專利名稱：一種雙水相萃取提取柿葉黃酮類物質的方法
技術領域：
本發明涉及一種雙水相萃取提取柿葉黃酮類物質的方法。
背景技術：
柿葉是柿樹的新鮮或干燥葉片。作為藥用始載于明《滇南本草》，曰“經霜葉敷臁瘡”。以后諸家本草及醫(藥)書也多有記載。其味苦、酸、澀，性涼，具有清肺止咳、涼血止血、活血化瘀、降血壓之功效。主要用于咳喘、肺氣腫、各種內出血、高血壓等病癥。柿葉中的主要有效成分是黃酮。目前已發現的黃酮類化合物有黃芪、異槲皮素、山萘酚、槲皮素等。國內外研究表明柿葉黃酮具有降血壓功能及促進植物生長作用，是一種具有實用價值的作物、瓜果增產劑和很有前途的天然降血壓藥。
柿葉中黃酮主要以甙類形式存在，一般提取時多采用水、甲醇、乙醇水溶液作溶劑，用乙酸乙酯作萃取劑。另據報道，有人采用水提樹酯吸附的方法提取分離柿葉黃酮類化合物。這些方法均存在以下問題操作繁瑣，提取率較低。
發明內容
要解決的技術問題為了避免現有技術的不足之處，本發明提供了一種雙水相萃取提取柿葉黃酮類物質的方法，利用雙水相萃取技術的特點，不但提高了提取柿葉黃酮類物質的提取率，而且可以得到高品質的黃酮類物質，同時方法本身既經濟又操作簡單。
技術方案在本發明中采用雙水相提取柿葉黃酮類物質的方法，雙水相萃取技術的特點有(1)體系的含水量多達75％～99％，兩界面張力極低，有助于保持有效成分的生物活性和相際質量傳遞；(2)上、下相密度小，一般10-2g·cm-3左右，是水密度的百分之一；(3)分相時間短；(4)雙水相萃取易于連續操作、工程放大，可直接線性放大4萬倍；
(5)雙水相萃取處理量大，能耗低；主要成本消耗在聚合物的使用上，而聚合物又可以循環使用，因此，生產成本較低。
本發明的技術特征在于a、固液浸取將柿葉烘干、粉碎，加入乙醇溶液，固液浸取，過濾除雜后得到柿葉粗提液；b、雙水相萃取取上述柿葉粗提液，加入PEG聚合物和硫酸銨雙水相系統，混勻、分為上、下兩相，分相溫度15℃～30℃，時間為2～6小時；c、乙酸酯類反萃取出富含聚乙二醇聚合物的上相，加水、乙酸酯類和無機鹽，混勻，系統在室溫下靜置分為上、下兩相，分相溫度為室溫，時間為1～3小時。
d、減壓蒸餾、真空干燥取出含有大量黃酮類物質的乙酸酯類的相，對其進行減壓蒸餾、濃縮溶液，然后將該濃縮液進行真空干燥，得到固體柿葉黃酮類物質。
在上述的雙水相萃取中，加入PEG聚合物和硫酸銨雙水相系統的同時還可以加入無機鹽，無機鹽可以為NaCl或Na2SO4。
上述加入的PEG聚合物為5％～25％，硫酸銨為10％～20％，其中PEG聚合物的分子量為300～1500。
上述加入的乙酸酯類可以為乙酸丁酯或乙酸乙酯。
有益效果本發明的有益效果是(1)分相迅速在實驗中觀察到，采用雙水相萃取法，約20分鐘左右即可分相，且沒有乳化層，縮短了實驗周期。
(2)過程集成雙水相萃取既達到了預處理的目的，又濃縮了料液。表現為大量的雜質(如親水性物質，細胞碎片等)進入下相，黃酮類物質進入上相，上相較原始處理液大為減少，濃縮倍數達到了4倍以上；(3)本發明方法簡單，易于掌握，不受環境影響，見效快。
下面結合附圖和實施例對本發明做進一步說明。
