二氫卟吩p6類氨基酸衍生物及其制備方法和用圖
【專利摘要】本發明涉及醫藥技術領域，具體涉及是一種新型二氫卟吩類光敏劑——二氫卟吩p6類氨基酸衍生物及其制備方法，以及在制備抗腫瘤藥物中的用途。本發明的二氫卟吩p6氨基酸衍生物的化學結構如通式(I)所示，本發明的二氫卟吩p6類氨基酸衍生物具有高效、低毒等優點，可用于制備新的光動力治癌藥物、光動力治療良性血管性疾病如老年性黃斑變性及鮮紅斑痣的藥物和光動力治療尖銳濕疣藥物。
【專利說明】
二氫卟吩p6類氨基酸衍生物及其制備方法和用途
技術領域
[0001] 本發明涉及醫藥技術領域，具體涉及是一種新型二氫卟吩類光敏劑一一二氫卟吩 P6類氨基酸衍生物及其制備方法，以及在制備抗腫瘤藥物中的用途。
【背景技術】
[0002] 光動力療法(photodynamic therapy，PDT)是在上世紀八十年代逐漸發展起來的 腫瘤靶向治療新技術即給藥(光敏劑)后用波長與光敏劑固有的紅光區最大吸收波長相匹 配的激光定向輻照病灶（腫瘤）組織，由光敏劑誘發組織中的基質氧(〇 2)激發產生單態氧 (%)等活性氧物質(R0S)，導致腫瘤細胞凋亡或壞死而發揮腫瘤靶向治療作用。由于PDT僅 對腫瘤組織實施靶向光照，可選擇性地破壞腫瘤細胞而對正常組織或器官則幾乎沒有損害 或損害很小，在臨床上也具有很好的控制性，因此，它是一種對人體非侵害性的治療技術， 具有副作用小(無手術產生的創傷痛苦，無放療和化療產生的嘔吐、惡心和免疫抑制）、可單 獨或配合其它治療手段重復多次使用等優點。
[0003] 光照、組織中的氧和光敏劑是TOT的三大要素，其中，光敏劑是核心。第一代卟啉類 光敏劑如卟吩姆鈉 (porfimer sodium)等成功用于腫瘤臨床治療，取得了令人矚目的療效， 但也存在明顯缺陷：（1)紅光區最大吸收波長短(630nm)使得波長與之相匹配的激光穿透殺 傷腫瘤深度不夠;且摩爾吸收系數(ε)小，導致光敏活性低；（2)為多組分卟啉混合物；（3)體 內清除慢導致滯留光毒性大。因此，從上世紀九十年代末起開展了二氫卟吩如苯并卟啉衍 生物(benzoporphyrin (^1'；^31:;^6，1^0)及葉綠素3降解衍生物為代表的第二代光敏劑的 研發。由于二氫卟吩類光敏劑具有結構單一明確、紅光區（>600nm)最大吸收波長較卟啉類 紅移至660-690nm致使該波長激光具有更佳的腫瘤殺傷深度且摩爾吸收系數（ε)高一個數 量級、光敏活性強、體內代謝快、滯留光毒性小，已成為光敏新藥研究熱點。其中，維替泊芬 (verteporf in)、替莫泊芬（temoporf in)和他拉泊芬（talaporf in)分別于2000年、2001年和 2004年成功上市。
[0004]二氫卟吩p6極不穩定，其6-和γ-羧基可自行脫水縮合成更穩定的六元內酸酐結 構而生成紫紅素-18,因此，針對二氫卟吩ρ6的結構修飾，文獻報道較少，主要在其3-乙烯 基、13-，15-羧基和20-中介氫三個部位分別進行結構改造(姚建忠，等.二氫卟吩ρ6醚類衍 生物的合成.有機化學，2001，21 (6): 458-462;姚建忠，等.蠶沙葉綠素的降解及二氫卟吩ρ6 酰胺衍生物的合成.中國醫藥工業雜志，1999，30(9):403-406;王屹，等.δ-(甲酰乙烯基)二 氫卟吩衍生物的合成·有機化學，2007,27(3) :391-396 ; Leach;et al. In vitro photodynamic effects of lysyl chlorine p6: cel1 survival, localization and u1trastruetura1 changes.Photochemistry and Photobiology，1993，58(5):653-660·)〇 [0005]鑒于文獻報道卟啉和二氫卟吩分子結構中引入水溶性氨基酸殘基可以改善其藥 效和制藥學性質（Hitoshi，T.，et al.Synthesis of chlorophyll-amino acid conjugates as models for modification of proteins with chromo/ fluorophores.Bioorg.Med.Chem.2014,22,1421-1428.；Kwitniewski,M.,et al.Diamino acid derivatives of PpIX as potential photosensitizers for photodynamic therapy of squamous cell carcinoma and prostate cancer: in vitro studies.J.Photochem.Photobiol.B 2009,94,214-222.