具有抑制癌細胞生長活性的肽及其應用
【專利摘要】本發明涉及一種具有抑制癌細胞生長活性的肽，屬于醫藥生物領域，所述肽包含如下的氨基酸序列：EDYHWFWLWYQQCPK，其編碼基因包含核苷酸序列gaagattatcattggttttggctgtggtatcagcagtgcccgaaa。本發明的肽具有抑制癌細胞生長活性的作用，尤其對肺癌細胞或子宮頸癌細胞的生長具有抑制活性。
【專利說明】
具有抑制癌細胞生長活性的肽及其應用
技術領域
[0001] 本發明屬于醫藥生物領域，本發明更具體涉及了一種具有抑制癌細胞生長活性的 肽及其應用。
【背景技術】
[0002] 在癌癥發生與治療的過程中，化學治療一直屬于主體部分。現有的臨床使用的化 療藥物，如環磷酰胺、順鉑、阿糖胞苷、阿霉素和長春新堿等，它們主要是用來破壞細胞的周 期的，RNA、DNA和蛋白質都是此類藥物的靶向目標。近年來，As 203在對于白血病的治療上取 得了很大的進展，但是，該藥物和其他化療藥物，其本身都有自己的毒性，不管是一種化療 藥物單獨使用還是幾種化療藥物結合運用在臨床治療上，其在對癌癥有明顯療效，殺傷殺 死癌細胞的同時，也會損害病人的正常細胞。化療藥物的副作用最普遍的就是對病人的骨 髓產生極度抑制，造成病人的極大痛苦，甚至引起死亡。
[0003] 目前對于癌癥的治療主要有以下幾種:手術治療，對于良性腫瘤療效較好，但是對 于沒有包膜包裹的癌癥組織和擴散性腫瘤難以完全根除;放射性治療，是利用某些腫瘤對 射線敏感的特點選擇性地殺死癌細胞，但是對于不敏感型以及易擴散型癌細胞療效較差， 而且在治療過程中也會造成正常細胞的死亡;化學治療，是將對細胞有毒、有害的藥物經由 循環系統帶到全身，雖然對于擴散型癌細胞也有一定療效，但是這種治療方法對于全身的 正常細胞也會造成極大傷害，使癌癥病人在治療癌癥過程中承受巨大的生理和心理的折 磨。因此開發出一種療效好、應用范圍廣、副作用小的抗癌藥物是癌癥患者和醫學工作者的 共同心愿。盡管近幾十年來化療藥物在治療癌癥方面取得了很大的進展，但當前化療藥物 存在的問題仍然很多，如存在的毒性、特異性較低以及易產生耐藥性，探討新型療法成為當 前的研究熱點。
[0004] 生物活性肽通常含有2~20個氨基酸殘基，其活性隨著組成它們的氨基酸不同以 及氨基酸排列順序不同而發生改變。肽具有多種生理功能，如抗氧化、抗增殖、抗微管蛋白 和細胞毒性，肽的這些活性使得它們具有抗癌潛能，這將在癌癥治療中有所貢獻。由于肽具 有很強的穿透腫瘤組織的能力，因此不僅可以到達原發性腫瘤的靶點，還可以到達繼發性 腫瘤的靶點，這些分子主要通過破壞細胞膜的完整性從而迅速殺死靶細胞，所以一般不產 生耐藥性。
【發明內容】
[0005] 本發明目的是針對上述問題，提供一種具有抑制癌細胞生長活性的肽及其應用。
[0006] 本發明的目的在于提供了一種抑制癌細胞生長的肽，其包含氨基酸序列的肽 EDYHWFWLWYQQCPK；
[0007] 作為一種優選方案，本發明提供的肽的序列為EDYHWFWLWYQQCPK。
[0008] 本發明還提供了編碼該短肽的核苷酸序列。
[0009] 作為一種優選方案，編碼上述肽的核苷酸序列包含 gaagattatcattggttttggctgtggtatcagcagtgcccgaaa〇
[0010] 作為一種優選方案，編碼上述肽的核苷酸序列為 gaagattatcattggttttggctgtggtatcagcagtgcccgaaa〇
[0011] 本發明的肽可用于制備具有治療實體腫瘤的藥物。
[0012] 采用化學合成的方法合成本發明的肽，即本領域熟知的已經非常成熟的固相肽合 成方法，可采用Boc方法也可以采用Fmoc方法。具體做法就是將被保護的氨基酸逐個偶聯到 惰性固相載體上去，然后利用強酸將肽鏈從載體上裂解下來，同時去除側鏈保護。
[0013] 本發明的肽具有抑制癌細胞生長活性的作用，尤其對肺癌細胞或子宮頸癌細胞的 生長具有抑制活性。
【具體實施方式】
[0014] 實施例1
[0015] 本發明肽的合成：
