一種利用羅丹明類熒光探針檢測亞錫離子的方法
【專利摘要】本發明提供了一種利用羅丹明類熒光探針檢測亞錫離子的方法，其特征在于，包括：分別將羅丹明類熒光探針溶液加入到NaOH/NaH2PO4緩沖溶液中得到多個含有熒光探針的緩沖體系，分別加入不同體積的亞錫離子溶液，得到不同濃度的亞錫離子溶液，靜置，在激發波長為560nm的條件下，檢測發射波長為587nm的熒光強度，以亞錫離子的濃度為橫坐標，熒光強度為縱坐標作圖，得到線性關系曲線；將羅丹明類熒光探針溶液加入到NaOH/NaH2PO4緩沖溶液中得到含有熒光探針的緩沖體系，加入待測的亞錫離子溶液，靜置，在激發波長為560nm的條件下，檢測發射波長為587nm的熒光強度，計算亞錫離子的濃度。本發明方法操作簡單、檢測快速、靈敏度高且選擇性好。
【專利說明】
一種利用羅丹明類熒光探針檢測亞錫離子的方法
技術領域
[0001] 本發明屬于熒光探針材料檢測方法領域，特別涉及一種利用羅丹明類熒光探針檢 測亞錫離子的方法。
【背景技術】
[0002] 亞錫離子應用于預防齲齒的歷史由來已久，作為人體生理活動所必需的微量元 素，大量證據表明Sn2+除了能有效抑制癌細胞的生成，還可促進蛋白質和核酸的合成，促進 身體的生長發育，還參與組成多種酶以及黃素酶的生物反應，從而增強體內環境的穩定性。 亞錫的缺乏可能會導致生長不良和聽力喪失，但亞錫過多積累造成對鋅離子代謝干擾，會 影響呼吸道和消化系統。
[0003] 亞錫離子具有很強的還原性，SnCl2是人們熟悉的還原劑。它能把許多金屬離子還 原成低氧化態，甚至還原到金屬。亞錫離子還有很強的配位性，在(合成化學，2006)報道了 1-(2-吡啶偶氮)-2-萘(PAN)與亞錫離子能很好的絡合形成新的混合膠束具有很好的熒光 性能，從而達到檢測亞錫的目的，利用熒光光譜法檢測線能達到2ng · mg"1。
[0004] 目前，人們用來檢測Sn2+的方法有火焰原子吸收光譜法、電位膜傳感法及紫外/可 見分光光度法，相比于這些方法，熒光分析法具有操作簡單，靈敏度高，選擇性好的優勢。 (八1^1 75^，2014，139,5223)報道了設計合成了兩種用于真核和原核細胞的5112+熒光探針，其 檢測線分別達到5.7 X 10-7和4.6 X 10-7。
【申請人】申請的中國專利201510869087.0 "檢測汞離 子的反應型羅丹明類熒光探針及其制備與應用"，在乙腈溶液中，使用熒光光譜法，在激發 波長為560nm，檢測發射波長為580nm，檢測汞離子的濃度在0.89-60μΜ的范圍達到一個很好 地線性，采用熒光探針法檢測汞離子溶液，可實現對汞離子的實時和快速的檢測，在環境檢 測方面有較好的應用前景。
[0005] 羅丹明及其衍生物作為開/關形式的熒光探針，具有較高的熒光量子產率，較大的 摩爾消光系數，在可見光區具有較長的發射和吸收波長。螺旋狀羅丹明內酰胺化合物本身 具有一定的結構張力，在與重金屬粒子結合后，內酰胺氮原子的質子化將導致氮原子電荷 密度減少，從而引發螺旋中心C-N鍵的開裂，同時，斷鍵后原本富電子的螺旋環將進行電荷 重排，形成更穩定的剛性平面大η鍵結構，從而產生熒光變化和顏色變化。和不同金屬離子 作用后，所形成的作用不同，羅丹明衍生物會發生熒光和顏色的變化也各不相同。因而羅丹 明及其衍生物在作為探針檢測重金屬離子方面具有很大的發展前景。熒光分子探針具有靈 敏度高，專一性強，無損傷快速準確等特點在檢測生物體內金屬方面顯示出了獨特的優勢， 并廣泛應用于金屬離子參與的生物學研究（111 〇坪.