；Serra,V.V.,New porphyrin amino acid conjugates: synthesis and photodynamic effect in human epithelial cells.Bioorg.Med.Chem.2010,18,6170-6178.；ffang,H.M.；Porphyrin with amino acid moieties:a tumor photosensitizer·Chem.Biol·Interact·2008，172，154-158·);另外， 二氫卟吩的2-位乙烯基的醚類衍生物比其先導物具有更強的光敏活性和腫瘤roT療效(姚 建忠等，二氫卟吩f甲醚的合成及其光敏化力和腫瘤光生物活性.藥學學報，2000，35(1): 63-66;姚建忠等，2-( 1-羥基）乙基二氫卟吩f及其醚類衍生物的合成和腫瘤光生物活性.中 國藥物化學雜志，2001，39(1): 1-4 .)，本發明擬在此基礎上研發新的一種二氫卟吩類光敏 劑。
[0006] 目前尚無文獻報道將二氫卟吩P6作為先導結構，在其7-位丙羧基引入氨基酸殘基 或同時在其7-位丙羧基引入氨基酸殘基和2-位乙烯基進行醚化結構設計。
【發明內容】
[0007] 本發明的目的是提供一種二氫卟吩p6類氨基酸衍生物包括二氫卟吩p6氨基酸衍 生物和二氫卟吩P6醚類氨基酸衍生物。本發明的另一目的在于提供該二氫卟吩p6類氨基酸 衍生物的制備方法。本發明的第三目的是提供該二氫卟吩P6類氨基酸衍生物在制備抗腫瘤 藥物中特別是光敏劑中的用途。
[0008] 本發明以結構穩定且制備方便的葉綠素 a穩定降解產物紫紅素-18為原料，經內酸 酐堿開環、羧基重氮甲烷甲基化及酯選擇性酸水解制得的二氫卟吩P6二甲酯為先導結構， 在其7-位丙羧基引入水溶性氨基酸殘基或在其7-位丙羧基引入水溶性氨基酸殘基后同時 對2-位乙烯基進行醚化，優化設計合成了一類新型二氫卟吩類光敏劑一一二氫卟吩p6類氨 基酸衍生物。
[0009] 本發明的第一方面，提供了一種二氫卟吩P6類氨基酸衍生物及其藥用鹽，本發明 所述的二氫卟吩P6類氨基酸衍生物的化學結構如式(I)所示：
[0011]式(I)中，
[0012]辦代表各種氨基酸殘基;優選賴氨酸、谷氨酸、天冬氨酸等。
[0013] R2 代表 CH=CH2、CH(OR3)CH3;
[0014] R3代表Η、低級烷基、高級烷基、（CH2 )m0R4或（CH2 )mNR5R6;優選CH3、C2H 5、n-C3H7、η- C4H9、n-CsHii、n-C6Hi3、n-CsHn 等。
[0015] R4代表H、低級烷基；
[0016] R#PR6獨立地表示低級烷基；
[0017] m表示2-6之間的整數；
[0018] 所述的低級烷基，指含1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基；
[0019] 所述的高級烷基，指含7-18個碳原子的直鏈或支鏈烷基。
[0020]本發明所述的二氫卟吩p6類氨基酸衍生物，部分優選化合物^~〖:^的心和心分別 組合如表1所示：
[0021]表1:本發明部分優選化合物Ιι~124
[0024] 其中η表示"正_"。
[0025]進一步地，本發明還提供了上述二氫卟吩ρ6類氨基酸衍生物的藥用鹽和藥學上可 接受制劑，所述的藥用鹽可以為堿金屬鹽，優選鈉鹽等，所述的制劑優選脂質體和脂肪乳等 靜脈制劑。
[0026] 本發明的第二方面，提供了上述的二氫卟吩ρ6類氨基酸衍生物的制備方法。
[0027] 本發明提供一種原料來源廣、制備方法簡單、毒性低的新型二氫卟吩類光敏 劑--二氫卟吩Ρ6類氨基酸衍生物的制備方法。
[0028]本發明所用原料為葉綠素 a穩定降解產物一紫紅素-18(pUrpUrin-18)，其化學結 構式如下：
[0030] 紫紅素 -18經內酸酐堿開環、羧基重氮甲烷甲基化和酯選擇性酸水解制得的二氫 卟吩P6二甲酯結構中的7-丙羧基與氨基酸縮合或其2-乙烯基和7-丙羧基分別與醇和氨基 酸發生加成和縮合反應，合成得到本發明新的結構類型的二氫卟吩類光敏劑--二氫卟吩 P6類氨基酸衍生物。
[0031] 上述紫紅素-18原料可用蠶沙中的葉綠素 a經酸堿降解制備。
[0032] 我國是世界蠶絲生產大國，蠶沙(家蠶糞)是蠶業的主要副產物之一。我國每年蠶 絲生產中約可產生100萬噸蠶沙。蠶沙中葉綠素 a含量約占0.75%，是極為豐富而廉價的葉 綠素資源。利用蠶沙制備焦脫鎂葉綠酸a醚類氨基酸衍生物，可拓展蠶業廢物資源的醫藥應 用，最終實現"變廢為寶"。
[0033] 紫紅素-18可用文獻方法合成得到(姚建忠，等.蠶沙中葉綠素 a降解過程的化學研 究·中草藥，1999,30(8) :568-57.)
