轉相溫度乳液在發酵過程中的應用的制作方法

專利名稱：轉相溫度乳液在發酵過程中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及按照PIT-方法制造的乳液在發酵過程中的應用。
在合成復雜的天然物質或其他有機化合物如抗生素時，人們越來越多地采用微生物學的方法。在微生物特別是有細菌或真菌參與的條件下就涉及到厭氧或需氧條件下的物質轉換。就這些方法而論，各專業領域不同，界限也總是模糊不清，如所用的“生物轉化”，有的用“生物轉變”或“發酵”。在本申請范圍內后者也是這種方法的用語，這時，將微生物主要是細菌用于轉變或合成化學化合物的。
對于發酵過程的開發和優化來說，尤其是在其中微生物發生轉變的反應介質，是具有意義的。一般地說，反應介質都是一種水性液體或水性分散體，特別影響到方法的收益和效率。微生物需要碳、氮和某些以結合形式存在的痕量元素如鈣、鐵、磷或鋅作為養料，以便進行新陳代謝，盡量達到所要求的產物。此外，還要經常保持一定的多數是窄范圍的溫度和pH-范圍。至于其他詳情細節，請參閱W.克魯格爾(Crueger)/A.克魯格爾的教科書“生物工藝學-應用微生物學教程”，1984年第2版，R.Oldenbourg出版社出版。該書第5章專門論述了發酵技術的基礎。因此，這一文獻也屬于本申請要公開的內容。作為微生物的養料，除能量豐富的糖類及其衍生物外，在許多方法中都添加天然的脂肪和油類，以及這類物質的衍生物，如甘油、甘油酯、脂肪酸或脂肪酯。當然培養基內不宜有任何內含物，而它對微生物的新陳代謝有負面影響。
從德國專利DE3738812A1中已知，一種用微生物制造α-Ω-二羧酸的方法，該方法使用熱帶假絲酵母(Candida tropicalis)的桿菌將十二烷酸甲酯轉化為所要求的二羧酸。轉化是在水性介質中，pH值為6.0，溫度30℃下產生。除了給微生物供應能量的葡萄糖外，介質還含有作為乳化劑的乙氧基化的脫水山梨糖醇單油酸酯、酵母提取物、玉米漿以及無機的氮源和磷源。然后，給介質定量添加十二烷基酸甲酯。文獻沒有提到乳液的類型、它在發酵物中的生成或在其中給介質定量加入月桂酸甲酯。由歐洲專利EP0 535 939A1中已知，有一種制備Ω-9-多種不飽和脂肪酸的方法，其中，水性培養基中，適宜的微生物在有糖類存在作為能量供應者和有無機或有機的氮源，以及有脂肪酸甲酯存在下生產所要求的多種不飽和脂肪酸。
而且還有一些方法，其中只利用上述現有技術的脂肪物質作為能量供應者。這是特別具有經濟效益的，因為這種脂肪物質通常比起糖、淀粉和類似的化合物，其價更低廉。帕克(Park)等人(帕克等人，“發酵與生物工程雜志”，第82卷，第2期，第183～186頁，1996)曾經描述過一種發酵過程以制造太樂菌素(tglosin)，其中在一種水性介質中使用弗氏鏈霉菌株(Streptomycesfradiae)的微生物，作為唯一碳源的菜籽油的原始用量大約含60克/公升。
此外，在發酵過程中，介質或發酵汁內的含氧量起著決定性的作用。因此，氧在需氧過程中具有基質的作用。對各種方法是否能使富含氧的氣相過渡到含有微生物的液相是關鍵。一個重要參數表示特異的交換表面，一般來說交換表面是間接地由氧的過渡系數kLa來確定的(請參閱克魯格爾的參考文獻，第5章，第71頁)。通常通過攪動發酵汁可調節氧的供入至最佳，氧或空氣和液體混合，使界面產生氣體交換。通過強烈的攪動，有明顯的機械能的供入，如帕克等人所實施的，但也能破壞部分培養基，而使此法的收率減少。除此以外，壞死的微生物本身繼續裂解，通過所形成的裂解產物可以導致培養基的毒化，于是不可能經濟地生產。在戈瑪(Coma)和洛爾斯(Rols)的工作(G.戈瑪，J.L.洛爾斯，“生物工藝通訊”，第13卷，第1期，第7～12頁，1991)中知道，發酵過程中使用豆油制造抗生素時可改進氧的過渡系數kLa，在投入相同能量(攪動)的情況下，可提高全過程的收率。
