蜂毒的大規模純化方法
【專利摘要】本發明涉及一種蜂毒的大規模純化方法。本發明的方法包括將粗蜂毒溶解在溶劑中以形成蜂毒溶液；對蜂毒溶液施加吸附劑以形成混合物；和經過濾移除吸附劑以得到純蜂毒溶液。利用本發明的方法，可將采集自養蜂場的粗蜂毒大規模純化至99％以上的純度，而不引起其組成的改變，由此純化的蜂毒可以用作藥品、化妝品和食品用材料。
【專利說明】蜂毒的大規模純化方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種蜂毒的大規模純化方法。更具體而言，本發明涉及一種蜂毒純化方法，該方法不引起蜂毒的組成改變，從而能夠大規模地生產高純度蜂毒。
【背景技術】
[0002]蜂毒是指由工蜂生產的有毒物質，其已被用于治療疾病。
[0003]關于蜂毒對人體的應用，早先是迫使捕獲的工蜂蟄刺患部，或者將脫離工蜂后的螫刺插入患部。然而，以此方式難以控制蜂毒的注入量或濃度，這使蜂毒療法不能具體化和一般化，并可能產生如休克等副作用。
[0004]如果能夠根據患者的身體狀況和體質提供調整藥物量和濃度的能力，則蜂毒療法能夠安全使用而不引起任何副作用。蜂毒療法已在美國和歐洲得到了一定程度的傳播。在20世紀90年代初期，用于治療炎癥和疼痛的純化蜂毒皮下注射法獲得FDA批準，并以Apitoxin的商品名進行生產。近來，已經在養蜂場中大面積地安置了蜂毒采集器，從而可采
集大量蜂毒。
[0005]但是，經養蜂場的采集器采集的蜂毒含有大量如塵和土等污染物和如蜂蜜、花粉和蜂膠等雜質。這些異物改變了蜂毒的組成，降低了蜂毒的生理活性。
【發明內容】
[0006]技術問題
[0007]本發明的一個目的是提供一種蜂毒純化方法，該方法不引起蜂毒的組成改變，從而能夠大規模地生產高純度蜂毒。
[0008]本發明要實現的目的并不限于上述目的，由以下說明書，本領域技術人員可清楚了解未聲明的其他目的。
[0009]技術方案
[0010]為達到上述目的，本發明提供了一種蜂毒的大規模純化方法，所述方法包括:將粗蜂毒溶解在溶劑中以形成蜂毒溶液；對蜂毒溶液施加吸附劑以形成混合物；和經過濾移除吸附劑以得到純蜂毒溶液。
[0011]在一個實施方式中，蜂毒溶液在施加吸附劑之前可以進行過濾。
[0012]關于這一點，蜂毒溶液可經由濾紙過濾，所述濾紙可優選是纖維素濾紙(cellulose filter)。
[0013]在該方法中，溶劑可以是水。
[0014]根據另一實施方式，基于蜂毒溶液的總重量，以0.02重量％?0.1重量％的量使用粗蜂毒。
[0015]在另一實施方式中，吸附劑為PSA (乙二胺-N-丙基硅烷)。
[0016]在另一實施方式中，以0.1g/升蜂毒溶液?IOg/升蜂毒溶液的量添加吸附劑。
[0017]在另一實施方式中，用于移除吸附劑的過濾可以是真空過濾，并可以使用濾紙進行，所述濾紙可優選為纖維素濾紙。
[0018]該方法可以還包括:過濾上述純蜂毒溶液以獲得濾液，和凍干該濾液以產生細粉。
[0019]關于這一點，過濾步驟通過真空過濾來進行。
[0020]根據另一實施方式，凍干步驟在_20°C以下進行。
[0021]有利效果
[0022]利用本發明的方法，可將采集自養蜂場的粗蜂毒大規模純化至99%以上的純度，而不引起其組成的改變，由此可將純化的蜂毒用作藥品、化妝品和食品用材料。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0023]圖1是圖示本發明的蜂毒的大規模純化方法的流程圖。
[0024]圖2是圖示本發明的蜂毒的大規模純化方法的流程圖，該方法用來生產適于長期存儲的細粉狀純蜂毒。
[0025]圖3顯示了比較純化前后蜂毒主要成分含量的色譜圖。
[0026]A:純化前，B:純化后
[0027]圖4顯示了純化前后蜂毒的電子顯微照片。 [0028]A:純化前，B:純化后
【具體實施方式】
