專利名稱：中藥血竭提取物的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種具有α-糖苷酶抑制劑活性的中藥血竭提取物的制備方法，屬中草藥制備化學技術領域。
背景技術：
糖尿病是一種復合病因的綜合病癥，是由于體內(nèi)胰島素缺乏或拮抗胰島素的激素增加、或胰島素在靶細胞內(nèi)不能發(fā)揮正常生理作用而引起的葡萄糖、蛋白質(zhì)及脂質(zhì)代謝紊亂的一種綜合病癥。目前降糖藥多系化學合成藥，不下30余種，可分為三大類，即黃脲類、雙胍類和α-葡萄糖苷酶抑制劑。α-葡萄糖苷酶屬于低聚糖水解酶類，包括麥芽糖酶、異麥芽糖酶、蔗糖酶和海藻糖酶等。α-葡萄糖苷酶能從含α-糖苷鍵底物的非還原端催化水解α-葡萄糖基，如水解α-1，4-糖苷鍵和糖原的α-1，4-及α-1，6-糖苷鍵。而α-葡萄糖苷酶抑制劑主要通過抑制存在于小腸粘膜微絨毛膜表面的麥芽糖酶和蔗糖酶等水解酶，阻礙糖類化合物分解成葡萄糖等單糖，進而起到降血糖的作用，主要代表藥物有阿卡波糖(Acarbose)和伏格列波糖(Voglibose)，兩者均為化學合成藥，抑制機理為競爭性抑制劑，可與底物同時和酶競爭性結合，可能會造成餐后低血糖。因此，尋找一種安全有效的降血糖藥物，對于治療、預防非胰島素依賴型糖尿病、高脂血癥、肥胖癥、高脂蛋白血癥具有重要的臨床應用價值。專利號為98110688.9的中國發(fā)明專利報道了一種用于治療糖尿病的血竭中藥制劑及其制備方法，但其僅僅停留在直接使用血竭全粉的動物和人體試驗方面，未對血竭進行進一步分離提取，未涉及從血竭中提取具降血糖作用的α-葡萄糖苷酶抑制成分。
血竭是被譽為“活血之圣藥”的珍貴中藥，其性味甘、溫、咸、平，兼有活血化瘀、消腫止痛、止血補血之功效?，F(xiàn)代醫(yī)學研究證明，血竭具有改善機體微循環(huán)，調(diào)整新陳代謝，改善免疫功能等作用。血竭主要來源于棕櫚科黃藤屬藤本植物與百合科龍血樹屬植物的樹脂及同屬它種植物果實中溶出或分泌的紅色樹脂。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種具有降血糖作用的中藥血竭提取物，該提取物具有明顯的α-葡萄糖苷酶抑制活性。
本發(fā)明的另一個目的在于一種從原料中藥血竭中提取血竭有效提取物的方法。
本發(fā)明的一種中藥血竭提取物的制備方法，其特征在于采用有機相極性梯度萃取法，其過程和步驟如下將原材料中藥血竭經(jīng)過適當粉碎和干燥后，用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮依次進行四步索氏抽提，將四步提取物用旋轉蒸發(fā)儀將溶劑揮發(fā)凈后，加水置于冷凍干燥機上進行冷凍干燥至粉末；提取溶劑總量為原材料血竭質(zhì)量的5倍；抽取溫度依次為90℃、70℃、90℃、70℃；提取時間分別為48小時、72小時、72小時和48小時最終獲得全部中藥血竭提取物。索氏抽取是在索氏提取器中進行，在其冷凝管上端加有溶劑，并在一定溫度的水浴上加熱，使溶劑不斷回流提取。
本發(fā)明方法所制備的中藥血竭提取物具備較高的α-葡萄糖苷酶抑制活性，且遠遠高于現(xiàn)有降血糖藥物；該產(chǎn)品安全無毒，適合作為藥物使用。本方法工藝簡單，操作方便。
現(xiàn)將本發(fā)明提取物各項性能試驗結果敘述于后一、血竭提取物體外對α-葡萄糖苷酶抑制活力測定在試管中分別加入α-葡萄糖苷酶及不同劑量的中藥血竭提取物，測定其對α-葡萄糖苷酶的抑制活性。以德國拜耳公司生產(chǎn)的拜糖蘋(有效成分為acarbose)做陽性對照物。其測試結果于下表1
