本發明涉及一種交聯瓊脂糖的分離材料,并用于制備所述分離材料的制備方法。
背景技術:
凝膠過濾層析已有40多年的應用歷史,在酶、蛋白質、多肽、核酸等大分子的分離純化中起重要重用,在各種柱層析的分離中是最溫和的處理方法。分離過程是基于溶解物質的擴散,而凝膠可以結合大量的水的能力。浸泡在水溶液中的不同分子尺寸大小的混合物,在不同的速率下通過凝膠床,從而達到分離純化的目的。
凝膠過濾的生物物質分離的理想凝膠應是親水性的,大孔,耐化學,機械穩定,不應該包含帶電基團或其他吸附中心。多糖類的分子結構中含有大量的羥基,為了使凝膠更穩定,從化學和機械的角度來看,凝膠的結構必須是交聯的。在凝膠分子鏈間的2個羥基功能團中引入含有環氧基、鹵代烷基等化合物作為交聯劑進行交聯反應達到交叉鏈接時,從而使其結構穩定。
脂肪族環氧化物或相應的鹵代醇或次氯代醇或鹵化物作為交聯劑,因為這些化合物形成醚鍵形成含羥基的矩陣。在色譜分離條件下,該類型的鍵的化學性質穩定,沒有帶電基團被引入的反應,達到理想的的吸附效果。
技術實現要素:
本發明的目的在于提供一種交聯瓊脂糖凝膠層析分離介質的制備方法,改變瓊脂糖凝膠珠體的性能,達到大規模生產要求。
本發明提供的制備方法,考慮到工業規模生產使用的需求,采用多次交聯的方法,形成剛性,半剛性,大大提高了珠體的機械穩定性和通透性,降低柱的反壓。
具體實施方法
(a)取6%瓊脂糖凝膠珠狀用去離子水洗去乙醇溶液,再依次用5倍體積20%,50%,70%,100%的二甲基亞砜混合溶液浸洗凝膠(置換出凝膠中的水),然后將洗好的瓊脂糖凝膠珠加入等體積的丙酮溶液中混合均勻,加入0.3克nabh4,13gna2so4,再加入35毫升50%naoh溶液,混合物攪拌1小時。在加入100毫升丙二醇雙縮水甘油醚,繼續反應過夜。反應完畢,用至少10倍體積的水洗干凈。
(b)將清洗后的凝膠轉移到等體積的丙酮溶液中,加入環氧氯丙烷增加反應溫度到60℃和加入相當于交聯劑體積的1m的氫氧化鈉,逐滴加入超過6h,然后再過夜反應,反應結束后,再用大量的水進行重復清洗。
對實驗所得交聯瓊脂糖凝膠層析分離介質做理化測試,結論層析分離介質的流速可達到350cm/h,耐壓可達到0.13mpa,ph穩定性可達到3~13,符合工業規模生產使用的需求。