本發明的任務是改進發酵過程，一方面使用廉價的碳源，另一方面要保證給微生物以充分供氧，而不通過攪動以使微生物有高的機械負擔。必須尋找一個方法，把發酵過程中的機械能量減少到最低程度，而不致于降低收率。主要是即使減少能量投入，也能提高收率。
已發現，使用特別微小細粒的油懸浮于水(油/水)的乳液就可解決上述任務。
在最初實施方案中，在發酵過程中使用油/水的乳液時，要求其中乳液至少含有水、乳化劑及油相，而油相含有一種或多種選自下列的化合物a)脂肪酸烷基酯和/或b)植物源的甘油三酯，而且乳液是按照PIT方法制造，其液滴大小在50～400納米的范圍內。
已知，水包油(油/水)的乳液是用非離子化的乳化劑制造而且是穩定的，它在加熱時通常能得到可逆的轉相，也就是說在一定的溫度范圍內乳液型式可以從油/水轉變為水/油(油包水的乳液)。在這種情況下，因為油是在外的連續相，乳液的傳導性降至零。在溫度提高時乳液在傳導性最大和剛好降至為零之間的溫度平均值稱為轉相溫度(PIT)，而使用這種方法制造的乳液稱為轉相溫度(PIT)乳液。
已知，PIT的情況與許多因素有關，例如與油成份的種類和相體積，乳化劑的親水性和結構以及乳化劑系統的組成。
對轉相溫度乳液的細度來說，其制造方法十分重要。通常，水相和油相和乳化劑混合，然后加熱到轉相溫度以上的溫度。同時，傳導性必須降至零。接著，乳液再被冷卻到最初溫度(通常室溫，約20℃)。首先通過超越PIT并接著的低于PIT溫度，就形成了按照本發明所用的乳液。
已知，只有這種PIT-乳液是特別微細的，它在轉相的情況下使油和水或膜狀流體結晶相之間形成一個具有界面張力低的微乳液相。因此，關鍵步驟總是在冷卻時進行逆轉。
德國專利DE38 19 193A1公開了一種使用相逆轉技術以制造低粘度的油/水乳液的方法。這種技術在這里被用于混合物內，在水介質中含有油成份、非離子性乳化劑和一種助乳化劑。油的組成是由50～100(重量)％的特定的單酯及雙酯，0～50(重量)％的C8-C22的脂肪酸甘油三酯，必要時可含有0～25(重量)％的烴油所組成。德國專利DE3819193A1所公開的除上述成份外沒有提出任何其他組份，也沒有提到所制乳液的應用目的。
從德國專利DE41 40 562A1中獲悉一種按照PIT原理制造油/水乳液的方法，其中極性的油成份和乳化劑系統，該系統含有HLB值范圍在10～18之間的非離子化乳化劑，在有由選自C12-22脂肪醇和/或格爾伯特(Guerbet)醇類構成的助乳化劑存在下，在超過乳液的PIT溫度下進行加熱，接著再冷卻，這時就得到很細的乳液。
從德國專利DE196 35 553A1中得知一種制造微細顆粒的PIT-乳液的乳化劑系統，其中含有的主要成份為脂肪酸乙氧基化物和偏甘油酯。
按照本發明的乳液的特征特別是其細度。液滴大小為50～400納米。優先的液滴大小為100～300納米范圍內，尤其是在180～300納米范圍內，特別優先的在160～250納米的范圍內。液滴的大小是按照高斯分布。其測定例如通過光的散射或吸收來進行。
小油滴的細度可使油相和水相之間產生很大的表面，同時可使含有微生物的水相和含有養料的油相之間能有如此迅速的接觸。通過很大的表面也簡化了氣體的交換，特別是氧和CO2的交換。此外，乳液的粘度以及全部發酵介質的粘度也隨之降低。