圖1工藝流程示意圖具體實施方式
現結合附圖對本發明作進一步描述實施例1(1)固液浸取稱取經清洗、去雜、烘干、粉碎的柿葉20g，加入50％乙醇300mL進行回流浸提3h，蒸餾回收溶劑，將所剩提取液過濾除雜，得到濾液153g。
(2)雙水相萃取取上述濾液，加入20g聚乙二醇、35g(NH4)2SO4、100g水，再加入無機鹽NaCl 5g混勻，在15℃分相2h～6h。
(3)乙酸丁酯或乙酸乙酯反萃取出富含聚乙二醇聚合物的上相124mL，加水50mL，80mL乙酸丁酯或乙酸乙酯和3gNaCl，充分混勻，系統在室溫下靜置分相1h～3h至徹底分為上、下兩相，含有大量黃酮類物質的乙酸丁酯相待進一步處理。
(4)減壓蒸餾、真空干燥取出乙酸丁酯相102mL進行減壓蒸餾濃縮溶液，將濃縮液置于60℃～80℃下真空干燥，得到固體柿葉黃酮類物質。
實施例2(1)固液浸取稱取經清洗去雜、烘干、粉碎的柿葉20g，加入70％乙醇400mL回流浸提5h，蒸餾回收溶劑，將所剩提取液過濾除雜，得到濾液190g。
(2)雙水相萃取取上述濾液，加入25g聚乙二醇、45g(NH4)2SO4、95g水，再加入2g NaCl，混勻，在25℃分相2h～6h。
(3)乙酸丁酯或乙酸乙酯反萃取出富含聚乙二醇聚合物的上相186mL，加水75mL，113mL乙酸丁酯，3g NaCl，充分混勻，系統在室溫下靜置分相1h～3h至徹底分為上、下兩相，含有大量黃酮類物質的乙酸丁酯相待進一步處理。
(4)減壓蒸餾、真空干燥將上述乙酸丁酯或乙酸乙酯相進行減壓蒸餾來濃縮溶液，將濃縮液置于60℃～80℃下真空干燥，得到固體柿葉黃酮類物質。
實施例3(1)固液浸取稱取經清洗去雜、烘干、粉碎的柿葉20g，加入60％乙醇500mL回流浸提8h，蒸餾回收溶劑，將所剩提取液過濾除雜，得到濾液389g。
(2)雙水相萃取取上述濾液，加入35g聚乙二醇、65g(NH4)2SO4、125g水，再加入無機鹽3g NaCl，混勻，在30℃分相2h～6h。
(3)乙酸丁酯或乙酸乙酯反萃取出富含聚乙二醇聚合物的上相221mL，加水85mL，126mL乙酸丁酯，3g NaCl，充分混勻，系統在室溫下靜置分相1h～3h至徹底分為上、下兩相，含有大量黃酮類物質的乙酸丁酯相待進一步處理。
(4)減壓蒸餾、真空干燥取出乙酸丁酯相238mL進行減壓蒸餾濃縮溶液，將濃縮液置于60℃～80℃下真空干燥，得到固體柿葉黃酮類物質。
所得產品按中國藥典標準檢測，產品中所含柿葉黃酮類化合物約為12.1％(分光光度法)。
本發明基于以下發現柿葉黃酮類物質在PEG/硫酸銨雙水相系統中分配的極大對稱。表1給出了柿葉黃酮類物質在PEG/硫酸銨雙水相中的分配數據。雙水相體系萃取分離技術的原理是柿葉黃酮類物質在雙水相體系中的選擇性分配。柿葉黃酮類物質進入雙水相體系后，在上相和下相間進行選擇性分配，表現出一定的分配系數。柿葉黃酮類物質對PEG具有某種親和性，使柿葉黃酮類物質能較容易溶解在富含PEG的上相，而一些雜質分配在下相，柿葉黃酮類物質的分配系數一般大于16，萃取率在78.9％～94.7％之間。