[0029]下面，將參照附圖給出對本發明優選實施方式的描述。對于本領域技術人員而言顯而易見的是，雖然在以下描述中說明了如具體組分等許多指定要素，但這些要素意在幫助對本發明的總體理解，而本發明可以在不具有所述指定要素下實施。此外，在本發明的描述中，當確定對相關技術的詳細描述將使本發明的主旨難以理解時，此種描述將被省略。
[0030]參照圖1，其圖示了蜂毒的大規模純化方法的流程圖。
[0031]由該流程圖可以看出，本發明的純化方法開始于溶解所采集的蜂毒(粗蜂毒)(SI)。
[0032]在步驟SI中，將粗蜂毒溶解以提供蜂毒溶液。優選的是，將粗蜂毒溶解在水中。
[0033]由于幾乎完全溶于水，蜂毒將溶解在水中，而非水溶性異物保持不溶。
[0034]關于這一點，優選將水溶性蜂毒溶解在去離子水中，以減少來自溶劑的污染。
[0035]優選的是，基于蜂毒溶液的總重量，溶解的粗蜂毒的量為0.02重量％~0.1重量％。例如，當蜂毒的量低于0.02重量％時，將不足以預期蜂毒的效果。另一方面，蜂毒的量超過0.1重量％時將處于過飽和狀態，這在經濟上是不利的。
[0036]可選的是，蜂毒溶液可以進行過濾處理。
[0037]這種過濾用于移除非水溶性雜質(砂、土、蜂膠、花粉等)，并可以使用濾紙進行。優選的是，濾紙可以是纖維素濾紙。
[0038]由于粒徑為20 μ m~30 μ m，非水溶性異物可通過如纖維素濾紙等濾紙濾出。
[0039]在步驟S2中，通過吸附移除水溶性異物。為此，將吸附劑添加至蜂毒溶液中。
[0040]也就是，在移除非水溶性異物后，通過吸附移除已溶解于蜂毒溶液中的如蜂蜜或顏料等水溶性異物。
[0041]為此，添加吸附劑并均勻混合，以移除保持溶解在溶液中的水溶性異物。
[0042]本發明可使用任何吸附劑，只要其可吸附如顏料等水溶性異物即可。優選的是PSA(乙二胺-N-丙基硅烷)，其為迄今為止已知的最有效的吸附劑。
[0043]優選的是，可以以0.1g/升蜂毒溶液~IOg/升蜂毒溶液的量添加吸附劑。當吸附劑的量小于0.1g/升蜂毒溶液時，吸附能力太差而不能分離出純蜂毒。吸附劑的量超過IOg/升時將造成組成改變，使其難以分離出99%以上純度的蜂毒。
[0044]在步驟S3中，將混合物過濾，以將純蜂毒與吸附劑和吸附在吸附劑上的異物分離，由此可以大規模地純化蜂毒。
[0045]過濾優選是真空過濾，而真空過濾更優選使用濾紙進行，從而得到99%以上純度的蜂毒。
[0046]在此情況下，已附著了水溶性異物的吸附劑(顆粒保留(液體))的大小為
0.45 μ m~0.8 μ m，并且濾紙優選為適于濾出該吸附劑的纖維素濾紙。
[0047]轉向圖2，其圖示了本發明另一實施方式的細粉狀蜂毒的大規模純化方法的流程圖，由此蜂毒可以長期存儲。
[0048]除圖1的純化工序(S1、S2和S3)之外，由該流程圖中可以看出，本發明的該實施方式的純化方法包括二次過濾和冷凍干燥的步驟(S4)，通過該步驟，可以制得不含細菌和真菌的細粉狀純蜂毒，由此其可以用作藥品、化妝品和食品用材料，并可長期存儲。
[0049]二次過濾優選為真空過濾，其采用濾紙且更優選采用孔徑為0.2μπι以下的纖維素濾紙。將所獲得的濾 液在_20°C以下凍干，以產生粉末狀純蜂毒。
[0050]如上所述，本發明的純化方法可以移除粗蜂毒中的異物而不引起蜂毒組成的改變，從而可大規模生產99%以上純度的蜂毒，所述蜂毒可以用作藥品、化妝品和食品用材料。
[0051]通過以下闡述的說明性實施例可更好地理解本發明，但不應認為這些實施例限制本發明。
[0052]實施例1:蜂毒I的純化
[0053]1.移除非水溶性異物
[0054]I)利用蜂毒采集器采集的粗蜂毒在以下條件下進行處理，以將其水溶性組分溶解在水中。
[0055]條件和方法
[0056]a.溶劑:去離子水
[0057]b.蜂毒含量:0.02重量％~0.1重量％ (基于總重量)
[0058]c.時間:使用玻璃棒將蜂毒在溶劑中輕輕攪拌15秒。
[0059]2)在以這種方式將水溶性成分溶解后，該溶液在以下條件下經濾紙過濾。將濾液用于下一步驟中，而使如砂、土、蜂膠、花粉等非水溶性外來雜質留在濾紙上并丟棄。
