一種應用于磺基水楊酸法測定植物體內脯氨酸含量的甲苯回收利用的方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種應用于磺基水楊酸法測定植物體內脯氨酸含量的甲苯回收利用 的方法。 技術背景
[0002] 在逆境條件下（旱、鹽堿、熱、冷、凍），植物體內脯氨酸（proline，Pro)的含量顯 著增加。植物體內脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性。植物脯氨酸含量測定是 植物生理學實驗的常用方法，廣泛用于作物、牧草、園藝植物、園林植物等各種植物科學研 宄。磺基水楊酸法是測定植物體內脯氨酸含量的常用方法，在實驗室產生的甲苯廢液量大， 直接倒掉對環境污染嚴重，試驗成本高。
【發明內容】
[0003] 本發明是為了解決目前磺基水楊酸法測定植物體內脯氨酸含量時甲苯廢液量大， 直接倒掉對環境污染嚴重，試驗成本高的技術問題，而提供一種應用于磺基水楊酸法測定 植物體內脯氨酸含量的甲苯回收利用的方法。
[0004] 本發明的一種應用于磺基水楊酸法測定植物體內脯氨酸含量的甲苯回收利用的 方法是按以下步驟進行的：
[0005] -、脫色：向用磺基水楊酸法測定植物體內脯氨酸含量的甲苯廢液中加入活性炭， 用震蕩儀震蕩2min，得到溶液I ;所述的用磺基水楊酸法測定植物體內脯氨酸含量的甲苯 廢液的體積與活性炭的質量比為ImL: 0.0 lg ;
[0006] 二、過濾：將步驟一得到的溶液I采用中速定性濾紙進行過濾1次，得到甲苯回收 液。
[0007] 磺基水楊酸法是測定植物體內脯氨酸含量的方法：
[0008] L標準曲線的繪制
[0009] (1)在分析天平上精確稱取25mg脯氨酸，倒入小燒杯內，用少量蒸餾水溶解，然 后倒入250mL容量瓶中，加蒸餾水定容至刻度，得到標準溶液，此標準液中每mL含脯氨酸 100 μ g ；
[0010] ⑵系列脯氨酸濃度的配制：取6個50mL容量瓶，分別盛入步驟I (1)得到的標準 溶液〇. 5mL，1.0 mL，I. 5mL，2. OmL，2. 5mL及3. OmL，用蒸餾水定容至刻度，搖勾，各瓶的脯氨 酸濃度分別為 I U g/mL，2 μ g/mL，3 μ g/mL，4 μ g/mL，5 μ g/mL 和 6 μ g/mL ;
[0011] (3)取6支試管，向6支試管中分別加入2mL步驟I (2)得到的6種濃度的系列標 準濃度的脯氨酸溶液、2mL冰醋酸和2mL酸性茚三酮溶液，每支試管在沸水浴中加熱30min， 自然冷卻至室溫，向各試管中準確加入4mL甲苯，振蕩30S，靜置片刻，使色素全部轉至甲苯 溶液；
[0012] (4)用注射器輕輕吸取各試管中的上層脯氨酸甲苯溶液至比色杯中，以純凈的甲 苯溶液為空白對照，于520nm波長處進行比色；
[0013] (5)標準曲線的繪制：先求出吸光度值（Y)依脯氨酸濃度（X)而變的回歸方程式， 再按回歸方程式繪制標準曲線，計算2mL測定液中脯氨酸的含量（μ g/2ml)。
[0014] 2.樣品的測定：
[0015] (1)脯氨酸的提取：準確稱取待測植物葉片0. 5g，置大管中，然后向管中加入5mL 質量分數為3%的磺基水楊酸溶液，在沸水浴中提取lOmin，（提取過程中要經常搖動），冷 卻后過濾于干凈的試管中，濾液即為脯氨酸的提取液；
[0016] (2)吸取2mL步驟2(1)得到的脯氨酸的提取液于另一干凈的帶玻塞試管中，加入 2mL冰醋酸和2mL的酸性茚三酮試劑，在沸水浴中加熱30min，溶液即呈紅色；
[0017] (3)冷卻后加入4mL甲苯，搖蕩30S，靜置片刻，取上層液至IOmL離心管中，在轉速 為3000rpm下離心5min ;
[0018] (4)用吸管輕輕吸取上層脯氨酸紅色甲苯溶液于比色杯中，以甲苯為空白對照，在 分光光度計上520nm波長處比色，得到甲苯廢液，求得吸光度值。
[0019] 磺基水楊酸法測定植物體內脯氨酸含量的原理：用磺基水楊酸提取植物樣品時， 脯氨酸便游離于磺基水楊酸的溶液中，然后用酸性茚三酮加熱處理后，溶液即成紅色，再用 甲苯處理，則色素全部轉移至甲苯中，色素的深淺即表示脯氨酸含量的高低。在520nm波長 下比色，從標準曲線上查出（或用回歸方程計算）脯氨酸的含量。
[0020] 本發明優點：
[0021] 一、本發明可以減少應用于磺基水楊酸法測定植物體內脯氨酸含量的甲苯廢液對 環境的污染，提高了有機溶劑的利用率，降低實驗成本；