表1柿葉黃酮類物質在PEG/硫酸銨雙水相系統中的分配行為
表中相比R＝Vt/Vb分配系數K＝Ct/Cb萃取率Y＝VtCt/(VtCt+VbCb)式中Vt、Vb-上、下相的體積；Ct、Cb-柿葉黃酮類化合物在上、下相中的濃度；因此，經上述固液浸取、PEG/硫酸銨雙水相系統萃取、有機溶劑反萃等過程的處理，使柿葉黃酮類物質得以濃縮和提純，最終得到柿葉黃酮類物質的成品。
權利要求
1.一種雙水相萃取提取柿葉黃酮類物質的方法，其特征在于a、固液浸取將柿葉烘干、粉碎，加入乙醇溶液，固液浸取，過濾除雜后得到柿葉粗提液；b、雙水相萃取取上述柿葉粗提液，加入PEG聚合物和硫酸銨雙水相系統，混勻、分為上、下兩相；c、乙酸酯類反萃取出富含聚乙二醇聚合物的上相，加水、乙酸酯類和無機鹽，混勻，系統在室溫下靜置分為上、下兩相；d、減壓蒸餾、真空干燥取出含有大量黃酮類物質的乙酸酯類的相，對其進行減壓蒸餾、濃縮溶液，然后將該濃縮液進行真空干燥，得到固體柿葉黃酮類物質。
2.根據權利要求1所述的一種雙水相萃取提取柿葉黃酮類物質的方法，其特征在于在雙水相萃取中，加入PEG聚合物和硫酸銨雙水相系統的同時還可以加入無機鹽。
3.根據權利要求1或2所述的一種雙水相萃取提取柿葉黃酮類物質的方法，其特征在于加入的PEG聚合物為5％～25％，硫酸銨為10％～20％。
4.根據權利要求1或2或3所述的一種雙水相萃取提取柿葉黃酮類物質的方法，其特征在于加入的PEG聚合物的分子量為300～1500。
5.根據權利要求1或2所述的一種雙水相萃取提取柿葉黃酮類物質的方法，其特征在于加入的無機鹽可以為NaCl或Na2SO4。
6.根據權利要求1所述的一種雙水相萃取提取柿葉黃酮類物質的方法，其特征在于加入的乙酸酯類可以為乙酸丁酯或乙酸乙酯。
7.根據權利要求1所述的一種雙水相萃取提取柿葉黃酮類物質的方法，其特征在于在雙水相萃取中，分相溫度15℃～30℃，時間為2～6小時。
8.根據權利要求1或6所述的一種雙水相萃取提取柿葉黃酮類物質的方法，其特征在于在乙酸酯類反萃中，分相溫度為室溫，時間為1～3小時。
9.根據權利要求1所述的一種雙水相萃取提取柿葉黃酮類物質的方法，其特征在于在減壓蒸餾、真空干燥中，真空干燥溫度為60℃～80℃下。
全文摘要
本發明涉及一種雙水相萃取提取柿葉黃酮類物質的方法。本發明的技術特征在于將柿葉烘干、粉碎，加入乙醇溶液，固液浸取，過濾除雜后得到柿葉粗提液。取上述柿葉粗提液，加入PEG聚合物和硫酸銨雙水相系統，混勻、分為上、下兩相。取出富含聚乙二醇聚合物的上相，加水、乙酸酯類和無機鹽，混勻。取出含有大量黃酮類物質的乙酸酯類的相，對其進行減壓蒸餾、濃縮溶液，然后將該濃縮液進行真空干燥，得到固體柿葉黃酮類物質。本發明的有益效果是提高了提取柿葉黃酮類物質的提取率，而且可以得到高品質的黃酮類物質，同時方法本身既經濟又操作簡單。
文檔編號B01D11/02GK1709542SQ200410026240
公開日2005年12月21日 申請日期2004年6月17日 優先權日2004年6月17日
發明者岳紅, 趙曉莉, 翟文俊 申請人:西北工業大學