專利名稱：水樣分離輻射式協同滅菌方法
技術領域：
本發明是一種水樣滅菌方法，尤其涉及一種適用于研究微生物凈水效應的水樣分 離輻射式協同滅菌方法。
背景技術：
微生物在水體污染物的降解、遷移、轉換過程中扮演著重要角色，而對比試驗方法 是開展這方面研究的重要手段。因此，在研究過程中首先需對水樣的滅菌，使之呈無菌狀 態，然后，與單種或多種微生物存在下的水樣進行比較，從而揭示單種或多種微生物的凈水 效應。目前，水體滅菌方法種類繁多，主要包括物理滅菌法、化學滅菌法和加入抗生素等。 其中，物理滅菌法主要有超聲波、輻照滅菌、脈沖電場和磁場等；化學滅菌法主要有鹵素制 劑、臭氧、高錳酸鉀、過氧化氫、甲醛、TiO2光催化滅菌、以及其它化學制劑，例如磺胺類、呋 喃類、季胺鹽類、重金屬類等；抗生素對微生物的作用原理大致可以分為以下幾種類型干 擾細胞壁的合成；損傷胞漿膜；影響細菌細胞蛋白質的合成；影響核酸(包括DNA和RNA)的 合成。但是，在采用對比試驗研究微生物的凈水效應時，不僅要保證滅菌處理的水樣其滅菌 效果達到100%，而且要保證滅菌前后水樣的水質狀況基本不變。因此，現行可供選擇的水 樣滅菌方法并不多。研究者常選用物理方法滅菌，滅菌過程中不添加任何物質。即便如此， 滅菌條件對水樣中有機物的賦存狀態影響較大。這是由于水樣在滅菌過程(如高溫高壓滅 菌)中所處環境的改變，一些大分子有機物會產生一定程度的裂解，使得滅菌前后水體有 機污染物種類、數量及理化性質產生劇烈變化。化學滅菌法和投加抗生素由于所添加的化 學物質易改變水樣水質狀況而不宜使用；物理滅菌方法又會因為滅菌過程改變原水樣中污 染物的形態而嚴重影響研究結果的可靠性。因此，現行的滅菌方法使采用對比試驗方法研 究微生物的凈水效應陷入困境。
發明內容
本發明的目的是提供一種水樣分離輻射式協同滅菌方法，以保證水樣滅菌效果達 到100 %，且滅菌前后的水樣水質狀況無差異，使滅菌前后水樣的水質狀況具有可比性。本發明的水樣分離輻射式協同滅菌方法，其步驟如下1)在無菌環境中，用0. 45 μ m微孔濾膜過濾水樣；2)將過濾后的水樣移取至已滅菌的干凈透明玻璃容器中用紫外燈輻射滅菌。紫外 輻射強度為100-120uW/cm2，紫外輻射時間為5-70min ；3)采用平板菌落計數法檢測水樣滅菌效果，并檢測滅菌前后水樣的水質差異。由于0.45 μ m微孔濾膜可以去除水中的大部分微生物，卻不能去除個體微小的 微生物并抑制細菌的滋生和繁殖；而紫外線可以殺死微生物并抑制微生物的繁殖，但穿透 能力差。因此，本發明首先，將用0.45μπι微孔濾膜過濾，使大量的微生物從水樣中分離， 然后，采用紫外燈輻射對過濾水樣進一步進行滅菌，去除遺留的個體較小微生物。為保證 滅菌效果，以上操作均在無菌環境下進行。在過濾水樣時不能帶入新的污染物，所采用的0. 45 μ m微孔濾膜也須經過紫外輻射滅菌。在紫外滅菌過程中，為使水樣充分暴露于紫外線下，宜將IOOml水樣放置在直徑 27mm、高75mm、壁厚Imm的小容積的透明玻璃容器中。本發明方法的有益效果是本發明方法簡單、易行、有效，不僅能確保滅菌效果達 到100 %，而且滅菌前后水樣水質狀況基本保持不變，即水樣水質差異< 3 %，解決了目前 單一方法滅菌效果不理想或對水樣水質易產生劇烈影響的技術問題，為研究和利用微生物 的凈水效應提供了基礎。
