細胞密度依賴性生長抑制檢測裝置的制造方法
【技術領域】
[0001]本實用新型涉及一種細胞增殖調控檢測裝置，尤其涉及一種細胞密度依賴性生長抑制檢測裝置。
【背景技術】
[0002]細胞在生長過程中達到相互接觸時有停止分裂的現象。由于培養基中的生長因子耗盡時也會產生生長抑制，所以正常細胞因相互接觸而抑制分裂的現象也稱為密度依賴性的生長抑制(density-dependent inhibit1n of growth)。在相同條件下培養的惡性細胞(malignant cells)對密度依賴性生長抑制失去敏感性，因而不會在形成單層時停止生長，而是相互堆積形成多層生長的聚集體，這種現象也說明惡性細胞的生長和分裂已經失去了控制，調節細胞正常生長和分裂的信號對于惡性細胞不再起作用。因此，利用專一的檢測裝置對細胞生長的性質和類型以動態形式進行鑒定，對正確認識和鑒別正常細胞和惡性細胞(癌細胞)，進一步了解細胞的癌變過程，即癌癥的發生機理，進而深入研宄探索治療癌癥的方法具有十分重要的意義。
[0003]目前，在細胞實驗中指導學生認識癌細胞還只是停留在切片和靜態的細胞形態觀察上，老師給學生灌輸較為先進的理論只能口頭或以模式圖或圖片進行，無法以動態形式展現出來，對于利用檢測裝置，尤其是利用專一的器皿對細胞密度依賴性生長抑制或關于正常細胞與惡性腫瘤細胞的區別進行直觀地展示的裝置還未見報道。
【發明內容】
[0004]針對現有技術的不足，本實用新型要解決的問題是提供一種細胞密度依賴性生長抑制檢測裝置。
[0005]本實用新型所述細胞密度依賴性生長抑制檢測裝置，由培養皿和透明塑料材質的積木塊組成；其特征在于:所述積木塊形狀似扇形體，由6?10塊組成，其共同組合后的形狀似圓柱體，且用明膠被固定于培養皿中央區域，培養皿中似圓柱體所占面積以外的區域為細胞培養觀察區；其中，所述似圓柱體的底面面積為培養皿底面面積的1/2?2/3，高度為培養皿高度的2/3?4/5，所述組成似圓柱體的積木塊有1/2為能解除固定的扇形體，有1/2設置有自上表面外緣到培養皿底面的斜面，斜面的上表面外緣與培養皿底面有0.5?1.5mm的距離，且斜面的底面與自體上表面外緣連線形成的夾角為15?42度。
[0006]上述的細胞密度依賴性生長抑制檢測裝置中:所述組成似圓柱體的積木塊優選有1/2為能解除固定的扇形體，有1/2設置有自上表面外緣到培養皿底面的斜面，且其兩種積木塊間隔排列。(如圖1所示)。
[0007]上述的細胞密度依賴性生長抑制檢測裝置中:所述積木塊優選由8塊組成，其共同組合后的形狀似圓柱體，且用明膠被固定于培養皿中央區域，；其中，有4塊為能解除固定的扇形體，有4塊設置有自上表面外緣到培養皿底面的斜面，且其兩種積木塊間隔排列，所述4塊有斜面的積木塊分別命名為A、B、C、D，其斜面的底面與自體上表面外緣連線形成的夾角分別為15度、25度、32度、42度。(如圖2所示)。
[0008]本實用新型所述的細胞密度依賴性生長抑制檢測裝置在以動態形式直接觀察待檢實驗細胞是否存在生長接觸抑制現象中應用。
[0009]本實用新型所述的細胞密度依賴性生長抑制檢測裝置在鑒別正常細胞與惡性腫瘤細胞中應用。
[0010]取貼壁生長的對數生長期實驗細胞(血管內皮細胞、肝癌細胞、胃癌細胞或胚肺成纖維細胞)，消化后制成單細胞懸液，并調整細胞濃度為17?10 8個/ml，以恰好覆蓋底面量將其加入檢測裝置中的細胞培養觀察區，將上述檢測裝置蓋好，置于5% C02，37°C，100%相對濕度的培養箱中常規培養至細胞貼壁，然后再向培養皿中加入培養液，使培養液量為檢測裝置中似圓柱體高度的2/3，繼續培養并定時觀察細胞培養觀察區內的細胞生長，以檢測實驗細胞是否有接觸抑制的情況。