〇1加.4(^&，2012,381，2-14)。羅丹明8又 稱玫瑰紅Β，羅丹明基熒光探針具有良好的熒光性能和較小的細胞毒性，廣泛應用于生物體 內離子及小分子的檢測，生物大分子的分析和檢測以及復雜生物體系的研究。該類熒光探 針在識別前后熒光呈現從無到有的增強型響應，具有很高的靈敏度，通過對識別基團的精 心選擇和設計該類探針表現出良好的選擇性和抗干擾性（Chem. Rev . 2012.112.1910-1956)。令人遺憾是目前很少見到是識別亞錫離子的羅丹明基熒光探針的報道。綜上所述， 開發出了一種可檢測亞錫離子的羅丹明基熒光探針對于研究亞錫離子的生物活性和藥理 作用具有重要的應用前景。
【發明內容】
[0006] 本發明的目的是提供一種利用羅丹明類熒光探針檢測亞錫離子的方法。
[0007] 為了達到上述目的，本發明提供了一種羅丹明類熒光探針在檢測亞錫離子含量中 的應用。
[0008] 優選地，所述的羅丹明類熒光探針的結構式為：
[0009]
[0010] 本發明還提供了一種利用羅丹明類熒光探針檢測亞錫離子的方法，其特征在于， 包括：
[0011]步驟1:配制羅丹明類熒光探針溶液；
[0012] 步驟2:配制亞錫離子溶液；
[0013] 步驟3:配制pH=6 · 0~7 · 0的NaOH/NaH2P〇4緩沖溶液；
[0014] 步驟4:分別將步驟1得到的羅丹明類熒光探針溶液加入到步驟3得到的NaOH/ NaH2P04緩沖溶液中得到多個含有熒光探針的緩沖體系，分別加入不同體積的步驟2所得的 亞錫離子溶液，得到不同濃度的亞錫離子溶液，靜置，在激發波長為560nm的條件下，檢測發 射波長為587nm的熒光強度，以亞錫離子的濃度為橫坐標，熒光強度為縱坐標作圖，得到線 性關系曲線；
[0015] 步驟5:將步驟1得到的羅丹明類熒光探針溶液加入到步驟3得到的NaOH/NaH2P〇4緩 沖溶液中得到含有熒光探針的緩沖體系，加入待測的亞錫離子溶液，靜置，在激發波長為 560nm的條件下，檢測發射波長為587nm的熒光強度，根據步驟4中得到的線性關系曲線，計 算亞錫離子的濃度。
[0016]優選地，所述的步驟1中的羅丹明類熒光探針的結構式為：
[0017]
[0018] 1 尤選地，所還的步驟1中的芕丹明類災元侏針浴淞的配制萬法包拈：稱取一定摩爾 量的羅丹明類熒光探針在乙腈溶劑中配置成l〇〇mL濃度為lxl(T 3M的熒光探針溶液，然后取 lmL上述的濃度為1χ10-3Μ的熒光探針溶液加入到10mL容量瓶中，然后用乙腈溶劑定容、搖 勻，得到1x10、的熒光探針溶液，取lmL上述的濃度為1x10、的熒光探針溶液加入到lOmL 容量瓶中，然后用乙腈溶劑定容、搖勻，得到lxl〇_5M的羅丹明類熒光探針溶液。
[0019] 更優選地，所述的乙腈溶劑的純度為95~98wt%。
[0020] 優選地，所述的步驟2中的亞錫離子溶液的配制方法包括:稱取一定摩爾量的亞錫 化合物在乙腈溶劑中配置成1 〇〇mL濃度為1 xl 0-3Μ的亞錫離子溶液，然后取lmL上述的濃度為 lx 10-3Μ的亞錫離子溶液加入到10mL的容量瓶中，然后用乙腈溶劑定容、搖勻，得到濃度為 1χ10_ 4Μ的亞錫離子溶液，然后取lmL上述的濃度為lxl(T4M的亞錫離子溶液加入到10mL的容 量瓶中，然后用乙腈溶劑定容、搖勻，得到濃度為lxl(T 5M的亞錫離子溶液。
[0021] 更優選地，所述的亞錫化合物的純度為95~98wt%。
