一種處理支原體污染的試劑、及其試劑盒和處理方法
【專利摘要】本發明公開了一種處理支原體污染的試劑、及其試劑盒和處理方法，所述試劑為包含抗生素太妙菌素、二甲胺四環素和抗生素環丙沙星的溶液；其中，所述抗生素太妙菌素、所述二甲胺四環素與所述二甲胺四環素，三者的濃度比值為4：1：3。本發明的處理支原體污染的試劑、及其試劑盒和處理方法，采用了特定比例的抗生素太妙菌素、二甲胺四環素與二甲胺四環素的三者的組合，能顯著提高支原體污染處理的效果；并且能夠簡便、安全且快速有效地處理支原體污染的問題。
【專利說明】
一種處理支原體污染的試劑、及其試劑盒和處理方法
技術領域
[0001]本發明涉及一種處理支原體污染的試劑、及其試劑盒和處理方法，屬于生物技術領域。
【背景技術】
[0002]支原體(Mycoplasma)污染是細胞培養過程中最常見的污染之一，特別是在哺乳動物細胞的培養過程中，支原體污染問題尤其令人頭疼，主要原因有以下三點:I)支原體體積非常小，直徑為0.ιμπι，一般過濾除菌無法去除，光學顯微鏡下難以看清它的形態結構;2)支原體生命力頑強，能在偏堿條件(pH 7.6?8.0)下生存，且對青霉素有抗藥性;3)細胞受支原體污染初期，部分敏感細胞可見細胞生長增增殖變慢、形態變圓。但多數細胞污染后無明顯變化，或略有變化，若不及時處理，還會產生交叉污染。支原體最終會導致細胞死亡，不過更常見的情況是，支原體與細胞共存;在這過程當中，支原體慢慢增殖，直至對細胞產生明顯的影響，如干擾細胞迀移、信號轉導、淋巴細胞活化和細胞因子表達。
[0003]對于相關科研工作者來說，最可怕的是支原體污染在不知不覺中改變許多參數，使研究成果的可信度大打折扣，甚至造成重大損失。
[0004]遭受支原體污染的細胞一般被直接扔棄;但有一些特殊的情況下，需要保留細胞；因此在確認發生支原體污染后，需要通過一些比較特殊的實驗進行處理來保留細胞。
[0005]因此需要一種能夠處理支原體污染、并能夠拯救被污染的細胞的處處理試劑盒。
【發明內容】
[0006]鑒于相關技術的上述問題和/或其他問題，本發明一方面提供了一種處理支原體污染的試劑，所述試劑為包含抗生素太妙菌素、二甲胺四環素和抗生素環丙沙星的溶液;其中，所述抗生素太妙菌素、所述二甲胺四環素與所述二甲胺四環素，三者的濃度比值為4:1:3。
[0007]優選的，所述試劑為所述抗生素太妙菌素、二甲胺四環素和抗生素環丙沙星溶解于無菌雙蒸水所形成的溶液。
[0008]本發明另一方面提供了一種處理支原體污染的試劑盒，所述試劑盒包括上述的試劑。
[0009]優選的，所述抗生素太妙菌素的濃度為20mg/ml，所述二甲胺四環素的濃度5mg/ml，所述抗生素環丙沙星的濃度為15mg/ml。
[0010]優選的，所述試劑盒中，所述試劑的規格為10ml、50ml、20ml或1ml。
[0011]本發明再一方面提供了一種處理支原體污染的方法，其中，將上述的試劑，或者上述試劑盒中的試劑與新鮮培養基混合以獲得抗生素培養基，所述抗生素培養基中的所述抗生素太妙菌素的濃度為20mg/ml，所述二甲胺四環素的濃度5mg/ml，所述抗生素環丙沙星的濃度為15mg/ml;將待處理的細胞培養物添加到所述抗生素培養基中，培養3天后，舍棄舊的培養基;再更換新的所述抗生素培養基，培養3天；如此循環，直至檢測不到支原體污染情況。
[0012]優選的，所述待處理的細胞培養物的培養條件如下:細胞培養密度大約為50000?100000個/ml，溫度 37°C 以及 5%C02。
