透明質酸及其鹽或衍生物包被的單精子選擇裝置的制造方法
【技術領域】
[0001]本實用新型涉及體外精子挑選領域，是一種透明質酸及其鹽或衍生物包被的單精子選擇裝置。
【背景技術】
[0002]現在用于挑選精子的培養皿多為普通細胞培養皿(Petri dish)，將處理后的精液放入普通細胞培養皿中，在顯微鏡下觀察精子的活動性能，操作者需要在眾多的精子中根據個人經驗判斷并挑選出被認為高質量的成熟精子，眾所周知，活動性較強的精子不一定是成熟的精子，此挑選過程受操作者個人經驗與主觀性影響較大，具有明顯的隨機性，不能確保挑選出的活躍精子即為成熟的活力精子。
[0003]透明質酸是卵子和透明帶黏液基質的主要成分，精子頂體和胞質膜中含有透明質酸酶。當精子穿透卵冠丘復合體時，胞質膜中透明質酸酶水解卵冠丘復合體中的黏液透明質酸，從而穿過黏液；在透明帶誘發頂體反應時精子釋放透明質酸酶水解透明質酸，在整個過程中，精子與透明質酸結合起到了重要作用。有研究表明只有成熟的活動精子可以與透明質酸結合。
【實用新型內容】
[0004]本實用新型要解決的技術問題是提供一種節約時間、既能準確選擇出成熟的精子又不破壞精子的形態、結構與活力的透明質酸及其鹽或衍生物包被的單精子選擇裝置。
[0005]為了解決以上所述的技術問題，本實用新型采取以下技術方案:一種透明質酸及其鹽或衍生物包被的單精子選擇裝置，包括皿體和適配的皿蓋，在所述皿體內底部一體制成有小凹槽，小凹槽中包被有可結合成熟精子的透明質酸及其鹽或衍生物，小凹槽的高度高于所述包被的透明質酸及其鹽或衍生物的高度；皿體的外壁分布有若干個方便拿取皿體且能避免接觸皿體皿口的小耳；所述皿體的底部下表面設有避免皿體底部磨損的凸臺階；培養皿體的邊緣最高處與小凹槽的底部形成的夾角為5?23度。
[0006]優選地，所述小凹槽由自所述培養皿體底部向上一體形成的一個環形突起形成。
[0007]優選地，所述小凹槽設置在所述培養皿體底部的中心位置。
[0008]進一步地，所述小凹槽的尺寸為:直徑9mm，高度0.6mm。
[0009]更進一步地，所述培養皿體的尺寸為:直徑50mm，高度8mm。
[0010]所述皿蓋和皿體由透明硬質塑料制成。
[0011]與現有技術相比，能結合成熟精子的透明質酸及其鹽或衍生物直接包被成固相于所述小凹槽中，省略了操作者每次包被透明質酸及其鹽或衍生物的過程，操作簡單快捷，極大節約操作者時間、提高工作效率；通過對大量被挑選的精子進行檢測發現，當挑選精子的角度小于23度時，能確保被挑選的精子不受任何損傷且在挑起的過程中不易掉落，本實用新型對培養皿體深度與直徑的進行最優化試驗，保證操作者緊靠培養皿體2的側壁挑選精子時，挑選工具與小凹槽底部的夾角小于23度；培養皿體的外壁分布有若干個小耳，既方便操作者拿取培養皿體，又能有效杜絕操作者接觸到培養皿體的皿口，防止外來污染物落入培養皿體中，影響精子的挑選；進一步地，培養皿體的外面底部設有凸臺階，有效避免培養皿體的下表面受到磨損、刮花，干擾顯微鏡下精子的挑選工作，使用本實用新型挑選成熟的單精子，既節約操作者時間，又能在不破壞精子的形態、結構與活力的狀態下準確選擇出成熟的單精子。
【附圖說明】
[0012]圖1是培養皿蓋立體示意圖
[0013]圖2是培養皿體立體示意圖
[0014]圖3是培養皿體底部立體示意圖
【具體實施方式】
[0015]實施例1
[0016]一種透明質酸及其鹽或衍生物包被的單精子選擇裝置，包括皿體2和適配的皿蓋1，優選采用透明硬質塑料制成；所述培養皿體2的尺寸為:直徑50_，高度8_，所述皿體2的內底部中心位置一體制成有一個向上的環形凸起形成所述小凹槽21，小凹槽21的高度高于所述包被的固相透明質酸的高度，小凹槽21中包被有可結合成熟精子的固相透明質酸。也可以將小凹槽21設置于皿體2內部底部的其他合適位置，小凹槽21可采用同樣可以結合成熟精子頭部的固相透明質酸及其鹽或衍生物來包被。
