二抗，室溫下孵育2小時。磁性分離器除去磁珠中的液體，用0.01]\1?85(含0.01%854/0.2%恥吧口117.4)清洗3次，將磁珠懸浮于0.01]\1?85，孵育過夜，重復上述分離，清洗步驟，最終稀釋至指定濃度。[〇〇57]2)磁標抗體的包被:采用點樣儀或噴點儀將lOiil磁性微球點樣在微流控芯片的反應池中，室溫干燥30分鐘以上。
[0058]3)微流控芯片的組裝:將10yl濃度為3yg/ml的HRP，300yl清洗液，200yl發光試劑分別封裝在試劑卡的各存儲池內，同時將芯片卡其他部件進行組裝，形成一張完整的微流控芯片。[〇〇59]4)存儲:4。(:，濕度為50%條件下保存。[〇〇6〇] 2.肌紅蛋白的定量檢測
[0061]1)標準曲線的制作:將肌紅蛋白標準品用小牛血清稀釋，配成濃度為Ong/ml，10ng/ml，25ng/ml，50ng/ml，150ng/ml，400ng/ml的肌紅蛋白標準品各 150yl，取30yl加入本發明實施例中制備的微流控芯片的加樣口，蓋上血液蓋，將試劑盒置于配套的設備中，放置 15min。每個樣本分別重復測定3次。讀取器自動顯示肌紅蛋白含量，根據肌紅蛋白的濃度及相應的發光強度，取三次測定平均值，繪制標準曲線。[〇〇62]2)取待檢樣本200iU，置于本發明實施例中所制作的微流控芯片中進行檢測，每次取樣30iU，重復測定3次，根據1)中繪制的標準曲線獲得待檢樣品中肌紅蛋白的濃度。[〇〇63]3)結果表明:采用本發明所述方法，得出的檢出限為lng/ml，檢測范圍為0.5ng/ml-1000ng/ml，批間CV小于10%，批內CV小于5%。
[0064]實施例2:堿性磷酸酶-金剛烷(ALP-AMPPD)系統用于肌紅蛋白的檢測 [〇〇65]1.微流控芯片的制作[〇〇66]1)抗體標記:1)酶標抗體:2.511^八1^(5011]/11^)，加入20(^1含1.25%戊二醛的100mM的ro(pH6.8)，混勻，室溫反應過夜;4°C條件下，電磁攪動，透析至50mM PBS(pH7.2)， 12小時，換液4次；1.5mg肌紅蛋白抗體溶于lOOyl 1M的碳酸鹽溶液(pH9.0);將活化的AP加入配好的蛋白質液體中，混勻，4°C條件下反應24小時，加入10yl 200mM的賴氨酸溶液，混勻，22°C條件下反應2小時;4°C條件下透析至50mM PBS(pH7.2)，12小時，換液4次；離心，取上清，用50mM TB7.4+0.6 %BSA+0.05 %NaN3稀釋所需濃度，-20 °C保存。i i)磁標抗體:準確移取30yl濃度為lmg/ml的鏈霉親和素標記磁珠，其中該功能化磁顆粒是以Fe3〇4為核，聚苯乙烯為殼，粒徑為2.0圓，于21111離心管中，渦旋震蕩3〇111111。再加入3(^1濃度為10邱/1111的生物素標記的人肌紅蛋白二抗，室溫下孵育2小時。磁性分離器除去磁珠中的液體，用0.01M 1^(含0.01%834/0.2%似陶)117.4)清洗3次，將磁珠懸浮于0.0謂1^，孵育過夜，重復上述分離，清洗步驟，最終稀釋至指定濃度。
[0067]2)磁標抗體的包被:采用點樣儀或噴點儀將lOiil磁性微球點樣在微流控芯片的反應池中，室溫干燥30min以上。[〇〇68]3)微流控芯片的組裝:將10yl濃度為3yg/ml的HRP，300yl清洗液，200yl發光試劑分別封裝在試劑卡的各存儲池內，同時將芯片卡其他部件進行組裝，形成一張完整的微流控芯片。[〇〇69]4)存儲:4°C，濕度為50%條件下保存。
[0070]2.肌紅蛋白的定量檢測
[0071]1)標準曲線的制作:將肌紅蛋白標準品用小牛血清稀釋，配成濃度為Ong/ml， 10ng/ml，25ng/ml，50ng/ml，150ng/ml，400ng/ml的肌紅蛋白標準品各 150yl，取30yl加入本發明實施例中制備的試劑盒的加樣區，蓋上血液蓋，將試劑盒置于配套的設備中，放置15分鐘。每個樣本分別重復測定3次。讀取器自動顯示肌紅蛋白含量，根據肌紅蛋白的濃度及相應的發光強度，取三次測定平均值，繪制標準曲線。
[0072]2)取待檢樣本200iU，置于本發明實施例中所制作的微流控芯片中進行檢測，每次取樣30iU，重復測定3次，根據1)中繪制的標準曲線獲得待檢樣品中肌紅蛋白的濃度。