[0013]與現有技術相比，本發明的處理支原體污染的試劑、及其試劑盒和處理方法，采用了抗生素太妙菌素、二甲胺四環素與二甲胺四環素的組合，并且發明人經過大量試驗研究意外地發現，特定比例的三種抗生素的組合，能夠更有效的處理支原體污染的問題，并且三者特定比例的組合的效果遠優越于抗生素太妙菌素與二甲胺四環素組合的效果，這說明了二甲胺四環素與抗生素太妙菌素、二甲胺四環素之間存在一定的協同效應，能顯著提高支原體污染處理的效果；另外，本發明的處理支原體污染的試劑、及其試劑盒和處理方法還具有以下優點:I)操作簡便:可以直接處理細胞培養過程中出現的支原體污染現象，處理試劑無需再溶解；2)使用安全:專門為殺滅支原體而設計，最大化的減少對常規培養細胞的傷害;3)快速有效:本試劑盒針對支原體的生物特性，采用最有效的成分，以達到快速、有效處理支原體污染的目的;總的來說，能夠簡便、安全且快速有效地處理支原體污染的問題。
【附圖說明】
[0014]圖1a為采用實施例1試劑處理支原體污染后的支原體檢測結果圖；
[0015]圖1b為采用對比例I的抗生素培養基處理支原體污染后的支原體檢測結果圖；
[0016]圖1c為采用對比例2的抗生素培養基處理支原體污染后的支原體檢測結果圖。
【具體實施方式】
[0017]以下通過實施例對本發明作進一步的說明，但本發明并不限于這些【具體實施方式】。
[0018]實施例1:處理支原體污染的試劑以及試劑盒的配制
[0019]以1ml規格的試劑盒為例:
[°02°] 將200mg太妙菌素，50mg二甲胺四環素和150mg抗生素環丙沙星依次溶于1ml無菌雙蒸水中，充分混勻，即得到配制好的處理支原體污染的試劑;然后，再將該試劑裝配到試劑盒中。
[0021]實施例2:處理支原體污染的方法
[0022]將實施例1配制的試劑(或者說試劑盒中的試劑)，按照1:100的體積比例(即，稀釋后的體積為實施例1的試劑體積的100倍)添加到新鮮的RMPI 1640培養基(待處理的細胞為293T細胞，其采用RMPI 1640培養基)中獲得抗生素培養基，其中，抗生素太妙菌素的濃度為
0.2mg/ml，二甲胺四環素的濃度0.05mg/ml，抗生素環丙沙星的濃度為0.15mg/ml。
[0023]將待處理的細胞培養物添加到上述的抗生素培養基中，培養3天后，舍棄舊的培養基;再更換新的抗生素培養基，培養3天;如此循環，直至檢測不到支原體污染情況。
[0024]檢測不到支原體污染情況后，可以進行正常的細胞培養或傳代培養。
[0025]在本實施例中，待處理的細胞培養物的培養條件如下:細胞培養密度大約為80000個/ml，溫度37 °C以及5% CO2。
[0026]在本實施例中，經過3個循環后，基本上檢測不到支原體污染情況了。
[0027]效果數據
[0028]實施例1的試劑與新鮮的RMPI1640培養基混合后的抗生素培養基中，抗生素太妙菌素的濃度為0.2mg/ml，二甲胺四環素的濃度0.05mg/ml，抗生素環丙沙星的濃度為0.15mg/ml;總抗生素濃度為0.4mg/ml ；
[0029]對比例1:
[0030]按照同樣的方法，配制對比例I的抗生素培養基，其中，抗生素太妙菌素的濃度為0.32mg/ml，二甲胺四環素的濃度0.08mg/ml;總抗生素濃度為0.4mg/ml ；
[0031]對比例2:
[0032]按照同樣的方法，配制對比例2的抗生素培養基，其中，抗生素環丙沙星的濃度為0.4mg/ml ；總抗生素濃度為0.4mg/ml ；
