一種干旱山地用微生物組合菌液及其凝膠制劑的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明設及一種干旱山地用微生物組合菌液及其凝膠制劑。
【背景技術】
[0002] 植物根際促生細菌（PGPR)是指生存在植物根圈范圍中，對植物生長有促進或對 病原菌有括抗作用的有益細菌，對植物生長及病害防治有極其重要的作用。目前關于PGPR 的研究報道很多，大量文獻證明，PGH?對植物根際±壤生態環境的改善、植物生長，尤其是 植物根系生長具有顯著的促進作用。
[0003] 干旱是全球范圍內影響農林生產的一種非常嚴重的自然災害。干旱會導致±壤中 細菌數量大幅降低，群落結構多樣性減少，±壤生物活性降低，從而會加大植物受到的干旱 脅迫。但是研究認為，干旱環境下接種PGH?并不能有效改良±壤，不能促進植物生長，對植 物抗干旱能力影響也有限。該是因為不同的環境條件，諸如溫度、±壤性質、水分和其他± 著微生物活力，尤其是干旱環境等均會對細菌的定殖和繁殖造成影響。一般微生物在適宜 水分條件下可正常繁殖并發揮功效，然而在干旱環境中卻不能長期定殖存活，便失去了其 特有的功能。
[0004] 為提高微生物的有效性，一般選用草炭、畜禽糞便、茹渣等有機材料作為有機吸附 載體，將微生物接種到有機吸附載體中制成生物有機肥料。將生物有機肥料施用到植物根 際環境中，適宜環境下微生物可定殖在植物根際環境中，并能作用于±壤和植物根際，充分 發揮微生物的作用，促進植物生長，甚至改善產品品質。但是，生物有機肥料中的有機吸附 載體蓄水能力有限，在干旱環境中，受水分脅迫的影響，生物有機肥料中有益微生物同樣不 能成功繁殖，嚴重制約了微生物功效的發揮。如何提高干旱環境下微生物的有效性，是其在 干旱環境中發揮功效的前提，也是目前微生物抗旱研究的難點所在。
【發明內容】
[0005] 針對上述現有技術中存在的不足，本發明的目的是結合不同PGPR的功能特點，尋 求一種適宜的PGH?組合，制備成微生物組合菌液，使其在干旱環境下發揮各組合的協同作 用，并通過特定吸附的方法制成凝膠制劑，提高其在干旱環境中的存活能力和有效性，該對 于提高PGH?在干旱環境下的應用效果和充分發揮PGPR的應用潛力具有重要意義。
[0006] 為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：
[0007] 一種干旱山地用微生物組合菌液，由蠟樣芽抱桿菌Z77、蠟樣芽抱桿菌L90和釀 酒酵母菌按C化之比為10 ;4~5 ;0. 5~1混合，微生物組合菌液中含活菌數大于或等于 5. 0 X l〇8cfu/ml。
[000引所述蠟樣芽抱桿菌炬acillus cereus)Z77,已于2012年12月31日保藏于中國 微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中屯、，保藏編號為CGMCC No. 7070,記載在中國專利 "一株蠟樣芽抱桿菌及其在提高植物抗旱能力中的應用"（CN 103667132A)中。
[0009] 所述蠟樣芽抱桿菌L90已于2012年12月31日保藏于中國微生物菌種保藏管理 委員會普通微生物中屯、，保藏編號為CGMCC No. 7069,記載在中國專利"一株蠟樣芽抱桿菌 及其在提高植物抗旱能力中的應用"（CN 103667132A)中。
[0010] 所述釀酒酵母菌（saccharomyces cerevisiae)來源于中國微生物菌種保藏管理 委員會普通微生物中屯、（CGMCC)，釀酒酵母菌的菌種編號為2. 0666。
[0011] 本發明還提供了一種干旱山地用凝膠制劑，由微生物吸附液和吸附載體按（20~ 30) ;1(血/g)的比例混合，制成化P-PGPR凝膠制劑；
[0012] 所述微生物吸附液是由微生物組合菌液采用專用稀釋液稀釋8-10倍制成；
[0013] 所述專用稀釋液是由黃豆芽和水按1 ;30~35(g/mL)混合，沸水中煮lOmin，冷卻 過濾，向濾液中加入1%~1.5% (質量分數）的葡萄糖和0.2%~0.3% (質量分數）的 尿素，溶解后混勻，制成稀釋液；
[0014] 所述吸附載體為CLP型制動載體，來自北京漢力森新技術有限公司，粒徑大小為 0. 3 ~0. 8mm。
[0015] 本發明的有益效果：
[0016] (1)本發明根據蠟樣芽抱桿菌炬acillus cereus)Z77、蠟樣芽抱桿菌L90和釀 酒酵母菌（saccharomyces cerevisiae)各自的功能特點，W蠟樣芽抱桿菌炬acillus cereus) Z77和蠟樣芽抱桿菌L90為主要組分，并與釀酒酵母菌進行優化組合，制成微生物 組合菌液，=種菌株之間不存在括抗作用，能夠發揮各自的功能特點，菌株之間還存在協同 作用，實現了多菌株在干旱環境下的集群促生效應，組合菌液對干旱環境具有更強的針對 性和有效性。