[0034]本發明所述的二氫卟吩p6類氨基酸衍生物的制備方法，以蠶沙葉綠素粗提物-- 市售糊狀葉綠素為起始原料的制備方法如下：
[0035] A、用葉綠素 a(chlorophyll a，VDI)為原料制備二氫卟吩p6二甲酯 (chlorinp6dimethylester，IV)，反應流程為：
[0037] B、用化合物m制備目標化合物二氫卟吩p6類氨基酸衍生物I，反應流程如下：
[0039]具體合成步驟為：
[0040] A1、制備紫紅素-18(purpurin-18，VI):
[0041] 首先，市售糊狀葉綠素的乙醚溶液，在0~5°C條件下與等體積量濃鹽酸攪拌反應 0.5h生成脫鎂葉綠酸a(pheophorbide a，VH);然后，化合物νπ在25 %氫氧化鉀的正丙醇液 中通氧氣反應2制得VI;
[0042] Α2、制備二氫Ρ卜吩ρ6二甲酯（chlorin p6dimethylester，IV)
[0043] 化合物VI溶于四氫呋喃-甲醇（1:4，v/v)，加等體積0.5mol. L-1氫氧化鈉反應2h制 得不穩定產物二氫卟吩p6(chlorine p6)后迅速與重氮甲燒反應制得二氫卟吩p6三甲酯 (chlorin p6trimethylester，V)，化合物 V經25%HC1 水解制得IV;
[0044] B1、制備二氫卟吩p6醚類衍生物Π
[0045] 將化合物IV與過量的33%HBr冰醋酸液室溫反應24h制得中間體ΙΠ ，中間體ΙΠ 在過 量1(2〇)3存在下與各種醇(r3〇h)反應制得化合物Π ;
[0046] B2、制備二氫卟吩p6類氨基酸目標衍生物I:
[0047]將化合物IV或Π 的二氯甲烷液在1_( 3-二甲氨基丙基）-3_乙基碳二亞胺鹽酸鹽 (EDCI)、N-羥基苯并三唑(HOBt)和N，N-二甲基異丙基胺(DIPEA)存在下分別與各種羧基或/ 和氨基保護的酸性或堿性氨基酸鹽酸鹽(Ri'_NH 2 · HC1)反應24h后再經三氟醋酸(TFA)脫去 叔丁基或叔丁氧羰基或和氫氧化鋰脫甲基酯制得二氫卟吩P6類氨基酸目標衍生物I。
[0048]本發明的部分優選化合物I!~124的辦和此分別組合如前述的表1。
[0049]本發明的第三方面，提供上述的二氫卟吩p6類氨基酸衍生物的制藥用途。
[0050]本發明二氫卟吩p6類氨基酸衍生物對小鼠黑色素瘤細胞B16-F10和人黑色素瘤細 胞A375等具有優良的TOT殺傷效應，且具有高效、低毒的優點。
[0051]與現有臨床應用的新一代光敏劑維替泊芬(verteporf in)相比，本發明二氫卟吩 P6類氨基酸衍生物具有高效、低毒等優點，可用于制備抗腫瘤藥物，特別是新的光動力治癌 藥物、光動力治療良性血管性疾病如老年性黃斑變性(一種視網膜微血管增生性疾病)及鮮 紅斑痣(一種先天性皮膚微血管畸形病變)的藥物和光動力治療尖銳濕疣(人乳頭瘤病毒感 染疾病)藥物。
【具體實施方式】
[0052]現結合實施例，對本發明作詳細描述，但本發明的實施不僅限于此。本發明所用試 劑和原料均市售可得或可按文獻方法制備。
[0053]下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，或按照制造廠商 所建議的條件。
[0054]實施例1:脫鎂葉綠酸a(W)的制備
[0055]蠶沙葉綠素 a(VIII)粗提物(糊狀葉綠素），購自浙江海寧市鳳鳴葉綠素有限公司。 [0056] 蠶沙葉綠素 a(VIII)粗提物100g溶于500mL乙醚，于0~5°C條件下加入等體積的濃鹽 酸并攪拌反應lh，分取下層酸液，加2倍量水稀釋，冷卻下用10m 〇l/L的NaOH中和至pH為5-6， 抽濾，P2〇5干燥后得到黑色粉末W粗品15g，不做純化直接用于下一步反應。
[0057]實施例2:紫紅素-18(VI)的制備
[0058] W粗品15g，溶于50mL四氫呋喃，加入300mL乙醚稀釋，再加入25% (w/v)的氫氧化 鉀正丙醇溶液20mL，于0~5°C條件下通〇2反應2h，用水提取(30〇1111^2)，10%!123〇4中和，過 濾，P2〇5干燥，硅膠Η柱層析分離得黑色粉末VI2.7g。
[0059]實施例3:二氫卟吩p6三甲酯（V)的制備
[0060] 化合物VI(2.0g，3.55mmol)，溶于50mL四氫咲喃，加入200mL甲醇，再加0.5mol · L-1氫氧化鈉水溶液250mL，室溫攪拌反應至698nm處吸收峰消失，加水500ml，用稀鹽酸中和至 pH 5~6,乙醚提取（3 X 200mL)，無水硫酸鈉干燥，過濾，醚液于冰鹽浴上加入新配制的 2.8 % (w/v)CH2N2乙醚液20mL，反應5min，水洗，回收溶劑，干燥后經硅膠Η柱色譜分離得 1.85 8黑色粉末￥，產率83.6%，純度(冊1^〇:99.8%。
[0061 ] 實施例4:二氫卟吩ρ6二甲酯(IV)的制備