[0022]優選地，所述的步驟3中的Na0H/NaH2P04緩沖溶液的配制方法包括:稱取氫氧化鈉 配制0. lmol/L的氫氧化鈉溶液，稱取磷酸二氫鈉0.68g，加入0. lmol/L的氫氧化鈉溶液 29 · lmL，用水稀釋至100mL，得到pH=6 · 0~7 · 0的NaOH/NaH2P〇4緩沖溶液。
[0023] 更優選地，所述的磷酸二氫鈉的純度為95~98wt%，所述的氫氧化鈉的純度為95 ~98wt%。
[0024] 優選地，所述的步驟4中的羅丹明類熒光探針溶液的用量為10yL，所述的步驟5中 的羅丹明類熒光探針溶液的用量為l〇yL。
[0025] 優選地，所述的羅丹明類熒光探針對亞錫離子溶液的檢測限達Ι.ΟμΜ。
[0026] 本發明的熒光探針在乙腈溶液中與亞錫離子發生絡合，顏色由無色變成粉紅色， 使用熒光光譜法，在激發波長為560nm，檢測其發射波長為587nm，此熒光探針的熒光強度隨 著亞錫離子濃度的增加而增加的特性，進行的高靈敏度檢測。在亞錫離子的濃度為1.2-6.2 μΜ的范圍內，熒光探針的熒光強度變化值與亞錫離子的濃度成良好的線性關系，相關系數 為0.993,最低檢測線為Ο.ΙμΜ，本發明方法操作簡單、檢測快速、靈敏度高且選擇性好，該熒 光探針對亞錫離子有很好的選擇性，在環境檢測方面具有較好的使用效果。
[0027] 與現有技術相比，本發明的有益效果是：
[0028] (1)本發明熒光探針能選擇性識別亞錫離子，并且不受其它常見離子的干擾、熒光 強度高、熒光強度高。
[0029] (2)該探針適用于pH值范圍為7.0-11.0,這個范圍可以滿足絕大多數生物樣品的 要求，該探針的靈敏度高檢測線可達到〇. ΙμΜ。
[0030] (3)采用本發明所制備的熒光探針進行亞錫離子的檢測，檢測過程簡單方便、靈敏 度高、檢測線低，可實現對亞錫離子的快速靈敏檢測。
【附圖說明】
[0031] 圖1為熒光探針加入亞錫離子前后的紫外變化圖譜;在圖1中，橫坐標為紫外吸收 波長(nm)，縱坐標為吸光度。
[0032] 圖2為熒光探針加入亞錫離子前后的熒光變化圖譜;在圖2中，橫坐標為熒光發射 波長(nm)，縱坐標為熒光強度。（圖2插圖表示的是熒光探針沒有加入亞錫離子的熒光變化 譜圖，說明了加入亞錫離子之后發射波長變化，熒光強度也發生了變化。）
[0033]圖3為濃度為10μΜ在乙腈溶液中對亞錫離子的熒光光譜響應圖；在圖3中，橫坐標 為熒光發射波長(nm)，縱坐標為熒光強度。
[0034]圖4為（濃度為ΙΟμΜ)在乙腈溶液中對不同的金屬離子（Sn2+、Fe3+、C 〇2+、Ni2+、Sr2+、 Ba2+、Mn2+、Zn2+、pb2+、Ca 2+、Cd2+)選擇干擾性檢測的熒光響應圖；在圖4中，橫坐標為不同的金 屬離子，縱坐標為熒光強度。
[0035]圖5為熒光探針溶液與亞錫離子絡合比的Job-Plot曲線;橫坐標為c[Cr3+]/c[Cr3+ +探針]，縱坐標為熒光F-F〇，其中F、F〇是在560nm的熒光發射強度。
[0036]圖6為濃度為ΙΟμΜ在不同溶劑（甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、DMF)中對亞錫離子的熒光 響應譜圖；橫坐標為不同的溶劑，縱坐標為熒光強度。
[0037]圖7為濃度為50μΜ的探針溶液使用磷酸二氫鈉/氫氧化鈉緩沖溶液配置了 一系列 不同pH的緩沖溶液，然后向探針溶液中加入一定量的亞錫離子，檢測熒光強度橫坐標為熒 光發射波長(nm)，縱坐標為焚光強度。
