一種蘇木素伊紅染色液及其制備方法
【專利摘要】本發明提供一種蘇木素伊紅染色液，包括蘇木素染色液和伊紅染色液，所述蘇木素染色液，包括蘇木素、鋁鹽、氧化劑、苯扎氯銨、醇、弱酸以及水；所述伊紅染色液，包括伊紅、比布列西猩紅、焰紅B、水以及乙醇。本發明還提供了所述蘇木素伊紅染色液的制備方法及其染色方法。本發明的蘇木素伊紅染色液對切片進行染色時，背景清晰、層次分明、染色效果好、易于讀片，且不易褪色，便于長期存放。
【專利說明】一種蘇木素伊紅染色液及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種標本分析前處理試劑，具體涉及一種蘇木素伊紅染色液及其制備方法、以及其染色方法。
【背景技術】
[0002]蘇木素伊紅染色方法，簡稱HE染色法，是組織學、胚胎學、病理學中使用最為廣泛的技術方法。HE染色是將組織切片或細胞涂片等分別浸入蘇木素染色液和伊紅染色液中，經過適當的時間和處理，使組織、細胞及其他成分染上不同深淺的顏色，產生不同的折射率，從而便于光學顯微鏡下進行觀察和研究。
[0003]蘇木素是一種堿性染料，由洋蘇木中提取，被氧化后生成蘇木因，同媒染劑共同使用，主要使細胞核內的染色質與胞質內的核糖體著紫藍色。蘇木素的分子式為C16H14O6，結構
式如下:
[0004]
【權利要求】
1.一種蘇木素伊紅染色液，包括蘇木素染色液和伊紅染色液，其特征在于， 每100ml所述蘇木素染色液中包括如下組分: 蘇木素0.3-lg ;鋁鹽0.5-10g ;氧化劑0.025-2.26g ;苯扎氯銨0.05-lg ;醇5_60ml ;弱酸0.03-6.3g ;余量為水； 每100ml所述伊紅染色液中包括如下組分: 伊紅0.3-0.5g ；比布列西猩紅0.03-0.05g ;焰紅B0.15-0.25g ；乙醇5_60ml ;余量為水。
2.根據權利要求1所述的蘇木素伊紅染色液，其特征在于，所述蘇木素染色液中， 所述氧化劑與所述蘇木素的質量比小于或等于2.3 ； 所述醇占所述蘇木素染色液的20%-60% (V/V)時，所述鋁鹽的重量應小于或等于IOX(1.2-v) g ;所述V為所述醇占所述蘇木素染色液的體積百分比。
3.根據權利要求1或2所述的蘇木素伊紅染色液，其特征在于， 所述氧化劑為紅色氧化汞、碘酸鈉、高錳酸鉀、高碘酸鉀、次氯酸鈉、次氯酸鈣、過氧化氫中的一種或多種的混合物； 所述弱酸為檸檬酸、水楊酸、冰乙酸中的一種或多種的混合物； 所述醇為乙醇、甲醇、乙二醇、異丙醇、丙二醇、丙三醇中的一種或多種混合物； 所述鋁鹽為硫酸鋁鉀、硫酸鋁銨`、硫酸鋁、硝酸鋁、氯化鋁中的一種或多種的混合物； 所述水為去離子水或蒸餾水中的一種； 所述伊紅為水溶性伊紅Y。
4.根據權利要求1-3任一所述的蘇木素伊紅染色液，其特征在于，所述蘇木素染色液，每100ml所述蘇木素染色液中包括如下組分: 蘇木素Ig ;硫酸招3.6g ;碘酸鈉0.1g ;苯扎氯銨0.1g ;乙醇IOml ;冰乙酸2.1g ;余量為水。
5.根據權利要求1-4任一所述的蘇木素伊紅染色液，其特征在于，所述伊紅染色液，還包括苯扎氯銨0.05-lg。
6.根據權利要求1-5任一所述的蘇木素伊紅染色液，其特征在于，所述伊紅染色液，每100ml所述伊紅染色液中包括如下組分: 伊紅Y0.5g ；比布列西猩紅0.04g ;焰紅B0.21g ;苯扎氯銨0.1g ；乙醇20ml。
