專利名稱:兒茶素類物質的制備方法
技術領域:
本發明涉及一種以不溶性聚乙烯吡咯烷酮為吸附劑,并采用柱層析手段從茶葉提
取物中去除雜質并高效回收高純度兒茶素類物質的綠色制備方法。
背景技術:
兒茶素類物質是茶葉提取物的重要功能成分,其具有淬滅自由基、抗氧化、抗過 敏、抗衰老、抗輻射、抗癌防癌、抗菌消炎等生理功能,在醫藥和食品領域有廣闊的應用前 景。但是普通的茶葉提取物中,均含有一定數量的咖啡因等雜質,而咖啡因具有成癮性、引 起失眠和誘發流產等不良作用,限制了茶葉提取物在醫藥和食品領域的推廣應用。因此,從 茶葉提取物中有效脫除咖啡因并獲得高純度兒茶素類物質的綠色制備方法一直受到科研 工作者的關注。 從茶葉提取物中脫除咖啡因并制備高純度兒茶素類物質的常用方法包括有機溶
劑脫除法、離子沉淀法、超臨界流體萃取法、吸附分離法等。其中,有機溶劑萃取法主要利用
咖啡因和兒茶素類物質極性差異,通過二氯甲烷或氯仿等有機溶劑萃取處理脫除咖啡因,
雖然該方法效果較好,但是氯仿等有機溶劑毒性大,產品的安全性得不到保證,限制了該方
法的推廣應用。離子沉淀法主要利用兒茶素類物質在一定條件下可以與某些金屬離子形成
絡合物而沉淀的性質,將茶葉提取物中的咖啡因和多糖等雜質分離,并通過離心和轉溶等
手段獲得較高純度的兒茶素類物質,雖然該法脫咖啡因效果也較好,但是產品色澤較深、且
其中金屬離子殘留高,同時生產過程環境污染較嚴重。超臨界流體萃取法主要利用咖啡因
與兒茶素類物質在超臨界流體中的溶解度的差異達到脫除咖啡因的效果,該法脫咖啡因效
果好、無溶劑殘留,但是該技術設備和運行成本非常高,很難在生產上大范圍應用。吸附分
離法是目前茶葉提取物脫咖啡因、純化兒茶素類物質的重要方法,該法主要利用吸附劑對
咖啡因和兒茶素類物質的選擇性吸附能力的差異,并通過吸附和解吸作用來脫除咖啡因和
富集兒茶素類物質。用于吸附分離的吸附劑主要有大孔樹脂、聚酰胺樹脂、葡聚糖凝膠和木
質纖維素等,但是這些吸附劑或者存在吸附量小、或者存在吸附選擇性不佳等問題,限制了
這些方法的推廣應用。 不溶性聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)是以N-乙烯基_吡咯烷酮為單體聚合而成的高聚 物,具有生理惰性、優良的生物相容性以及性質穩定和無毒等特點。已廣泛應用于食品、醫 藥、洗滌和印染等領域。有研究顯示,PVPP能與多酚類化合物(如兒茶素類物質)通過疏水 交互作用、氫鍵和范德華力形成絡合物,可以作為啤酒、果汁、葡萄酒等食品澄清劑和穩定 劑。因此,PVPP可用作分離多酚類物質的吸附劑。但是以PVPP為吸附劑進行茶葉提取物 脫除咖啡因等雜質時存在兩個重要技術障礙,其一為PVPP對兒茶素類物質的吸附力很強, 乙醇、乙醇水溶液、丙酮、丙酮水溶液或者乙酸乙酯等普通的洗脫劑均不能有效地將吸附在 PVPP上的兒茶素類物質洗脫下來,從而導致洗脫過程過于緩慢和復雜、產品得率低、PVPP 再生困難;其二為PVPP溶脹性能強,普通的以PVPP為吸附劑的層析柱流速非常慢,無法達 到生產應用要求
