檢測人血清白蛋白的熒光探針及其制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及熒光探針，具體涉及一種檢測人血清白蛋白的熒光探針及其制備方 法。
【背景技術】
[0002] 人血清白蛋白（HSA)是人血漿中含量最多的蛋白，其在血漿中的濃度高達0. 7mM。 人血清白蛋白可以可逆地結合很多內源性以及外源性的化合物，例如激素、脂肪酸、維生 素、血紅素、代謝產物以及藥物分子，增強這些化合物在血漿中的溶解度、運送它們到特定 的組織或器官或者當它們有毒性作用的時候降解掉。人血清白蛋白這種類似海綿的功能很 大程度上影響了很多外源藥物的藥代動力學。
[0003] HSA表現出假酯酶的活性，可以水解含有酯鍵的藥，例如阿司匹林。Lys 199、Lys 402、Lys 519和Lys 545構成了 HSA假酯酶的活性位點。
[0004] 人體體液中血漿白蛋白的含量被認為是一個可靠的健康指示器。HSA在普通尿液 中的濃度低于30mg/L，而在血漿中正常的濃度范圍為35-55g/L。尿液中過量的HSA會導致 微量白蛋白尿，這是心血管疾病和腎病在糖尿病和高血壓中的指標。此外，血漿中低水平的 白蛋白濃度被稱為低蛋白血癥，這是肝硬化以及慢性肝炎的信號。因此，準確的檢測HSA的 濃度具有重要的臨床意義。現有技術中，仍沒有令人滿意的檢測HSA的濃度的分子探針。
【發明內容】
[0005] 本發明所要解決的技術問題是提供一種檢測人血清白蛋白的熒光探針，在檢測 HSA中具有良好的效果；本發明同時提供其制備方法，工藝簡單、易于實現。
[0006] 本發明所述的檢測人血清白蛋白的熒光探針，其分子結構式如下：
[0007]
[0008] 中文名為：甲基-2-氰基-3-(6-(二甲基氨基）喹啉-2-基）丙烯酸乙酯。
[0009] 所述的檢測人血清白蛋白的熒光探針的制備方法，包括如下步驟：
[0010] (1)將對氨基-N，N-二甲基苯胺、反式丁烯醛溶解到甲苯中，室溫下反應，TLC監測 反應，待對氨基-N，N-二甲基苯胺完全參與到反應中后停止反應，萃取得粗產物，柱層析提 純得產物a ;
[0011] (2)將產物a、SeO2溶解到二氧六環中，回流反應，TLC監測反應，待產物a完全參 與到反應中后停止反應，過濾，收集濾液蒸除溶劑，得粗產物，柱層析提純得產物b ;
[0012] (3)將產物b、氰乙酸甲酯和哌啶依次加入到有機溶劑中，攪拌溶解，回流反應， TLC監測反應，待產物b完全參與到反應中后停止反應，濃縮得粗產物，柱層析提純得檢測 人血清白蛋白的熒光探針。
[0013] 其中：
[0014] 對氨基-N，N-二甲基苯胺、反式丁烯醛、甲苯的摩爾比為：1:1. 5-5:10-50。
[0015] 產物a、SeO2、二氧六環的摩爾比為1:1-1. 5:10-100。
[0016] 產物b、氰乙酸甲酯、哌啶、有機溶劑的摩爾比為1:1-2:0. 1-0. 5:20-150。
[0017] 有機溶劑為無水乙醇或無水甲醇。
[0018] 過濾為采用硅藻土過濾。
[0019] 柱層析提純采用200-300目柱層析硅膠柱，采用的洗脫液為二氯甲烷與甲醇的混 合液或無水乙酸乙酯與石油醚的混合液。
[0020] 合成路線如下所示：
[0021]
[0022] 與現有技術相比，本發明的有益效果如下：
[0023] (1)本發明以喹啉熒光團為報告基團，與乙二酸二乙酯結合合成的熒光比率探針 在檢測HSA中具有較好的效果。因此，本發明的熒光比率探針可以定量檢測HSA的濃度。
[0024] (2)本發明所述制備方法，工藝簡單、易于實現。
【附圖說明】
[0025] 圖1是本發明檢測人血清白蛋白的熒光探針加入HSA前后的紫外吸收光譜；
[0026] 圖2是本發明檢測人血清白蛋白的熒光探針隨著加入HSA濃度的增大的熒光強度 變化圖；
[0027] 圖3是本發明檢測人血清白蛋白的熒光探針加入0-10 μΜ的HSA時熒光強度的線 性關系圖。
【具體實施方式】
[0028] 以下結合實施例對本發明做進一步描述。
[0029] 實施例1
[0030] 檢測人血清白蛋白的焚光探針的制備：
[0031] (1)將Imol對氨基-Ν，N-二甲基苯胺及5mol反式丁烯醛溶解到25mL甲苯中，在 室溫下攪拌反應，TLC監測，待對氨基-N，N-二甲基苯胺完全參與到反應中后停止反應，（二 氯甲烷與蒸餾水混合液）萃取得粗產品，柱層析（二氯甲烷：甲醇=1:1)提純得產物a;
[0032] (2)將0· 8mol產物a、I. 2mol SeO2加入到25mL二氧六環中攪拌溶解，回流反應， TLC監測反應，待產物a完全參與到反應中后停止反應，冷卻至室溫，混合物用二氯甲烷洗 脫過的硅藻土進行過濾，收集濾液蒸除溶劑，得粗產物，粗產物通過硅膠柱層析進行純化 (二氯甲烷：甲醇=50:1)，得產物b ;