[0062] 化合物V (375mg，0.601mmol)溶于lOOmL四氫呋喃，加入lOOmL的25 %鹽酸，常溫反 應4小時。反應完全后，加入2.5倍量水，用氫氧化鈉水溶液調節pH至5-6，二氯甲烷萃取。有 機層水洗3次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸出二氯甲烷，硅膠Η柱色譜純化(洗脫劑:二氯甲烷/ 甲醇= 100/3)，得黑色固體IV(300mg，0.492mmol )，產率81.8% JSCESDm/z :611.39[Μ+Η] + (100% )〇UV-visAmax(CH3OH,nm)(e/M_1cm _1) :667( 1.73 ΧΙΟ5), 610(2.23 ΧΙΟ4), 529(2.31 X ΙΟ4), 497(6.22 ΧΙΟ4), 397(3.47 X ΙΟ5) NMR[CDC13,600ΜΗζ]: δ9.69(s, 1Η) ,9,47(s, 1Η), 8.66(s,lH),7.95(dd ,J=18.0,11.4Hz,lH) ,6.29(d ,J= 18. 0Hz , 1Η) ,6.12(d ,J= 11.4Hz , lH),5.16(m,lH),4.39(m,lH),4.20(s,3H),4.14(s,3H),3.71(m,2H),3.64(s,3H),3.38(s, 3H) ,3.23(s,3H) ,2.43-2.10(m,4H) ,1.85(d,J = 6.0Hz,3H),1.69(t,J = 7.8Hz,3H) ,-1.0 (br sJHhHPLC purity:98.8%。
[0063] 實施例5:21-溴乙基-2-去乙烯基二氫卟吩p6二甲酯（ΙΠ )的制備
[0064] 化合物IV(1 · Og，1 · 64mmol)，加33%HBr冰醋酸液100mL，室溫避光密封反應36h，減 壓蒸除冰醋酸，得到墨綠色固體化合物m，不做純化直接用于下一步反應。
[0065] 實施例6:2-(1-甲氧基）乙基-2-去乙烯基二氫卟吩p6二甲酯（IL·)的制備 [0066] 上述墨綠色固體化合物ΙΠ (0. lg)，溶于干燥二氯甲烷50mL，加入Κ2⑶3(lOOmg)和 2mL干燥甲醇，在N2保護下室溫反應2.5h后反應完畢，停止反應，過濾，水洗3次，飽和食鹽水 洗1次，無水Na 2S04干燥2h，減壓回收有機溶劑后硅膠Η色譜分離(洗脫劑:二氯甲烷/甲醇/丙 酮/甲酸=100/2/2/0 · 1，v/v/v/v)，得黑色粉末 Π ! 30 · 4mg，產率32 · 7 %。
[0067] MS(ESI + )m/z:643.73[M+H] + (100%)；HRMS(ESI + )m/z:642.3059[M] + ,calcd for C36H42N4O7 642.3053。
[0068] 4 NMR[(CD3)2S0,300MHz]:S9.79(s，2H)，8.98(s，lH)，5.97(m，lH)，4.99(m，lH), 4.55(m，lH)，4.13(s，3H)，4.10(s，3H)，3.73(m，2H)，3.60(s，3H)，3.47(s，3H)，3.30(s，3H)， 2.35(m，2H)，2.15(m，2H)，2.00(d，3H)，1.78(d，3H)，1.61(m，3H)，-1.16(s，lH)，-1.30(s， lH)〇
[0069] 實施例7:2-(1-乙氧基）乙基-2-去乙烯基二氫卟吩p6二甲酯（Π 2)的制備
[0070]按實施例6的方法，化合物ΙΠ (0.1 g)與2mL干燥無水乙醇反應制得黑色固體Π 2 26.8mg，收率 28.2%。
[0071 ] MS(ESI+)m/z:657.50[M+H] + (100%)〇
[0072] 4 NMR[(CD3)2S0,300MHz]:S9.62(s，lH)，9.06(s，lH)，8.82(s，lH)，8.77(s，lH)， 5.91(m，lH)，4.92(m，lH)，4.51(m，lH)，4.32(s，3H)，4.15(s，3H)，3.69(m，2H)，3.58(s，3H)， 3.45(s，3H)，3.33(s，3H)，2.32(m，2H)，2.21(m，2H)，1.96(d，3H)，1.83(d，3H)，1.63(m，3H)， 0.91(m，3H)，-1.01(s，lH)，-1.26(s，lH)。
[0073] 實施例8:2-(1-正丙氧基）乙基-2-去乙烯基二氫卟吩p6二甲酯（Π 3)的制備 [0074]按實施例6的方法，化合物m(0.1g)與2mL干燥無水正丙醇反應制得黑色固體Π 3 31.1mg，收率 32.1%。
[0075] MS(ESI+)m/z :671,46[M+H] + ( 100% ) 〇