7.根據權利要求1-6任一所述的蘇木素伊紅染色液的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: 1)蘇木素染色液的配制: a.按選定的比例取醇、蘇木素，將所述蘇木素加入醇中，加熱溶解，得到蘇木素醇溶液，備用; b.按選定的比例取水、鋁鹽，使所述鋁鹽完全溶解于水中，加入步驟a中得到的所述蘇木素醇溶液，得到混合液； c.按選定的比例取氧化劑、苯扎氯銨、弱酸，將所述氧化劑攪拌加入步驟b中得到的所述混合液中，加熱溶液變深紫色后，冷卻，加入所述苯扎氯銨、弱酸，混合均勻，過濾，即得蘇木素染色液； 2)伊紅染色液的配制:將伊紅、比布列西猩紅、焰紅B溶解于水中，加入乙醇，過濾，即得伊紅染色液。
8.根據權利要求7所述的蘇木素伊紅染色液的制備方法，其特征在于，所述伊紅染色液的配制還包括在向所述水中加入所述伊紅、所述比布列西猩紅、所述焰紅B、所述乙醇后，再加入按選定的比例稱取的所述苯扎氯銨的步驟。
9.根據權利要求1-6任意一項所述的蘇木素伊紅染色液的染色方法，其特征在于，包括以下步驟: O切片預處理:取待染色石蠟切片按常規方式脫蠟、水化； 2)蘇木素伊紅染色:將步驟I)中得到的經預處理后切片置于所述蘇木素染色液中染色3-10min ;取出后水洗，分化，水洗，返藍后，再水洗；取所述伊紅染色液對切片染色10-60s ； 3)切片脫水、透明、封片:將步驟2)得到的染色后的切片采用常規方式脫水，透明處理，封片，即可。
10.根據權利要求9所述的蘇木素伊紅染色液的染色方法，其特征在于，所述步驟I)為:取石蠟切片置于二甲苯中脫蠟2-3次，每次5-10min ;將上述石蠟切片依次置于無水乙醇中2-3次、每次3-5min，體積分數為90%_95%的乙醇中1_2次、每次l_3min，體積分數為60%-80%的乙醇中l_3min，再水洗l_5min。
11.根據權利要求10所述的蘇木素伊紅染色液的染色方法，其特征在于，所述步驟I)為:取石蠟切片置于二甲苯中脫蠟3次，每次5min ;將上述石蠟切片依次置于無水乙醇中2次、每次3min，體積分數為95%的乙醇中2次、每次3min，體積分數為70%的乙醇中3min，再用蒸懼水水洗5min。
12.根據權利要求9-11任一所述的蘇木素伊紅染色液的染色方法，其特征在于，所述步驟2)為:將步驟I)中得到的經預處理后切片置于所述蘇木素染色液中染色3-10min ;取出后水洗l_20min，用0.1%_1%鹽酸乙醇分化l_60s后，水洗l_5min，用0.2%氨水或飽和碳酸鋰水溶液返藍30s-60s后，水洗l_5min ;取所述伊紅染色液對切片染色10s_60s。
13.根據權利要求12所述的蘇木素伊紅染色液的染色方法，其特征在于，所述步驟2)為:將步驟I)中得到的經預處理后切片置于所述蘇木素染色液中染色5min ;取出后水洗5min,用0.25%鹽酸乙醇分化30s后，水洗5min，用1.36%的碳酸鋰水溶液中返藍30s后，水洗5min ;取所述伊紅染色液對切片染色15s。
14.根據權利要求9-13任一所述的蘇木素伊紅染色液的染色方法，其特征在于，所述步驟3)為:將步驟2)得到的染色后的切片分別用體積分數為60-80%的乙醇脫水10-30S，體積分數為95%的乙醇脫水2-3次、每次l_5min，無水乙醇脫水2_3次，每次l_5min ;再置于二甲苯中透明2-3次，每次2-5min ;封片，即可。
15.根據權利要求14所述的蘇木素伊紅染色液的染色方法，其特征在于，所述步驟3)為:將步驟2)得到的染色后的切片分別用體積分數為80%的乙醇脫水30s，體積分數為95%的乙醇脫水2次、每次3min，無水乙醇脫水2次，每次3min ;再置于二甲苯中透明2次，每次5min ;封片，即可。
【文檔編號】C09B67/22GK103725040SQ201310752989
【公開日】2014年4月16日 申請日期:2013年12月31日 優先權日:2013年12月31日
【發明者】吳軍, 鄒霈, 吳昊, 謝敏浩, 王洪勇, 劉婭靈 申請人:江蘇省原子醫學研究所