一種用于生物he染色的染料組合物、應用及其使用方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種醫學生物形態學研究領域，具體涉及一種用于生物HE染色的染 料組合物、應用及其使用方法。
【背景技術】
[0002] 醫學生物形態學研究領域通常需要對生物組織內的細胞器等形態結構進行染色， 以利于達到可視化觀察，限定并對其進行檢查。為了達到更有利的可視化觀察效果，對生物 組織的染色技術在不斷的發展，通常采用HE染色技術，H指蘇木精（Hemaltoxylm)、E指伊 紅（eosin)，其化學式分別如下：
[0003]
[0004] 蘇木精是最早用于生物學的天然染料之一，是生物形態學實驗室中最常用的染 料，它來源于蘇木樹的樹心木提煉出而獲得，呈淡黃褐色的粉末狀，易溶于酒精，也可溶于 熱水。從伊紅的化學結構中，可看到它的酸性著色基團為羥基（一0H)和羧基（一C00H)，它 能與NaOH作用生成鈉鹽（一COONa)。而鈉鹽經電離后，它的有色離子為陰離子的過程，可 使細胞質和細胞外基質中的成分染成紅色。
[0005] HE染色技術通常分為兩種，一是傳統的經典石蠟切片HE染色方法，二是現有常用 的普通整塊蘇木精伊紅染色方法。由于傳統的石蠟組織切片染色都是采取單片片染的方 法，它是一種傳統而最常用的石蠟切片技術。其基本程序：（i)取材和固定；（ii)脫水和包 埋；（iii)切片、染色和封固。這種方法在醫學形態學領域中廣泛應用而被人們熟知。但是， 這種制作法具有一定的弊端和局限性，比如在制作做大批量連續教學切片時；同時，也可耗 費制作者大量的時間和精力。普通整塊蘇木精伊紅染色方法的操作程序通常為：取材一固 定一脫色一媒染一蘇木精染色液染色一分色一還原一流水沖洗一蒸餾水洗一伊紅染色液 染色一常規脫水一透明一石蠟包埋、切片一貼片及烤片一透明一樹膠封固。但這方法同樣 也存在一定弊端，染色液染色步驟較多，不易掌握等缺點，若染色技術掌握不到位，就容易 導致所取材的組織結構出現差別以及出現染色結果不均勻一致的現象，而且還經過媒染一 蘇木精染色液染色一分色一還原一水洗一伊紅染色液染色等過程。
[0006] 不論是傳統石蠟方法還是整塊HE染色方法，染色過程都較為復雜，染色步驟較 多，不易掌握。
【發明內容】
[0007] 本發明人經過多年的研究發現，由于現有染料成份蘇木精和伊紅在染色過程中所 配置而成的染色液通常只能單獨分別進行染色，即需要在某一染色成份染色后，對染色對 象進行一定處理后才可進行另一染色成份的染色步驟，否則染色出來的生物組織的細胞器 形態結構無法可視化觀察，即細胞核和細胞質的染色效果區分不夠明顯，有待于進一步改 進。
[0008] 有鑒于此，本發明提供一種用于生物HE染色的染料組合物、應用及其使用方法， 其可以有效的縮減現有染色技術的染色步驟，簡化染色過程，較易掌握。
[0009] 為解決以上技術問題，本發明的技術方案是采用一種用于生物HE染色的染料組 合物，所述染料組合物由A液和B液混合組成；
[0010] A液包括染色有效成分a、染色輔助成分以及水，其中染色有效成分a、染色輔助成 分以及水的重量份數比為（1. 5-2. 5) : (4-5. 5) : (90-100);其中染色有效成分a由重量份數 比分別為0. 3-0. 5份蘇木精、1. 2-1. 8份硫酸鋁鉀、0. 02-0. 08份任一選自碘酸鈉、高錳酸鉀 的氧化劑組成，染色輔助成分由檸檬酸、丙三醇中若干組分組成；
[0011] B液由染色有效成分b和水組成，其中染色有效成分b為伊紅和80-85 %酒精，并 且伊紅、水、80-85%酒精的重量份數比為1: (3-5) : (95-100);
[0012] 所述A液與B液的混合比例為體積比3: (18-25)。