發明內容
本發明要解決的技術問題是提供一種綠色環保的兒茶素類物質的制備方法,該方
法能有效脫除咖啡因雜質,且能高通量快速回收高純度的兒茶素類物質。 為了解決上述技術問題,本發明提供一種兒茶素類物質的制備方法,包括以下步
驟 1)、制備茶葉提取物水溶液;
2)、制備層析柱 由吸附劑和流速加速助劑按1 3 : 1的重量比例混合后采用濕法灌柱灌制而 成,吸附劑為不溶性聚乙烯吡咯烷酮,流速加速助劑為層析硅膠、石英砂和微晶纖維素中的 至少一種; 3)、上樣將茶葉提取物水溶液勻速注入層析柱,使茶葉提取物水溶液的注入速度 =層析柱床流出液的流速,每小時流出液的體積為層析柱床體積的1. 5 2. 5倍;當流出液 呈現淡黃色時,停止茶葉提取物水溶液的注入和流出液的流出,并靜止10 30分鐘;
4)、洗脫包含咖啡因的雜質以蒸餾水、乙醇水溶液或乙醇為洗脫液淋洗層析柱, 所述洗脫液的用量是層析柱床體積的1 3倍;流出液為包含咖啡因等雜質的淋洗液;
上述乙醇水溶液可由乙醇和水按照任意體積比混合而得; 5)、洗脫兒茶素類物質以體積濃度^ 60%的二甲基亞砜的乙醇溶液或二甲基亞
砜為洗脫液再次淋洗層析柱床;收集含兒茶素類物質的淋洗液;
6)、兒茶素類固體的獲得 將含有兒茶素類物質的淋洗液采用減壓蒸餾法蒸去液體,獲得兒茶素類物質。
作為本發明的兒茶素類物質的制備方法的改進當步驟5)以體積濃度^ 60%的 二甲基亞砜的乙醇溶液為洗脫液時,步驟6)為先減壓蒸餾去除乙醇,然后再減壓蒸餾去除 二甲基亞砜;例如先采用0. 1兆帕、5(TC減壓蒸餾法回收乙醇,然后再于650Pa、5(TC條件下 蒸出二甲基亞砜,得兒茶素類固體; 作為本發明的兒茶素類物質的制備方法的另一種改進當步驟5)以二甲基亞砜 為洗脫液時,步驟6)為減壓蒸餾去除二甲基亞砜;例如直接于650Pa、5(TC條件下蒸出二甲 基亞砜,得兒茶素類固體。 作為本發明的兒茶素類物質的制備方法的進一步改進步驟2)中層析柱的高度 為該層析柱直徑的7. 5 15倍。 作為本發明的兒茶素類物質的制備方法的進一步改進步驟2)的制備層析柱包 括吸附劑前處理和流速加速助劑前處理; 吸附劑前處理包括將不溶性聚乙烯吡咯烷酮置于二甲基亞砜中浸泡,然后將上述 浸泡后的不溶性聚乙烯吡咯烷酮用蒸餾水反復清洗至無二甲基亞砜為止,接著將上述清洗 后的不溶性聚乙烯吡咯烷酮放入蒸餾水中溶脹; 流速加速助劑前處理包括將流速加速助劑置于二甲基亞砜中浸泡,然后將上述浸 泡后的流速加速助劑用蒸餾水反復清洗至無二甲基亞砜為止,接著將上述清洗后的流速加 速助劑放入蒸餾水中溶脹。
作為本發明的兒茶素類物質的制備方法的進一步改進步驟1)的制備茶葉提取
4物水溶液可選用以下任意一種方法 將茶葉提取物按lg/25 10ml的料液比與蒸餾水在85 95。C混合,或者將茶葉 提取物按lg/25 10ml的料液比與體積濃度為0. 01% 30%的乙醇水溶液在室溫下混 合,得茶水溶液;然后去除茶水溶液中的不溶物,得茶葉提取物水溶液;