表1 血竭抑制劑對α-葡萄糖苷酶的抑制活性抑制劑 劑量(μg)抑制率(％)ID50抑制比活力(Unit/mg)第一步提取物 88.9(石油醚提取物) 16 10.624 12.00.4g32 13.440 15.5第二步提取物 819.116 31.6(氯仿提取物)25.7μg3.4524 44.432 58.740 65.0第三步提取物 221.4443.3(乙酸乙酯提取物)4.10μg21.209665.9883.010 97.3第四步提取物 224.5457.6(丙酮提取物)3.24μg27.014689.5896.810 98.8217.5425.4641.3血竭全粉862.310 78.4 5.86μg15.0124 85.532 89.340 97.71000 31.52000 70.2Acarbose1.452mg0.0753000 79.14000 82.5由表1可見，國產(chǎn)廣西血竭全粉及其各種溶劑依次提取后的提取物對α-葡萄糖苷酶都有抑制效果，其中，國產(chǎn)廣西血竭第四步提取物(丙酮提取物)對α-葡萄糖苷酶的抑制活性最強，ID50達到3.24μg，而要達到100％的抑制率只需要8μg。試驗中各抑制劑能力依次為廣西血竭第四步提取物(丙酮提取物)＞第三步提取物(乙酸乙酯提取物)＞國產(chǎn)血竭全粉＞第二步提取物(氯仿提取物)＞拜糖蘋＞第一步提取物(石油醚提取物)。國產(chǎn)血竭的氯仿提取物對α-葡萄糖苷酶有抑制作用，但抑制活力較低，國產(chǎn)血竭的石油醚提取物基本沒有抑制活力。本發(fā)明血竭提取物具有很強的α-葡萄糖苷酶抑制活性，其中血竭丙酮提取物抑制活性是降糖藥物拜糖蘋的300-380倍，具有重要的實際效益和經(jīng)濟效益。
二、對正常小鼠空腹血糖的影響試驗昆明種小鼠，體重20-22g，分成5組，即陰性對照組、陽性對照組、第四步提取物即丙酮提取物低劑量組、丙酮提取物中劑量組和丙酮提取物高劑量組。陰性對照組灌胃生理鹽水，陽性對照組灌胃拜糖萍50mg/kg，丙酮提取物低劑量組灌胃提取物300mg/kg，中劑量組灌胃提取物400mg/kg，高劑量組灌胃提取物500mg/kg。連續(xù)給藥7天，末次給藥后禁食10h，眼眶靜脈竇取血，離心取血清，按葡萄糖氧化酶法測定血糖水平，結果見表2。
表2 血竭第四步提取物對正常小鼠糖耐量的影響
*P＜0.01v.s.陰性對照組由表可知，血竭第四步提取物，即丙酮提取物中、高劑量組對正常小鼠的糖耐量效果接近于拜堂蘋。
三、四氧嘧啶Alloxan誘導的糖尿病小鼠血糖值試驗昆明種小鼠，體重20-22g，禁食24h，腹腔注射Alloxan200mg/kg，每天一次，72h后禁食10h，靜脈竇取血離心取血清測定血糖值，選取血糖值在11.1mmol/L以上者進行實驗。分組時各組動物平均血糖值之差不大于0.5mmol/L。小鼠共分5組，即陰性對照組、陽性對照組、血竭第四步提取物即丙酮提取物低劑量組、中劑量組和高劑量組。陰性對照組灌胃生理鹽水，陽性對照組灌胃拜糖萍50mg/kg，第四步提取物即丙酮提取物低劑量組灌胃提取物300mg/kg，中劑量組灌胃提取物400mg/kg，高劑量組灌胃提取物500mg/kg。連續(xù)給藥10d，末次給藥后禁食10h，眼眶靜脈竇取血，離心取血清，按葡萄糖氧化酶法測定血糖水平，結果見表3。
表3血竭第四步提取物對Alloxan誘導的糖尿病小鼠血糖值的影響
*P＜0.01v.s.陰性對照組由表可知，血竭第四步提取物(即丙酮提取物)中、高劑量組對Alloxan誘導的糖尿病小鼠降血糖效果接近于拜堂蘋。
具體實施例方式