因此，可以明顯地減少發酵介質的攪拌速度，從而提高發酵過程的收率。
按照本發明，是在含有微生物，必要時含有其他助劑和添加劑的水性發酵介質中定量添加PIT乳液的。這種方法的細節，特別是所加乳液的速度和量都由微生物的種類和所擇的各種發酵方法所定，而專業人員是能夠適應具體情況的。
PIT-乳液除含水以外還含有油相，油相是由脂肪酸烷基酯類a)或天然植物油類及其衍生物b)所構成的化合物。所涉及的a)類和b)類是疏水的，是不溶于水或很少溶于水的化合物，對發酵過程中所用的細菌而言，它們既可用作養料，又可用作能量供應者，而且它也作為原料，也是通過生物轉換所要求的產物的基質。a)類適宜的酯特別是從有7至23個碳原子的飽和的、不飽和的、直鏈的或支鏈的脂肪酸中衍生的。并以式(I)表示的化合物R1-COO-R2(I)其中R1代表有6-22個碳原子的烷基，R2表示有1-4個碳原子的烷基，其中，甲基和乙基特別優先。使用甲酯是有利的。式(I)的甲酯可用通常方式而獲得，如通過甘油三酯和甲醇的酯基轉化，最后進行蒸餾。適宜的脂肪酸是己酸、庚酸、辛酸、壬酸、癸酸、十一碳烷酸、月桂酸、十三碳烷酸、肉豆蔻酸、十五碳烷酸、棕櫚酸、十七碳烷酸、硬脂酸、十九碳烷酸、花生酸和山萮酸。不飽和酸的代表有，例如，月桂烯酸、肉豆蔻烯酸、棕櫚炔酸、巖芹烯酸、油酸、反油酸、蓖麻酸、亞油、反亞油酸、亞麻酸、順-9-十二碳烯酸、花生四烯酸和芥酸。還有，這些酸的甲酯混合物也是適宜的。使用含有油酸甲酯、棕櫚酸甲酯、硬脂酸甲酯和/或壬酸甲酯類的甲酯的PIT-乳液是特別優先。基于天然脂肪酸混合物的甲酯，例如由亞麻子油、椰子油、棕櫚油、棕櫚仁油、橄欖油、蓖麻油、菜籽油、豆油或葵花油(菜籽油和葵花油有時有新和舊法栽培的品種)中獲得的甲酯也可以使用。
b)類適宜的化合物是植物源的天然油類。因此主要涉及甘油三酯的混合物，其中甘油有時和長鏈脂肪酸可完全酯化。特別適宜的植物油則選自花生油、椰子油和/或葵花油。
花生油平均含有(基于脂肪酸)54(重量)％的油酸、24(重量)％的亞油酸、1(重量)％的亞麻酸、1(重量)％花生酸、10(重量)％的棕櫚酸，以及4(重量)％的硬脂酸。熔點為2～3℃。
亞麻子油通常含有5(重量)％的棕櫚酸、4(重量)％的硬脂酸、22(重量)％的油酸、17(重量)％的亞油酸和52(重量)％的亞麻酸。碘值位于155～205的范圍內。皂化值為188～196，熔點大約為-20℃。
椰子油在脂肪酸中含有約0.2～1(重量)％的己酸、5～8(重量)％的辛酸、6～9(重量)％的癸酸、45～51(重量)％的月桂酸、16～19(重量)％的肉豆蔻酸、9～11(重量)％的棕櫚酸、2～3(重量)％的硬脂酸、少于0.5(重量)％的山萮酸、8～10(重量)％的油酸以及至多1(重量)％的亞油酸。碘值位于7.5～9.5的范圍內，皂化值為0.88～0.90。熔點20～23℃。
橄欖油主要含有油酸(請參閱Lebensmittelchem.Gerichtl.Chem.，39，112～114，1985)。棕櫚油作為脂肪酸成份含有約2(重量)％的肉豆蔻酸、42(重量)％的棕櫚酸、5(重量)％的硬脂酸、41(重量)％的油酸、10(重量)％的亞麻酸。棕櫚仁油，基于脂肪酸光譜，通常含有下列成份9(重量)％的己酸/辛酸/癸酸，50(重量)％的月桂酸、15(重量)％的肉豆蔻酸、7(重量)％的棕櫚酸、2(重量)％的硬脂酸、15(重量)％的油酸和1(重量)％的亞油酸。
