專利名稱：一種陽離子多糖涂覆型親水色譜固定相的制備方法及應用的制作方法
一種陽離子多糖涂覆型親水色譜固定相的制備方法及應用技術領域：
本發明涉及親水色譜固定相技術領域，具體地說，是ー種陽離子多糖涂覆型親水色譜固定相的制備方法及應用。
背景技木親水作用色譜最早是由Alpert 提出[A.J.Alpert, J.Chromatogr.A, 1990,499,177]，是近年來色譜領域研究的熱點之一。因其對極性化合物有很強的保留及很好的分離選擇性，并且與質譜檢測良好的兼容性和靈敏度等優點，應用方面也越來越廣泛，也越來越受關注。隨著對硅膠的表面修飾，將硅膠表面固載上糖作為ー種新型的親水色譜固定相也得到了很快的發展[P.Hemstrom, et al, J.Sep.Sci, 2006, 29,1784]。糖基修飾的娃膠固定相具有高柱效、高選擇性和穩定性，適用于分離各種強極性化合物，如單糖、寡糖、糖醇、核苷和氨基酸等，具有很廣泛的應用前景。目前常見的多糖色譜固定相有利用點擊化學所制備的鍵合多糖親水色譜材料，如鍵合￠-環糊精[X.Liang, et al, Chem.commun, 2007,2491]和鍵合麥芽糖[X.Liang，et al，Anal.Methods，2010，2，217]，對極性化合物及寡糖樣品都有很好的保留及很強的分離選擇性。雖然改制備方法非常高效，但也存在它的缺陷，如步驟繁瑣影響產率，還有反應過程中使用了大量有機試劑。基于以上的研究背景，發明人開發出了ー種新型的親水色譜固定相及其制備方法，利用離子相互作用原理，將帶不同電荷硅膠與陽離子多糖結合，以制備附聚型的多糖色譜固定相。此方法優勢在于反應簡單易控，穩定性高，在水系中涂覆更為環保安全。同時在糖生物學和糖蛋白組學中都取得了很好的應用。
發明內容本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供一種陽離子多糖涂覆型親水色譜固定相的制備方法及應用。本發明的目的是通過以下技術方案來實現的:—種陽離子多糖涂覆型親水色譜固定相，其化學結構式如圖8所示:其中Silica Gel為娃膠,帶負電荷，saccharide為季銨化的多糖,帶正電荷。一種陽離子多糖涂覆型親水色譜固定相的制備方法，其具體步驟為:(I)硅膠預處理硅膠加入質量濃度為I 40%的鹽酸或硝酸溶液中，加熱回流攪拌I 48小時，過濾，水洗至中性，于100 160°C下干燥至恒重；(2)硅膠表面修飾將步驟(I)所得的活化硅膠 置于玻璃或者聚四氟こ烯反應容器中，在氮氣氛圍下加入有機溶劑，攪拌均勻，滴加硅烷試劑，保持溫度為20 200°C條件下攪拌2 48小吋。待反應體系冷卻至室溫，減壓過濾并用甲苯、丙酮、甲醇水、甲醇洗滌，固體產品在60 100°C條件下干燥12 36小時；所述的有機溶劑為與水不互溶的有機溶劑，包括甲苯、こ苯、ニ甲苯、正己烷、正庚烷、正戊烷、正辛烷、環己烷等苯系物和烷烴；所述的有機溶劑的使用量為每克活化硅膠使用2 IOOmL有機溶劑；硅烷試劑結
構式為:
權利要求
1.一種陽離子多糖涂覆型親水色譜固定相，其特征在于，其化學結構式為:
