頭孢克洛的藥物組合物及其對急性肺損傷的保護作用
【專利摘要】本發明公開了頭孢克洛的藥物組合物及其對急性肺損傷的保護作用，本發明提供的頭孢克洛的藥物組合物中含有頭孢克洛和一種從石菖蒲的干燥根莖中分離得到的結構新穎的天然產物化合物(Ⅰ)，頭孢克洛和該天然產物單獨作用時，對肺損傷具有防治作用；二者聯合作用時，對肺損傷的防治作用進一步提高，可以開發成防治肺損傷的藥物。本發明與現有技術相比具有突出的實質性特點和顯著的進步。
【專利說明】
頭孢克洛的藥物組合物及其對急性肺損傷的保護作用
技術領域
[0001] 本發明屬于生物醫藥領域，涉及頭孢克洛的新用途，具體涉及一種頭孢克洛的藥 物組合物及其對急性肺損傷的保護作用。
【背景技術】
[0002] 頭孢克洛屬第二代口服頭孢菌素，對多種革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌均具有很 強的殺滅作用。本品為廣譜半合成頭孢菌素類抗生素。對產青霉素酶金黃色葡萄球菌、A組 溶血性鏈球菌、草綠色鏈球菌和表皮葡萄球菌的活性與頭孢羥氨芐相同，對不產酶金黃色 葡萄球菌和肺炎球菌的抗菌作用較頭孢羥氨芐強2~4倍。對革蘭陰性桿菌包括對大腸埃希 菌和肺炎克雷伯菌等的活性較頭孢氨芐強，與頭孢羥氨芐相仿，對奇異變形桿菌、沙門菌屬 和志賀菌屬的活性較頭孢羥氨芐強。
[0003] 該品的作用機制是抑制細菌細胞壁的合成。
[0004] 目前尚未見頭孢克洛與肺損傷防治的相關報道。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的在于提供一種頭孢克洛的藥物組合物，該藥物組合物中含有頭孢克 洛和一種從石菖蒲中分離得到的結構新穎的天然產物，頭孢克洛和該天然產物可以協同治 療肺損傷。
[0006] 本發明的上述目的是通過下面的技術方案得以實現的：
[0007] 一種具有下述結構式的化合物（I)，
[0008]
[0009] -種頭孢克洛的藥物組合物，包括頭孢克洛、如上所述的化合物（I)和藥學上可以 接受的載體。
[0010] 如上所述的化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將石菖蒲的干燥根莖 粉碎，用85~95 %乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和 水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟 (a)中正丁醇萃取物用大孔樹脂除雜，先用8%乙醇洗脫10個柱體積，再用70%乙醇洗脫12 個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗脫 濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為40:1、20:1、10:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫 得到4個組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為8:1、5:1和2:1 的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相 硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個柱體積洗脫液，洗 脫液減壓濃縮得到化合物(I)。
[0011] 進一步地，步驟(a)中用90%乙醇熱回流提取，合并提取液。
[0012]進一步地，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0013] 如上所述的化合物(I)在制備治療肺損傷的藥物中的應用。
[0014] 如上所述的頭孢克洛的藥物組合物在制備治療肺損傷的藥物中的應用。
[0015] 本發明的優點：
[0016] 本發明提供的頭孢克洛的藥物組合物中含有頭孢克洛和一種從石菖蒲中分離得 到的結構新穎的天然產物，頭孢克洛和該天然產物單獨作用時，對肺損傷具有防治作用;二 者聯合作用時，對肺損傷的防治作用進一步提高，可以開發成防治肺損傷的藥物。本發明與 現有技術相比具有突出的實質性特點和顯著的進步。
【具體實施方式】
[0017] 下面結合實施例進一步說明本發明的實質性內容，但并不以此限定本發明保護范 圍。盡管參照較佳實施例對本發明作了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解，可以對 本發明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發明技術方案的實質和范圍。
[0018] 實施例1:化合物(I)分離制備及結構確證
[0019]分離方法：（a)將石菖蒲的干燥根莖（2kg)粉碎，用90 %乙醇熱回流提取（20L X 3 次），合并提取液，濃縮至無醇味(4L)，依次用石油醚(4LX3次）、乙酸乙酯(4LX3次)和水飽 和的正丁醇(4LX3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b) 步驟(a)中正丁醇萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用8%乙醇洗脫10個柱體積，再用70% 乙醇洗脫12個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中 70 %乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為40:1 (8個柱體積）、20 :1 (8個柱體 積）、10:1(8個柱體積)和5:1(10個柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步 驟(c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為8:1(8個柱體積）、5:1(10個柱體積） 和2:1(5個柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷 基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個 柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物（I) (395mg，HPLC歸一化純度大于98% )。
