專利名稱：用于dna和rna分離純化回收的核酸吸附材料的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，涉及核酸DNA或RNA分離純化及回收的一種核酸吸附材料的制備，具體涉及一種對動物、植物、微生物的組織及細(xì)胞中的DNA或RNA特異吸附的核酸吸附材料的制備方法，采用該吸附材料能簡單、快速分離出超純的DNA或RNA。
背景技術(shù)：
目前，國內(nèi)外提取動物、植物、微生物的組織及細(xì)胞中的DNA或RNA多采用有機(jī)溶劑抽提方法。該方法操作繁瑣、耗時(shí)長、不易被掌握，提取的核酸DNA或RNA易受蛋白質(zhì)及雜質(zhì)污染，且純度和產(chǎn)量不高，而且有機(jī)溶劑有害人體健康。
發(fā)明內(nèi)容
針對上述方法存在的不足，本發(fā)明目的在于，用于DNA和RNA快速分離純化回收的核酸吸附材料的制備方法。為了實(shí)現(xiàn)上述任務(wù)，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案一種用于DNA和RNA快速分離純化回收的核酸吸附材料的制備方法，其特征在于，按以下步驟操作I)原料組成及重量百分比紙纖維3% 15%，硅粉3% 20%，羧甲基纖維素5% 15%，余量為去離子水，原料的重量百分比總和為100% ；2)將配方中的原料加熱溶解形成混合物，然后用電動攪拌器進(jìn)行勻漿；3)將得到的勻漿液倒入直徑為4cm的六孔模具中；放置60°C烤箱中烘烤30min或常溫下自然干燥，即可得到核酸吸附材料。本發(fā)明的方法制備的核酸吸附材料，在特定的溶液中能特異性吸附DNA或RNA，從而使提取DNA或RNA操作方法簡單快速，且純度高、產(chǎn)量高，避免使用有機(jī)溶劑?？捎糜诜肿由飳W(xué)研究領(lǐng)域中的動物、植物、微生物的組織及細(xì)胞中DNA或RNA的分離、純化和回收。
圖I是本發(fā)明制備核酸吸附材料的流程圖；圖2是制成的核酸吸附紙纖維材料圖片；下面結(jié)合附圖和實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)說明。
具體實(shí)施例方式以下是發(fā)明人給出的實(shí)施例，需要說明的是，這些實(shí)施例是較優(yōu)的例子，本發(fā)明不限于這些實(shí)施例。實(shí)施例I :參見圖1，本實(shí)施例的操作步驟為
I)在三角瓶中按重量取優(yōu)質(zhì)紙纖維10%、硅粉15%，羧甲基纖維素15%，用去離子水補(bǔ)至總體積500ml。2)將三角瓶放入水浴中，加熱，直至上述混合物完全溶解。3)用電動攪拌器進(jìn)行勻漿。4)將勻漿液倒入直徑為4cm的六孔模具中，將模具放置在60°C烤箱中烘烤30min或在常溫下自然干燥，即可得到核酸吸附材料。5)將制備好的核酸吸附材料做成直徑O. 7cm圓形紙片(如圖2所示)。實(shí)施例2 參見圖1，本實(shí)施例的操作步驟為I)在三角瓶中按重量取優(yōu)質(zhì)紙纖維5%、硅粉10%，羧甲基纖維素10%，用去離子水補(bǔ)至總體積500ml。2)將三角瓶放入水浴中，加熱，直至上述混合物完全溶解。3)用電動攪拌器進(jìn)行勻漿。4)將勻漿液倒入直徑為4cm的六孔模具中，將模具放置在60°C烤箱中烘烤30min或在常溫下自然干燥，即可得到核酸吸附材料。5)將制備好的吸附材料做成直徑O. 7cm圓形紙片(如圖2所示)。實(shí)驗(yàn)例I :微量血液RNA核酸吸附快速分離采用上述實(shí)施例制備的核酸吸附材料，放入核酸吸附離心套管的內(nèi)層中作為核酸吸附介質(zhì)，外層套管為液體收集管，使用時(shí)將內(nèi)層吸附管插入到外層收集管中。 RNA提取試劑由紅細(xì)胞裂解溶液，離解溶液，清除溶液，洗滌液溶和分離溶液組成。所述的RNA提取試劑各組分及物質(zhì)濃度(摩爾/升)組成按終濃度體積為紅細(xì)胞裂解溶液0.01-lmol/L 的 NH4C1，0. 0001-0. 3mol/L 的 KHCO3,O. 00001-lmol/L EDTA余量為去離子水；離解溶液0.l-10mol/L 的胍鹽，O. 005-0. 5mol/L 的 C6H5Na3O7,0. 0001-lmol/L 的C15H28NaNO3, ,0. 01_2mol/L 的 C2H6OS, O. Ι-lOmol/L 的 NaAc，余量為去離子水；清除溶液0. 