[0033] (3)稱取產物b 0· 5mmol、氰乙酸甲酯1.0 mmol和哌啶0· Immol溶解在30mL的無 水乙醇中，加熱回流反應，TLC監測反應直至產物b完全參與反應后停止反應。減壓蒸除溶 劑，柱層析提純（石油醚：乙酸乙酯=1:2)，得到檢測人血清白蛋白的熒光探針。所述產物 為黃棕色粉末狀固體，產率56%，111邛.237-239°(：。1!1匪1?(4001抱，〇)(：13)5 8.57(8，1!1)，8· 12-8. 03 (m，2H)，7. 94-7. 85 (m，1H)，7. 47-7. 38 (m，1H)，6. 88-6. 79 (m，1H)，3. 56 (s，3H)，3. 12 (s，6H) 〇
[0034] 檢測人血清白蛋白的熒光探針（甲基-2-氰基-3-(6-(二甲基氨基）喹啉-2-基） 丙烯酸乙酯）的紫外吸收活性研究
[0035] 對5μΜ的甲基-2-氰基-3-(6-(二甲基氨基）喹啉-2-基）丙烯酸乙酯進行紫 外可見光光譜掃描。在PBS(pH = 7.4)緩沖液中，將40μΜ的HSA與5μΜ的甲基-2-氰 基-3-(6-(二甲基氨基）喹啉-2-基）丙烯酸乙酯室溫反應3min，然后進行紫外可見光光 譜掃描。如圖1所示，甲基-2-氰基-3-(6-(二甲基氨基）喹啉-2-基）丙烯酸乙酯在不 加 HSA的情況下，在427nm處有一個吸收峰，當加入40 μ M HSA后，427nm的吸收峰降低并紅 移到了 431nm處。表明探針與HSA發生了作用并導致紫外吸收光譜的變化。
[0036] 檢測人血清白蛋白的熒光探針（甲基-2-氰基-3-(6-(二甲基氨基）喹啉-2-基） 丙烯酸乙酯）的體外熒光活性研究
[0037] 利用熒光儀來測定甲基-2-氰基-3-(6-(二甲基氨基）喹啉-2-基）丙烯酸乙 酯的熒光活性研究：在PBS(pH7.4)緩沖液中，將0-100μΜ的HSA與ΙΟμΜ的甲基-2-氰 基-3-(6-(二甲基氨基）喹啉-2-基）丙烯酸乙酯室溫反應3min，然后進行熒光光譜掃描， 激發波長選擇380nm。
[0038] 如圖2所示，隨著HSA的濃度增加，熒光信號比值（F/F。）在不斷增大，當HSA的濃 度達到40 μ M時，增大的速度變緩。為了更準確的測量HSA的濃度，我們研究了低濃度下 HSA濃度和熒光信號比值F/F。之間的關系，研究結果見圖3。結果表明，在0-10 μΜ的低濃 度下，它們很好地符合線性關系。
[0039] 其中，F代表熒光強度，F。代表加入HSA前所述探針的熒光強度。
【主權項】
1. 一種檢測人血清白蛋白的熒光探針，其特征在于：其分子結構式如下：2. -種權利要求1所述的檢測人血清白蛋白的熒光探針的制備方法，其特征在于：包 括如下步驟： (1) 將對氨基-N，N-二甲基苯胺、反式丁烯醛溶解到甲苯中，室溫下反應，TLC監測反 應，待對氨基-N，N-二甲基苯胺完全參與到反應中后停止反應，萃取得粗產物，柱層析提純 得產物a; (2) 將產物a、Se02溶解到二氧六環中，回流反應，TLC監測反應，待產物a完全參與到 反應中后停止反應，過濾，收集濾液蒸除溶劑，得粗產物，柱層析提純得產物b; ⑶將產物b、氰乙酸甲酯和哌啶依次加入到有機溶劑中，攪拌溶解，回流反應，TLC監 測反應，待產物b完全參與到反應中后停止反應，濃縮得粗產物，柱層析提純得檢測人血清 白蛋白的焚光探針。3. 根據權利要求2所述的檢測人血清白蛋白的熒光探針的制備方法，其特征在于：對 氨基-N，N-二甲基苯胺、反式丁烯醛、甲苯的摩爾比為：1:1. 5-5:10-50。4. 根據權利要求2所述的檢測人血清白蛋白的熒光探針的制備方法，其特征在于：產 物a、Se02、二氧六環的摩爾比為1:1-1. 5:10-100。5. 根據權利要求2所述的檢測人血清白蛋白的熒光探針的制備方法，其特征在于：產 物b、氰乙酸甲酯、哌啶、有機溶劑的摩爾比為1:1-2:0. 1-0. 5:20-150。6. 根據權利要求2所述的檢測人血清白蛋白的熒光探針的制備方法，其特征在于：有 機溶劑為無水乙醇或無水甲醇。7. 根據權利要求2所述的檢測人血清白蛋白的熒光探針的制備方法，其特征在于：過 濾為采用娃藻土過濾。8. 根據權利要求2所述的檢測人血清白蛋白的熒光探針的制備方法，其特征在于：柱 層析提純采用200-300目柱層析硅膠柱，采用的洗脫液為二氯甲烷與甲醇的混合液或無水 乙酸乙酯與石油醚的混合液。
【專利摘要】本發明涉及熒光探針，具體涉及一種檢測人血清白蛋白的熒光探針及其制備方法。所述的熒光探針其分子結構式如下：。本發明以喹啉熒光團為報告基團，與乙二酸二乙酯結合合成的熒光比率探針在檢測HSA中具有較好的效果；所述的制備方法，工藝簡單、易于實現。
【IPC分類】C09K11/06, C07D215/38, G01N21/64
【公開號】CN105018072
【申請號】CN201510398769
【發明人】陳志偉, 朱海亮, 孫娟
【申請人】山東理工大學
【公開日】2015年11月4日
【申請日】2015年7月8日