鑒定或輔助鑒定具有不同千粒重小麥的方法及其專用引物對的制作方法
【專利摘要】本發明公開了鑒定或輔助鑒定具有不同千粒重小麥的方法及其專用引物對。本發明所提供的引物對，由引物甲和引物乙組成；所述引物甲為如下a1)或a2)：a1)序列表的序列1所示的單鏈DNA分子；a2)將序列1經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列1具有相同功能的DNA分子；所述引物乙為如下a3)或a4)：a3)序列表的序列2所示的單鏈DNA分子；a4)將序列2經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列2具有相同功能的DNA分子。實驗證明，采用本發明提供的引物對可鑒定或輔助鑒定具有不同千粒重的小麥，在小麥育種中具有重要的應用價值。
【專利說明】
鑒定或輔助鑒定具有不同千粒重小麥的方法及其專用引物對
技術領域
[0001] 本發明設及生物技術領域，具體設及鑒定或輔助鑒定具有不同千粒重小麥的方法 及其專用引物對。
【背景技術】
[0002] 小麥是當今世界上最主要的糧食類作物，全世界超過了35%的人把小麥作為主 食，在農業類生產W及國民經濟中均占有及其重要的地位。我國是世界上小麥栽種面積最 大的國家之一，但是，由于我國一直W來地少人多的現實狀況，致使我國也是當今世界上最 大的小麥進口國，平均每年進口小麥總量高達1〇,〇〇〇,〇〇〇噸，因此我國急需提高小麥產量。 小麥產量受單位面積穗數、穗粒數和千粒重=個因素的影響，=者關系的協調是取得小麥 高產的關鍵。而在小麥產量構成因素中受遺傳效應的影響最大是小麥的千粒重，廣義遺傳 力要高達59%-80%，而小麥巧粒大小相關指標粒長、粒寬是決定千粒重的重要因子。因 此，建立快速、準確W及高通量的鑒定或輔助鑒定小麥千粒重性狀的方法，能夠縮短小麥育 種所需年限并且選育出高產優質的小麥品種。
[0003] 高分辨率溶解曲線分析技術巧igh Resolution Melting Qirve Analysis，HRM) 是一項應用于檢測單核巧酸多態性的分析性新技術，該技術是根據不同堿基序列進行PCR 擴增反應后形成的雙鏈DNA分子的溶解溫度存在差異的運一物理性質，在同一反應容器中 對堿基序列進行高分辨率溶解，利用可與雙鏈DNA分子結合的飽和巧光染料運行HRM程序： 即將PCR擴增產物從低到高W每次不到0. rC逐步升溫(在60°C~95°C范圍內），雙鏈DNA分 子在運一過程中達到一定溫度后解鏈，巧光染料隨其解鏈會脫落，并停止發出巧光信號。W 巧光強度變化為縱坐標，解鏈溫度為橫坐標，得到相應的特征性溶解曲線，再根據特征性溶 解曲線形態變化即可判斷雙鏈DNA分子性質的差異。HRM還具有高通量、高靈敏度、特異性 好、重復性好、操作簡便和適用范圍廣等優點。
【發明內容】
[0004] 本發明所要解決的技術問題是如何鑒定或輔助鑒定具有不同千粒重的小麥。
[0005] 為解決上述技術問題，本發明首先提供了引物對。
[0006] 本發明所提供的引物對，可由引物甲和引物乙組成；
[0007] 所述引物甲可為如下al)或曰2):
[000引 a 1)序列表的序列1所示的單鏈DNA分子；
[0009] a2)將序列1經過一個或幾個核巧酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列1具有相 同功能的DNA分子；
[0010] 所述引物乙可為如下日3)或曰4):
[00川日3)序列表的序列2所示的單鏈DNA分子；
