一種超臨界CO₂提取灰樹花中多糖的方法

一種超臨界CO₂提取灰樹花中多糖的方法
【專利摘要】一種超臨界CO2提取灰樹花中多糖的方法，其萃取方法如下：選取新鮮的灰樹花子實體，干燥，粉碎，過篩，得灰樹花粉末；使用CO2作為溶劑，濃度為60?95%的乙醇溶液作為夾帶劑，進行萃取，萃取釜壓力為20?40MPa，溫度為30?55℃，CO2流速控制在5?20L/h，萃取時間為100?180min；將萃取分離得到的萃取液，用復合酶純化,再加入乙醇至濃度90%,靜置醇析24h,4000 r/min離心20min，得沉淀物；將沉淀物在0.4?0.8MPa的，36℃的條件下進行真空干燥，即得灰樹花多糖的干物質，其水分低于8%；提取操作方便、效率高、工藝簡單且極大地提高了生產效率，適宜工業化生產。
【專利說明】
一種超臨界G02提取灰樹花中多糖的方法
技術領域
[0001]本發明涉及灰樹花提取多糖方法，特別涉及一種超臨界CO2提取灰樹花中多糖的方法。
【背景技術】
[0002]灰樹花是一種極具開發價值的珍貴食、藥用真菌，屬擔子菌亞門，層菌綱，無隔擔子菌亞綱，非褶菌目，多孔菌科，又名貝葉多孔菌、千佛菌、栗子蘑、云蕈等，日本稱之舞茸。
[0003]灰樹花中更為人們所矚目的是它的生理活性物質一一多糖。多糖是從灰樹花子實體中分離到的一種真菌多糖，國內外深入開展了作為生物反應調節劑的真菌多糖的研究，灰樹花多糖顯著的療效也逐漸被人們所認識。經過大量的化學和藥理分析發現，灰樹花多糖具有明顯的抗腫瘤，抗HIV病毒，改善免疫系統功能，調節血糖、血脂及膽固醇水平，降血壓等作用，對防止癌細胞的生成和轉移、艾滋病、高血壓、肥胖癥、糖尿病以及免疫系統功能的紊亂都有一定的療效，且無任何毒副作用。
[0004]多糖一般是指聚合度超過一定分子量的多聚糖，其分子量通常在數萬至數百萬，多糖純品實質是一定分子量范圍的均一組分。多糖類抗腫瘤作用與其化學結構高度相關，真菌多糖分子的立體結構對其活性的影響很大，其中一重或三重螺旋結構所占比例較多的活性顯著。灰樹花多糖的抗腫瘤活性與其分子量和分支度密切相關，分支度高而置換率低或分支度低而置換率高時，抗腫瘤活性均消失。多糖溶解性越好，活性越強。
[0005]傳統的灰樹花多糖提取方法主要是采用熱水浸提法、酸浸提法、堿浸提法等。酸或堿浸提法雖能提高提取率，但對設備要求高且極易破壞多糖的結構，還存在環境污染問題。傳統的熱水浸提法時間長、耗能高，活性成分提取得率低。超臨界CO2法提取灰樹花多糖的方法不僅縮短提取時間、降低能耗，同時能提高提取得率。

【發明內容】

[0006]本發明的目的是提供一種超臨界CO2提取灰樹花中多糖的方法，解決現有技術中灰樹花中多糖的提取方法提取工藝步驟復雜，生產周期長成本很高，滿足不了廠家的需求的問題。
[0007]為解決以上問題本發明所采用的方案:
一種超臨界CO2提取灰樹花中多糖的方法，其萃取方法如下:
(1)選取新鮮的、肉質飽滿、無霉變、無蟲蝕的灰樹花子實體，進行干燥，干燥至水分含量為5?10 %，再使用粉碎機粉碎，過80目篩，得灰樹花粉末；
(2)使用CO2作為溶劑，將體積濃度為60-95%的乙醇溶液作為夾帶劑，夾帶劑與灰樹花粉末的質量比為1-2:1;
(3)將夾帶劑均勻噴灑在粉碎后的灰樹花粉末中，加入超臨界萃取釜中進行萃取，萃取釜壓力為20-40MPa，溫度為30-55°C，C02流速控制在5-20L/h，萃取時間為100-180min后得萃取液； (4)將萃取分離得到的萃取液，用復合酶純化萃取液，再加入體積濃度為95%乙醇溶液至質量濃度90%，靜置醇析24h，醇析后將沉淀物進行離心，離心機轉速為:4000 r/min，離心時間:20min，得離心沉淀物；