[0016] 本發明采用采用化學合成的方法制備所述的肽，即本領域熟知的已經非常成熟的 固相肽合成方法，既可以采用Boc方法也可以采用Fmoc方法。具體做法就是將被保護的氨基 酸逐個偶聯到惰性固相載體上去，然后利用強酸將肽鏈從載體上裂解下來，同時去除側鏈 保護。
[0017] 具體而言，使用Perkin-Elmer公司的ABI433A型多肽合成儀、選用Fmoc/HOBt/ DCCO.lOmmol模式，采用多肽固相合成法進行活性肽單體和酰胺化肽鏈的合成，合成中所用 氨基酸用Fmoc保護，合成用樹脂為HMP樹脂。合成結束后用含0.70g結晶酚，0.25ml二巰基乙 醇，0.8ml硫代苯甲醚，0.5ml去離子水，15mlTFA三氟乙酸的切割試劑將肽從樹脂上切割下 來。用反相高效液相色譜，在C 18柱上進行肽的純化。制備得到氨基酸序列為 EDYHWFWLWYQQCPK 的肽。
[0018] 實施例2
[0019] 抑制癌細胞的試驗：
[0020] 本實施例的目的在于試驗所述肽在一系列腫瘤細胞中的作用，實驗將以生理鹽水 作為陰性對照。選用細胞系為A549(ATCC，U.S.A，目錄號：CCL-185)，Hela，人成骨細胞瘤細 胞系U-20S(P53+，RB-;ATCC，U. S.A，目錄號：HTB-96)，在24孔板培養皿中種入1 X 105腫細 胞，培養液為10%FBS DMEM，第二天吸去液體，按照0.005mg/ml的量加入實施例1制備的肽 或生理鹽水，輕輕晃動液體3次，在37°C、5 %C02中孵育180分鐘。加入含1 %FBS DMEM培養基 至lml，將細胞放置于37°C、5 % C02中孵育3-10天，觀察細胞狀態。
[0021] 實驗結果如下表1所示：
[0022] 表1肽抑制腫瘤細胞生長的實驗結果
[0023]
[0024]由上表可以看出本發明的肽對A549和He la細胞更敏感。
[0025] 實施例3
[0026] 抑制小鼠體內腫瘤的實驗：
[0027]取對數生長期的HepG2細胞細胞株，在無菌條件下制備成lX107/ml細胞懸液，以 0.1ml接種于裸鼠右側腋窩皮下。用游標卡尺測量裸鼠移植瘤直徑，待腫瘤生長至100-200mm3后將動物隨機分組。使用測量瘤徑的方法，動態觀察被試多肽的抗腫瘤效果。腫瘤直 徑的測量次數為每1天測1次。給藥方式均采用尾靜脈注射。陰性對照組注射等量生理鹽水， 每天1次；恩度組3 . Omg/kg，每天給藥1次；實施例1中肽的高中低劑量組分別以10mg/kg、 5mg/kg、lmg/kg為給藥劑量，每天給藥1次。試驗結束后，小鼠處死，手術剝取瘤塊稱重。其結 果見下表2所示：
[0028] 表2肽抑制小鼠體內腫瘤的實驗結果(每組裸鼠數量n = 5)
[0029]
【主權項】
1. 一種肽，其特征在于:所述肽具有抑制癌細胞生長活性，尤其是抑制肺癌細胞或子宮 頸癌細胞的活性。2. 根據權利要求1中所述的肽，該肽包含如下的氨基酸序列:EDYHWFWLWYQQCPK。3. 根據權利要求1中所述的肽，該肽的氨基酸序列如下所示:EDYHWFWLWYQQCPK。4. 一種編碼根據權利要求1所述肽的核苷酸。5. 根據權利要求4所述的核苷酸，其特征在于該核苷酸序列包含 gaagattatcattggttttggctgtggtatcagcagtgcccgaaa〇6. 根據權利要求4所述的核苷酸，其特征在于該核苷酸序列為 gaagattatcattggttttggctgtggtatcagcagtgcccgaaa〇7. 權利要求1-3中的所述肽的應用，其特征在于該應用為抑制腫瘤細胞生長的活性。8. 根據權利要求7中所述的應用，所述的腫瘤細胞是指肺癌細胞或子宮頸癌細胞。
【文檔編號】C12N15/11GK106084012SQ201610538669
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年7月9日
【發明人】王艷瑋, 施放, 王萍萍, 孫明, 周東超, 楊凱, 孫大鵬
【申請人】青島大學