[0012] a4)將序列2經過一個或幾個核巧酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列2具有相 同功能的DNA分子。
[001引所述引物對中，所述引物甲和所述引物乙的摩爾比可化：1。
[0014] 所述引物對的用途為鑒定或輔助鑒定具有不同粒重小麥。所述粒重可為千粒重。
[0015] 所述引物對在制備用于鑒定或輔助鑒定具有不同粒重小麥的試劑盒或鑒定具有 不同粒重的小麥中的應用也屬于本發明的保護范圍。
[0016] 上述應用中，所述粒重可為千粒重。
[0017] 為解決上述技術問題，本發明還提供了鑒定或輔助鑒定具有不同粒重小麥的試劑 盒。
[0018] 本發明所提供的鑒定或輔助鑒定具有不同粒重小麥的試劑盒，包括所述引物對。
[0019] 上述試劑盒中，所述粒重可為千粒重。
[0020] 所述試劑盒在鑒定具有不同粒重的小麥中的應用也屬于本發明的保護范圍。
[0021] 上述應用中，所述粒重可為千粒重。
[0022] 為解決上述技術問題，本發明還提供了所述試劑盒的制備方法。
[0023] 本發明所提供的所述試劑盒的制備方法，可為如下（I)或（n):
[0024] (I)所述引物對中各條引物分別單獨包裝；
[0025] (n)所述引物對中各條引物按照權利要求2所述比例混合在一起。所述引物甲和 所述引物乙的摩爾比具體可為1:1。
[0026] 為解決上述技術問題，本發明還提供了一種鑒定或輔助鑒定具有不同粒重小麥的 方法。
[0027] 本發明所提供的鑒定或輔助鑒定具有不同粒重小麥的方法，可包括如下步驟：
[00%] 1)W待測小麥的基因組DNA為模板，采用所述引物對進行HRM反應，得到樣本溶解 曲線；W標準小麥甲的基因組DNA為模板，采用所述引物對進行HRM反應，得到b型溶解曲線； W標準小麥乙的基因組DNA為模板，采用所述引物對進行HRM反應，得至Ija型溶解曲線；
[0029]所述標準小麥甲為京紅5號、內麥11、晉麥3號、梁來友白皮小麥、畢紅穗、小白麥、 大白皮、小紅皮、定興寨、紅粒當年老、春小麥、大紅麥、陜西白麥、牛趾甲、麻花板、紅金麥、 白齊麥、小口紅、蘭花麥、帶芒紅麥、緑鹿冬麥、紅麥、紅老麥、有芒白釋、紅皮冬麥、磐石無 芒、有芒白釋、白秋麥、老麥、中優9507、呂旱328、延安11、農大183、線麥、江西早、紅花早、江 東口、大黃皮、崇陽紅麥1、早五天、六柱頭、贈不知、豬毛元字頭、水里站、黃水白、落青、早小 麥、望水白、婪源麥、車銅子、和尚麥、懦麥、芒小麥、立顆寸、泡子麥、麵英5號、安徽3號、浙麥 1號、洋麥、火球、大青芒、新曙光1號、新曙光6號、吉春1016、鄭引4號、南大2419、0rofen、水 原86、1'1'；[1111^|11、10￥1'；[]110、教德薩3號、13]1〇1'；[、潮安小麥、赤殼、松蕊麥、深根、抗誘10號、臺 中23、晉麥2418、敵誘早、徑陽60、石特14、復壯30、豐產3號、百農3217、西農6028、冀麥2號、 內鄉5號、鄭州6號、咸農39、濟南17、小偃6號、陜農7859、矮豐3號、魯麥1號、萊州953、鄭州 741、白芒麥、黃瓜先、半截忙、老來瞎、峻姑腦、紅狗豆、白火麥、=月黃、紅搶場、蝴子麥、平 原50、白扁穗、白齊麥、白秀子頭、有芒掃谷旦、阜陽紅、搶場麥、火麥、霉前五、堿麥、立月黃、 小佛手、紅和尚頭、大口麥、白條魚、白芒麥、大玉花、府麥、老齊麥、紫賴紅、大粒半芒、六月 黃、葛家鄉、葛爾紅麥、大春白四棱麥、白朗灰麥、扎紅、邊己春麥-6、白芒小麥、烏江卓、木宗 卓嗔、藏冬4號、一枝麥、大白麥、巧老漢、火里炎、紅秀子、白大頭、金黃麥、大白麥、白齊頭、 白媽昨、老秀頭、高原506、寧春4號、金麥4號、蜀萬8號、繁6、畢麥26、去麥34、興義4號、鳳麥 11、同家巧小麥、紅花麥、白麥子、成都光頭、換香果、小S月黃、紅須麥、紫皮、白芒麥、魚餓 麥、洋麥、豬尿麥、扁頭光殼麥、長芒石扁頭、豬狗麥、濱西紅殼洋麥、白冬麥、紅春麥、春麥、 無芒春麥、紅金包銀、喀什白皮、托克遜1號、中國春、鄭麥9023或偃展1號；