將茶葉按料液比lg/50 20ml用蒸餾水于85 95。C浸提30 45分鐘,過濾, 得初級茶水和茶渣;將茶渣按lg茶葉/50 20ml蒸餾水的料液比于85 95。C再次浸提 30 45分鐘,過濾,得二級茶水;合并初級茶水和二級茶水,得浸提茶水;采用反滲透法將 浸提茶水濃縮至濃度為40 100克/升,得茶葉提取物水溶液。 在本發明的制備方法中,步驟4)中洗脫液的流速為每小時1. 5 2. 5倍層析柱床 體積,步驟5)中洗脫液的流速為每小時1. 5 2. 5倍層析柱床體積。
本發明的高純度兒茶素類物質的制備方法, 在步驟1)中,可通過離心或過濾等方式去除茶水溶液中的不溶物,從而得茶葉提 取物水溶液;茶葉提取物可通過市購的方式獲得。 在步驟2)中的吸附劑前處理中,將不溶性聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)置于2-4倍倍
重量的二甲基亞砜(DMS0)中浸泡12小時,傾去飄浮的細小顆粒后,過濾回收匿S0,將PVPP
用蒸餾水反復清洗至無匿SO后,再將PVPP在蒸餾水中浸泡溶脹過夜。 流速加速助劑前處理中采用與上述吸附劑前處理相同的方法對層析硅膠、石英
砂或微晶纖維素進行處理。 對于步驟4)所得的包含咖啡因等雜質的淋洗液(即流出液),若該淋洗液中不 含乙醇,可直接經反滲透濃縮后進行噴霧干燥,得咖啡因粗品;若該淋洗液中含乙醇,先經 0. 1兆帕、5(TC減壓蒸餾回收乙醇,得含咖啡因的水溶液,再經反滲透濃縮后噴霧干燥,得咖 啡因粗品。 在步驟5)中,待流出液開始呈淡黃色或與酒石酸鐵溶液顏色反應呈淡紫色時,開 始收集流出液;直至流出液無顏色或與酒石酸鐵溶液的無淡紫色顏色反應時,停止洗脫,關 閉流出閥門。收集的這部分流出液即為含高純度兒茶素類物質的淋洗液。
在步驟6)中,當步驟5)以體積濃度>60%的二甲基亞砜的乙醇溶液為洗脫液時, 采用減壓蒸餾法將含有兒茶素類物質的淋洗液在0. 1兆帕、5(TC條件下將乙醇蒸出回收, 獲得含高純度兒茶素類物質的匿SO溶液。由于匿SO是良好的醫藥原料(二甲基亞砜本身 具有消炎止痛、利尿、鎮靜等作用)及高效載體(溶解性能好、滲透性強),因此含兒茶素類 物質的miso溶液可直接用于藥物配方。為了獲得高純兒茶素類固體,可將含高純度兒茶素 類物質的匿SO溶液在50°C 、小于700帕條件下繼續減壓蒸餾,回收DMSO,從而獲得高純度 兒茶素類固體,該兒茶素類固體中咖啡因含量低于0. 4% ,兒茶素類總量高于90% 。
本發明的經過洗脫兒茶素類物質后的層析柱可以再生,具體步驟如下以2-3倍 層析柱床體積的蒸餾水淋洗平衡后,可用于下一輪次的上樣和洗脫操作。經過10-15個輪 次的上樣_洗脫循環后的層析柱,用2-4倍層析柱床體積的0. 1摩爾/升的氫氧化鈉溶液 淋洗,再以同樣體積的0. 1摩爾/升的鹽酸溶液淋洗,之后以蒸餾水充分淋洗,直至流出液 酸度為中性。 本發明的高純度兒茶素類物質的制備方法與現有技術相比,具有以下優點