[0060]* 濾紙
[0061]-類型:纖維素濾紙(不使用玻璃微纖維濾紙)
[0062]-顆粒保留(液體):20μηι~30μηι
[0063]-空氣流速:5s/100mL/in2~10s/100mL/in2
[0064]2.移除水溶性外來雜質
[0065]I)在移除非水性外來雜質后，在乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)的存在下于以下條件下移除已溶于水中的水溶性外來雜質。
[0066]條件和方法[0067]a.將蜂毒溶液添加至容有乙二胺-N-丙基硅烷的燒杯中。
[0068]b.攪拌該溶液以使糖和蜂毒以外的成分吸附至吸附劑上，隨后使用濾紙分離出純蜂毒。
[0069]c.裝載率:以0.Hg/升蜂毒溶液的量使用乙二胺-N-丙基硅烷。
[0070]2)在移除水溶性外來雜質之后，使用濾紙在以下條件下進行真空過濾以得到99%純的蜂毒。
[0071]* 濾紙
[0072]-類型:纖維素濾紙
[0073]-顆粒保留(液體):0.45 μ m~0.8 μ m
[0074]實施例2:蜂毒2的純化
[0075]通過真空過濾移除細菌和真菌，由此對純蜂毒溶液滅菌，隨后將無菌溶液凍干以產生可用作藥品、化妝品和食品用材料并可長期存儲的細粉。
[0076]I)實施例1中制備的純蜂毒溶液在以下條件下使用濾紙進行真空過濾。
[0077]* 濾紙
[0078]-類型:纖維素濾紙
[0079]-顆粒保留(液體):0.2 μ m
[0080]2)在真空過濾之后，將濾液在以下條件下冷凍干燥，以產生細粉狀純蜂毒。
[0081]*凍干條件
[0082]溫度:-20°C以下
[0083]由于蜂毒粉末因其凍干后很輕而可能飛走，因此必須將濾液置于凍干機內，將其容納在具有細孔的容器中并蓋上蓋子。凍干進行至完全干燥。
[0084]測試例1:主要組分的定性和定量分析
[0085]為檢驗實施例1的純蜂毒溶液的純度和成分，在以下條件下進行液相色譜。
[0086]條件和方法
[0087]I)柱:Sepadex200
[0088]2)洗脫緩沖液:0.1M甲酸銨
[0089]3)分析成分:蜂毒肽、蜂毒明肽、磷脂酶A2
[0090]4)參照標準進行定性和定量分析。
[0091]5)當檢測到組分如表1中所示時確定其為99%純的蜂毒。
[0092]表1
[0093]
【權利要求】
1.一種蜂毒的大規模純化方法，所述方法包括: 將粗蜂毒溶解在溶劑中以形成蜂毒溶液； 對所述蜂毒溶液施加吸附劑以形成混合物；和 經過濾移除所述吸附劑以得到純蜂毒溶液。
2.如權利要求1所述的方法，所述方法還包括在所述施加步驟之前對所述蜂毒溶液進行過濾。
3.如權利要求2所述的方法，其中，所述過濾步驟使用濾紙進行。
4.如權利要求3所述的方法，其中，所述濾紙為纖維素濾紙。
5.如權利要求1所述的方法，其中，所述溶劑是水。
6.如權利要求1所述的方法，其中，基于所述蜂毒溶液的總重量，以0.02重量％~0.1重量％的量使用所述粗蜂毒。
7.如權利要求1所述的方法，其中，所述吸附劑為PSA(乙二胺-N-丙基硅烷)。
8.如權利要求1所述的方法，其中，以0.1g/升所述蜂毒溶液~IOg/升所述蜂毒溶液的量添加所述吸附劑。
9.如權利要求1所述的方法,其中,所述過濾為真空過濾。
10.如權利要求9所述的方法，其中，所述真空過濾使用濾紙進行。
11.如權利要求10所述的方法，其中，所述濾紙為纖維素濾紙。
12.如權利要求1所述的方法，所述方法還包括對所述純蜂毒溶液進行過濾以提供濾液，和凍干所述濾液以產生細粉。
13.如權利要求12所述的方法，其中，所述過濾步驟通過真空過濾進行。
14.如權利要求13所述的方法，其中，所述凍干步驟在-20°C以下進行。
【文檔編號】B01D39/00GK104023556SQ201280065521
【公開日】2014年9月3日 申請日期:2012年4月24日 優先權日:2012年1月4日
【發明者】韓相美, 李光吉, 樸瓘奎 申請人:韓國農村振興廳