[0076] 4 NMR[(CD3)2S0,600MHz]:S12.06(s，1H)，9.85(s，1H)，9.72(s，1H)，8.97(s，1H)， 5.96(m，lH)，4.99(m，lH)，4.57(m，lH)，4.14(s，3H)，4.12(s，3H)，3.69(m，3H)，3.57(s，3H)， 3.38(s，3H)，3.16(s，3H)，2.37(m，lH)，2.14(m，lH)，2.09(m，2H)，1.97(d，3H)，1.80(d，3H)， 1.64(m，3H)，1.56(m，3H)，0.89(m，3H)，-1.13(s，lH)，-1.28(s，lH)。
[0077] 實施例9:2-(1-正丁氧基）乙基-2-去乙烯基二氫卟吩p6二甲酯（Π 4)的制備 [0078]按實施例6的方法，化合物m(O.lg)與2mL干燥無水正丁醇反應制得黑色固體Π 4 27.5mg，收率 27.8%。
[0079] MS(ESI+)m/z:685.49[M+H] + (100%)〇
[0080] 4 NMR[(CD3)2S0,600MHz]:S12.01(s，1H)，9.83(s，1H)，9.65(s，1H)，8.98(s，1H)， 5.88(m，lH)，5.05(m，lH)，4.58(m，lH)，4.16(s，3H)，4.15(s，3H)，3.58(m，3H)，3.55(s，3H)， 3.47(m，3H)，3.35(s，3H)，3.10(d，3H)，2.40(m，lH)，2.12(m，4H)，1.92(d，3H)，1.83(d，3H)， 1.68(m，3H)，0.72(m，3H)，-1.13(s，lH)，-1.25(s，lH)。
[0081] 13CMMR[(CD3)2S0,600MHz]:S174.91，174.38，170.22，167.59，166.58，145.46， 141.12,140.85,137.70,136.20,135.17,134.73,132.66,129.09,112.95,104.73,103.70， 101.03.94.46.72.41.68.82.53.24.52.90.52.73.48.81.41.72.34.11.32.22.29.23, 24.83.23.89.19.49.19.09.17.90.14.13.12.49.11.09 〇
[0082] 實施例10:2-(1-正戊氧基）乙基-2-去乙烯基二氫卟吩p6二甲酯（Π 5)的制備 [0083]按實施例6的方法，化合物ΙΠ (0.1 g)與2mL干燥無水正戊醇反應制得黑色固體Π 5 27.0mg，收率 26.7%。
[0084] MS(ESI+)m/z:699.52[M+H] + (100%)〇
[0085] 4 NMR[(CD3)2S0,600MHz]:S12.05(s，1H)，9.87(s，1H)，9.78(s，1H)，8.96(s，1H)， 5.95(m，lH)，4.99(m，lH)，4.55(m，lH)，4.15(s，3H)，4.11(s，3H)，3.66(m，3H)，3.60(s，3H)， 3.49(m，lH)，3.38(s，3H)，3.19(d，3H)，2.36(m，lH)，2.06(m，2H)，1.99(m，4H)，1.80(d，3H)， 1.66(m，2H)，1.60(m，3H)，1.38(m，2H)，1.28(m，2H)，0.74(m，3H)，-1.14(s，lH)，-1.27(s， 1Η)〇
[0086] 13C 匪R[(CD3)2SO, 600MHz ] :δ174· 91,174.38,170.22,167.59,166.58,145.46， 141.12,140.85,137.70,136.20,135.17,134.73,132.66,129.09,112.95,104.73,103.70， 101.03.94.46.72.41.68.82.53.24.52.90.52.73.48.81.41.72.34.11.32.22.29.23, 24.83.23.89.19.49.19.09.17.90.14.13.12.49.11.09 〇
[0087] 實施例11:2-(1-正己氧基）乙基-2-去乙烯基二氫卟吩p6二甲酯（Π 6)的制備 [0088]按實施例6的方法，化合物ΙΠ (0.1 g)與2mL干燥無水正戊醇反應制得黑色固體Π 6 37.4mg，收率 36.3%。
[0089] MS(ESI+)m/z:713.45[M+H] + (100%)〇
[0090] 4 NMR[(CD3)2S0,600MHz]:S12.07(s，1H)，9.81(s，1H)，9.67(s，1H)，8.95(s，1H)， 5.87(m，lH)，5.02(m，lH)，4.56(m，lH)，4.15(s，3H)，4.13(s，3H)，3.55(s，3H)，3.51(m，3H)， 3.37(m，3H)，3.34(s，3H)，3.11(d，3H)，2.40(m，lH)，2.10(m，2H)，1.93(d，3H)，1.81(d，3H), 1.68(m，3H)，1.52(m，3H)，0.56(m，3H)，-1.13(s，lH)，-1.27(s，lH)。