[0038]圖8所示，ΙΟμΜ探針在乙腈溶液中加入0到15μΜ的Cr3+離子的熒光發射光譜圖，當其 達至Ijl. 2μΜ-6.2μΜ之間有良好的線性，線性相關系數達到0.993，其最低檢測限為0.12μΜ。橫 坐標為Sn2+的濃度，縱坐標為探針的相對熒光強度F/F〇,然后所作出的線性關系曲線(λ Μ = 560nm)〇
【具體實施方式】
[0039] 下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用于說明本發明 而不用于限制本發明的范圍。此外應理解，在閱讀了本發明講授的內容之后，本領域技術人 員可以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定 的范圍。以下各實施例中所用的乙腈溶劑的純度為99wt %，磷酸二氫鈉的純度為98wt %，所 述的氫氧化鈉的純度為98wt%，亞錫化合物的純度為98wt%。
[0040] 以下實施例中的羅丹明類熒光探針的結構式為式（1)，其合成方法記載在中國專 利201510869087.0"檢測汞離子的反應型羅丹明類熒光探針及其制備與應用"中的實施例1 中。
[0041 ] 實施例1
[0042] (1)將羅丹明類熒光探針溶于在乙腈溶劑中，配成ΙΟμΜ熒光探針溶液，將羅丹明類 熒光探針溶于乙腈溶劑中，配制成1〇μΜ亞錫離子溶液，將1 .OmL ΙΟμΜ熒光探針溶液加入到 1 .OmL ΙΟμΜ亞錫離子溶液中，測試加入亞錫離子溶液前后熒光探針溶液的紫外變化圖譜， 結果如圖1所不。
[0043] (2)將羅丹明類熒光探針溶于在乙腈溶劑中，配成ΙΟμΜ熒光探針溶液，將羅丹明類 熒光探針溶于乙腈溶劑中，配制成1〇μΜ亞錫離子溶液，將1 .OmL ΙΟμΜ熒光探針溶液加入到 1 .OmL ΙΟμΜ亞錫離子溶液中，測試加入亞錫離子溶液前后熒光探針溶液的熒光變化圖譜， 結果如圖2所不。
[0044] (3)基于Stern-Vo lmer理論，考察了羅丹明類熒光探針溶液對于Sn2+離子進行檢測 時的線性范圍和實際最低檢測濃度。
[0045]將羅丹明類熒光探針溶于在乙腈溶劑中，配制成熒光探針溶液，分別將羅丹明類 熒光探針溶于乙腈溶劑中，配制成亞錫離子溶液，依次在0μΜ、1μΜ、2μΜ、3μΜ、4μΜ、5μΜ、6μΜ、7 μΜ、8μΜ、9μΜ 和 1 ΟμΜ 熒光探針溶液中按體積比 1:1 加入 1 ΟμΜ、9μΜ、8μΜ、7μΜ、6μΜ、5μΜ、4μΜ、3μ 1、2以1、以1和(^1亞錫離子溶液，通過進行熒光測試其譜圖變化，激發波長為56〇11111，發射波 長為587nm，然后根據熒光強度的最大變化值作圖并作出絡合比的Job-Plot曲線;橫坐標為 c[Sn2+]/c[Sn2++探針]，縱坐標為熒光F-F〇，其中F、F〇是在560nm的熒光發射強度。羅丹明類 熒光探針在560nm的激發光激發下，熒光強度很弱，隨著亞錫離子的加入，熒光強度不斷增 強，根據Stern-Volmer方程：
[0046] F/Fo=l+KsvCq
[0047] 其中Fo和F分別表示加入Sn2+前后所測得的RHPT的熒光強度，Ksv是增強常數，Cd 的Sn2+濃度。RHPT增強程度與Sn2+呈現良好的線性關系，如圖5所示，通過計算其線性回歸方 程，線性相關系數為0.993，線性范圍為1.2以1-6.2以1，探針檢測的最低限為0.1以1。如圖8所 不。
