鹽酸阿糖胞苷的藥物組合物及其在生物醫藥中的應用
【專利摘要】本發明公開了鹽酸阿糖胞苷的藥物組合物及其在生物醫藥中的應用，本發明提供的鹽酸阿糖胞苷的藥物組合物中含有鹽酸阿糖胞苷和一種結構新穎的天然產物化合物(Ⅰ)，鹽酸阿糖胞苷、化合物(Ⅰ)單獨作用時，對甲狀腺功能亢進具有治療效果；鹽酸阿糖胞苷和化合物(Ⅰ)聯合作用時，對甲狀腺功能亢進的治療效果進一步提高，可以開發成治療甲狀腺功能亢進癥的藥物，與現有技術相比具有突出的實質性特點和顯著的進步。
【專利說明】
鹽酸阿糖胞苷的藥物組合物及其在生物醫藥中的應用
技術領域
[0001] 本發明屬于生物醫藥領域，涉及鹽酸阿糖胞苷的新用途，具體涉及鹽酸阿糖胞苷 的藥物組合物及其在生物醫藥中的應用。
【背景技術】
[0002] 鹽酸阿糖胞苷適用于急性淋巴細胞性及非淋巴細胞性白血病的誘導緩解期或維 持鞏固期、慢性粒細胞性白血病的急變期，也可聯合用于非霍奇金淋巴瘤。也用于病毒性眼 病如樹枝狀角膜炎、角膜虹膜炎、流行性角膜、結膜炎等。
[0003] 迄今為止，尚未見鹽酸阿糖胞苷及其藥物組合物與甲狀腺功能亢進癥的相關性報 道。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的在于提供一種鹽酸阿糖胞苷的藥物組合物，該藥物組合物中含有鹽 酸阿糖胞苷和一種結構新穎的天然產物，鹽酸阿糖胞苷和該天然產物可協同治療甲狀腺功 fb/C?liE〇
[0005] 本發明的上述目的是通過下面的技術方案得以實現的：
[0006] 一種具有下述結構式的化合物（I)，
[0007]
[0008] -種鹽酸阿糖胞苷的藥物組合物，包括鹽酸阿糖胞苷、如權利要求1所述的化合物 (I)和藥學上可以接受的載體，制備成需要的劑型。
[0009] 進一步地，藥學上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、 崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑。
[0010] 進一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、 膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。
[0011] 上述化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將飛揚草粉碎，用60~70%乙 醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃 取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中正丁醇萃取物 用大孔樹脂除雜，先用1 〇 %乙醇洗脫12個柱體積，再用70 %乙醇洗脫15個柱體積，收集70 % 洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠 分離，依次用體積比為50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d) 步驟(c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為10:1、5:1和2:1的二氯甲烷-甲醇 梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積 百分濃度為70 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集7~13個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到 化合物(I)。
[0012] 進一步地，化合物（I)的制備方法中，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0013] 上述化合物(I)在制備治療甲狀腺功能亢進癥的藥物中的應用。
[0014] 上述鹽酸阿糖胞苷的藥物組合物在制備治療甲狀腺功能亢進癥的藥物中的應用。
[0015] 本發明的優點：
[0016] 本發明提供的鹽酸阿糖胞苷的藥物組合物中含有鹽酸阿糖胞苷和一種結構新穎 的天然產物，鹽酸阿糖胞苷、化合物（I)單獨作用時，對甲狀腺功能亢進具有治療效果;鹽酸 阿糖胞苷和化合物（I)聯合作用時，對甲狀腺功能亢進的治療效果進一步提高，可以開發成 治療甲狀腺功能亢進癥的藥物。
【具體實施方式】
[0017] 下面結合實施例進一步說明本發明的實質性內容，但并不以此限定本發明保護范 圍。
[0018] 實施例1:化合物(I)分離制備及結構確證