[0091] 13CMMR[(CD3)2S0,600MHz]:S173.84，173.48，169.72，166.87，166.10，154.25， 148.25.145.10.140.48.137.06.135.85.134.65.134.00. 132.10.128.50.122.41.104.30， 103.11,100.67,93.80,71.90,68.61,53.24,52.70,52.38,48.28,31.24,30.95,29.54， 28·76，25·44，24·41，23·36，21·85，18·61，17·45，13·57，11·97，10·57。
[0092] 實施例12:2-(1-正辛氧基）乙基-2-去乙烯基二氫卟吩p6二甲酯（Π 7)的制備 [0093]按實施例6的方法，化合物ΙΠ (0.1 g)與2mL干燥無水正辛醇反應制得黑色固體Π 7 38.0mg，收率 35.5%。
[0094] MS(ESI+)m/z:741.52[M+H] + (100%)〇
[0095] 實施例13: N-(二氫卟吩p6二甲酯-73-酰基)-L-谷氨酸(h)的制備
[0096] 化合物IV( 110mg，0 · 180mmol)溶解在30mL干燥二氯甲燒，加入EDCI (41 · 5mg， 0.21 6mmo1，1 · 2equiv.)和H0Bt(29· 2mg，0· 21 6mmo1，1 · 2equiv·)，氮氣保護冰鹽浴下攬摔反 應30min，將L-GliKOBi^h · HCl(60.9mg，0.216mmol，1.2equiv.)和DIPEA(0.038mL， 0.216111111〇1，1.2691^￥.)溶于1〇1^二氯甲烷后，滴加入反應液，氮氣保護室溫條件下攪拌反 應過夜。然后加入200mL二氯甲燒，依次用5 %梓檬酸水溶液、飽和食鹽水和水洗滌，無水硫 酸鈉干燥，回收溶劑。固體殘留物直接溶于15mL干燥二氯甲烷，然后加入5mL三氟乙酸，室溫 攪拌反應6小時。反應完全后，加入100mL二氯甲燒，10 %碳酸氫鈉水溶液調節pH至3-4，硅膠 Η柱層析(洗脫劑:二氯甲烷/甲醇/丙酮/甲酸= 100/5/5/0.1)，得黑色固體產物1^82.5!!^， 0.112臟〇1，兩步收率61.9% ;HPLC purity:97.6%。
[0097] MS(ESI + )m/z:740.42[M+H] + (100%)；HRMS(ESI + )m/z:739.3290[M] + ,calcd for C40H45N5O9 739.3217。
[0098] UV-visAmax(CH30H,nm)(e/M _1cm_1) :666(2.72 X 105) ,528(5.39 X104), 497(8.92 X 104), 397(4.81 X 105)。
[0099] 4 NMR[(CD3)2S0,600MHz]:Sl2.33(br s，2H)，9.67(s，1H)，9.45(s，1H)，8.98(s, 1H) ,8.10(dd,J=18,12Hz,lH),8.03(d,J=12Hz,lH) ,6.34(d,J=18Hz,lH) ,6.10(d,J = 12Hz,lH),4.99(m,lH),4.58(m,1H),4.15(s,3H),4.12(s,3H),3.98(m,2H),3.56(s,3H), 3.40(s,3H),3.38(m,lH),3.09(s,3H),2.28(m,2H),2.18(m,2H),2.01(m,2H),1.88(m,2H), 1.83(d，J = 6.0Hz，3H)，1.65(t，J = 6.0Hz，3H) ,-1.14(s，lH) ,-1.29(s，1H)</3C NMR[(CD3) 2S0,600MHz]:5173.59,173.42,173.30,171.74,169.75,167.27,166.09,154.16,148.17, 144.95,140.56,137.28,136.03,135.11,134.20,131.19,128.76,128.66,122.63,122.53, 104.22,103.13,99.79,94.13,52.79,52.62,52.29,51.10,48.16,32.43,31.53,30.01, 28.89.26.22.23.49.18.54.17.51.12.00. 11.85.10.64 〇
[0100] 化合物Ii的化學結構式如下：
[0102] 實施例14:Ν-[2-(1-甲氧基）乙基-2-去乙烯基-二氫卟吩p6二甲酯-73-酰基]-L-谷氨酸(I2)的制備
[0103] 按實施例13的方法，化合物111與1^-6111(081^)2.狀1制得黑色固體1 2，收率 61.2%〇
[0104] MS(ESI+)m/z:772.58[M+H] + (100%)〇