[0017]所述小凹槽21的尺寸優選為:直徑9mm，高度0.6mm，根據三角函數，當操作者緊靠培養皿體2的側壁從小凹槽21中挑選精子時的角度約為18度，經過多次試驗驗證，當挑選成熟精子的角度大于23度時，存在以下三方面的缺陷:第一，由于角度較大，精子注射用穿刺針或其他中空細管頂端尖頭的部位容易損傷被挑選的精子；第二，由于角度過大，在重力作用下，被挑選的成熟精子容易從精子注射用穿刺針或其他中空細管中掉落；第三，精子注射用穿刺針或其他中空細管頂端尖頭的位置容易刮花培養皿體2，造成干擾，增加操作者在顯微鏡下確認及挑選成熟精子的難度。培養皿體2和小凹槽21的尺寸也可以根據需要采取其他尺寸，只要保證操作者緊靠培養皿體2的側壁從小凹槽21中挑選精子的角度小于23度，確保被挑選精子可以完整無損傷挑出即可。充分考慮培養皿體2的高度與直徑的關系，優選培養皿體2的側壁上沿與小凹槽21底部之間的夾角為5?23度。
[0018]皿體2的外面側壁最好均勻分布有4個方便拿取皿體2的小耳22，使用的時候，操作者可以用拇指和食指拿起小耳22，有效避免手指或手套接觸皿口，杜絕外來污染物落入皿體中妨礙精子的挑選；皿體2的底部下表面優選設有3個避免皿體2底部磨損的凸臺階23，保證在顯微鏡下精子的挑選工作。所述小耳22和凸臺階23的個數均可根據實際設置若干個。
[0019]通常將該固相透明質酸包被的單精子選擇裝置優選在在4°C冰箱環境下保存，也可以將其保存在可以在2_8°C的環境下，只要能保證固相透明質酸及其鹽或衍生物保持可以結合成熟精子頭部的活性即可。
[0020]當操作者進行成熟單精子挑選的時候，按以下步驟進行:
[0021]1)將所述單精子選擇裝置從所放置的冰箱中取出，平衡至室溫；
[0022]2)用密度梯度法分離并洗滌精子，也可以根據需要采取現有技術其他分離及洗滌精子的方法；以含4mg/ml人白蛋白的培養液調節至精子數量為0.5X 106個/ml的精子懸液，以提高精子被透明質酸及其鹽或衍生物特異性結合的識別準確性；也可以采用含有3?5mg/ml人白蛋白的培養液調節至精子數量為0.2?1 X 106個/ml的精子懸液，只要能達到提高精子被透明質酸及其鹽或衍生物特異性結合的識別準確性的目的即可；
[0023]3)揭下所述培養皿蓋1，在所述單精子選擇裝置的皿體2內準備2個或多個培養液液滴用于接收挑選后的成熟精子；
[0024]4)吸取20?30ul，優選的吸取25ul經所述2)處理后的精子懸液至該單精子選擇裝置的小凹槽21中，使精子懸液布滿小凹槽21 ;
[0025]5)蓋上所述培養皿蓋1，在25°C左右反應5min ;或者在22?30°C反應1?lOmin ；
[0026]6)揭下所述培養皿蓋1，在顯微鏡下確定精子頭部被小凹槽21內透明質酸結合至固相表面難以向前運動，但尾部鞭打劇烈的精子，這類精子即為成熟精子；
[0027]7)采用中空細管，優選用精子注射用穿刺針緊靠培養皿體2或以與皿底不大于23度的角度將所述步驟6)中確定的精子以于挑選出并放置于所述培養液滴中。
[0028]實施例2
[0029]實施例2中透明質酸及其鹽或衍生物包被的單精子選擇裝置和實施例1 一樣，區別僅在于挑選成熟精子時的使用方法不同，當操作者進行成熟單精子挑選的時候，按以下步驟進行:
[0030]1)將所述單精子選擇裝置從所放置的冰箱中取出，平衡至室溫；