①PVPP對兒茶素類吸附量高,選擇性好,在20-60°C范圍內,PVPP對兒茶素類物質的單分子層最大吸附量約為510-670毫克/克,是普通吸附劑的2-3倍;同時PVPP對咖啡因 的吸附量小,約為14-44毫克/克,兒茶素類物質對咖啡因的選擇吸附系數達到4. 1-10. 6, 是普通吸附劑的2-6倍。 ②在柱床中添加流速加速助劑后,柱床的通透性得到顯著改善,液體在柱床中的 流速較未添加流速加速助劑的普通PVPP柱床快4-11倍;而且,由于流速加速助劑基本不吸 附茶葉提取物中的物質,因此對后續的洗脫效果幾乎沒有影響。 ③由于PVPP對兒茶素類物質具有很強的吸附能力,采用普通的乙醇、乙醇水溶
液、丙酮、丙酮水溶液以及乙酸乙酯等溶劑很難快速、高效地將兒茶素類物質從吸附劑上洗
脫來下。本發明在大量研究的基礎上,篩選獲得了可快速高效將兒茶素類物質從PVPP吸附
劑上洗脫下來的溶劑,即體積比濃度不低于60%的匿S0乙醇溶液或者匿S0 ;采用1-3倍柱
床體積的該洗脫劑就可將95%以上的吸附在PVPP上的兒茶素類物質洗脫下來。 ④本發明所使用的PVPP和匿S0均具有較高的生物安全性,從而使兒茶素類物質
產品的安全性有保障。 ⑤本發明還可獲得咖啡因粗品副產品,可以解決含咖啡因溶液排放引起的環境污 染問題,同時分離過程中對乙醇等溶劑均采用回收方法,整個技術對環境友好。
具體實施例方式
實施例1、一種兒茶素類物質的制備方法,依次進行以下步驟 1)從杭州塞納茶葉有限公司購買的茶葉提取物,該提取物中兒茶素類總量為 61. 2%,咖啡因含量為10. 3%。將此茶葉提取物按lg/25ml的料液比用體積濃度為20%的 乙醇水溶液進行溶解,于4°C 、6000轉/分鐘的條件下離心20分鐘,收集上清液;得茶葉提 取物水溶液。 2)將市售吸附劑PVPP、流速加速助劑層析硅膠分別在2倍重量的匿S0中浸泡 12小時,傾去漂浮的細小粒子,紗網過濾回收DMSO,將處理后的PVPP和層析硅膠以大量蒸 餾水反復洗滌以除去剩余的DMSO,之后將上述洗滌后的PVPP、硅膠分別在蒸餾水中溶脹過 夜。將溶脹后的吸附劑PVPP與流速加速助劑層析硅膠按1 : l的比例(干重,即PVPP與層 析硅膠的重量比為l : 1)充分混合。采用濕法裝柱,層析柱內經6厘米,柱床高70厘米, 柱床體積約2升。 3)用蠕動泵將上述茶葉提取物水溶液泵入層析柱,控制流速,使泵入速度=流出 速度,每小時流出液的體積約為層析柱床體積的2倍;待流出液呈現淡黃色或與酒石酸鐵 溶液顏色反應呈淡紫色時(與酒石酸鐵顏色反應的具體做法是,取3-5滴流出液滴至盛有 1毫升、酸度為PH 7. 5的3. 6毫摩爾/升酒石酸鐵溶液試管中,裸眼觀察顏色變化),即停 止上樣,關閉流出液閥門,靜置20分鐘。 4)以乙醇淋洗柱床以除去咖啡因等雜質,流速控制為每小時2.5倍柱床體積,淋 洗時間為0.4小時。收集流出液并轉入旋轉蒸發器中,在O. 1兆帕、5(TC條件下減壓蒸餾回 收乙醇,將回收乙醇后的水溶液進行反滲透濃縮和噴霧干燥,獲得咖啡因粗品。