[0019] 試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化 學試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學試劑有限公司。
[0020] 分離方法：（a)將飛揚草(2kg)粉碎，用65%乙醇熱回流提取(20LX3次），合并提取 液，濃縮至無醇味（4L)，依次用石油醚(4L X 3次）、乙酸乙酯（4L X 3次）和水飽和的正丁醇 (4LX3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中 正丁醇萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫12個柱體積，再用70%乙醇洗脫 15個柱體積，收集70 %洗脫液，減壓濃縮得70 %乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70 %乙醇洗 脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為50:1 (8個柱體積）、25:1 (8個柱體積）、15:1 (8個 柱體積)和5:1(10個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步驟(c)中組分4 用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為10:1(8個柱體積）、5:1(10個柱體積)和2:1(5個柱 體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的 反相硅膠分離，用體積百分濃度為70%的甲醇水溶液等度洗脫，收集7~13個柱體積洗脫 液，洗脫液減壓濃縮得到化合物（I) (HPLC歸一化純度大于98% )。
[0021] 結構確證：白色無定型粉末，HR-ESI-MS顯示[M+H]+為m/z 341.1331，結合核磁特 征可得分子式為〔2()112()〇5，不飽和度為11。核磁共振氫譜數據511(口口111471^(1;[116-(15,5001抱） ： Η-1α(1.25，m)，Η-1β(2·17，m)，H-2(1.09，m，2H)，Η-3α(1.03，dd，J=2.6,11·2Ηζ)，Η-3β (1.49，dd，J = 2.6，11.2Hz)，H-6(5.53，s)，H-90(2.61，d，J = 3.9Hz)，H-ll(5.67，d，J = 4.5， 12.6Hz)，H-12(5.78，d，J=6.5，12.6Hz)，H-13a(3.42，s)，H-17a(6.17，br，s)，H-170(5.54， 1^，8)，!1-18(1.28,8)，!1-19(9.76,8)，!1-20(4.48，111，2!1) ;核磁共振碳譜數據心（卯111， pyridine-d5，125MHz):31.7(CH2，1-C)，19.3(CH 2,2-C)，35.2(CH2,3-C)，58.7(C，4-C)， 145.9(C，5-C)，122.6(CH，6-C)，99.1(C，7-C)，57.8(C，8-C)，24.2(CH，9-C)，38.7(C，10-C)， 128.5(CH，11-C)，124.1(CH，12-C)，48.3(CH，13-C)，217.7(C，14-C)，214.7(C，15-C)，151.9 (C，16-C)，116.7(CH2，17-C)，28.6(CH3，18-C)，207.2(CH，19-C)，66.8(CH2,20-C)。在氫譜中 可以觀察到一個單峰甲基信號[3 111.28(3!1，8，16-18)]，一個醛基信號[6119.76(1!1，8，!1-19)]，一對端稀經質子信號[5[16.17(1!1，131'，8)與5.54(1!1，131'，8)]，一個連氧亞甲基質子信 號[δ Η4.48(2Η，π0]以及三個烯屬次甲基質子信號[SH5.53(lH，s)，5.67(lH，d，J = 4.5， 12.6Hz)與5.78(lH，d，J = 6.5,12.6Hz)];在碳譜中顯示該化合物有20個碳信號，其中有一 組末端雙鍵碳信號，兩組環內雙鍵碳信號，三個酮羰基碳信號，一個半縮醛碳信號以及一個 連氧碳信號。結合以上信息可以得出該化合物可能是一個二萜類化合物，通過文獻發現其 與ent_6a，7α，12β, 14a_Tetrahyd;roxy_19_acetoxy_70，20_epoxykaur_16_en_15_one具有 相似結構。將二者核磁數據進行比較，發現該化合物仍然是ent-kauranoid型的化合物。通 過對新化合物的氫譜以及碳譜進行解析發現，該化合物與已知化合物的主要區別在C-6、C-11和C-12位附近。在HMBC譜圖中，在已知化合物中的C-6位連氧碳上的質子信號在新化合物 中是一個烯質子信號，結合11個不飽和度以及高分辨質譜，故而推測該新化合物和已知化 合物的區別在新化合物中的C-5與C-6之間的雙鍵。