[0073]3)結果表明:采用本發明所述方法，得出的檢出限為0.05ng/ml，檢測范圍為 0 ? 01ng/ml-1500ng/ml，批間CV小于8 ? 5%，批內CV小于2 ? 4%。[〇〇74]實施例3:磁微粒顆粒尺寸篩選[〇〇75]磁性微球的粒徑小，比表面積大，表面含有活性基團，故偶聯容量大，但磁顆粒尺寸過小不利于磁鐵收集，故進行磁微粒尺寸篩選。
[0076]其他的實驗條件參見實施例2,磁微粒顆粒的尺寸按照以下方案進行。
[0077]選擇顆粒尺寸分別為0.1wik0.5m1、1.8M1、2iim、3iim、lOym磁顆粒標記抗C反應蛋白抗體。檢測時采用磁性大小經過優選的永磁鐵，固定磁鐵高度。[〇〇78] 實驗結果如下:
[0079]磁微粒粒徑尺寸從0.1wik0.5ym、1.8ym、2iim、3iim依次增強，3ym干擾加大，lOym開始減小，信號值最低，綜合各因素1.8ym信號最強，干擾最小。
[0080]結果分析:磁微粒尺寸較小時，比表面積較大，表面所負載的生物分子量大，同時能夠很好地分散在溶液中，但要保證磁性微球充分被收集所需的磁場強度大。在本實施例中由于磁珠所受的磁場力不能保證其充分被收集，導致部分有效磁珠在清洗過程中流失， 從而導致最終檢測信號值不高。當磁顆粒粒徑較大時，比表面積小，表面生物分子的標記率相對較低，相同條件下，磁性粒子所受磁場力大，分散的磁珠能夠得到充分的收集，但其由于極易發生沉降，導致生物分子間反應不充分，從而減弱發光信號。綜合考慮，粒徑為1?3y m磁性微球效果較好，因此本發明的實施例中1.8mi的磁性微球效果最好。
[0081]以上所述僅是本發明的優選實施方式，應當指出，對于本技術領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發明的保護范圍。
【主權項】
1.一種肌紅蛋白定量檢測的磁微粒化學發光微流控芯片，其特征在于，所述微流控芯 片結構主要包括蓋片(1)和底片(11)，其中蓋片(1)上的空氣栗(3)，氣流微通道(5)，加樣口 (2)，樣本液流通道(6)，第一生物標記物存儲池(4)，微混合器(7)以及過渡區(10)依次連 接;底片(11)上的過濾器(12)，反應池(13)，清洗池(14)，檢測池(15)，溶液釋放通道(18)依 次連接;底片(11)上的檢測池(15)通過溶液釋放通道(18)與清洗液存儲池(16)和發光液存 儲池(17)連接；所述第一生物標記物存儲池(4)存儲預封裝酶或發光劑標記抗肌紅蛋白抗體溶液;所 述反應池(13)存儲預封裝磁顆粒標記抗肌紅蛋白抗體;所述清洗液存儲池(16)和發光液存 儲池(17)分別存儲預封裝清洗液和發光液;所述蓋片(1)和底片(11)用膠帶(20和22)密封。2.如權利要求1所述微流控芯片，其特征在于，所述第一生物標記物存儲池(4)、清洗液 存儲池(16)和發光液存儲池(17)體積為10?500yl，為液囊或腔體;所述微流控芯片的微混 合器是寬度為20?300wii，深度為10?lOOwii的折線形或方形結構;所述微流控芯片的過濾 器由腔體和濾血膜組成;所述微流控芯片的反應池為毛細管微通道，該毛細管微通道為管 狀通道或矩形通道，允許微液體流進或通過。3.如權利要求2所述微流控芯片，其特征在于，所述反應池為管狀通道，直徑為0.5? 10mm〇4.如權利要求2所述微流控芯片，其特征在于，所述反應池為矩形通道，寬為0.1?5mm， 深度為〇.01?2mm，長為5?40mm。5.如權利要求1所述微流控芯片，其特征在于，所述磁顆粒為超順磁性顆粒，為Fe3〇4或 y -Fe2〇3化合物，磁顆粒粒徑為0.1?lOym。6.如權利要求1所述的一種肌紅蛋白定量檢測的磁微粒化學發光微流控芯片，其特征 在于，所述樣本體積為5?200y 1。7.如權利要求1所述的一種肌紅蛋白定量檢測的磁微粒化學發光微流控芯片，其特征 在于，所述芯片還包含配套儀器，所述配套儀器為小型便攜設備，所述設備主要包括控制裝 置和檢測裝置。
【文檔編號】G01N21/76GK205650213SQ201520828637
【公開日】2016年10月19日
【申請日】2015年10月26日 公開號201520828637.X, CN 201520828637, CN 205650213 U, CN 205650213U, CN-U-205650213, CN201520828637, CN201520828637.X, CN205650213 U, CN205650213U
【發明人】范玉霞, 李泉
【申請人】深圳華邁興微醫療科技有限公司