[0048] (4)將羅丹明類熒光探針分別溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、DMF溶劑中，配成10μΜ熒 光探針溶液，將氯化亞錫溶于乙腈溶劑中，配制成1〇μΜ亞錫離子溶液，將1. OmL 10μΜ熒光探 針溶液加入到1. 〇mL 10μΜ亞錫離子溶液中，激發波長為560nm，發射波長為587nm，結果如圖 6所示。
[0049] 實施例2
[0050] -種利用羅丹明類熒光探針檢測亞錫離子的方法，具體步驟為：
[0051]步驟1 :配制羅丹明類熒光探針溶液：所述的羅丹明類熒光探針參照 201510869087.0"檢測汞離子的反應型羅丹明類熒光探針及其制備與應用"的合成方法。所 述的的羅丹明類熒光探針溶液的配制方法為:稱取一定摩爾量的羅丹明類熒光探針在乙腈 溶劑中配置成100mL濃度為lxl(T 3M的熒光探針溶液，然后取lmL上述的濃度為lxl(T3M的熒 光探針溶液加入到10mL干燥的容量瓶中，然后用乙腈溶劑定容、搖勻，得到1χ10- 4Μ的熒光探 針溶液，取lmL上述的濃度為1χ10-4Μ的熒光探針溶液加入到10mL干燥的容量瓶中，然后用乙 腈溶劑定容、搖勾，得到lxl〇_ 5M的羅丹明類焚光探針溶液；
[0052] 步驟2:配制亞錫離子溶液：稱取一定摩爾量的亞錫化合物（SnCl2)在乙腈溶劑中 配置成100mL濃度為lxl(T3M的亞錫離子溶液，然后取lmL上述的濃度為lxl(T3M的亞錫離子 溶液加入到10mL的干燥的容量瓶中，然后用乙腈溶劑定容、搖勻，得到濃度為1χ10-4Μ的亞錫 離子溶液，然后取lmL上述的濃度為1χ10- 4Μ的亞錫離子溶液加入到10mL的干燥的容量瓶中， 然后用乙腈溶劑定容、搖勻，得到濃度為1X1 〇_5M的亞錫離子溶液；
[0053] 步驟3:配制pH=7.0的NaOH/NaH2P〇4緩沖溶液:稱取氫氧化鈉配制0. lmol/L的氫氧 化鈉溶液，稱取磷酸二氫鈉〇 . 68g，加入0 . lmol/L的氫氧化鈉溶液29 . lmL，用水稀釋至 100mL，得到 pH=7.0的NaOH/NaH2P〇4 緩沖溶液。
[0054] 步驟4:分別將步驟1得到的羅丹明類熒光探針溶液10uL加入到步驟3得到的NaOH/ NaH2P〇4緩沖溶液10uL中得到多個含有熒光探針的緩沖體系，分別加入0uL、10uL、20uL、 30uL、40uL的步驟2所得的亞錫離子溶液，得到不同濃度的亞錫離子溶液，乙腈溶液定容至 2mL，靜置lmin，在激發波長為560nm的條件下，檢測發射波長為587nm的焚光強度，以亞錫離 子的濃度為橫坐標，熒光強度為縱坐標作圖，得到線性關系曲線y = 21.58+4.50225x;
[0055] 步驟5:將步驟1得到的羅丹明類熒光探針溶液10uL加入到步驟3得到的NaOH/ NaH2P〇4緩沖溶液10uL中得到含有熒光探針的緩沖體系，加入待測的亞錫離子溶液10uL，靜 置lmin，在激發波長為560nm的條件下，檢測發射波長為587nm的熒光強度，根據步驟4中得 到的線性關系曲線，計算亞錫離子的濃度為2xl(T 6M。
[0056] 實施例3