5)將80份體積分數的匿SO與20份體積分數的乙醇混合配制成體積濃度為80 % 的匿SO乙醇溶液,用蠕動泵將其泵入柱床洗脫兒茶素類物質,控制流速,使泵入速度和流 出速度均約為每小時2倍柱床體積,待流出液開始呈淡黃色或與酒石酸鐵溶液顏色反應呈
6淡紫色時(與酒石酸鐵顏色反應的具體做法是,取3-5滴流出液滴至盛有1毫升、酸度為pH 7. 5的3. 6毫摩爾/升酒石酸鐵溶液試管中,裸眼觀察顏色變化),開始收集流出液;直至流 出液體無顏色或與酒石酸鐵溶液的無淡紫色顏色反應時,停止洗脫,關閉流出閥門。
6)將步驟5)所得的含有兒茶素類物質的洗脫液轉移至旋轉蒸發器中,于O. 1兆 帕、5(TC條件下減壓蒸餾回收乙醇。將所得的含兒茶素類物質的匿S0溶液在650Pa、5(TC 條件下減壓蒸餾,回收匿SO,并獲得高純度兒茶素類物質。經HPLC檢測,兒茶素類含量為 94. 4%,咖啡因含量為0. 08%。 實施例2、一種兒茶素類物質的制備方法,依次進行以下步驟
1)從杭州塞納茶葉有限公司購買的茶葉提取物,該提取物中兒茶素類總量為 46. 3%,咖啡因含量為6. 7%。將此茶葉提取物按料液比lg/10ml用體積比為10%的乙醇 水溶液進行溶解,減壓過濾并收集上清液,得茶葉提取物水溶液。 2)將市售吸附劑PVPP、流速加速助劑微晶纖維素分別在2倍重量的匿SO中浸泡 12小時,傾去漂浮的細小粒子,紗網過濾回收匿SO ;將處理后的PVPP和微晶纖維素以大量 蒸餾水反復洗滌以除去剩余的DMSO,之后將上述洗滌后的PVPP、微晶纖維素分別在蒸餾水 中溶脹過夜。將溶脹后的吸附劑PVPP與流速加速助劑微晶纖維素按2 : l的比例(干重) 充分混合。采用濕法裝柱,層析柱內經6厘米,柱床高45厘米,柱床體積約1.3升。
3)用蠕動泵將茶葉提取物水溶液泵入層析柱,控制流速,使泵入速度和流出速度 均約為每小時2. 5倍柱床體積,待流出液呈現淡黃色或與酒石酸鐵溶液顏色反應呈淡紫色 時,即停止上樣,關閉流出液閥門并靜置30分鐘。 4)以體積濃度為50%的乙醇水溶液淋洗柱床除去咖啡因等雜質,流速控制為每 小時2倍柱床體積,淋洗時間為0. 8小時。收集淋洗液并轉入旋轉蒸發器中,經0. 1兆帕、 5(TC減壓蒸餾回收乙醇后,再進行反滲透濃縮并噴霧干燥,獲得咖啡因粗品。
5)配制體積濃度為60%的匿SO乙醇溶液,用蠕動泵將其泵入柱床洗脫兒茶素類 物質,控制流速,使泵入速度和流出速度均約為每小時1. 5倍柱床體積,待流出液開始呈淡 黃色或與酒石酸鐵溶液顏色反應呈淡紫色時(與酒石酸鐵顏色反應的具體做法是,取3-5 滴流出液滴至盛有1毫升、酸度為pH 7. 5的3. 6毫摩爾/升酒石酸鐵溶液試管中,裸眼觀 察顏色變化),開始收集流出液;直至流出液體無顏色或與酒石酸鐵溶液的無淡紫色顏色 反應時,停止洗脫,關閉流出閥門。 6)將步驟5)所得的含有兒茶素類物質的洗脫液轉移至旋轉蒸發器中,于O. 1兆 帕、5(TC條件下減壓蒸餾回收乙醇。然后將含兒茶素類物質的匿SO溶液在650Pa、5(TC條 件下減壓蒸餾,回收匿SO,并獲得高純度兒茶素類物質。經HPLC檢測,兒茶素類含量為 93. 5%,咖啡因含量為0. 21%。 實施例3、一種兒茶素類物質的制備方法,依次進行以下步驟