[0011]觀察時，若實驗細胞生長達到匯合狀態且與皿或圓柱體壁密切接觸后停止生長，即可初步判定為接觸抑制，再繼續培養并經過2?5個細胞周期，實驗細胞仍停止分裂，即確定為實驗細胞出現接觸抑制；反之，在繼續培養后，實驗細胞仍能進行分裂，且呈現堆積生長，并能出現跨越有斜面的積木塊斜面上表面外緣并沿斜面生長現象，則為非接觸抑制。
[0012]是否出現非接觸抑制可以間接用于鑒別正常細胞與惡性腫瘤細胞。本實用新型的細胞密度依賴性生長抑制檢測裝置中設置夾角分別為15度、25度、32度、42度的斜面還可進一步用于判定惡性腫瘤細胞及轉化細胞的增殖強弱。
[0013]上述實驗中對于證實已出現接觸抑制的實驗細胞，還可以通過依次分別拆除固定于培養皿中央區域的無斜面的扇形體積木塊，增加其培養觀察區的面積，進一步進行所述實驗細胞接觸抑制釋放現象的觀察。
[0014]本實用新型在現有實理論基礎和實驗基礎上，利用機械原理與細胞學、生理學實驗技術相結合的方法，研制了“細胞密度依賴性生長抑制檢測裝置”，應用本專利所述細胞密度依賴性生長抑制檢測裝置，可使學生在進行離體細胞培養實驗時，極為方便地以動態形式直接觀察到待檢的實驗細胞生長接觸抑制的存在與否、細胞接觸抑制釋放現象、以及鑒別腫瘤細胞與正常細胞的生長增殖狀態，達到區分正常細胞與轉化或癌變細胞的目的。本裝置特別適合于動態觀察各種因素、藥物對離體細胞的影響，能極大地提升學生的動手和觀察能力，為實驗教學提供了一種直觀、方便、靈活、準確檢測細胞接觸抑制的工具。
【附圖說明】
[0015]圖1:本實用新型所述細胞密度依賴性生長抑制檢測裝置立體效果圖
[0016]其中:A、B、C、D分別為4塊有斜面的積木塊，其斜面的底面與自體上表面外緣連線形成的夾角分別為15度、25度、32度、42度。
[0017]圖2:為圖1中在1-1和2-2方向的縱切剖面圖，圖中分別顯示了 A、B、C、D 4塊有斜面的積木塊斜面夾角。
【具體實施方式】
[0018]實施例1
[0019]取直徑為80mm塑料培養皿一只，備用。
[0020]取與塑料培養皿材質相同的透明塑料，制作成底面面積為培養皿底面面積的2/3，高度為培養皿高度2/3的圓柱體，然后沿柱體圓心將圓柱體等分為8塊扇形體積木塊，然后將其中的4塊自上表面外緣到底面制作成斜面，并使斜面的上表面外緣與培養皿底面具有0.8mm的距離，所述4塊有斜面的積木塊分別命名為A、B、C、D，其斜面的底面與自體上表面外緣連線形成的夾角分別為15度、25度、32度、42度(如圖2所示)。將8塊扇形體積木塊按斜面有無區分為兩種，重新將兩種積木塊間隔排列組合，組合后的形狀似圓柱體，用明膠將其固定于備用的培養皿中央區域，培養皿中似圓柱體所占面積以外的區域為細胞培養觀察區；其中，無斜面的扇形體積木塊設計為能解除固定，自由拆除功能。此裝置即為本實用新型所述的細胞密度依賴性生長抑制檢測裝置(如圖1所示)。
[0021]實施例2
[0022]取實施例1制備的細胞密度依賴性生長抑制檢測裝置，用75%的醫用酒精浸泡消毒2小時以上，三蒸水沖洗三遍，晾干，置超凈工作臺中用紫外線照射30分鐘后備用。
[0023]取貼壁生長的對數生長期實驗細胞(血管內皮細胞、肝癌細胞、胃癌細胞或胚肺成纖維細胞)，消化后制成單細胞懸液，并調整細胞濃度為17?10 8個/ml，以恰好覆蓋底面量將其加入檢測裝置中的細胞培養觀察區，將上述檢測裝置蓋好，置于5% C02，37°C，100%相對濕度的培養箱中常規培養至細胞貼壁，然后再向培養皿中加入培養液，使培養液量為檢測裝置中似圓柱體高度的2/3，繼續培養并定時觀察細胞培養觀察區內的細胞生長，以檢測實驗細胞是否有接觸抑制的情況。