[0057] 步驟1 :配制羅丹明類熒光探針溶液：所述的羅丹明類熒光探針參照 201510869087.0"檢測汞離子的反應型羅丹明類熒光探針及其制備與應用"的合成方法。所 述的的羅丹明類熒光探針溶液的配制方法為:稱取一定摩爾量的羅丹明類熒光探針在乙腈 溶劑中配置成100mL濃度為lxl(T 3M的熒光探針溶液，然后取lmL上述的濃度為lxl(T3M的熒 光探針溶液加入到10mL干燥的容量瓶中，然后用乙腈溶劑定容、搖勻，得到1χ10- 4Μ的熒光探 針溶液，取lmL上述的濃度為1χ10-4Μ的熒光探針溶液加入到10mL干燥的容量瓶中，然后用乙 腈溶劑定容、搖勾，得到lxl〇_ 5M的羅丹明類焚光探針溶液；
[0058] 步驟2:配制亞錫離子溶液：稱取一定摩爾量的亞錫化合物（SnCl2)在乙腈溶劑中 配置成100mL濃度為lxl(T3M的亞錫離子溶液，然后取lmL上述的濃度為lxl(T3M的亞錫離子 溶液加入到10mL的干燥的容量瓶中，然后用乙腈溶劑定容、搖勻，得到濃度為1χ10-4Μ的亞錫 離子溶液，然后取lmL上述的濃度為1χ10- 4Μ的亞錫離子溶液加入到10mL的干燥的容量瓶中， 然后用乙腈溶劑定容、搖勻，得到濃度為1X1 〇_5M的亞錫離子溶液；
[0059] 步驟3:配制pH=7.0的NaOH/NaH2P〇4緩沖溶液:稱取氫氧化鈉配制0. lmol/L的氫氧 化鈉溶液，稱取磷酸二氫鈉〇 . 68g，加入0 . lmol/L的氫氧化鈉溶液29 . lmL，用水稀釋至 100mL，得到 pH=7.0的NaOH/NaH2P〇4 緩沖溶液。
[0060] 步驟4:分別將步驟1得到的羅丹明類熒光探針溶液10uL加入到步驟3得到的NaOH/ NaH2P〇4緩沖溶液10uL中得到9個含有熒光探針的緩沖體系，分別加入10，20，30，40，50，60， 70，80，90yL的步驟2所得的亞錫離子溶液，得到不同濃度的亞錫離子溶液，乙腈溶液定容， 靜置lmin，在激發波長為560nm的條件下，檢測發射波長為587nm的熒光強度，以亞錫離子的 濃度為橫坐標，熒光強度為縱坐標作圖，得到線性關系曲線如圖3所示。
[0061] 從熒光光譜可得知熒光探針的熒光強度隨著亞錫離子濃度的增加而增加，到最后 趨于穩定，且熒光強度的增強值與亞錫離子濃度有良好的線性關系，R 2 = 〇.993。
[0062] 本發明利用熒光探針，進行亞錫離子的高靈敏檢測，熒光探針的熒光強度變化值 與亞錫離子濃度有良好的線性關系，相關系數為R 2 = 〇.993,對亞錫離子的檢測線可達到 Ο.ΙμΜ。本發明方法操作簡單、靈敏度高、檢測快速且選擇型好，可對混合樣品中的亞錫離子 進行在線原位快速靈敏檢測。
[0063] 實施例4
[0064]各種金屬離子對RHPT+Sn2+熒光探針的干擾實驗：
[0065]步驟1 :配制羅丹明類熒光探針溶液：所述的羅丹明類熒光探針參照 201510869087.0"檢測汞離子的反應型羅丹明類熒光探針及其制備與應用"的合成方法。所 述的的羅丹明類熒光探針溶液的配制方法為:稱取一定摩爾量的羅丹明類熒光探針在乙腈 溶劑中配置成100mL濃度為lxl(T 3M的熒光探針溶液，然后取lmL上述的濃度為lxl(T3M的熒 光探針溶液加入到10mL干燥的容量瓶中，然后用乙腈溶劑定容、搖勻，得到1χ10- 4Μ的熒光探 針溶液，取lmL上述的濃度為1χ10-4Μ的熒光探針溶液加入到10mL干燥的容量瓶中，然后用乙 腈溶劑定容、搖勾，得到lxl〇_ 5M的羅丹明類焚光探針溶液；