[0030] 所述標準小麥乙為紅皮小麥、火瞭麥、假紅麥、小白芒、晉麥8號、豐抗2號、長治 6406、北京8號、原冬822、農大311、農大139、銘賢169、東方紅3號、蘭溪早小麥、華東6號、蘇 麥3號、揚麥158、恩麥4號、鄂麥6號、白油麥、敦化春麥、光頭、新克旱9號、克豐3號、克潰4號、 東農 101、赤小麥、Funo、Ka趾日3、農林 10號、錢交麥、Early Premium、Villa Glori、Atlas66、 甘肅96、上林小麥、碧媽1號、碧媽4號、石家莊54、平陽27、泰山1號、濟南2號、蝴包、煙農15、 石家莊407、溫麥6號、西山扁穗、媽昨麥、秀芒麥、出山豹、本地黃花麥、墨脫小麥、康定小麥、 日喀則54號、日喀則8號、山麥、紅芒麥、甘麥8號、青春28、互助紅、定西24、會寧10號、貴農10 號、醬麥、白花麥、漢中白、梭條紅麥、紅芒子、陽麥、紅冬麥、紅春麥、新冬2號或喀什1號；
[0031] 2)比較樣本溶解曲線、a型溶解曲線和b型溶解曲線，如果樣本溶解曲線與a型溶解 曲線一致、待測小麥為B基因型，如果樣本溶解曲線與b型溶解曲線一致、待測小麥為A基因 型;然后進行如下dl)或d2)的判斷：
[0032] dl)A基因型的待測小麥的粒重大于B基因型的待測小麥；
[0033] d2)A基因型的待測小麥的粒重大于非A基因型的待測小麥。
[0034] 上述方法中，所述粒重為千粒重。
[0035] 上述方法中，所述大于為在統計學上的大于。
[0036] 上述方法中，所述"采用所述引物對進行HRM反應"的HRM反應體系由待測小麥品種 的葉片的基因組DNA、所述引物甲、所述引物乙、Light切cler HRM Master Mix、MgCl2和水 組成;其中Li曲tCycler HRM Master Mix為Roche公司的產品。
[0037] 12.5化的所述HRM反應體系中，待測小麥品種的葉片的基因組DNA為60ng，所述引 物甲的濃度為0.325皿ol/L，所述引物乙的濃度為0.325皿ol/L，MgCl2的濃度為1.5mol/L， LightCycler HRM Master Mix為6.25化。
[0038] 上述方法中，所述"采用所述引物對進行HRM反應，得到樣本溶解曲線"的步驟具體 如下：
[0039] (1)制備所述HRM反應體系，然后進行PCR擴增反應；
[0040] (2)取完成步驟(1)的PCR擴增產物，依次進行如下反應:95°C作用30s;降低到50°C 作用30s;逐漸升高溫度到95°C，期間每升高rC收集巧光信號25次;迅速降溫至37°C作用 5s。W巧光強度變化為縱坐標，解鏈的溫度為橫坐標，得到特征性溶解曲線。所述步驟（1) 中，進行PCR擴增反應的儀器可為Roche LightCycler 96。
[0041 ] 所述步驟（1)中，進行PCR擴增反應的PCR程序可為:94°C變性5min;94°C變性30s， 58°C退火29s，72°C延伸6s，45個循環；72°C延伸2min。
[0042] 上述任一所述引物對、上述任一所述試劑盒或上述任一所述方法在小麥育種中的 應用也屬于本發明的保護范圍。