[0020] 結構確證：白色無定形粉末，冊431-1^顯示[1+!1]+為111/2 469.3243，結合核磁特 征可得分子式為〇3〇1144〇4，不飽和度為9。核磁共振氫譜數據511(。。111，00(]13,60〇]\〇2):!1-1 (1.49，m)，H-l(2.91，ddd，J=13.3,7.0,4.2Hz)，H-2(2.41，ddd，J=15.4,6.8,4.2Hz)，H-2 (2.65，ddd，J=15.4，11.2,7.0Hz)，H-5(1.34，d，J=11.2Hz)，H-6(1.48，m)，H-6(1.63，m)， H-7(1.68，m)，H-7(1.87，m)，H-9(2.47，s)，H-16(2.21，d，J=13.1Hz)，H-16(2.43，d，J = 13.1Hz)，H-18(2.46，d，J=8.4Hz)，H-19(1.41，m)，Η-20(1·10，m)，H-21(1.28，m)，H-21 (1.48，m)，H-22(1.36，m)，H-22(1.51，m)，H-23(1.02，s)，H-24(0.82，s)，H-25(1.19，s)，H-26(1.22，s)，H-27(1.36，s)，H-28(0.87，s)，H-29(0.85，d，J = 6.3Hz)，H-30(0.93，d，J = 6 · 1Hz)，OH-12(6 · 38，s);核磁共振碳譜數據δ。(ppm，CDC13，125MHz): 39 · 2(CH2，1-C)，34 · 3 (CH2,2-C)，215.6(C，3-C)，47.5(C，4-C)，55.2(CH，5-C)，19.7(CH2,6-C)，38.4(CH 2,7-C)， 46.5(C，8-C)，54.7(CH，9-C)，37.2(C，10-C)，196.2(C，11-C)，140.8(C，12-C)，143.2(C，13-C)，58.6(C，14-C)，209.4(C，15-C)，54.3(CH2，16-C)，53.4(C，17-C)，48.0(CH，18-C)，39.9 (CH，19-C)，40.5(CH，20-C)，30.8(CH2,21-C)，38.8(CH2,22-C)，26.6(CH 3,23-C)，15.7(CH3， 24-C)，13.7(CH3,25-C)，19.7(CH3,26-C)，14.3(CH3,27-C)，19.3(CH3,28-C)，17.2(CH 3,29-〇,2〇.4((：!13,3〇-〇。紅外波譜表明該化合物含有€[，0-不飽和羰基（1705(^_ 1)，羥基 (3425cm-羰基（1760cm-雙鍵（1663cm-4 和偕二甲基（1380cm-4 基團。13C-匪R、DEPT 和 HSQC譜中顯示有30個碳信號，包括八個甲基，七個亞甲基，五個次甲基，三個羰基，一對四取 代烯烴碳，以及五個季碳，以上功能結構再結合不飽和數表明該化合物為五環三萜結構。 ^-NMR譜結合HSQC譜顯示的六個叔甲基質子信號δ Η 1.02(3H，s)，0.82(3H，s)，1.19(3H，s)， 1.22(3H，s)，1.36(3H，s)和0.87(3H，s)，兩個仲甲基質子信號δ Η 0.85(3H，d，J = 6.3Hz)， 0.93(3!1，(1，1 = 6.1他）以及1!1-匪1?數據表明該化合物為烏蘇烷型三萜類化合物。在該烏蘇 烷型化合物中，C-3、C-11和C-15位形成酮基，C-12與C-13形成雙鍵結構。HMBC譜中H 3-23和 H3-24與C-3，H2-16和H3-27與C-15的相關性以及它們的碳化學位移進一步確證C-3和C-15位 形成酮基。另HMBC譜中H-9和H-18與C-12，H-18和H 3-27與C-13以及OH-12與C-12相關信號以 及它們的碳化學位移表明該化合物存在烯醇式結構，羥基連接在C-12位與C-12和C-13形成 的雙鍵構成烯醇式結構。此外，OH-12和H-9與C-11的相關信號以及碳化學位移確認C-11位 形成羰基。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和NOESY譜，以及文獻關于相關類型核磁數據，可基本確 定該化合物如下所示，立體構型進一步通過ECD試驗確定，理論值與實驗值基本一致。化學 結構式和碳原子編號如下：
[0021]
[0022] 實施例2:藥理作用 [0023] 1、材料與方法
[0024] 1.1動物
[0025]選用健康雄性清潔級SD大鼠，體重320-370g(由南京軍區總醫院動物實驗中心提 供）。動物飼養在溫度(22 ± 1) °C、相對濕度55 %~65 %、12h光照周期的通風干燥環境中，采 用大小鼠維持料1022飼養。
[0026] 1.2試劑與樣品
[0027] 頭孢克洛購自中國藥品生物制品檢定所。化合物（I)自制，制備方法見實施例1。大 鼠腫瘤壞死因子-a(TNF-a)、白細胞介素-6(IL-6)、白細胞介素-IO(IL-IO)，酶聯免疫吸附 法(ELISA)檢測試劑盒購自美國Biosource International公司；大鼠 HMGB1ELISA檢測試劑 盒購自日本Shino-Test公司產品。
[0028] 1.3大鼠分組及模型制備