1)從杭州塞納茶葉有限公司購買的茶葉提取物,該提取物中兒茶素類總量為 46. 3%,咖啡因含量為6. 7%。將此茶葉提取物按料液比lg/20ml用9(TC的蒸餾水進行溶 解,減壓過濾(0. 1兆帕)并收集上清液,得茶葉提取物水溶液。 2)將市售吸附劑PVPP在2倍重量的匿SO中浸泡12小時,傾去漂浮的細小粒子, 紗網過濾回收匿SO,然后將PVPP以大量蒸餾水反復洗滌以除去剩余的DMSO,之后再放入蒸 餾水中溶脹過夜;采用相同的方法對由層析硅膠和微晶纖維素按重量比為1 : l混合而成的流速加速助劑進行處理;將溶脹后的吸附劑與流速加速助劑按l : l的比例(干重)充 分混合。采用濕法裝柱,層析柱內經6厘米,柱床高90厘米,柱床體積約2. 5升。
3)用蠕動泵將茶葉提取物水溶液泵入層析柱,控制流速,使泵入速度和流出速度 均約為每小時2倍柱床體積,待流出液呈現淡黃色或與酒石酸鐵溶液顏色反應呈淡紫色時 (與酒石酸鐵顏色反應的具體做法是,取3-5滴流出液滴至盛有1毫升、酸度為pH 7. 5的 3. 6毫摩爾/升酒石酸鐵溶液試管中,裸眼觀察顏色變化),即停止上樣,關閉流出液閥門并 靜置30分鐘。 4)以體積濃度為20%的乙醇水溶液淋洗柱床以除去咖啡因等雜質,流速控制為 每小時2倍柱床體積,淋洗時間為1小時。收集淋洗液并轉入旋轉蒸發器中,經0. 1兆帕、 5(TC減壓蒸餾回收乙醇后,再進行反滲透濃縮和噴霧干燥,獲得咖啡因粗品。
5)配制體積濃度為60%的匿SO乙醇溶液,用蠕動泵將其泵入柱床洗脫兒茶素類 物質,控制流速,使泵入速度和流出速度均約為每小時1. 5倍柱床體積,待流出液開始呈淡 黃色或與酒石酸鐵溶液顏色反應呈淡紫色時(與酒石酸鐵顏色反應的具體做法是,取3-5 滴流出液滴至盛有1毫升、酸度為pH 7. 5的3. 6毫摩爾/升酒石酸鐵溶液試管中,裸眼觀 察顏色變化),開始收集流出液;直至流出液體無顏色或與酒石酸鐵溶液的無淡紫色顏色 反應時,停止洗脫,關閉流出閥門。 6)將步驟5)所得的含有兒茶素類物質的洗脫液轉移至旋轉蒸發器中,于O. 1兆 帕、50°C條件下減壓蒸餾回收乙醇。再將含兒茶素類物質的匿SO溶液在650帕、50°C條件下 減壓蒸餾,回收DMSO,并獲得高純度兒茶素類物質。經HPLC檢測,兒茶素類含量為92. 7% , 咖啡因含量為0. 13%。 實施例4、一種兒茶素類物質的制備方法,依次進行以下步驟 1)從杭州塞納茶葉有限公司購買的3級炒青綠茶,其內含成分為兒茶素類總量為
16. 5%,咖啡因含量為3. 3%。將此茶葉按料液比lg/20ml用9(TC蒸餾水浸提30分鐘,減
壓(0. 1兆帕)過濾得到茶水,將茶渣再次以同樣體積的9(TC蒸餾水浸提30分鐘并減壓過
濾,合并兩次濾液,得浸提茶水,采用反滲透法將浸提茶水濃度濃縮至80克/升,得茶葉提