[0043] 實驗證明，采用本發明提供的引物對可鑒定或輔助鑒定具有不同千粒重的小麥， 在小麥育種中具有重要的應用價值。
【附圖說明】
[0044] 圖1為特征性溶解曲線。
[0045] 圖2為特征性溶解曲線。
【具體實施方式】
[0046] 下面結合【具體實施方式】對本發明進行進一步的詳細描述，給出的實施例僅為了闡 明本發明，而不是為了限制本發明的范圍。
[0047] 下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規方法。
[0048] 下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。
[0049] W下實施例中的定量試驗，均設置=次重復實驗，結果取平均值。
[0050] 小麥核屯、種質就是用最小的小麥種質數量和遺傳重復，最大程度地代表了整個小 麥種質資源的多樣性，而小麥微核屯、種質則是從小麥核屯、種質中進一步選擇一個核屯、子 集，也即小麥核屯、種質的核屯、種質，使用更小的種質資源代表了整個種質庫的遺傳多樣性。 我國共有23090份小麥種質資源，針對運些小麥種子資源構建了 1160份的小麥核屯、種質，W 5.0 %的樣本量代表了小麥種質資源90.1 %的遺傳多樣性。進一步從1160份的小麥核屯、種 質中篩選出表1所示的262個種質材料，作為我國的小麥微核屯、種質。262個小麥品種的冬春 性和產地見表1。表1中所示的262個小麥品種均記載與如下文獻中：郝晨陽等2008,我國普 通小麥核屯、種質的構建及遺傳多樣性分析，科學通報，2008,53(8) ,908-915。
[0051] Light切cler HRM Master Mix和Roche Light切cler 96儀器均為Roche公司產 品。
[0052] 實施例1、測定不同小麥品種的性狀
[0053] 1、小麥巧粒的獲得
[0化4] 2013~2014年，將262個小麥品種的種子分別種植于中國農業科學院試驗基地(位 于北京市），獲得不同小麥品種的小麥巧粒。
[0055] 2013~2014年，將262個小麥品種的種子分別種植于洛陽農林科學院試驗基地(位 于河南省洛陽市），獲得不同小麥品種的小麥巧粒。
[0056] 2014~2015年，將262個小麥品種的種子分別種植于西北農林科技大學試驗基地 (位于陜西省楊凌示范區），獲得不同小麥品種的小麥巧粒。
[0057] 2、測量不同小麥品種的小麥巧粒的平均粒長、平均粒寬和平均千粒重
[0058] A、采用手工測量法測量種植于中國農業科學院試驗基地的不同小麥品種的小麥 巧粒的粒長、粒寬和千粒重
[0059] (1)隨機取種植于中國農業科學院試驗基地的小麥品種的小麥巧粒100粒，計算粒 長和粒寬：
[0060] 粒長:根據長度方向進行緊密排列，記錄100粒巧粒的總粒長，取平均值；
[0061] 粒寬:根據寬度方向進行緊密排列，記錄100粒巧粒的總粒寬，取平均值。
[0062] 每個小麥品種需重復=次，=次結果取平均值，得到種植于中國農業科學院試驗 基地的不同小麥品種的小麥巧粒的粒長和粒寬。
[0063] (2)隨機取種植于中國農業科學院試驗基地的小麥品種的小麥巧粒200粒，稱重并 計算千粒重。
[0064] 每個小麥品種需重復=次，=次結果取平均值，得到種植于中國農業科學院試驗 基地的不同小麥品種的小麥巧粒的千粒重。
[0065] B、采用手工測量法測量種植于洛陽農林科學院試驗基地的不同小麥品種的小麥 巧粒的粒長、粒寬和千粒重