[0033]將待處理的細胞培養物分成3份，分別添加到實施例1的試劑配制的抗生素培養基、對比例I的抗生素培養基和對比例2的抗生素培養基，培養3天后，舍棄舊的培養基;再更換新的各自的抗生素培養基，培養3天;如此循環。
[0034]每經歷一個循環周期，取各自的培養物進行支原體檢測，檢測結果參圖la、lb和Ic0
[0035]參見圖la，采用實施例1的試劑，經歷3個循環周期后，檢測不到支原體污染情況了；
[0036]然而，參見圖1b和Ic，對比例I和對比例2，在經歷3個循環周期后，仍存在支原體污染情況。
[0037]由此可以看出，同樣的總抗生素濃度以及同樣的處理方法，采用抗生素太妙菌素、二甲胺四環素與二甲胺四環素的三者的特定比例組合的試劑的支原體污染處理效果遠優越于抗生素太妙菌素與二甲胺四環素兩者組合的效果，也遠優越于二甲胺四環素的處理效果，這說明了二甲胺四環素與抗生素太妙菌素、二甲胺四環素之間存在一定的協同效應，能顯著提高支原體污染處理的效果。
[0038]應當理解，雖然本說明書按照實施方式加以描述，但并非每個實施方式僅包含一個獨立的技術方案，說明書的這種敘述方式僅僅是為清楚起見，本領域技術人員應當將說明書作為一個整體，各實施方式中的技術方案也可以經適當組合，形成本領域技術人員可以理解的其他實施方式。
[0039]上文所列出的一系列的詳細說明僅僅是針對本發明的可行性實施方式的具體說明，它們并非用以限制本發明的保護范圍，凡未脫離本發明技藝精神所作的等效實施方式或變更均應包含在本發明的保護范圍之內。
【主權項】
1.一種處理支原體污染的試劑，其特征在于:所述試劑為包含抗生素太妙菌素、二甲胺四環素和抗生素環丙沙星的溶液;其中， 所述抗生素太妙菌素、所述二甲胺四環素與所述二甲胺四環素，三者的濃度比值為4:1:3。2.如權利要求1所述的試劑，其特征在于:所述試劑為所述抗生素太妙菌素、二甲胺四環素和抗生素環丙沙星溶解于無菌雙蒸水所形成的溶液。3.一種處理支原體污染的試劑盒，其特征在于:所述試劑盒包括如權利要求1至2中任意一項所述的試劑。4.如權利要求3所述的試劑盒，其特征在于:所述抗生素太妙菌素的濃度為20mg/ml，所述二甲胺四環素的濃度5mg/ml，所述抗生素環丙沙星的濃度為15mg/ml。5.如權利要求4所述的試劑盒，其特征在于:所述試劑盒中，所述試劑的規格為10ml、50ml、20ml或1ml。6.一種處理支原體污染的方法，其特征在于: 將所述權利要求1至2中任意一項所述的試劑，或者所述權利要求3至5中任意一項所述的試劑盒中的試劑與新鮮培養基混合以獲得抗生素培養基，所述抗生素培養基中的所述抗生素太妙菌素的濃度為20mg/ml，所述二甲胺四環素的濃度5mg/ml，所述抗生素環丙沙星的濃度為15mg/ml; 將待處理的細胞培養物添加到所述抗生素培養基中，培養3天后，舍棄舊的培養基;再更換新的所述抗生素培養基，培養3天;如此循環，直至檢測不到支原體污染情況。7.如權利要求6所述的方法，其特征在于: 所述待處理的細胞培養物的培養條件如下:細胞培養密度大約為50000?100000個/ml，溫度37 °C 以及5% CO2。
【文檔編號】C12N5/071GK106047797SQ201610692668
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年8月19日
【發明人】張智培, 熊延獅
【申請人】上海逍鵬生物科技有限公司