[0013] 優選的，所述A液中染色有效成分a、染色輔助成分以及水的重量份數比為 2. 05:5. 02:95〇
[0014] 優選的，所述A液中染色有效成分a由重量份數比分別為0.4份蘇木精、1. 6份硫 酸鋁鉀、0. 05份任一選自碘酸鈉、高錳酸鉀的氧化劑組成。
[0015] 優選的，所述氧化劑為碘酸鈉。
[0016] 優選的，所述A液中染色輔助成分由重量份數比為0. 02份檸檬酸和5份丙三醇組 成。
[0017] 優選的，所述B液中伊紅、水、85%酒精的重量份數比為1:5:100。
[0018] 優選的，所述A液與B液的混合比例為體積比3:20。
[0019] 本申請還提供第二種技術方案，即前述任一所述的染料組合物作為生物HE染色 時染料的應用，其特征在于：所述生物主要指生物組織。
[0020] 本申請還提供第三種技術方案，即前述任一所述的染料組合物在用于生物HE染 色時的使用方法，其特征在于：首先將生物組織固定于FAA固定液中，經流水洗后，放入權 利要求1-7任一所述的染料組合物中進行染色，然后逐步經脫水、石蠟包埋、切片、烘干封 固即可。
[0021] 優選的，所述FAA固定液是由體積比為1:1: (18-20)的40%甲醛溶液、冰醋酸、 70 %酒精組成。
[0022] 本申請所述用于生物HE染色的染料組合物的基本說明如下：
[0023] 本發明人通過長時間的研制得出，本申請所述的染料組合物可以有效的對生物組 織進行染色，所得染色效果為細胞核呈藍色，細胞質呈紅色，顏色分明，有利于對細胞結構 進行有效的觀察。同時本申請所述染料組合物可以有效的縮減現有染色技術的染色步 驟，簡化染色過程，較易掌握。
【附圖說明】
[0024] 圖1-3為實施例一中染液5分別對應的肝、脾、腎組織切片效果示意圖。
【具體實施方式】
[0025] 為了使本領域的技術人員更好地理解本發明的技術方案，下面結合具體實施例對 本發明作進一步的詳細說明。
[0026] 下面將列舉一些與本申請相關的用于生物HE染色的染料組合物。
[0027]染液 1:
[0028] 該染液1的染料組合物由A液和B液混合組成；
[0029] A液由染色有效成分a、染色輔助成分以及水組成，其中染色有效成分a、染色輔助 成分以及水的重量份數比為1.5:5. 5:100;其中染色有效成分a由重量份數比分別為0.3 份蘇木精、1. 8份硫酸鋁鉀、0. 08份高錳酸鉀組成，染色輔助成分由檸檬酸組成；
[0030] B液由染色有效成分b和水組成，其中染色有效成分b為伊紅和80%酒精，并且伊 紅、7K、80%酒精的重量份數比為1:3:95;
[0031] 所述A液與B液的混合比例為體積比3:18。
[0032] 染液 2 :
[0033] 該染液2的染料組合物由A液和B液混合組成；
[0034] A液由染色有效成分a、染色輔助成分以及水組成，其中染色有效成分a、染色輔助 成分以及水的重量份數比為1.5:5. 5:100;其中染色有效成分a由重量份數比分別為0.3 份蘇木精、1. 8份硫酸鋁鉀、0. 08份碘酸鈉組成，染色輔助成分由丙三醇組成；
[0035] B液由染色有效成分b和水組成，其中染色有效成分b為伊紅和80%酒精，并且伊 紅、7K、80%酒精的重量份數比為1:3:95;
[0036] 所述A液與B液的混合比例為體積比3:18。
[0037] 染液 3 :
[0038] 該染液3的染料組合物由A液和B液混合組成；
[0039] A液由染色有效成分a、染色輔助成分以及水組成，其中染色有效成分a、染色輔助 成分以及水的重量份數比為2. 5:4:90;其中染色有效成分a由重量份數比分別為0. 5份蘇 木精、1. 2份硫酸鋁鉀、0. 02份高錳酸鉀組成，染色輔助成分由檸檬酸組成；