[0066]步驟2:分別配制多種金屬離子溶液，配制方法為:稱取一定摩爾量的金屬化合物 (SnCl2)在乙腈溶劑中配置成100mL濃度為lxl(T3M的金屬離子溶液，然后取lmL上述的濃度 為1X 10-3Μ的金屬離子溶液加入到1 OmL的干燥的容量瓶中，然后用乙腈溶劑定容、搖勻，得到 濃度為lxl(T4M的金屬離子溶液，然后取lmL上述的濃度為lxl(T4M的金屬離子溶液加入到 1 OmL的干燥的容量瓶中，然后用乙腈溶劑定容、搖勻，得到濃度為1X1 0-5Μ的金屬離子溶液； 所述的金屬離子為（5112+、？63+、(：〇 2+、附2+、3￥+、8&2+、111 2+、2112+、？132+、0&2+、0(1 2+)，對應的金屬 化合物為（SnCl2、FeCl3、CoCl2、NiN03、SrCl2、BaCl2、MnCl2、ZnCl2、KCl、NaCl、Pd(N〇3)2、Ca (N〇3)2、CdCl2)〇
[0067] 步驟3:分別在lcm的石英比色皿中加入lmL的金屬離子溶液和lmL的羅丹明類熒光 探針溶液;在激發波長為560nm的條件下，檢測發射波長為587nm的熒光強度，把測試時熒光 強度的最大數值記錄下來進行作圖比較各種離子的干擾情況，只有Co 2+、Ni2+和Cd2+離子的 亞錫離子有輕微的干擾影響，其它的金屬離子基本上對亞錫離子沒有干擾影響。
[0068] 步驟4:如圖4所對應的黑色柱子，取濃度為ΙΟμΜ的熒光探針溶液然后加入同等濃 度的亞錫離子和其他的金屬離子，然后通過熒光光譜可以看出，Co 2+、Ni2+和Cd2+離子的亞錫 離子有輕微的干擾影響，其它的金屬離子基本上對亞錫離子沒有干擾影響。
[0069] 實施例5
[0070] 步驟1 :配制羅丹明類熒光探針溶液：所述的羅丹明類熒光探針參照 201510869087.0"檢測汞離子的反應型羅丹明類熒光探針及其制備與應用"的合成方法。所 述的的羅丹明類熒光探針溶液的配制方法為:稱取一定摩爾量的羅丹明類熒光探針在乙腈 溶劑中配置成濃度為ΙΟμΜ的熒光探針溶液；
[0071] 步驟2:配制ρΗ=7.0的NaOH/NaH2P〇4緩沖溶液:稱取氫氧化鈉配制0. lmol/L的氫氧 化鈉溶液，稱取磷酸二氫鈉〇 . 68g，加入0 . lmol/L的氫氧化鈉溶液29 . lmL，用水稀釋至 100mL，得到 pH=7.0的NaOH/NaH2P〇4 緩沖溶液。
[0072]步驟3:配制亞錫離子溶液:稱取一定摩爾量的亞錫化合物（SnC12)在乙腈溶劑中 配置成100mL濃度為lxl(T3M的亞錫離子溶液，然后取lmL上述的濃度為lxl(T3M的亞錫離子 溶液加入到10mL的干燥的容量瓶中，然后用乙腈溶劑定容、搖勻，得到濃度為1χ10- 4Μ的亞錫 咼子溶液；
[0073]步驟4:分別在步驟1中得到的濃度為ΙΟμΜ的熒光探針溶液中加入步驟2得到的 NaOH/NaH2P〇4緩沖溶液，得到一系列不同（ρΗ=1·0、2·0、3·0、4·0、5·0、6·0、7·0、8·0、9·0、 10.0、11.0、12.0 )ρΗ的緩沖溶液;分別取0.5mL體積的緩沖溶液加入0.5mL體積的濃度為 1χ10_4Μ的亞錫離子溶液，在激發波長為560nm，發射波長為587nm的條件下，檢測加入亞錫離 子溶液前后的熒光強度，得到不同pH條件下探針溶液熒光強度的變化。發現在pH=l.0-3.0 的時候熒光強度明顯下降，pH=4.0-12.0熒光強度變化不明顯，探針溶液比較穩定，因此該 熒光探針在乙腈溶劑中pH = 1.0-3.0以下受到酸性條件影響比較大，pH從10.0-12.0，熒光 強度有逐漸增強，可能是因為熒光強度有逐漸增強，可能是因為隨著磷酸二氫根的增強，增 強了溶液中的電解質濃度，對螺類環的打開有利，見附圖7。