[0031]2)用密度梯度法分離并洗滌精子，也可以根據需要采取現有技術其他分離及洗滌精子的方法；以含4mg/ml人白蛋白的培養液調節至精子數量為0.5X 106個/ml的精子懸液，以提高精子被透明質酸及其鹽或衍生物特異性結合的識別準確性；也可以采用含有3?5mg/ml人白蛋白的培養液調節至精子數量為0.2?1 X 106個/ml的精子懸液，只要能達到提高精子被透明質酸及其鹽或衍生物特異性結合的識別準確性的目的即可；
[0032]3)揭下所述培養皿蓋1，在所述單精子選擇裝置的皿體2內分別準備2個或多個暫存挑選出的精子的培養液液滴以及抑制挑選出的精子運動的PVP液滴；
[0033]4)吸取20?30ul，優選的吸取25ul經所述2)處理后的精子懸液至該單精子選擇裝置的小凹槽21中，使精子懸液布滿小凹槽21 ;
[0034]5)蓋上所述培養皿蓋1在顯微鏡熱臺加熱至35°C反應5min，也可以根據需要在顯微鏡熱臺加熱至33?37°C反應1?lOmin ；
[0035]6)揭下所述培養皿蓋1，在顯微鏡下確定精子頭部被小凹槽21內透明質酸結合至固相表面難以前向運動，但尾部鞭打劇烈的精子，即為成熟精子；
[0036]7)采用中空細管，優選用精子注射用穿刺針緊靠培養皿體2或以與小凹槽21的底部不大于23度的角度將所述步驟6)中確定的精子挑選出，暫存于培養液液滴或放置于PVP液滴中制動。
【主權項】
1.一種透明質酸及其鹽或衍生物包被的單精子選擇裝置，包括皿體(2)和適配的皿蓋(1)，其特征在于:在所述皿體(2)內底部一體制成有小凹槽(21)，小凹槽(21)中包被有可結合成熟精子的透明質酸及其鹽或衍生物，小凹槽(21)的高度高于所述包被的透明質酸及其鹽或衍生物的高度；皿體(2)的外壁分布有若干個方便拿取皿體(2)且能避免接觸皿體(2)皿口的小耳(22);所述皿體(2)的底部下表面設有避免皿體(2)底部磨損的凸臺階(23); 培養皿體⑵的邊緣最高處與小凹槽(21)的底部形成的夾角為5?23度。2.如權利要求1所述的透明質酸及其鹽或衍生物包被的單精子選擇裝置，其特征在于:所述小凹槽(21)由自所述培養皿體(2)底部向上一體形成的一個環形突起形成。3.如權利要求2所述的透明質酸及其鹽或衍生物包被的單精子選擇裝置，其特征在于:所述小凹槽(21)設置在所述培養皿體(2)底部的中心位置。4.如權利要求3所述的透明質酸及其鹽或衍生物包被的單精子選擇裝置，其特征在于:所述小凹槽(21)的尺寸為:直徑9mm，高度0.6mm。5.如權利要求4所述的透明質酸及其鹽或衍生物包被的單精子選擇裝置，其特征在于:所述培養皿體⑵的尺寸為:直徑50mm，高度8mm。6.如權利要求1?5任一項所述的透明質酸及其鹽或衍生物包被的單精子選擇裝置，其特征在于:所述皿蓋(1)和皿體(2)由透明硬質塑料制成。
【專利摘要】本實用新型公開透明質酸及其鹽或衍生物包被的單精子選擇裝置，包括透在所述皿體(2)內部底部一體制成有小凹槽(21)，小凹槽(21)中包被有可結合成熟精子的透明質酸及其鹽或衍生物，小凹槽(21)的高度高于所述包被的透明質酸及其鹽或衍生物的高度；皿體(2)的外面分布有若干個方便拿取皿體(2)且能避免接觸皿體(2)皿口的小耳(22)；所述皿體(2)的外底部設有避免皿體(2)外底部磨損的凸臺階(23)；培養皿體(2)的邊緣最高處與小凹槽(21)的底部形成的夾角為5～23度。使用簡單、操作方便，既能方便選擇出成熟的單精子又不破壞精子的形態、結構與活力。
【IPC分類】C12M1/22
【公開號】CN205077047
【申請號】CN201520786339
【發明人】胡家純, 陶思恩, 程浩, 鄧少君, 楊紅芳, 何水生
【申請人】深圳市博銳德生物科技有限公司
【公開日】2016年3月9日
【申請日】2015年10月12日