[0022] 二、本發明具有操作簡單、處理量大、易于人工掌握等特點，對進行植物生理特性 研宄具有一定應用價值；
[0023] 三、本發明方法能夠回收磺基水楊酸法測定植物體內脯氨酸含量測定用甲苯萃取 液，甲苯回收率：85% ;活性炭回收利用次數：8次，并且適用于大量樣品的處理。
【具體實施方式】：
【具體實施方式】 [0024] 一：本實施方式是一種應用于磺基水楊酸法測定植物體內脯氨酸含 量的甲苯回收利用的方法，具體是按以下步驟進行的：
[0025] -、脫色：向用磺基水楊酸法測定植物體內脯氨酸含量的甲苯廢液中加入活性炭， 用震蕩儀震蕩2min，得到溶液I ;所述的用磺基水楊酸法測定植物體內脯氨酸含量的甲苯 廢液的體積與活性炭的質量比為ImL: 0.0 lg ;
[0026] 二、過濾：將步驟一得到的溶液I采用中速定性濾紙進行過濾1次，得到甲苯回收 液。
[0027] 本實施方式優點：
[0028] 一、本發明可以減少應用于磺基水楊酸法測定植物體內脯氨酸含量的甲苯廢液對 環境的污染，提高了有機溶劑的利用率，降低實驗成本；
[0029] 二、本發明具有操作簡單、處理量大、易于人工掌握等特點，對進行植物生理特性 研宄具有一定應用價值；
[0030] 三、本發明方法能夠回收磺基水楊酸法測定植物體內脯氨酸含量測定用甲苯萃取 液，甲苯回收率：85% ;活性炭回收利用次數：8次，并且適用于大量樣品的處理。
[0031] 采用下述試驗驗證本發明效果：
[0032] 試驗一：本試驗為一種應用于磺基水楊酸法測定植物體內脯氨酸含量的甲苯回收 利用的方法，具體是按以下步驟進行的：
[0033] -、脫色：向用磺基水楊酸法測定植物體內脯氨酸含量的甲苯廢液中加入活性炭， 用震蕩儀震蕩2min，得到溶液I ;所述的用磺基水楊酸法測定植物體內脯氨酸含量的甲苯 廢液的體積與活性炭的質量比為ImL: 0.0 lg ;
[0034] 二、過濾：將步驟一得到的溶液I采用中速定性濾紙進行過濾1次，得到甲苯回收 液。
[0035] 三、將步驟二得到的甲苯回收液作為磺基水楊酸法測定植物體內脯氨酸含量的甲 苯萃取液，最后又得到甲苯廢液。
[0036] 再重復步驟一至三7次，測試用磺基水楊酸法測定植物體內脯氨酸含量時使用不 同回收次數的甲苯回收液后在波長為~ 2(|的吸光度，如表1所示，隨著回收次數的增加，吸 光度變化規律不明顯，但增加幅度不大，在8次回收以內，增加幅度均極小，可以應用于磺 基水楊酸法測定植物體內脯氨酸含量的甲苯。
[0037] 回收次數為0指的是用市售的甲苯應用于磺基水楊酸法測定植物體內脯氨酸含 量；回收次數為1指的是試驗一步驟二中得到的甲苯回收液應用于磺基水楊酸法測定植物 體內脯氨酸含量。
[0038] 表 1
[0039]
【主權項】
1. 一種應用于磺基水楊酸法測定植物體內脯氨酸含量的甲苯回收利用的方法，其特征 在于應用于磺基水楊酸法測定植物體內脯氨酸含量的甲苯回收利用的方法是按以下步驟 進tx的： 一、 脫色：向用磺基水楊酸法測定植物體內脯氨酸含量的甲苯廢液中加入活性炭，用震 蕩儀震蕩2min，得到溶液I;所述的用磺基水楊酸法測定植物體內脯氨酸含量的甲苯廢液 的體積與活性炭的質量比為ImL: 0.Olg; 二、過濾：將步驟一得到的溶液I采用中速定性濾紙進行過濾1次，得到甲苯回收液。
【專利摘要】一種應用于磺基水楊酸法測定植物體內脯氨酸含量的甲苯回收利用的方法，涉及一種應用于磺基水楊酸法測定植物體內脯氨酸含量的甲苯回收利用的方法。本發明是為了解決目前磺基水楊酸法測定植物體內脯氨酸含量時甲苯廢液量大，直接倒掉對環境污染嚴重，試驗成本高的技術問題。本發明：一、脫色；二、過濾。本發明優點：本發明可以減少應用于磺基水楊酸法測定植物體內脯氨酸含量的甲苯廢液對環境的污染，提高了有機溶劑的利用率，降低實驗成本，并且操作簡單、處理量大、易于人工掌握等特點，對進行植物生理特性研究具有一定應用價值；本發明的甲苯回收率：85％；活性炭回收利用次數：8次，并且適用于大量樣品的處理。
【IPC分類】G01N21-78, G01N21-31, C02F9-02
【公開號】CN104692551
【申請號】CN201510116226
【發明人】張玉霞, 于華榮, 郭園, 周立業, 包金花, 王樂
【申請人】內蒙古民族大學
【公開日】2015年6月10日
【申請日】2015年3月17日