[0024]觀察時，若實驗細胞生長達到匯合狀態且與皿或圓柱體壁密切接觸后停止生長，即可初步判定為接觸抑制，再繼續培養并經過2、5個細胞周期，實驗細胞仍停止分裂，即確定為實驗細胞出現接觸抑制；反之，在繼續培養后，實驗細胞仍能進行分裂，且呈現堆積生長，并能出現跨越有斜面的積木塊斜面上表面外緣并沿斜面生長現象，則為非接觸抑制。
[0025]是否出現非接觸抑制可以間接用于鑒別正常細胞與惡性腫瘤細胞。通常情況下建系的腫瘤細胞及轉化細胞，當其生長達到單層匯合狀態密度并與細胞培養觀察區的容積壁緊密接觸以后，在不改變培養條件的情況下，細胞仍會出現繼續增殖，并呈堆積性生長狀態；增殖的細胞能跨越有斜面的積木塊斜面上表面外緣，并貼附于斜面表面向外周擴散性生長，表現為非接觸抑制。本實用新型的細胞密度依賴性生長抑制檢測裝置中設置夾角分別為15度、25度、32度、42度的斜面還可進一步用于判定惡性腫瘤細胞及轉化細胞的增殖強弱。
[0026]上述實驗中對于證實已出現接觸抑制的實驗細胞，還可以通過依次分別拆除固定于培養皿中央區域的無斜面的扇形體積木塊，增加其培養觀察區的面積，進一步進行所述實驗細胞接觸抑制釋放現象的觀察。
【主權項】
1.一種細胞密度依賴性生長抑制檢測裝置，由培養皿和透明塑料材質的積木塊組成；其特征在于:所述積木塊形狀似扇形體，由6?10塊組成，其共同組合后的形狀似圓柱體，且用明膠被固定于培養皿中央區域，培養皿中似圓柱體所占面積以外的區域為細胞培養觀察區；其中，所述似圓柱體的底面面積為培養皿底面面積的1/2?2/3，高度為培養皿高度的2/3?4/5，所述組成似圓柱體的積木塊有1/2為能解除固定的扇形體，有1/2設置有自上表面外緣到培養皿底面的斜面，斜面的上表面外緣與培養皿底面有0.5?1.5mm的距離，且斜面的底面與自體上表面外緣連線形成的夾角為15?42度。
2.根據權利要求1所述的細胞密度依賴性生長抑制檢測裝置，其特征在于:所述組成似圓柱體的積木塊有1/2為能解除固定的扇形體，有1/2設置有自上表面外緣到培養皿底面的斜面，且其兩種積木塊間隔排列。
3.根據權利要求1所述的細胞密度依賴性生長抑制檢測裝置，其特征在于:所述積木塊由8塊組成，其共同組合后的形狀似圓柱體，且用明膠被固定于培養皿中央區域，；其中，有4塊為能解除固定的扇形體，有4塊設置有自上表面外緣到培養皿底面的斜面，且其兩種積木塊間隔排列，所述4塊有斜面的積木塊分別命名為A、B、C、D，其斜面的底面與自體上表面外緣連線形成的夾角分別為15度、25度、32度、42度。
【專利摘要】本實用新型公開了一種細胞密度依賴性生長抑制檢測裝置，是由培養皿和透明塑料材質的積木塊組成；所述積木塊形狀似扇形體，由6～10塊組成，其共同組合后的形狀似圓柱體，且被固定于培養皿中央區域，培養皿中似圓柱體所占面積以外的區域為細胞培養觀察區；其中，所述組成似圓柱體的積木塊有1/2為能解除固定的扇形體，有1/2設置有自上表面外緣到培養皿底面的斜面，斜面的上表面外緣與培養皿底面有0.5～1.5mm的距離，且斜面的底夾角為15～42度。本實用新型的裝置為實驗教學提供了一種直觀、方便、靈活、準確檢測細胞接觸抑制的工具。
【IPC分類】C12M1-34
【公開號】CN204325367
【申請號】CN201420814882
【發明人】張尚立, 趙靜, 馬劍鋒, 彭正華, 屈坤
【申請人】山東大學
【公開日】2015年5月13日
【申請日】2014年12月18日