進一步的對新化合物的HMBC譜的解析 中，H-18/C-5，H-19/C-5，H-20/C-6之間的相關性證實了新化合物中C-5與C-6之間的雙鍵。 同時，在HMBC譜圖中，!1-11/(：-12，!1-9/(：-12以及!1-13/(：-12的相關性，證實了(：-12和(：-11之 間存在一個雙鍵。此外，根據核磁數據和不飽和度可知C-19位是一個醛基。最后，通過氫譜 數據的比較發現，該新化合物的C-13位的質子向低場位移，而且C-14位上連氧碳信號也缺 失同時多出了一個羰基碳，通過HMBC中H-13/C-14，H-11/C-14之間的相關信號可以說明該 化合物在C-14位是一個羰基。R0ESY譜中，H-19/H-20之間的相關性說明19-醛基是位于α位 的。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和R0ESY譜，以及文獻關于相關類型核磁數據，可基本確定該化 合物如下所示，立體構型進一步通過ECD試驗確定，理論值與實驗值基本一致。該化合物化 學式及碳原子編號如下：
[0022]
v
[0023] 實施例2:藥理作用
[0024] 本實施例使用甲狀腺素片大鼠造模法制備甲狀腺功能亢進大鼠模型，測定大鼠心 率、體溫、體重及血清T3、T4水平的變化。觀察藥物對大鼠甲狀腺功能亢進癥的治療作用。
[0025] 1、材料與方法
[0026] 1.1動物
[0027] SD大鼠60只，體重200±20g，雌雄各半，由廣西醫科大學實驗動物中心提供。
[0028] 1.2試劑與樣品
[0029] 鹽酸阿糖胞苷購自中國藥品生物制品檢定所。化合物（I)自制，制備方法見實施例 1。他巴唑（上海中西制藥有限公司）；甲狀腺素片（天津君安生物制藥公司）生產。 1251_三碘 甲狀腺原氨酸(T3)放射免疫分析試劑盒、1251_四碘甲狀腺素(T4)放射免疫分析試劑盒。
[0030] 1.3儀器
[0031] 實驗動物電子秤(上海醫療器械廠）；肛表、TN型托盤式扭動天平(上海第二天秤儀 器廠）；心電圖儀（日本產）；5417R低溫高速離心機(德國EPPEND0RF公司生產）。
[0032] 1.4大鼠分組及模型制備
[0033]甲亢動物模型制作方法:參照文獻(林蘭等，甲亢寧對甲亢大鼠甲狀腺激素及心鈉 素的影響，中國中醫基礎醫學雜志，2005)，選用甲狀腺素片大鼠造模法，甲狀腺素片以蒸餾 水溶解，按600mg/kg劑量灌胃。造模后的動物表現為興奮、好斗、易驚、體重減輕、飲水及飲 食量增加、心率加快等為造模成功，與陰虛型甲亢患者臨床表現相近似。
[0034]取SD大鼠60只，雌雄各半，造模前常規適應性飼養3d。隨機取10只作為正常對照 組，其余50只按上述方法進行造模。模型制作成功后隨機分為5組:模型對照組、陽性對照組 (他巴唑組，50mg · kg-3和鹽酸阿糖胞苷組(80mg · kg-4、化合物（I)組(80mg · kg-4、鹽酸 阿糖胞苷與化合物（I)組合物組【40mg · kg<鹽酸阿糖胞苷+40mg · kg^1化合物（I)】。造模成 功后，按照上述劑量給藥，每日一次，連續7天。正常對照組與模型對照組小鼠灌胃給予純化 水。
[0035] 1.5心率測定實驗
[0036]分別于治療前、治療后第7d，在大鼠安靜狀況下，用心電圖儀測定心率。
[0037] 1.6體溫測定實驗
[0038]分別于治療前、治療后第7d，于上午8時測定大鼠的肛門溫度。
[0039] 1.7體重測定實驗
[0040]分別于治療前、治療后第7d，大鼠禁食12h后測量其體重。
[0041 ] ^血清^丄的測定實驗
[0042]造模大鼠末次給藥后ld，尾靜脈采血，分離血清，采用放射免疫分析法(RIA)測定， 具體操作按照藥盒說明書進行。
[0043] 1.9統計學方法
[0044]實驗數據用均數土標準差(X土s)表示，應用SPSS18.0版統計軟件進行單因素方差 分析和t檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。
[0045] 2、實驗結果
[0046] 2.1對甲狀腺功能亢進模型大鼠心率、體溫的影響
[0047] 與正常對照組比較，模型對照組心率明顯加快（P<0.01)，體溫明顯升高（P〈 0.01);與模型對照組比較，鹽酸阿糖胞苷與化合物（I)組合物組和陽性對照組心率明顯減 慢(P<0.01)，體溫明顯降低(P<0.01);與模型對照組比較，鹽酸阿糖胞苷組、化合物（I)組 心率減慢(P<〇.〇5)體溫降低(P<0.05)。
[0048] 試驗結果見表1。
[0049 ] 2.2對甲狀腺功能亢進模型大鼠血清T3、T4水平的影響