[0017] (2)本發明還提供了一種延長微生物組合物菌液在干旱環境中成活時間的方法， 將CLP型制動載體與微生物組合菌液相結合，形成CLP-PGH?凝膠，延長了組合菌液中的微 生物在干旱環境下的生存定殖能力和存活時間，提高了有效微生物的數量，在干旱環境下 可改良±壤，促進植物生長，提高水分利用效率，提高植物干旱適應能力，改善造林效果。
【附圖說明】
[0018] 圖1為不同稀釋處理對菌液微生物存活時間的影響。
【具體實施方式】
[0019] 結合實施例對本發明作進一步的說明，應該說明的是，下述說明僅是為了解釋本 發明，并不對其內容進行限定。
[0020] 實施例1 ;微生物組合菌液的制備及對植物在干旱環境中適應能力的影響的考察
[0021] 1.微生物組合菌液的制備：
[0022] 分別將蠟樣芽抱桿菌炬acillus cereus)Z77、蠟樣芽抱桿菌L90和釀酒酵母菌按 照常規方法進行種子培養和液體發酵培養，制得蠟樣芽抱桿菌Z77菌液、蠟樣芽抱桿菌L90 菌液和釀酒酵母菌菌液。
[0023] 將蠟樣芽抱桿菌Z77菌液、蠟樣芽抱桿菌L90菌液和釀酒酵母菌菌液按C化 之比為10 ;4. 7 ;0. 7混合，制備得到微生物組合菌液，微生物組合物菌液含活菌數為 6. 84Xl〇Scfu/ml。
[0024] 2.微生物組合菌液對植物在干旱環境中適應能力的影響
[0025] 選用金銀花裸根苗，進行金銀花裸根苗的盆栽實驗。金銀花定植時，取配置好的微 生物組合菌液12ml，用無菌水稀釋至100ml，分別均勻的誘灌于金銀花根系周圍，然后誘水 至田間持水量的80%，作為試驗組；同時設置誘灌等量蠟樣芽抱桿菌L90(對照組1)、蠟樣 芽抱桿菌Z77 (對照組2)、釀酒酵母菌（對照組3)試驗，保持各處理總活菌數基本一致，正 常管理。60d后，開始進行干旱脅迫，控制水分含量為田間持水量的40%左右。30d后測定 金銀花葉片的光合速率、蒸騰速率、相對含水量和相對電導率，計算水分利用效率，結果如 表1所示。可W看出，同對照組相比，試驗組具有最高的葉片相對含水量和水分利用效率， 最低的葉片相對電導率。此外，試驗組還顯著提高了±壤中速效磯和速效鐘的含量。因此， 在各菌株互不括抗的基礎上，微生物組合菌液可充分發揮集群協同作用，顯著提高±壤有 效養分含量，提高金銀花在干旱環境中的適應能力，提高水分利用效率。
[0026] 表1不同處理金銀花的葉片相對含水量、相對電導率和±壤養分
[0027]
【主權項】
1. 一種干旱山地用微生物組合菌液，其特征在于，由蠟樣芽孢桿菌Z77、蠟樣芽孢桿菌 L90和釀酒酵母菌按cfu之比為10 :4~5 :0. 5~1混合，微生物組合菌液中含活菌數大于 或等于 5. 0X108cfu/ml。
2. 根據權利要求1所述的干旱山地用微生物組合菌液，其特征在于，所述蠟樣芽孢桿 菌Z77菌種保藏編號為CGMCCNo. 7070 ;所述蠟樣芽孢桿菌L90的菌種保藏編號為CGMCC No. 7069,所述釀酒酵母菌在CGMCC的菌種編號為2. 0666。
3. -種干旱山地用微生物吸附液，其特征在于，由權利要求1所述的微生物組合菌液 采用專用稀釋液稀釋8-10倍制成。
4. 根據權利要求3所述的干旱山地用微生物吸附液，其特征在于，所述專用稀釋液是 由黃豆芽和水按Ig:30~35mL混合，蒸煮，冷卻過濾，向濾液中加入1 %~1. 5%的葡萄糖 和0. 2%~0. 3%的尿素，溶解后混勻，制成專用稀釋液。
5. -種干旱山地用凝膠制劑，其特征在于，由權利要求3所述的微生物吸附液和吸附 載體按（20~30)ml:lg的比例混合，制成凝膠制劑。
6. 根據權利要求5所述的干旱山地用凝膠制劑，其特征在于，所述吸附載體為CLP型制 動載體。
7. 根據權利要求6所述的干旱山地用凝膠制劑，其特征在于，所述CLP型制動載體的粒 徑大小為0. 3~0. 8mm。
【專利摘要】本發明公開了一種干旱山地用微生物組合菌液，由蠟樣芽孢桿菌Z77、蠟樣芽孢桿菌L90和釀酒酵母菌按cfu之比為10：4～5：0.5～1混合，微生物組合菌液中含活菌數大于或等于5.0×108cfu/ml。本發明還公開了一種干旱山地用凝膠制劑，由微生物吸附液和吸附載體按(20～30)：1的比例混合，形成凝膠制劑，所述微生物吸附液是由微生物組合菌液采用稀釋液稀釋8-10倍制成。本發明的微生物組合菌液實現了多菌株在干旱環境下的集群促生效應，組合菌液對干旱環境具有更強的針對性和有效性；凝膠制劑能在干旱環境下可延長微生物的存活時間，提高有效微生物數量，在干旱環境條件下可改良土壤，提高植物干旱適應能力，提高造林成活率。
【IPC分類】C09K17-00, C09K105-00
【公開號】CN104726103
【申請號】CN201510149260
【發明人】馬海林, 盛升, 井大煒, 劉方春, 馬丙堯, 杜振宇, 邢尚軍
【申請人】山東省林業科學研究院
【公開日】2015年6月24日
【申請日】2015年3月31日