2.一種陽離子多糖涂覆型親水色譜固定相的制備方法，其特征在于，其具體步驟為: (1)硅膠預處理 硅膠加入質量濃度為I 40%的鹽酸或硝酸溶液中，加熱回流攪拌I 48小時，過濾，水洗至中性，于100 160°C下干燥至恒重； (2)娃膠表面修飾 將步驟(I)所得的活化硅膠置于玻璃或者聚四氟こ烯反應容器中，在氮氣氛圍下加入有機溶劑，攪拌均勻，滴加硅烷試劑，保持溫度為20 200°C條件下攪拌2 48小吋。待反應體系冷卻至室溫，減壓過濾并用甲苯、丙酮、甲醇水、甲醇洗滌，固體產品在60 100°C條件下干燥12 36小時； (3)磺化過程 將步驟(2)所得產品加入到含有質量分數為30%過氧化氫溶液和含濃硫酸的甲醇溶液的混合溶液中，攪拌均勻，保持溫度為10 40°C條件下攪拌2 48小時；反應結束后減壓過濾并用水、甲醇洗滌，固體產品在60 100°C條件下干燥12 36小時； (4)涂覆過程 將步驟(3)所得產品與陽離子多糖水溶液混合，攪拌均勻，保持溫度為10 40°C條件下攪拌I 60分鐘；反應結束后減壓過濾并用水、甲醇洗滌，固體產品在60 100°C條件下干燥12 36小時。
3.如權利要求2所述的ー種陽離子多糖涂覆型親水色譜固定相的制備方法，其特征在于，在所述的步驟⑵中，所述的有機溶劑為與水不互溶的有機溶劑，包括甲苯、こ苯、ニ甲苯、正己烷、正庚烷、正戊烷、正辛烷、環己烷等苯系物和烷烴。
4.如權利要求2所述的ー種陽離子多糖涂覆型親水色譜固定相的制備方法，其特征在于，在所述的步驟(2)中，所述的有機溶劑的使用量為每克活化硅膠使用2 IOOmL有機溶齊U。
5.如權利要求2所述的ー種陽離子多糖涂覆型親水色譜固定相的制備方法，其特征在于，在所述的步驟(2)中，硅烷試劑結構式為:X3Si"9^A 其中，X為-OCH3,-OCH2CH3或-Cl，m= I 12，A為SH;硅烷試劑的使用量為每克活化娃膠使用0.5 5mmol。
6.如權利要求2所述的ー種陽離子多糖涂覆型親水色譜固定相的制備方法，其特征在于，在所述的步驟(3)中，所述的混合溶液的使用量為每克硅膠使用2 IOOmL質量分數為30%過氧化氫溶液，1 1OmL甲醇溶液及0.01 ImL濃硫酸溶液。
7.如權利要求2所述的ー種陽離子多糖涂覆型親水色譜固定相的制備方法，其特征在于，在所述的步驟(4)中，所述的陽離子多糖包括陽離子纖維素，陽離子淀粉等等，分子量范圍在100 200萬之間。
8.如權利要求2所述的ー種陽離子多糖涂覆型親水色譜固定相的制備方法，其特征在于，在所述的步驟(4)中，所述的陽離子 多糖的使用量為每克硅膠使用0.01 lg，所配置的水溶液濃度為0.1 % 10%。
9.一種陽離子多糖涂覆型親水色譜固定相在糖生物學和糖蛋白組學中的應用。
全文摘要
本發明涉及一種陽離子多糖涂覆型色譜固定相的制備方法及應用，其中Silica Gel為硅膠，帶負電荷，saccharide為季銨化的多糖，帶正電荷。本發明提供了上述固定相材料的制備方法，利用離子相互作用，將表面磺化的硅膠與帶正電荷的陽離子多糖在水溶液體系中結合，以制備附聚型的色譜固定相。該固定相得制備方法對比于傳統的鍵合糖型固定相更為高效，方便，環保。同時具有很好的分離選擇性，重復性和穩定性。對于分離其他類型的極性化合物有很大的應用潛在性，在糖生物學和糖蛋白組學都將有很廣泛的應用。
文檔編號B01J20/286GK103120932SQ201310066189
公開日2013年5月29日 申請日期2013年3月1日 優先權日2013年3月1日
發明者梁鑫淼, 柯燕雄, 盛騫瑩 申請人:華東理工大學