[0050] 與正常對照組比較，模型對照組血清T3、T4值明顯升高(P<0.01)。與模型對照組 比較，鹽酸阿糖胞苷與化合物（I)組合物組和陽性對照組血清T3、T4值明顯降低(P<0.01); 與模型對照組比較，鹽酸阿糖胞苷組、化合物（I)組血清T3、T4值降低(P<0.05)。
[0051 ] 試驗結果見表2。
[0052]表1對甲狀腺功能亢進模型大鼠心率、體溫、體重的影響 [0053]
[0055] 表2對甲狀腺功能亢進模型大鼠血清T3、T4水平的影響
[0056]
[0057?-甲狀腺功能亢進癥又稱甲狀腺毒癥，是由于甲狀腺內或甲狀腺外的多種原因引起 血中甲狀腺激素過量，作用于全身的組織和器官，造成機體的神經、循環、消化等各系統興 奮性增高和代謝亢進為主要表現的疾病總稱。甲亢是危害人類健康的一種常見內分泌疾 病，患病率約為0. 5%~1 %，可發生于任何年齡，以中青年女性多見。中醫藥在治療甲狀腺 功能亢進癥、改善臨床癥狀方面療效明顯，但臨床和實驗研究僅在深度和廣度上有所進展， 并無重大突破，并缺乏以動物模型開展的藥理研究報告和高水平研究。
[0058] 上述結果表明，鹽酸阿糖胞苷、化合物（I)單獨作用時，對甲狀腺功能亢進具有治 療效果；鹽酸阿糖胞苷和化合物（I)聯合作用時，對甲狀腺功能亢進的治療效果進一步提 高，可以開發成治療甲狀腺功能亢進癥的藥物。
[0059] 上述實施例的作用在于說明本發明的實質性內容，但并不以此限定本發明的保護 范圍。本領域的普通技術人員應當理解，可以對本發明的技術方案進行修改或者等同替換， 而不脫離本發明技術方案的實質和保護范圍。
【主權項】
1. 一種具有下述結構式的化合物（I)，2. -種鹽酸阿糖胞巧的藥物組合物，其特征在于:包括鹽酸阿糖胞巧、如權利要求1所 述的化合物(I)和藥學上可W接受的載體，制備成需要的劑型。3. 根據權利要求2所述的鹽酸阿糖胞巧的藥物組合物，其特征在于:藥學上可W接受的 載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附 載體或潤滑劑。4. 根據權利要求2所述的鹽酸阿糖胞巧的藥物組合物，其特征在于：所述劑型包括片 劑、膠囊劑、日服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注 射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。5. 權利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含W下操作步驟：（a)將飛 揚草粉碎，用60~70%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油酸、乙酸乙 醋和水飽和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b) 步驟(a)中正下醇萃取物用大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫12個柱體積，再用70%乙醇洗 脫15個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（C)步驟(b)中70%乙醇 洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲燒-甲醇梯度 洗脫得到4個組分；（d)步驟(C)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為10:1、5:1 和2:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的 反相硅膠分離，用體積百分濃度為70%的甲醇水溶液等度洗脫，收集7~13個柱體積洗脫 液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。6. 根據權利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為AB-8型 大孔吸附樹脂。7. 權利要求1所述的化合物（I)在制備治療甲狀腺功能亢進癥的藥物中的應用。8. 權利要求2~4任一所述的鹽酸阿糖胞巧的藥物組合物在制備治療甲狀腺功能亢進 癥的藥物中的應用。
【文檔編號】A61K31/7068GK106083876SQ201610382827
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年5月31日 公開號201610382827.2, CN 106083876 A, CN 106083876A, CN 201610382827, CN-A-106083876, CN106083876 A, CN106083876A, CN201610382827, CN201610382827.2
【發明人】黃芳
【申請人】黃芳