(5)將步驟4所得離心沉淀物進行真空干燥，真空壓力為:0.4-0.8MPa，溫度為36°C，干燥時間為5-7小時，即得灰樹花多糖的干物質，其水分含量低于8%;
上述的一種超臨界CO2提取灰樹花中多糖的方法，其中，所述的復合酶包括糖化酶和蛋白酶。
[0008]本方案的有益效果:
本發明一種超臨界CO2提取灰樹花中多糖的方法，先對灰樹花子實體進行烘干與粉碎處理，有利于后期與超臨界CO2的萃取工作，同時采用體積濃度為60-95%的乙醇溶液，增加萃取率，使超臨界CO2與灰樹花反應更加完善，增強超臨界0)2的溶解性與選擇性，成本較低，所萃取的灰樹花，可滿足廠家的需求。提取操作方便、效率高、工藝簡單且極大地提高了生產效率，適宜工業化生產。
【具體實施方式】
[0009]以下通過具體實施例對本發明的【具體實施方式】作進一步詳細的說明。
[0010]實施例1:
一種超臨界CO2法提取灰樹花多糖的方法，包括以下步驟:
(I)選取新鮮的、肉質飽滿、無霉變、無蟲蝕的灰樹花子實體，進行干燥，干燥至水分含量為5 %，再使用粉碎機粉碎，過80目篩，得灰樹花粉末。
[0011](2)使用CO2作為溶劑，濃度為60%的乙醇溶液作為夾帶劑，夾帶劑與灰樹花粉末的質量比為1:1。
[0012](3)將夾帶劑均勻噴灑在粉碎后的灰樹花粉末中，加入超臨界萃取釜中進行萃取，萃取釜壓力為20MPa，溫度為30°C，C02流速控制在5L/h，萃取時間為10min后得萃取液。
[0013](4)將萃取分離得到的萃取液，加入蒸餾水，蒸餾水與萃取液體積比為2:1，得稀釋萃取液，并將其保持溫度在60°C，加入與稀釋萃取液質量比為1:5000量的糖化酶，糖化酶的酶活力為:10萬U/g，攪拌處理15min，再用碘液檢測至碘液不變色，冷卻至35°C，得反應萃取液，再加入反應萃取液質量比為I: 10000量的胰蛋白酶，蛋白酶的酶活力為:2500U/g，處理Ih,在280nm下紫外檢測無明顯吸收峰說明蛋白質除盡;加入體積濃度為95%的乙醇溶液直至乙醇的質量濃度達到90%，靜置醇析24h，醇析后將沉淀物進行離心，離心機轉速為:4000r/min，離心時間:20min，得離心沉淀物；
(5)將步驟4所得離心沉淀物進行真空干燥，真空壓力為:0.4MPa，溫度為36 V，干燥時間為5小時，即得灰樹花多糖的干物質，其水分含量低于5.4%。
本實施例最終得到的灰樹花多糖得率為10%，超過工業生產中灰樹花的多糖得率6%-
8% ο
[0014]實施例2:
一種超臨界CO2法提取灰樹花多糖的方法，包括以下步驟:
(I)選取新鮮的、肉質飽滿、無霉變、無蟲蝕的灰樹花子實體，進行干燥，干燥至水分含量為10 %，再使用粉碎機粉碎，過80目篩，得灰樹花粉末。
[0015](2)使用CO2作為溶劑，濃度為95%的乙醇溶液作為夾帶劑，夾帶劑與灰樹花粉末的質量比為2:1。
[0016](3)將夾帶劑均勻噴灑在粉碎后的灰樹花粉末中，加入超臨界萃取釜中進行萃取，萃取釜壓力為40MPa，溫度為55°C，C02流速控制在20L/h，萃取時間為180min后得萃取液。
[0017](4)將萃取分離得到的萃取液，加入蒸餾水，蒸餾水與萃取液體積比為2:1，得稀釋萃取液，并將其保持溫度在60°C，加入與稀釋萃取液質量比為1:5000量的糖化酶，糖化酶的酶活力為:10萬U/g，處理15min，再用碘液檢測至碘液不變色，冷卻至35°C，得反應萃取液，再加入反應萃取液質量比為1:10000量的胰蛋白酶，蛋白酶的酶活力為:2500U/g，處理lh，在280nm下紫外檢測無明顯吸收峰說明蛋白質除盡;加入體積濃度為95%的乙醇溶液直至乙醇的質量濃度達到90%，靜置醇析24h，醇析后將沉淀物進行離心，離心機轉速為:4000 r/min，離心時間:20min，得離心沉淀物；