01-20mol/L的胍鹽，O. 001-0. 60mol/L的C4H11NO3,余量為乙醇和去離子水(2:1，v/v)的混合溶液；洗滌溶液0.001-2mol/L 的 NaCl，0. 0001_2mol/L 的 C4H11NO3，余量為乙醇和去離子水(2:1，v/v)的混合溶液；操作步驟是I、取O. 5-lml血液，加入3倍體積紅細(xì)胞裂解溶液混勻，室溫放置5min。2、4000r離心Imin棄去上清。3、沉淀中加入Iml離解溶液混勻，室溫放置5min。4、將液體吸入核酸吸附管中室溫放置5min。5. 12000r離心30s，棄去收集管中的廢液，將吸附管插回收集管中。6、加清除溶液，12000r離心30s，棄去收集管中的廢液，將吸附管插回收集管中。7、加洗滌溶液，12000r,離心30s，棄去收集管中的廢液。8、將吸附管插入一干凈的離心管中，加分離溶液室溫放置2min后，12000r離心Imin，即獲得純化的RNA。
實(shí)驗(yàn)例2 :組織細(xì)胞基因組DNA的核酸快速分離本實(shí)施例與實(shí)驗(yàn)實(shí)施例I不同的是，選用的DNA核酸提取試劑由懸浮溶液、離解溶液、清除溶液、洗滌溶液和分離溶液組成。DNA核酸提取試劑各組分及物質(zhì)濃度(摩爾/升)組成按終濃度體積為懸浮溶液0.01-0. 2mol/L 的 C4H11NO3,0. 001-0. 5mol/L 的 EDTA, O. 0001-0. 9mol/L的C15H28NaNO3,余量為去離子水；離解溶液0. 5-1OmoI/L是胍鹽，余量為去離子水；清除溶液0. l-10mol/L的胍鹽，O. 01_4mol/L的C4H11NO3,余量為乙醇和去離子水(2:1, v/v)的混合溶液；洗滌溶液0. 01-8mol/L的NaCl，0. 001_3mol/L的C4H11NO3,余量為乙醇和去離子 水(2:1, v/v)的混合溶液；，分離溶液0.01-10mol/L 的 EDTA，0. 001-0. 6mol/L 的 C4H11NO3,余量為去離子水。操作步驟是I、收集經(jīng)勻漿后的組織或消化后的細(xì)胞，加懸浮溶液懸浮。2、加離解溶液混勻，室溫5min。3、將液體吸入吸附管中，12000r離心30s，棄去收集管中的廢液，將吸附管插回收
集管中。4、加清除溶液，12000r離心30s，棄去收集管中的廢液，將吸附管插回收集管中。5、加洗滌溶液，12000r,離心30s，棄去收集管中的廢液。6、將吸附管插入一干凈的收集管中，加分離溶液室溫放置2min后，12000r離心Imin，即獲得純化的DNA。
權(quán)利要求
1 .一種用于DNA和RNA快速分離純化回收的核酸吸附材料的制備方法，其特征在于，按以下步驟操作 1)原料組成及重量百分比 紙纖維3% 15%，硅粉3% 20%，羧甲基纖維素5% 15%，余量為去離子水，原料的重量百分比總和為100% ； 2)將配方中的原料加熱溶解形成混合物，然后用電動攪拌器進(jìn)行勻漿； 3)將得到的勻漿液倒入直徑為4cm的六孔模具中；放置在60°C烤箱中烘烤30min或在常溫下自然干燥，即可得到核酸吸附材料。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用于DNA和RNA快速分離純化回收的核酸吸附材料的制備方法，制得的核酸吸附材料由以下原料按重量百分比制成；紙纖維3%～15%，硅粉3%～20%，羧甲基纖維素5%～15%，余量為去離子水，原料的重量百分比總和為100％；首先將配方中的原料加熱溶解形成混合物，然后用電動攪拌器進(jìn)行勻漿后倒入直徑為4cm的六孔模具中；放置在60℃烤箱中烘烤30min或在常溫下自然干燥，即可得到核酸吸附材料。制得的核酸吸附材料做成直徑為0.7cm的圓形紙片，放入核酸吸附離心套管中作為核酸吸附介質(zhì)，在特定溶液中能特異地吸附DNA或RNA，從而降低了蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì)的污染，提高了DNA或RNA的純度和產(chǎn)量，避免使用有機(jī)溶劑提取DNA或RNA時(shí)所對人體引起的毒副作用。
文檔編號B01J20/24GK102836698SQ201210334908
公開日2012年12月26日 申請日期2012年9月11日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月11日
發(fā)明者饒國洲, 李昂, 周洪, 李曉紅 申請人:西安交通大學(xué)口腔醫(yī)院