菜籽油作為脂肪酸成份通常含有約48(重量)％的芥酸、15(重量)％的油酸、14(重量)％的亞油酸、8(重量)％的亞麻酸、5(重量)％的二十碳烯酸、3(重量)％的棕櫚酸、2(重量)％的十六烯酸和1(重量)％的二十二烷二烯酸。用新法栽培的菜籽油是富含不飽和成份。通常脂肪酸組份是芥酸0.5(重量)％、油酸63(重量)％、亞油酸20(重量)％、亞麻酸9(重量)％、二十烯酸(Icosensaure)1(重量)％、棕櫚酸4(重量)％、十六烯酸2(重量)％和二十二烷二烯酸1(重量)％。
蓖麻油含有80～85(重量)％的蓖麻酸的甘油酯，此外還含有約7(重量)％的油酸的甘油酯、3(重量)％的亞油酸的甘油酯以及大約2(重量)％的棕櫚酸和硬脂酸的甘油酯。
豆油含有總脂肪酸的55～65(重量)％的多種不飽和酸，特別是亞油酸和亞麻酸。葵花油有類似的情形，基于總脂肪酸，通常的脂肪酸光譜如下約1(重量)％的肉豆蔻酸、3～10(重量)％的棕櫚酸、14～65(重量)％的油酸和20～75(重量)％的亞油酸。
有關上述甘油三酯中脂肪酸成份的一切數據都是已知的，它依賴于原料的質量，因此在數值上可能有偏差。特別優先的是含有選自椰子油、葵花油和/或菜籽油類的b)類養料的PIT-乳液。
按照本發明，所用PIT-乳液的重要成份是加入乳化劑及乳化劑系統。首先作為乳化劑而加入的是非離子性乳化劑，特別是乙氧基化的脂族醇和脂肪酸。為了形成PIT乳液，加入兩成份的乳化劑系統是有利的，即含有一個親水性乳化劑(A)和一個疏水性助乳化劑(B)。作為親水非離子性乳化劑(A)適宜的是HLB值約為8～18的物質。所謂HLB(親水-親脂-平衡)值應當理解為按下式計算的值HLB＝(100-L)/5其中L指親脂類的重量組份，即脂族烷基類或脂族酰基類在環氧乙烷加成產物中的百分數。
按照本發明的含意，脂肪醇乙氧基化物具有以下通式(II)R3-O-(CH2CH2O)n-H (II)其中R3代表有6～24個碳原子的直鏈或支鏈的、飽和或不飽和的烷基，n表示1～50的數值。在式(II)中，特別優先的，是n值為1～35，尤其是1～15的化合物。此外，特別優先的是式(II)中R3是有16～22個碳原子的烷基的化合物。
公式(II)的化合物是按已知方法通過脂族醇同環氧乙烷，必要時有酸性或堿性催化劑存在下，在加壓下轉化而制得的。代表性的實例是己醇、辛醇、2-乙基己基醇、癸醇、月桂醇、異十三烷醇、肉豆蔻醇、鯨蠟醇、棕櫚油醇、硬脂醇、異硬脂醇、油醇、反油醇、巖芹醇、亞油醇、亞麻醇、桐醇、花生醇、順-9-二十碳烯醇、山萮醇、瓢兒菜醇和巴西烯醇以及其工業混合物，例如基于脂肪和油的工業甲酯的高壓氫化時或由Roelen羰基合成醛時以及在不飽和脂肪族醇二聚作用中作為單體分餾時所產生的。優先的是有12～18個碳原子的工業脂族醇，例如椰子醇、棕櫚醇、棕櫚仁醇或硬脂醇。
脂肪酸乙氧基化物也可作為乳化劑成份(A)，主要是式(III)R4CO2(CH2CH2O)mH(III)
其中R4代表有12～22個碳原子的直鏈或支鏈的烷基，m為5～50的數值，優選是15～35。代表性實例是由20～30摩爾的環氧乙烷和月桂酸、異十三烷酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸、異硬脂酸、油酸、反油酸、巖芹酸、亞油酸、亞麻酸、桐酸、花生酸、順-9-二十碳烯酸、山萮酸和芥酸的加成產物以及其工業混合物，例如在天然脂肪和油加壓裂解時或由Roelen羰基合成還原醛時產生的。優選是由20～30摩爾的環氧乙烷和有16～18個碳原子的脂肪酸的加成產物。