[0066] 按照步驟A的方法，將中國農業科學院試驗基地替換為洛陽農林科學院試驗基地， 其它步驟均不變，獲得種植于洛陽農林科學院試驗基地的不同小麥品種的小麥巧粒的粒 長、粒寬和千粒重。
[0067] C、采用萬深SC-G自動考種分析及千粒重儀測量種植于西北農林科技大學試驗基 地的不同小麥品種的小麥巧粒的粒長、粒寬和千粒重
[0068] 粒長:隨機取種植于西北農林科技大學試驗基地的小麥品種的小麥巧粒100粒，采 用萬深SC-G自動考種分析及千粒重儀測量粒長，取平均值；
[0069] 粒寬：隨機取種植于西北農林科技大學試驗基地的小麥品種的小麥巧粒100粒，采 用萬深SC-G自動考種分析及千粒重儀測量粒寬，取平均值；
[0070] 千粒重:隨機取種植于西北農林科技大學試驗基地的小麥品種的小麥巧粒200粒， 采用萬深SC-G自動考種分析及千粒重儀稱重，并計算千粒重。
[0071] 每個小麥品種需重復=次，=次結果取平均值，獲得種植于西北農林科技大學試 驗基地的不同小麥品種的小麥巧粒的粒長、粒寬和千粒重。
[0072] D、不同小麥品種的小麥巧粒的平均粒長、平均粒寬和平均千粒重的獲得
[0073] (1)將同一小麥品種的種植于中國農業科學院試驗基地的小麥巧粒的粒長、種植 于洛陽農林科學院試驗基地的小麥巧粒的粒長和種植于西北農林科技大學試驗基地的小 麥巧粒的粒長取平均值，得到該小麥品種的平均粒長。
[0074] (2)將同一小麥品種的種植于中國農業科學院試驗基地的小麥巧粒的粒寬、種植 于洛陽農林科學院試驗基地的小麥巧粒的粒寬和種植于西北農林科技大學試驗基地的小 麥巧粒的粒寬取平均值，得到該小麥品種的平均粒寬。
[0075] (3)將同一小麥品種的種植于中國農業科學院試驗基地的小麥巧粒的千粒重、種 植于洛陽農林科學院試驗基地的小麥巧粒的千粒重和種植于西北農林科技大學試驗基地 的小麥巧粒的千粒重取平均值，得到該小麥品種的平均千粒重。
[0076] 不同小麥品種的平均粒長、平均粒寬和平均千粒重的測量結果見表1。
[0077] 表 1
[0084]
[0085] 實施例2、特征性溶解曲線與小麥巧粒性狀的關聯分析
[0086] 一、引物對的制備
[0087] 由寶生物工程化連)有限公司合成引物甲和引物乙，引物甲的核巧酸序列為:5'- TGTGGTGATGAGTTCATGGTTAA-3 '（序列表中序列1所示），引物乙的核巧酸序列為：5 ' - ACGTCGGCACCCCTCA-3 '（序列表中序列2所示）。引物甲和引物乙的純化級別均為HPLC。
[008引引物對由引物甲和引物乙組成。
[0089]二、基因分型的方法
[0090] 1、基因組DNA的提取
[0091] 提取待測小麥的葉片的基因組DM。待測小麥為表1中的262個小麥品種。
[0092] 2、制備HRM反應體系
[0093] HRM反應體系（12.扣L)由待測小麥品種的葉片的基因組DNA (6化g)、引物甲、引物 乙、6.2扣L Light切cler HRM Master Mix、MgCl2和水組成；其中引物甲的濃度為0.37扣 mol/L，引物乙的濃度為0.375皿ol/L，MgCl2的濃度為1.5mol/L。
[0094] 3、HRM 反應
[00巧](1)取步驟2制備的反應體系，置于Roche Li曲tCycler 96儀器，進行PCR擴增反 應，PCR程序為:94°C變性5min;94°C變性3〇3,56°(：退火293,72°(：延伸63,45個循環;72°(：延 伸2min。