取物水溶液。 2)將市售吸附劑PVPP在2倍重量的匿SO中浸泡12小時,傾去漂浮的細小粒子, 紗網過濾回收匿SO,將PVPP以大量蒸餾水反復洗滌以除去剩余的DMSO,之后蒸餾水中溶脹 過夜;采用相同的方法對由層析硅膠、石英砂和微晶纖維素按重量比為1 : 1 : l混合而成
的流速加速助劑進行處理。將處理后的吸附劑PVPP與流速加速助劑按3 : i的比例(干
重)充分混合。采用濕法裝柱,層析柱內經8厘米,柱床高80厘米,柱床體積約4.0升。
3)用蠕動泵將茶葉提取物水溶液泵入層析柱,控制流速,使泵入速度和流出速度 均約為每小時2倍柱床體積,待流出液呈現淡黃色或與酒石酸鐵溶液顏色反應呈淡紫色時 (與酒石酸鐵顏色反應的具體做法是,取3-5滴流出液滴至盛有1毫升、酸度為pH 7. 5的 3. 6毫摩爾/升酒石酸鐵溶液試管中,裸眼觀察顏色變化),即停止上樣,關閉流出液閥門并 靜置30分鐘。 4)蒸餾水淋洗柱床以除去咖啡因等雜質,流速控制為每小時1. 5倍柱床體積,淋
洗時間為2小時。收集淋洗液,經反滲透濃縮,并進行噴霧干燥,獲得咖啡因粗品。 5)用蠕動泵將DMSO泵入柱床洗脫兒茶素類物質,控制流速,使泵入速度和流出速度均約為每小時2. 5倍柱床體積,待流出液開始呈現淡黃色或與酒石酸鐵溶液顏色反應呈 淡紫色時(與酒石酸鐵顏色反應的具體做法是,取3-5滴流出液滴至盛有1毫升、酸度為pH 7. 5的3. 6毫摩爾/升酒石酸鐵溶液試管中,裸眼觀察顏色變化),開始收集流出液;直至流 出液體無顏色或與酒石酸鐵溶液的無淡紫色顏色反應時,停止洗脫,關閉流出閥門。
6)將步驟5)所得的含兒茶素類物質的匿S0溶液轉移至旋轉蒸發器中,于650帕、 5(TC減壓蒸餾回收DMS0,并獲得高純度兒茶素類物質。經檢測,兒茶素類含量為90.4%,咖 啡因含量為0.31%。 7)以0. 1摩爾/升的氫氧化鈉淋洗經過多次吸附_洗脫循環后的柱床,用量為2 倍柱床體積,之后以2倍柱床體積的0. 1摩爾/升的鹽酸進行淋洗,并用大量蒸餾水反復淋 洗柱床,直至流出液酸度近中性為止,完成層析柱的再生。 最后,還需要注意的是,以上列舉的僅是本發明的若干個具體實施例。顯然,本發 明不限于以上實施例,還可以有許多變形。本領域的普通技術人員能從本發明公開的內容 直接導出或聯想到的所有變形,均應認為是本發明的保護范圍。
權利要求
一種兒茶素類物質的制備方法,其特征是包括以下步驟1)、制備茶葉提取物水溶液;2)、制備層析柱由吸附劑和流速加速助劑按1~3∶1的重量比例混合后采用濕法灌柱灌制而成,所述吸附劑為不溶性聚乙烯吡咯烷酮,所述流速加速助劑為層析硅膠、石英砂和微晶纖維素中的至少一種;3)、上樣將茶葉提取物水溶液勻速注入層析柱,使茶葉提取物水溶液的注入速度=層析柱床流出液的流速,每小時流出液的體積為層析柱床體積的1.5~2.5倍;當流出液呈現淡黃色時,停止茶葉提取物水溶液的注入和流出液的流出,并靜止10~30分鐘;4)、洗脫包含咖啡因的雜質以蒸餾水、乙醇水溶液或乙醇為洗脫液淋洗層析柱,所述洗脫液的用量是層析柱床體積的1~3倍;流出液為包含咖啡因雜質的淋洗液;5)、洗脫兒茶素類物質以體積濃度≥60%的二甲基亞砜的乙醇溶液或二甲基亞砜為洗脫液再次淋洗層析柱床;收集含兒茶素類物質的淋洗液;6)、兒茶素類固體的獲得將含有兒茶素類物質的淋洗液采用減壓蒸餾法蒸去液體,獲得兒茶素類物質。