偏甘油酯可以考慮作為乳化劑成份(B)，優選是式(IV)化合物 其中COR5代表有12～22個碳原子的直鏈或支鏈的酰基，x、y和z的總和為0或者為1～50的數值，優選是15～35。適于本發明含意的偏甘油酯的代表性實例是甘油單月桂酸酯、甘油單椰子脂肪酸酯、甘油單棕櫚酸酯、甘油單硬脂酸酯、甘油單異硬脂酸酯、甘油單油酸酯和甘油單牛脂酸酯以及其和5～50優選是20～30摩爾的環氧乙烷的加成產物。優選使用單酸甘油酯及工業的單酸-/二酸-甘油酯的混合物和過量式(IV)中的單酸甘油酯組份，其中COR5代表有16～18個碳原子的直鏈酰基。
通常使用的乳化劑混合物，其中(A)和(B)成份的重量比為10∶90至90∶10，優先是25∶75至75∶25，而特別優先的是40∶60至60∶40。
作為其他適宜的乳化劑，例如是選自以下的非離子性表面活性劑(I)2至30摩爾的環氧乙烷和/或0至5摩爾的氧化丙烯和有8～22個碳原子的直鏈脂族醇的加成產物；(II)有6～22個碳原子的飽和與不飽和脂肪酸的單甘油酯和二甘油酯以及脫水山梨糖醇單酯和脫水山梨糖醇二酯及其環氧化乙烷的加成產物；(III)烷基中有8～22個碳原子的烷基單苷和烷基寡苷及其乙氧基化的類似物；(IV)15～60摩爾的環氧乙烷和蓖麻油和/或硬化蓖麻油的加成產物；(V)聚油酯特別是聚甘油酯、例如聚甘油聚蓖麻油酸酯或聚甘油聚-12-羥基硬脂酸酯。由多種這類物質構成的化合物的混合物也是適合的；(VI)2～15摩爾的環氧乙烷和蓖麻油和/或硬化蓖麻油的加成產物；(VII)基于直鏈、支鏈、不飽和或飽和的C12/22-脂肪酸、蓖麻油酸以及12-羥基硬脂酸和甘油、聚甘油、季戊四醇、二季戊四醇、糖醇(例如山梨醇)以及聚苷(例如纖維素)的偏酯類；(VIII)羊毛蠟醇；(IX)聚亞烷二醇。
環氧乙烷和/或氧化丙烯和脂肪酸的單酸甘油酯和二酸甘油酯以及脫水山梨糖醇單酯和脫水山梨糖醇二酯或蓖麻油的加成產物，都是周知的并在商業上可市購的商品。因此而涉及到同系混合物，其平均烷氧化度相當于與其進行加成反應的環氧乙烷和/或氧化丙烯和基質物質量的比例。
為選擇適宜的乳化劑系統，可以有目的地通過計算以求出各個系統的轉相溫度。但是，為優化起見，在選擇乳化劑或乳化劑系統中還要另外考慮，對上述選擇的工業處理的適應性以及，以一方為水相而另一方為油相的混合。相應的專業知識完全是另一個領域，特別是從化妝品制造領域發展的。特別值得參考的有TH.Forster、W.von Rybinski、H.Tesmann和A.Wadle在“國際化妝品科學雜志”上發表的“轉相乳化作用的最佳乳化劑混合計算法”(16，84～92，1994)。在該文中詳細闡述了對所給定的由一個油相、一個水相和一個乳化劑組合而成的三組份體系的計算方法，它基于轉相溫度(PIT)范圍的對油相特征的EACN(相當于鏈烷烴的碳數)值通過CAPICO法(濃縮物中的轉相計算)進行計算。Forster等人的公開，特別又包括了本文產生復雜主題的重要文獻，使人們看到它與Forster等人出版物的公開有關。然后，在個別地方根據列舉的實例說明如何在EACA概念的框架內使用CAPICO方法以選擇和優化乳化劑/乳化劑系統，以便獲得最佳調整轉相溫度范圍的預定值。
本發明所用的PIT乳液主要含有水20～90(重量)％，尤其是30～80(重量)％，而最優先的則是30～60(重量)％。100重量份中的其余(重量)％是油相以及乳化劑，必要時還有其他助劑和添加劑。油相本身的優先量為10～80(重量)％，尤其是40～70(重量)％。此外，油相優選只含有a)或b)的成份或者是這些成份的混合物。特別優先的是使用乳液所含油相和水相的重量比例為1∶1時。乳化劑或乳化劑系統的優先含量是1～25(重量)％，尤其是含量為5～20而特別優先的含量是5～15(重量)％。本發明所用的乳液表明，優選的轉相溫度范圍是20～95℃，特別是從40到95℃。
