一種試劑及其在硫醇檢測中的應用的制作方法
【專利摘要】本發明提供了一種檢測硫醇的試劑，它是熒光素馬來酰亞胺。此試劑由熒光素胺和順丁烯二酸酐在冰乙酸回流5小時制得，反應只需一步進行，且反應條件簡單，易于生產。本發明提供了硫醇的定量檢測方法，是基于熒光素馬來酰亞胺，在DMSO和HEPES(pH7.0)的混合溶液中定量地檢測硫醇的含量。該檢測方法，對硫醇顯示了高的靈敏性和選擇性，檢測過程簡便、靈敏、快速，檢測結果準確。
【專利說明】—種試劑及其在硫醇檢測中的應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及硫醇的檢測技術，具體涉及一種試劑及其合成方法，以及這種試劑在檢測硫醇中的應用。
【背景技術】
[0002]小分子硫醇谷胱甘肽(GSH)、半胱氨酸(Cys)、同型半胱氨酸(Hcy)在維持細胞氧化還原環境起著重要的作用，硫醇缺乏關系許多疾病，如兒童生長緩慢、肝損傷、艾滋病等等。然而，高濃度的硫醇會導致其他綜合癥，如心血管疾病、阿爾茨海默氏病等。因此發展定量檢測硫醇的方法顯得尤為重要。近年來，分子探針檢測硫醇的方法尤為盛行，其中尤其是加成反應用于硫醇識別更為活躍，馬來酰亞胺因為含有不飽和基團，能被硫醇的巰基進行親核加成反應。在本 發明中，我們選擇熒光素為熒光團，馬來酰亞胺為鍵合點，設計為硫醇的熒光探針，實現了硫醇的定量檢測，且用于細胞成像。
【發明內容】
[0003]本發明的目的是提供一種選擇性高、定量檢測硫醇的新的試劑，以及該試劑在硫醇檢測中的應用。
[0004]本發明提供的快速檢測硫醇的試劑和方法，是基于一種熒光素馬來酰亞胺，在pH為7.0的HEPES溶液和DMSO混合溶液中定量地檢測硫醇的含量。該檢測方法，對硫醇顯示了高的靈敏性和選擇性，檢測過程簡便、靈敏、快速，檢測結果準確。
[0005]該試劑的結構式是:
【權利要求】
1.一種試劑:它是熒光素馬來酰亞胺，其特征在于結構式為:
2.如權利要求1所述的一種試劑的合成方法，其特征在于步驟為:熒光素胺和順丁烯二酸酐按摩爾比1:1完全溶解在冰乙酸中，回流5小時，停止反應；濃縮、冷卻后抽濾，并用碳酸鈉溶液洗滌，最后用苯重結晶得到橘黃色固體。
3.—種檢測硫醇的方法:其特征在于，步驟為: (I)、配制2mM的熒光素馬來酰亞胺DMSO溶液； ⑵、按體積比150:50:1，將DMSO溶液、pH7.0的HEPES水溶液、熒光素馬來酰亞胺的DMSO溶液加到干凈的熒光比色皿中，在熒光分光光度儀上檢測，隨著待測樣的加入，533nm的熒光強度逐漸增強； (3)、配制2mM的GSH蒸餾水溶液，把1.5mL的DMSO溶液、0.5mL的pH7.0的HEPES溶液、10 μ L的熒光素馬來酰亞胺DMSO溶液加到另一個熒光比色皿中，分別在加入GSH蒸餾水溶液的體積為75、150、225、300、375、450、525、600μ L時，在熒光分光光度儀上測定533nm對應的熒光強度F為133、269、389、511、629、729、834、929，以GSH濃度為橫坐標，以相對熒光強度F — Ftl為縱坐標繪制圖，F0 = 39，得到GSH濃度的工作曲線；線性回歸方程為:F —F0 = -59.5+2.05c, c 的單位為 μ M ； (4)、將DMSO溶液1500μ L、HEPES緩沖溶液500uL和熒光素馬來酰亞胺溶液IOuL加到干凈的熒光比色皿中，用微量進樣器吸取V μ L待測樣品溶液，加入到此干凈的熒光比色皿中，在熒光分光光度儀上檢測，將測得的熒光強度代入步驟(3)的線性回歸方程，得到濃度c，待測樣品C待測樣=(2000+V待測)μ LXcX 10_7νμ L，即可求得GSH的濃度。
【文檔編號】C09K11/06GK103951673SQ201410194221
【公開日】2014年7月30日 申請日期:2014年5月8日 優先權日:2014年5月8日
【發明者】霍方俊, 陰彩霞 申請人:山西大學