[0105] 4 NMR[(CD3)2S0,300MHz]:S9.81(s，lH)，9.79(s，lH)，8.96(s，lH)，5.97(m，lH)， 4.96(m，lH)，4.59(m，lH)，4.14(s，3H)，4.10(s，3H)，3.98(m，2H)，3.75(m，3H)，3.61(s，3H)， 3.49(s，3H)，3.42(s，3H)，3.23(s，3H),2.27-2.ll(m，5H)，2.00(m，4H)，1.81(d，3H),1.63 (m，3H)，-1.12(s，lH)，-1.29(s，lH)。
[0106] 化合物I2的化學結構式如下：
[0108] 實施例15:N-[2-(l-乙氧基）乙基-2-去乙烯基-二氫卟吩p6二甲酯-73-酰基]-L-谷氨酸(I3)的制備
[0109] 按實施例13的方法，化合物Π 2與L-GliKOBut)〗· HC1制得黑色固體13,收率 65.3%〇
[0110] MS(ESI+)m/z : 786.56[M+H] + ( 100% ) 〇
[0111] 化合物I3的化學結構式如下：
[0113] 實施例16:Ν-[2-(1-正丙氧基）乙基-2-去乙烯基-二氫卟吩p6二甲酯-73-酰基]-L-谷氨酸（14)的制備
[0114] 按實施例13的方法，化合物Π 3與L-GliKOBut)〗· HC1制得黑色固體14,收率 63.6%〇
[0115] MS(ESI + )m/z:800.57[M+H] + (100%)；HRMS(ESI + )m/z:799.3808[M] + ,calcd for C43H53N5O10 799.3792〇
[0116] 4 NMR[(CD3)2S0,300MHz]:S9.86(s，lH)，9.78(s，lH)，8.95(s，lH)，7.71(s，lH), 5.99(m，lH)，4.98(m，lH)，4.57(m，lH)，4.14(s，3H)，4.11(s，3H)，3.72(m，3H)，3.66(m，lH)， 3.60(s,3H),3.47(m,2H),3.40(s,3H),3.20(s,3H),2.27-2.03(m,5H),2.00(m,4H),1.81 (d,3H),1.68(m,4H),1.61(m,3H),0.91(m,3H),-1.12(s,lH),-1.27(s,lH)〇
[0117] 13CMMR[(CD3)2S0,600MHz]:S174.84，174.33，171.45，170.21，167.83，166.59， 154.74,148.71,145.73,141.05,140.84,137.62,136.46,135.21,135.11,134.51,132.73， 128.95,122.88,104.88,103.60,101.08,94.33,72.41,70.86,53.26,53.13,52.75,52.42, 48.70,33.18,32.10,31.71,29.41,25.01,23.94,23.40,22.51，19.22,18.11,14.37， 12.54,11.25〇
[0118] 化合物I4的化學結構式如下：
[0120] 實施例17:Ν-[2-(1-正丁氧基）乙基-2-去乙烯基-二氫卟吩p6二甲酯-73-酰基]-L-谷氨酸（L·)的制備
[0121] 按實施例13的方法，化合物Π 4與L-GliKOBut)〗· HC1制得黑色固體15,收率 45.0%〇
[0122] MS(ESI+)m/z:814.53[M+H] + (100%)〇
[0123] 4 NMR[(CD3)2S0,600MHz]:S9.90(s，lH)，9.81(s，lH)，8.99(s，lH)，7.96(m，lH)， 6.00(m，lH)，5.04(m，lH)，4.62(m，lH)，4.19(s，3H)，4.16(s，3H)，3.74(m，3H)，3.64(s，3H)， 3.56(m，lH)，3.44(s，3H)，3.24(s，3H),2.35-2.12(m，5H)，2.03(m，4H)，1.86(d，3H),1.70 (m，4H)，1.65(m，3H)，-1.07(s，lH)，-1.22(s，lH)。
[0124] 13C 匪R[(CD3)2SO, 600MHz ] :δ173· 76,171.42,169.72,167.25,166.08,154.23， 148.21,145.21,140.53,137.11,135.93,134.59,134.02,132.11,128.47,122.39,104.35， 103.12,100.60,93.79,71.95,68.38,52.74,52.24,51.37,48.21,32.46,31.77,31.53， 31.19,30.52,28.89,26.71,24.45,23.44,19.03,18.71,17.59,13.72,12.03,10.65。
[0125] 化合物I5的化學結構式如下：