2. 根據權利要求1所述的兒茶素類物質的制備方法,其特征是所述步驟5)中以體積 濃度> 60%的二甲基亞砜的乙醇溶液為洗脫液,所述步驟6)為先減壓蒸餾去除乙醇,然后 再減壓蒸餾去除二甲基亞砜。
3. 根據權利要求1所述的兒茶素類物質的制備方法,其特征是所述步驟5)中以二甲 基亞砜為洗脫液,所述步驟6)為減壓蒸餾去除二甲基亞砜。
4. 根據權利要求1、2或3所述的兒茶素類物質的制備方法,其特征是所述步驟2)中 層析柱的高度為該層析柱直徑的7. 5 15倍。
5. 根據權利要求4所述的兒茶素類物質的制備方法,其特征是所述步驟2)的制備層 析柱包括吸附劑前處理和流速加速助劑前處理;所述吸附劑前處理包括將不溶性聚乙烯吡咯烷酮置于二甲基亞砜中浸泡,然后將上述 浸泡后的不溶性聚乙烯吡咯烷酮用蒸餾水反復清洗至無二甲基亞砜為止,接著將上述清洗 后的不溶性聚乙烯吡咯烷酮放入蒸餾水中溶脹;所述流速加速助劑前處理包括將流速加速助劑置于二甲基亞砜中浸泡,然后將上述浸 泡后的流速加速助劑用蒸餾水反復清洗至無二甲基亞砜為止,接著將上述清洗后的流速加 速助劑放入蒸餾水中溶脹。
6. 根據權利要求5所述的兒茶素類物質的制備方法,其特征是所述步驟l)的制備茶 葉提取物水溶液為以下任意一種方法將茶葉提取物按lg/25 10ml的料液比與蒸餾水在85 95。C混合,或者將茶葉提取 物按lg/25 10ml的料液比與體積濃度為0. 01% 30%的乙醇水溶液在室溫下混合,得 茶水溶液;然后去除茶水溶液中的不溶物,得茶葉提取物水溶液;將茶葉按料液比lg/50 20ml用蒸餾水于85 95。C浸提30 45分鐘,過濾,得初 級茶水和茶渣;將所述茶渣按lg茶葉/50 20ml蒸餾水的料液比于85 95。C再次浸提 30 45分鐘,過濾,得二級茶水;合并初級茶水和二級茶水,得浸提茶水;采用反滲透法將 浸提茶水濃縮至濃度為40 100克/升,得茶葉提取物水溶液。
全文摘要
本發明公開了一種兒茶素類物質的制備方法,包括以下步驟1)制備茶葉提取物水溶液;2)制備層析柱,其由吸附劑和流速加速助劑按1~3∶1的重量比例混合后采用濕法灌柱灌制而成;3)上樣將茶葉提取物水溶液勻速注入層析柱;4)洗脫包含咖啡因的雜質,流出液為包含咖啡因雜質的淋洗液;5)洗脫兒茶素類物質以體積濃度≥60%的二甲基亞砜的乙醇溶液或二甲基亞砜為洗脫液再次淋洗層析柱床;收集含兒茶素類物質的淋洗液;6)兒茶素類固體的獲得。采用本發明的方法能有效脫除咖啡因雜質,從而獲得高純度的兒茶素類物質。
文檔編號B01D15/08GK101696201SQ20091015323
公開日2010年4月21日 申請日期2009年10月29日 優先權日2009年10月29日
發明者葉儉慧, 梁月榮, 范芳媛, 董占波, 鄭新強, 陸建良 申請人:浙江大學;