按照本發明，所描述的PIT-乳液可以用于各種發酵過程。此外還可用于專業人員所熟悉的所有的方法布置，如分批發酵法或分批加料發酵法，以及連續發酵法。凡是專業人員所熟悉的發酵系統也都可以使用。詳細情況請參閱Crueger的著作，第50-70頁。微乳的用途不限于某些微生物，專業人員通過發酵所熟悉的化合物，都可使用乳液進行制造或轉換。除了以合成抗生素為主而采用的經典的發酵方法以外(請參閱，Crueger著作，第197～242頁)，上述乳液還適用于微生物的轉化(“生物轉換”)，如甾族化合物和甾醇的轉換、抗生素和殺蟲劑的轉換，或者維生素的制造(請參閱Crueger的著作，第254～273頁)。而優選是用于發酵過程以制造抗生素，如頭孢菌素、太樂菌素或紅霉素。
在一般情況下，按適當方式定量供給含有微生物和氮源和微量元素，必要時還含有其他助劑，尤其是除泡劑的水狀發酵汁以乳液。作為氮源例如可考慮胨、酵母提取物或麥芽提取物、玉米漿、尿素或卵磷脂。微量元素可采用無機鹽的形式，例如硝酸鈉或硝酸鉀、硝酸胺、硫酸胺、硫酸鐵等等。PIT乳液的另一個優點，就是它本身可以以其他添加物，除泡劑或氮源加入。
表1a
表1b
權利要求
1.油/水乳液的應用，乳液至少含有水、乳化劑以及油相，而油相含有選自以下的一個或多個化合物a)脂肪酸烷基酯和/或b)植物源的甘油三酯，其特征為，在發酵方法中乳液是按照PIT-方法制造，且其液滴大小為50～400nm。
2.按照權利要求1的應用，其特征為，油相作為成份含有a)脂肪酸甲酯。
3.按照權利要求1或2的應用，其特征為，所用乳液，其液滴的平均大小在100～300納米的范圍內，優選是180～300納米，而最優先的則是160～250納米。
4.按照權利要求1至3的應用，其特征為，所用乳液的含水量為20～90(重量)％，優先為30～80(重量)％，特別優先為30～60(重量)％。
5.按照權利要求1至4的應用，其特征為，所用乳液的油相含量為10～80(重量)％，優先的為40～70(重量)％。
6.按照權利要求1至5的應用，其特征為，所用乳液含有式(I)的脂肪酸甲酯R1-COO-R2(I)其中R1代表有6～22個碳原子的烷基，R2則表示甲基。
7.按照權利要求1至6的應用，其特征為，所用乳液，其油相中含有油酸甲酯、棕櫚酸甲酯、硬脂酸甲酯和/或壬酸甲酯。
8.按照權利要求1至7的應用，其特征為，所用乳液在油相中含有葵花油和/或菜籽油。
9.按照權利要求1至8的應用，其特征為，所用乳膠含有一個乳化劑系統，該系統含有HLB值為8～18的親水乳化劑，并結合有疏水助乳化劑。
10.按照權利要求9的應用，其特征為，所用乳液的乳化劑系統，其親水乳化劑和助乳化劑之間的量比是10∶90至90∶10。
11.按照權利要求1至10的應用，其特征為，所用乳化劑的量為1～25(重量)％，優選是5～20(重量)％，特別優選為5～15(重量)％。
全文摘要
本發明涉及在發酵過程中油/水乳液的應用,該乳液至少含有水、乳化劑以及一種油相,該油相含有選自以下的一種或多種化合物:a)脂肪酸烷基酯和/或b)植物源的甘油三酯,其中乳液是按照PIT－方法產生的,乳液液滴的平均大小在50～400納米的范圍內。
文檔編號B01F17/34GK1351654SQ00808011
公開日2002年5月29日 申請日期2000年5月16日 優先權日1999年5月25日
發明者馬賽厄斯·韋格納, 讓－皮埃爾·莫利托, 克里斯琴·德豪特, 貝努特·阿布里貝特, 本特·羅格 申請人:考格尼斯德國有限責任公司