(5)將步驟4所得離心沉淀物進行真空干燥，真空壓力為:0.SMPa，溫度為36°C，干燥時間為7小時，即得灰樹花多糖的干物質，其水分含量低于3.6%。
本實施例最終得到的灰樹花多糖得率為11%。
[0018]實施例3:
一種超臨界CO2法提取灰樹花多糖的方法，包括以下步驟:
(I)選取新鮮的、肉質飽滿、無霉變、無蟲蝕的灰樹花子實體，進行干燥，干燥至水分含量為7 %，再使用粉碎機粉碎，過80目篩，得灰樹花粉末。
[0019](2)使用CO2作為溶劑，濃度為60%的乙醇溶液作為夾帶劑，夾帶劑與灰樹花粉末的質量比為1.5:1。
[0020](3)將夾帶劑均勻噴灑在粉碎后的灰樹花粉末中，加入超臨界萃取釜中進行萃取，萃取釜壓力為30MPa，溫度為42°C，C02流速控制在12L/h，萃取時間為140min后得萃取液。
[0021](4)將萃取分離得到的萃取液，加入蒸餾水，蒸餾水與萃取液體積比為2:1，得稀釋萃取液，并將其保持溫度在60°C，加入與稀釋萃取液質量比為1:5000量的糖化酶，糖化酶的酶活力為:10萬U/g，處理15min，再用碘液檢測至碘液不變色，冷卻至35°C，得反應萃取液，再加入反應萃取液質量比為1:10000量的胰蛋白酶，蛋白酶的酶活力為:2500U/g，處理lh，在280nm下紫外檢測無明顯吸收峰說明蛋白質除盡;加入體積濃度為95%的乙醇溶液直至乙醇的質量濃度達到90%，靜置醇析24h，醇析后將沉淀物進行離心，離心機轉速為:4000 r/min，離心時間:20min，得離心沉淀物；
(5)將步驟4所得離心沉淀物進行真空干燥，真空壓力為:0.6MPa，溫度為36°C，干燥時間為6小時，即得灰樹花多糖的干物質，其水分含量低于4.2%。
本實施例最終得到的灰樹花多糖得率為13%，遠遠超過工業生產中灰樹花的多糖得率6%-8%0
[0022]僅為本發明較佳的【具體實施方式】，但本發明的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本技術領域的技術人員在本發明揭露的技術范圍內，可輕易想到的變化或替換，都應涵蓋在本發明的保護范圍內。因此，本發明不受本實施例的限制，任何采用等效替換取得的技術方案均在本發明保護的范圍內。
【主權項】
1.一種超臨界CO2提取灰樹花中多糖的方法，其特征在于，其萃取方法如下: 選取新鮮的、肉質飽滿、無霉變、無蟲蝕的灰樹花子實體，進行干燥，干燥至水分含量為5?10 %，再使用粉碎機粉碎，過80目篩，得灰樹花粉末； 使用CO2作為溶劑，將體積濃度為60-95%的乙醇溶液作為夾帶劑，夾帶劑與灰樹花粉末的質量比為1_2:1 ； 將夾帶劑均勻噴灑在粉碎后的灰樹花粉末中，加入超臨界萃取釜中進行萃取，萃取釜壓力為20-40MPa，溫度為30-55°C，C02流速控制在5-20L/h，萃取時間為100-180min后得萃取液； 將萃取分離得到的萃取液，用復合酶純化萃取液，再加入體積濃度為95%的乙醇溶液至質量濃度達到90%，靜置醇析24h，醇析后將沉淀物進行離心，離心機轉速為:4000 r/min，離心時間:20min，得離心沉淀物； 將步驟4所得離心沉淀物進行真空干燥，真空壓力為:0.4-0.SMPa，溫度為36 V，干燥時間為5-7小時，即得灰樹花多糖的干物質，其水分含量低于8%。2.如權利要求1所述的一種超臨界CO2提取灰樹花中多糖的方法，其特征在于，所述的復合酶包括糖化酶和蛋白酶。
【文檔編號】C08B37/00GK106084079SQ201610336165
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年5月20日
【發明人】仲延龍, 朱惠芬
【申請人】江蘇江大源生態生物科技股份有限公司