[0096] (2)完成步驟（1)后，進行如下反應:首先95°C作用30s(目的為與巧光染料結合）； 然后降低到50°C作用30s(目的為使解旋的DNA單鏈再重新結合為雙鏈結構）；再然后逐漸升 高溫度到95°C(目的為解鏈），期間每升高rC收集巧光信號25次;最后迅速降溫至37°C作用 5s。W巧光強度變化為縱坐標，解鏈的溫度為橫坐標，得到特征性溶解曲線。采用IBM SPSS Statistics 22軟件分析特征性溶解曲線。
[0097] 部分實驗結果見圖l(a為碧媽4號，b為赤殼)結果表明，待測小麥品種進行HRM反應 獲得的特征性溶解曲線分為a型和b型兩種。
[0098] 根據HRM反應的特征性溶解曲線結果，得出如下結論：W待測小麥的基因組DNA為 模板，用引物甲和引物乙組成的特異引物對進行HRM反應，得到特征性溶解曲線，之后進行 如下評判:如果所述特征性溶解曲線呈現b型，則所述待測小麥的基因型為A;如果所述特征 性溶解曲線呈現a型，則所述待測小麥的基因型為B。
[0099] 按照上述方法對262個小麥品種的基因型進行分型，實驗結果見表1和圖2(a為基 因型為B的待測小麥，b為基因型為A的待測小麥）。結果表明，186個小麥品種的基因型為A， 76個小麥品種的基因型為B。
[0100] =、特征性溶解曲線與小麥相關性狀的關聯分析
[0101] 對基因型A和基因型B兩種類型小麥巧粒的千粒重、粒長和粒寬進行統計，結果見 表2。結果表明，基因型A的小麥品種的千粒重顯著高于基因型B的小麥品種(P<0.05)，而基 因型A的小麥品種的粒寬和基因型B的小麥品種的粒寬無顯著差異，基因型A的小麥品種的 粒長和基因型B的小麥品種的粒寬也無顯著差異。
[0102] 表2
[0103]
【主權項】
1. 引物對，由引物甲和引物乙組成； 所述引物甲為如下al)或a2): al)序列表的序列1所示的單鏈DNA分子； a2)將序列1經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列1具有相同功 能的DNA分子； 所述引物乙為如下a3)或a4): a3)序列表的序列2所示的單鏈DNA分子； a4)將序列2經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列2具有相同功 能的DNA分子。2. 如權利要求1所述的引物對，其特征在于:所述引物對中，所述引物甲和所述引物乙 的摩爾比為1:1。3. 權利要求1或2所述引物對在制備用于鑒定或輔助鑒定具有不同粒重小麥的試劑盒 或鑒定具有不同粒重小麥中的應用。4. 鑒定或輔助鑒定具有不同粒重小麥的試劑盒，包括權利要求1或2所述引物對。5. 權利要求4所述試劑盒在鑒定具有不同粒重小麥中的應用。6. 權利要求4所述試劑盒的制備方法，為如下（I)或（Π ): (I)所述引物對中各條引物分別單獨包裝； (Π )所述引物對中各條引物按照權利要求2所述比例混合在一起。7. -種鑒定或輔助鑒定具有不同粒重小麥的方法，包括如下步驟： 1)以待測小麥的基因組DNA為模板，采用權利要求1所述引物對進行HRM反應，得到樣本 溶解曲線；以標準小麥甲的基因組DNA為模板，采用權利要求1所述引物對進行HRM反應，得 至Ijb型溶解曲線；以標準小麥乙的基因組DNA為模板，采用權利要求1所述引物對進行HRM反 應，得到a型溶解曲線； 所述標準小麥甲為京紅5號、內麥11、晉麥3號、梁來友白皮小麥、畢紅穗、小白麥、大白 皮、小紅皮、定興寨、紅粒當年老、春小麥、大紅麥、陜西白麥、牛趾甲、麻花板、紅金麥、白齊 麥、小口紅、蘭花麥、帶芒紅麥、涿鹿冬麥、紅麥、紅老麥、有芒白稃、紅皮冬麥、磐石無芒、有 