實施例一采用有機相極性梯度萃取法，即溶劑索氏抽提制備中藥血竭提取物。首先稱取干燥并研細的廣西血竭樣品1000g，移入濾紙筒內(nèi)，將濾紙筒放入特制的索氏抽提器中，下端連接已干燥的2000ml平底燒瓶A，由冷凝管上端加入石油醚，加量為1000ml，于90℃水浴上加熱使石油醚不斷的回流提取，抽提48小時后，取出濾紙筒，揮盡其中溶劑，得第一步提取后殘留物(石油醚提取殘留物)946g，將濾紙筒再次放入索氏抽提器中，將索氏抽提器下端的溶劑燒瓶A更換為燒瓶B，由冷凝管上端加入氯仿1000ml，于70℃水浴上加熱使氯仿不斷的回流提取，抽提72小時后，取出濾紙筒，揮盡其中溶劑，得第二步提取后殘留物(氯仿提取殘留物)545g，將濾紙筒再次放入索氏抽提器中，將索氏抽提器下端的溶劑燒瓶B更換為燒瓶C，由冷凝管上端加入乙酸乙酯1000ml，于90℃水浴上加熱使乙酸乙酯不斷的回流提取，抽提72小時后，取出濾紙筒，揮盡其中溶劑，得第三步提取后殘留物(乙酸乙酯提取殘留物)190g，將濾紙筒再次放入索氏抽提器中，將索氏抽提器下端的溶劑燒瓶C更換為燒瓶D，由冷凝管上端加入丙酮1000ml，于90℃水浴上加熱使丙酮不斷的回流提取，抽提48小時后，取出濾紙筒，揮盡其中溶劑，得第四步提取后殘留物(丙酮提取殘留物)9g，將溶劑燒瓶A，B，C和D中的內(nèi)容物分別使用旋轉蒸發(fā)儀濃縮，分別得到血竭石油醚提取物52g、氯仿提取物396g、乙酸乙酯提取物351g和丙酮提取物178g。
權利要求
1.一種中藥血竭提取物的制備方法，其特征在于采用有機相極性梯度萃取法，其過程和步驟如下將原材料中藥血竭經(jīng)過適當粉碎和干燥后，用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮依次進行四步索氏抽提，將四步提取物用旋轉蒸發(fā)儀將溶劑揮發(fā)凈后，加水置于冷凍干燥機上進行冷凍干燥至粉末；提取溶劑總量為原材料血竭質(zhì)量的5倍；提取溫度依次為90℃、70℃、90℃、70℃；提取時間分別為48小時、72小時、72小時和48小時最終獲得全部中藥血竭提取物。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種中藥血竭提取物的制備方法，其特征在于所述的索氏抽提是在索氏提取器中進行，在其冷凝管上端加有溶劑，并在一定溫度的水浴上加熱，使溶劑不斷回流提取。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種具有α－糖苷酶抑制劑活性的中藥血竭提取物的制備方法，屬中草藥制備化學技術領域。本發(fā)明方法的特征在于采用有機相極性梯度萃取法，其過程和步驟如下將原材料中藥血竭經(jīng)過適當粉碎和干燥后，用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮依次進行四步索氏抽提，將四步提取物用旋轉蒸發(fā)儀將溶劑揮發(fā)凈后，加水置于冷凍干燥機上進行冷凍干燥至粉末；提取溶劑總量為原材料血竭質(zhì)量的5倍；抽提溫度依次為90℃、70℃、90℃、70℃；提取時間分別為48小時、72小時、72小時和48小時最終獲得全部中藥血竭提取物。該提取物具備較高的α－葡萄糖苷酶抑制活性，且遠遠高于現(xiàn)有降血糖藥物。本方法工藝簡單，操作方便。
文檔編號B01D11/02GK1528385SQ0315145
公開日2004年9月15日 申請日期2003年9月29日 優(yōu)先權日2003年9月29日
發(fā)明者雍克嵐, 呂敬慈, 黃茂華, 陳旭, 俞蔚, 修姍姍 申請人:上海大學