[0029]采用盲腸結扎穿孔法(CLP)建立膿毒血癥模型，術前禁食12h，以烏拉坦（1250mg/ kg)腹腔注射劑量麻醉，沿腹正中線做一 2cm長的切口，進腹找到盲腸，以4-0絲線環形結扎 盲腸根部，以18G針頭在游離端對穿1次后擠出糞便少許，送回腹腔，隨后依次縫合腹膜和皮 膚。Sham組僅做剖腹、分離盲腸遠端、關腹手術。術后立即皮下注射生理鹽水lmL補充術中液 體丟失。大鼠隨機分為5組，每組10只，分別為假手術組(Sham組）、模型對照組(CLP組）、頭孢 克洛組（l〇mg · kg-Ο、化合物（I)組（10mg · kg-"、頭孢克洛與化合物（I)組合物組【5mg · kg 4頭孢克洛+5mg · kg<化合物（I)】<XLP+藥物組于CLP后即時及6h后腹腔分別注射藥物； Sham組于假手術后即時及6h后、CLP組于CLP后0及6h腹腔分別注射生理鹽水lmL。
[0030] 1.4檢測指標及方法
[0031] 各組動物均于CLP后24h取股靜脈血2mL，離心10min后取血清-80°C保存。采用 ELISA法檢測血清中TNF-a、HMGBl及IL-10的水平。此外，CLP 24h后檢測肺組織干濕重比(W/ D)、髓過氧化物酶活性(ΜΡ0)。
[0032] 1.5統計學方法
[0033] 采用SPSS13.0統計軟件進行統計分析，計量資料以均數土標準差(X 土 s)表示，多 組間比較采用單因素方差分析，P〈〇.05為差異有統計學意義。
[0034] 2、實驗結果
[0035] 2.1對膿毒血癥大鼠 TNF_a、HMGBl及IL-10水平的影響
[0036] 與Sham組比較，CLP明顯增加血漿TNF-a、HMGBl及IL-10水平。CLP+藥物組CLP后24h 時的TNF-a和HMGB1水平低于CLP組；與模型對照組比較，頭孢克洛與化合物（I)組合物組血 漿TNF-a、HMGB1及IL-10水平明顯降低(P<0.01);與模型對照組比較，頭孢克洛組、化合物 (I)組血漿TNF-a、HMGBl及IL-10水平降低(Ρ<0·05)。結果如下。
[0037] 2.2對膿毒血癥大鼠肺組織W/D及ΜΡ0活性的影響
[0038] 與Sham組比較，CLP明顯增加肺組織W/D及ΜΡ0活性，（Ρ〈0·05);而CLP+藥物組肺組 織W/D及ΜΡ0活性低于CLP組。與模型對照組比較，頭孢克洛與化合物（I)組合物組肺組織W/D 及ΜΡ0活性明顯降低(P<0.01);與模型對照組比較，頭孢克洛組、化合物（I)組肺組織W/D及 ΜΡ0活性降低(P<0.05)。結果見下表。
[0039]
[0040] 上述結果表明，頭孢克洛與化合物（I)組合物可以顯著降低膿毒血癥引發的肺損 傷，且效果優于頭孢克洛或化合物（I)單獨作用的結果，可以開發成治療急性肺損傷的藥 物。
[0041] 上述實施例的作用在于說明本發明的實質性內容，但并不以此限定本發明的保護 范圍。本領域的普通技術人員應當理解，可以對本發明的技術方案進行修改或者等同替換， 而不脫離本發明技術方案的實質和保護范圍。
【主權項】
1. 一種具有下述結構式的化合物（I)，2. -種頭抱克洛的藥物組合物，其特征在于:包括頭抱克洛、如權利要求1所述的化合 物(I)和藥學上可W接受的載體。3. 權利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含W下操作步驟：（a)將石 富蒲的干燥根莖粉碎，用85~95%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石 油酸、乙酸乙醋和水飽和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇 萃取物；（b)步驟(a)中正下醇萃取物用大孔樹脂除雜，先用8%乙醇洗脫10個柱體積，再用 70%乙醇洗脫12個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（C)步驟(b) 中70 %乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為40:1、20:1、10:1和5:1的二氯甲 燒-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步驟(C)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比 為8:1、5:1和2:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基 硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個柱 體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。4. 根據權利要求3所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中用90%乙醇熱 回流提取，合并提取液。5. 根據權利要求3所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為AB-8型 大孔吸附樹脂。6. 權利要求1所述的化合物（I)在制備治療肺損傷的藥物中的應用。7. 權利要求2所述的頭抱克洛的藥物組合物在制備治療肺損傷的藥物中的應用。
【文檔編號】A61P11/00GK106083980SQ201610411907
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月13日 公開號201610411907.6, CN 106083980 A, CN 106083980A, CN 201610411907, CN-A-106083980, CN106083980 A, CN106083980A, CN201610411907, CN201610411907.6
【發明人】不公告發明人
【申請人】崔坤峰