芒白稃、白秋麥、老麥、中優9507、呂旱328、延安11、農大183、線麥、江西早、紅花早、江東門、 大黃皮、崇陽紅麥1、早五天、六柱頭、蝴不知、豬毛元字頭、水里站、黃水白、落青、早小麥、望 水白、婺源麥、車锎子、和尚麥、懦麥、芒小麥、三顆寸、泡子麥、_英5號、安徽3號、浙麥1號、 洋麥、火球、大青芒、新曙光1號、新曙光6號、吉春1016、鄭引4號、南大2419、Orofen、水原86、 Triumph、Lovrin 10、敖德薩3號、Tanori、潮安小麥、赤殼、松蕊麥、深根、抗銹10號、臺中23、 晉麥2418、敵銹早、涇陽60、石特14、復壯30、豐產3號、百農3217、西農6028、冀麥2號、內鄉5 號、鄭州6號、咸農39、濟南17、小偃6號、陜農7859、矮豐3號、魯麥1號、萊州953、鄭州741、白 芒麥、黃瓜先、半截忙、老來瞎、螻蛄腚、紅狗豆、白火麥、三月黃、紅搶場、蚰子麥、平原50、白 扁穗、白齊麥、白秀子頭、有芒掃谷旦、阜陽紅、搶場麥、火麥、霉前五、堿麥、三月黃、小佛手、 紅和尚頭、大口麥、白條魚、白芒麥、大玉花、府麥、老齊麥、紫秸紅、大粒半芒、六月黃、葛家 鄉、葛爾紅麥、大春白四棱麥、白朗灰麥、扎紅、邊巴春麥-6、白芒小麥、烏江卓、木宗卓嘎、藏 冬4號、一枝麥、大白麥、雜老漢、火里炎、紅秀子、白大頭、金黃麥、大白麥、白齊頭、白螞蚱、 老秀頭、高原506、寧春4號、金麥4號、蜀萬8號、繁6、畢麥26、去麥34、興義4號、鳳麥11、同家 壩小麥、紅花麥、白麥子、成都光頭、換香果、小三月黃、紅須麥、紫皮、白芒麥、魚鰍麥、洋麥、 豬屎麥、扁頭光殼麥、長芒石扁頭、豬狗麥、滇西紅殼洋麥、白冬麥、紅春麥、春麥、無芒春麥、 紅金包銀、喀什白皮、托克遜1號、中國春、鄭麥9023或偃展1號； 所述標準小麥乙為紅皮小麥、火燎麥、假紅麥、小白芒、晉麥8號、豐抗2號、長治6406、北 京8號、原冬822、農大311、農大139、銘賢169、東方紅3號、蘭溪早小麥、華東6號、蘇麥3號、揚 麥158、恩麥4號、鄂麥6號、白油麥、敦化春麥、光頭、新克旱9號、克豐3號、克澇4號、東農101、 赤小麥、Funo、KaBka3、農林 10號、錢交麥、Early Premium、Villa 61〇1'；[、41:1&866、甘肅96、 上林小麥、碧螞1號、碧螞4號、石家莊54、平陽27、泰山1號、濟南2號、蚰包、煙農15、石家莊 407、溫麥6號、西山扁穗、螞蚱麥、禿芒麥、出山豹、本地黃花麥、墨脫小麥、康定小麥、日喀則 54號、日喀貝IJ8號、山麥、紅芒麥、甘麥8號、青春28、互助紅、定西24、會寧10號、貴農10號、醬 麥、白花麥、漢中白、梭條紅麥、紅芒子、陽麥、紅冬麥、紅春麥、新冬2號或喀什1號； 2)比較樣本溶解曲線、a型溶解曲線和b型溶解曲線，如果樣本溶解曲線與a型溶解曲線 一致、待測小麥為B基因型，如果樣本溶解曲線與b型溶解曲線一致、待測小麥為A基因型;然 后進行如下dl)或d2)的判斷： dl )A基因型的待測小麥的粒重大于B基因型的待測小麥； d2)A基因型的待測小麥的粒重大于非A基因型的待測小麥。8.權利要求1或2所述引物對，或，權利要求4所述試劑盒，或，權利要求7所述方法在小 麥育種中的應用。
【文檔編號】C12N15/11GK106048074SQ201610694430
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年8月19日
【發明人】高欣, 梁園園, 王中華, 李學軍
【申請人】西北農林科技大學