具體實施例方式以下結合實例進一步說明本發明實例1水樣分離輻射式協同滅菌方法，其步驟如下1)取IOOml城鎮河流水樣，在無菌環境中，用經過紫外輻射滅菌的0.45 μ m微孔濾 膜過濾水樣，微生物數量由原先的IO5-6CfuAil下降為IO2-3CfuAil ；2)將過濾后的水樣移取至已滅菌的干凈透明玻璃容器中，玻璃容器直徑27mm、高 75mm、壁厚1mm，放置在距30W紫外燈30cm處，用紫外燈輻射滅菌，紫外輻射強度為IlOuw/ cm2，紫外輻射時間為30min。以進一步殺死遺留在水樣中的個體較小的微生物。3)采用平板菌落計數法檢測水樣滅菌效果，并檢測滅菌前后水樣的水質差異。檢測結果表明水樣滅菌效果可達到100%，且滅菌前后水樣中的總碳、有機碳、 無機碳、可溶性總氮、可溶性總磷等的濃度差異均<3%，符合《環境水質監測質量保證手 冊》中平行樣水質檢測誤差< 10%的要求，滅菌前后的水樣水質狀況具有可比性。實例2水樣分離輻射式協同滅菌方法，其步驟如下1)取IOOml生活排污口水樣，在無菌環境中，用經過紫外輻射滅菌的0.45 μ m微孔 濾膜過濾水樣；使得大部分微生物與水樣分離，遺留在水樣中的主要為個體較小的微生物。2)將過濾后的水樣移取至已滅菌的干凈透明玻璃容器中，玻璃容器直徑27mm、高 75mm、壁厚1mm，放置在距30W紫外燈50cm處，用紫外燈輻射滅菌，紫外輻射強度為120uw/ cm2，紫外輻射時間為70min。以進一步殺死遺留在水樣中的個體較小的微生物。3)采用平板菌落計數法檢測水樣滅菌效果，并檢測滅菌前后水樣的水質差異。檢測結果表明水樣滅菌效果可達到100%，且滅菌前后水樣中的總碳、有機碳、 無機碳、可溶性總氮、可溶性總磷等的濃度差異均<3%，符合《環境水質監測質量保證手 冊》中平行樣水質檢測誤差< 10%的要求，滅菌前后的水樣水質狀況具有可比性。上述具體實施方式
用來解釋說明本發明，而不是對本發明進行限制。在本發明的 精神和權利要求的保護范圍內，對本發明作出的任何修改和改變，都落入本發明的保護范 圍。
權利要求
水樣分離輻射式協同滅菌方法，其步驟如下1)在無菌環境中，用0.45μm微孔濾膜過濾水樣；2)將過濾后的水樣移取至已滅菌的干凈透明玻璃容器中用紫外燈輻射滅菌。紫外輻射強度為100 120uw/cm2，紫外輻射時間為5 70min；3)采用平板菌落計數法檢測水樣滅菌效果，并檢測滅菌前后水樣的水質差異。
2.根據權利要求1所述的水樣分離輻射式協同滅菌方法，其特征是將IOOml水樣置于 直徑27mm、高75mm、壁厚Imm的透明玻璃容器中。
全文摘要
本發明公開的水樣分離輻射式協同滅菌方法，其步驟如下1)在無菌環境中，用0.45μm微孔濾膜過濾水樣；2)將過濾后的水樣移取至已滅菌的干凈透明玻璃容器中用紫外燈輻射滅菌。紫外輻射強度為100-120uw/cm2，紫外輻射時間為5-70min；3)采用平板菌落計數法檢測水樣滅菌效果，并檢測滅菌前后水樣的水質差異。本發明方法簡單、易行、有效，不僅能確保滅菌效果達到100％，而且滅菌前后水樣水質狀況基本保持不變，即水樣水質差異＜3％，解決了目前單一方法滅菌效果不理想或對水樣水質易產生劇烈影響的技術問題，為研究和利用微生物的凈水效應提供了基礎。
文檔編號C02F9/08GK101948203SQ20101026995
公開日2011年1月19日 申請日期2010年8月31日 優先權日2010年8月31日
發明者史一鳴, 呂軍, 陳丁江 申請人:浙江大學