【主權項】
1. 一種羅丹明類巧光探針在檢測亞錫離子含量中的應用。2. -種利用羅丹明類巧光探針檢測亞錫離子的方法，其特征在于，包括： 步驟1:配制羅丹明類巧光探針溶液； 步驟2:配制亞錫離子溶液； 步驟3:配制pH=6.0~7.0的化OH/Na出P化緩沖溶液； 步驟4:分別將步驟1得到的羅丹明類巧光探針溶液加入到步驟3得到的化OH/化出Kk緩 沖溶液中得到多個含有巧光探針的緩沖體系，分別加入不同體積的步驟2所得的亞錫離子 溶液，得到不同濃度的亞錫離子溶液，靜置，在激發波長為560nm的條件下，檢測發射波長為 587nm的巧光強度，W亞錫離子的濃度為橫坐標，巧光強度為縱坐標作圖，得到線性關系曲 線； 步驟5:將步驟1得到的羅丹明類巧光探針溶液加入到步驟3得到的化OH/化出P〇4緩沖溶 液中得到含有巧光探針的緩沖體系，加入待測的亞錫離子溶液，靜置，在激發波長為560nm 的條件下，檢測發射波長為587nm的巧光強度，根據步驟4中得到的線性關系曲線，計算亞錫 離子的濃度。3. 如權利要求2所述的利用羅丹明類巧光探針檢測亞錫離子的方法，其特征在于，所述 的步驟1中的羅丹明類巧光探針的結構式為：4. 如權利要求2所述的利用羅丹明類巧光探針檢測亞錫離子的方法，其特征在于，所述 的步驟1中的羅丹明類巧光探針溶液的配制方法包括:稱取一定摩爾量的羅丹明類巧光探 針在乙臘溶劑中配置成IOOmL濃度為Ixicr3M的巧光探針溶液，然后取ImL上述的濃度為 1 Xl(T3M的巧光探針溶液加入到IOmL容量瓶中，然后用乙臘溶劑定容、搖勻，得到1 Xl(T4M的 巧光探針溶液，取ImL上述的濃度為IxlCT4M的巧光探針溶液加入到IOmL容量瓶中，然后用乙 臘溶劑定容、搖勻，得到IxlCT5M的羅丹明類巧光探針溶液。5. 如權利要求2所述的利用羅丹明類巧光探針檢測亞錫離子的方法，其特征在于，所述 的步驟2中的亞錫離子溶液的配制方法包括:稱取一定摩爾量的亞錫化合物在乙臘溶劑中 配置成IOOmL濃度為IxlCT3M的亞錫離子溶液，然后取ImL上述的濃度為IxlCT3M的亞錫離子 溶液加入到IOmL的容量瓶中，然后用乙臘溶劑定容、搖勻，得到濃度為IxlCT4M的亞錫離子溶 液，然后取ImL上述的濃度為IxlO-4M的亞錫離子溶液加入到IOmL的容量瓶中，然后用乙臘溶 劑定容、搖勻，得到濃度為IxlCT5M的亞錫離子溶液。6. 如權利要求2所述的利用羅丹明類巧光探針檢測亞錫離子的方法，其特征在于，所述 的步驟3中的化OH/Na出Kk緩沖溶液的配制方法包括:稱取氨氧化鋼配制0.1mol/L的氨氧化 鋼溶液，稱取憐酸二氨鋼0.68g，加入0.1mol/L的氨氧化鋼溶液29. ImL，用水稀釋至IOOmL， 得到抑=6.0~7.0的NaOH/Na出K)4緩沖溶液。7. 如權利要求2所述的利用羅丹明類巧光探針檢測亞錫離子的方法，其特征在于，所述 的步驟4中的羅丹明類巧光探針溶液的用量為10化，所述的步驟5中的羅丹明類巧光探針溶 液的用量為10化。8.如權利要求2所述的利用羅丹明類巧光探針檢測亞錫離子的方法，其特征在于，所述 的羅丹明類巧光探針對亞錫離子溶液的檢測限達l.OiiM。
【文檔編號】C07D491/107GK105907387SQ201610255254
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2016年4月22日
【發明人】光善儀, 徐曼曼, 趙剛, 徐洪耀
【申請人】東華大學