超支化固定金屬親和色譜固定相及其制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種超支化固定金屬離子親和色譜固定相及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 蛋白質作為生命的物質基礎，對生命活動有著重要的意義。隨著生物科技的發展， 對一些醫療產品如抗生素，疫苗，抗體，多肽，治療性蛋白質等的分離與純化變得越來越重 要。然而蛋白質等生物大分子一般以復雜混合物的形式存在，且具有特殊性質，如對溫度， 酸堿度，有機溶劑敏感等問題，僅根據其理化性質分離幾乎不能取得很好的效果。親和色譜 是一類在分離介質上修飾合適的配基，與蛋白進行特異性結合而實現蛋白純化的方法，特 異性高，應用廣泛。作為親和色譜的一種，固定金屬親和色譜由于其選擇性好，重現性高，分 辨率高，廣泛用于含組氨酸標簽蛋白分子的特異性識別與分離。當以膜材料作為色譜固定 相時，由于其壓降小，軸向擴散路徑短，容易擴大生產等優點，成為近幾年的研宄熱點。
【發明內容】
[0003] 本發明的目的之一在于提供一種超支化固定金屬離子親和色譜固定相。
[0004] 本發明另一目的是提供超支化固定金屬離子親和色譜固定相的制備方法，以表面 含有羥基的色譜固定相為基質，利用超支化的方法對材料進行表面改性，在膜表面引入大 量氨基后，再通過環氧基引入氨基羧酸配基，最后螯合金屬離子，成功制備超支化固定金屬 離子親和膜。
[0005] 本發明還進一步提供了上述材料的應用，將該制備的固定化金屬親和色譜固定相 用于純化蛋清中溶菌酶。
[0006] 本發明實現過程如下： 結構式（I)所示的超支化固定金屬親和色譜固定相，
【主權項】
1. 結構式（I)所示的超支化固定金屬親和色譜固定相，
2. 權利要求1所述超支化固定金屬親和色譜固定相的制備方法，其特征在于包括如下 步驟： (1) 色譜固定相預處理：將色譜固定相經甲醇浸泡去除表面油脂及粘附雜質，用甲醇 和水反復洗滌干燥，所述的色譜固定相為硅膠、殼聚糖或表面修飾有硅羥基的磁性納米材 料； (2) 色譜固定相表面氨基化：將色譜固定相先與環氧氯丙烷反應，然后與三-(2-氨 基）乙基胺反應得到氨基化色譜固定相；
(3) 將氨基化色譜固定相依次與丙烯酸甲酯和乙二胺通過邁克加成反應和酰胺化反 應在膜表面形成超支化結構；
(4)最后引入IDA型配基：將步驟（3)制備的超支化色譜固定相與環氧氯丙烷反應引入 環氧基，進一步與氨基羧酸反應使膜表面產生IDA型金屬螯合配基；
3. 螯合有金屬離子Co2+、Zn2+、Cu2+、Ni2+、Fe3+、Ga3+、Zr4+或Ti4+的超支化固定金屬親和 色譜固定相。
4. 權利要求1所述超支化固定金屬親和色譜固定相在蛋白分離與純化中的應用。
5. 根據權利要求4所述應用，其特征在于：超支化固定金屬親和色譜固定相螯合Co2+、 Zn2+、Cu2+或Ni2+時，用于His-tagged蛋白的分離與純化。
6. 螯合Fe3+、Ga3+、Zr4+或Ti4+的超支化固定金屬親和色譜固定相在富集磷酸化鈦中的 應用。
【專利摘要】本發明公開了結構通式（I）所示的超支化固定金屬親和色譜固定相，其在色譜固定相表面運用超支化的方法對材料表面改性，提高了材料表面功能基團密度，對蛋白有較高的吸附容量。本發明所制備的色譜固定相具有金屬螯合色譜分離性能，將其用于分離蛋清中的溶菌酶，可取得很好的分離效果和較高的蛋白回收率。
【IPC分類】C07K1-22, B01D15-38, C01B25-37, B01J20-30, B01J20-286
【公開號】CN104841404
【申請號】CN201510223120
【發明人】符瑞, 衛引茂
【申請人】西北大學
【公開日】2015年8月19日
【申請日】2015年5月6日