[0127] 實施例18:Ν-[2-(1-正戊氧基）乙基-2-去乙烯基-二氫卟吩p6二甲酯-73-酰基]-L-谷氨酸（1 6)的制備
[0128] 按實施例13的方法，化合物Π5與L-GliKOBut)〗· HC1制得黑色固體16,收率 50.0%〇
[0129] MS(ESI+)m/z:828.58[M+H] + (100%)〇
[0130] 4 NMR[(CD3)2S0,600MHz] :S9.84(s，lH)，9.74(s，lH)，8.93(s，lH)，7.73(m，lH)， 5.91(m，lH)，4.98(m，lH)，4.58(m，lH)，4.13(s，3H)，4.11(s，3H)，3.64(m，4H)，3.58(s，3H)， 3.46(m，lH)，3.37(s，3H)，3.17(s，3H),2.28-2.14(m，4H)，2.09(m，2H)，1.97(d，3H),1.81 (d，3H)，1.72(m，2H)，1.65(m，4H)，1.59(m，3H)，0.73(t，3H)，-1.12(s，lH)，-1.27(s，lH)。
[0131] 13C 匪R[(CD3)2SO, 600MHz ] :δ173· 79,171.02,169.72,167.31,166.08,154.20， 148.19,145.18,140.48,137.09,135.88,134.67,134.03,132.18,128.46,122.38,104.32， 103.12,100.62,93.80,71.92,68.65,52.74,52.22,51.90,48.23,32.72,31.62,31.36， 31.16,29.32,28.85,27.57,24.48,23.44,18.68,17.54,13.72,12.01,10.62〇
[0132] 化合物I6的化學結構式如下：
[0134] 實施例19:Ν-[2-(1-正己氧基）乙基-2-去乙烯基-二氫卟吩p6二甲酯-73-酰基]-L-谷氨酸（17)的制備
[0135] 按實施例13的方法，化合物Π 6與L-GliKOBut)〗· HC1制得黑色固體17,收率 48.7%〇
[0136] MS(ESI+)m/z : 842.60[M+H] + ( 100% ) 〇
[0137] 化合物17的化學結構式如下：
[0139] 實施例20:Ν-[2-(1-正辛氧基）乙基-2-去乙烯基-二氫卟吩p6二甲酯-73-酰基]-L-谷氨酸（Is)的制備
[0140] 按實施例13的方法，化合物Π 7與L-GliKOBut)〗· HC1制得黑色固體18,收率 49.3%〇
[0141] MS(ESI+)m/z:870.62[M+H] + (100%)〇
[0142] 化合物Is的化學結構式如下：
[0144] 實施例21:N-(二氫卟吩p6二甲酯-73-酰基)-L_天冬氨酸(1 9)的制備
[0145] 按實施例13的方法，化合物IV與?-Α8ρ(0Βι^)2 · HC1制得19,收率58.0% ;HPLC purity:96.3% 〇
[0146] MS(ESI+)m/z:726.43[M+H] + (100%)〇
[0147] UV-visAmax(CH3OH,nm)(e/M_1cm_1) :667(3.73 ΧΙΟ5) ,612(5.46 X 104), 529(6.14 X ΙΟ4),497(1.01 X ΙΟ5),398(6.15X ΙΟ5)。
[0148] 4^^(003)230,60010^1:59.48(8,111),9.19(8,111),8.95(8,110,8.05((1,1 = 7.2Ηζ,1Η) ,7.89(dd,J=18,12Hz,lH) ,6.17(d,J = 18Hz,lH) ,5.96(d,J=12Hz,lH) ,5.01 (m,lH),4.61(m,lH),4.45(m,2H),4.17(s,3H),4.16(s,3H),3.51(s,3H),3.36(m,lH),3.31 (s,3H),2.88(s,3H),2.61(m,lH),2.49(s,2H),2.35(m,lH),2.09(m,2H),1.84(d,J= 6.6Hz,3H),1.44(t ,J = 7.2Hz,3H),-1.25(s,lH),-1.33(s,lH)〇
[0149] 13CMMR[(CD3)2S0,600MHz]:S173.37，172.84，172.03，171.24，169.79，167.31， 166.13,154.03,148.05,144.73,140.50,137.17,135.81,134.95,134.21,131.05,128.62， 122.48,122.39,104.05,103.13,99.61,94.10,52.82,52.69,52.28,48.62,48.18,37.31， 32.73,31.64,28.83,23.51,18.41,17.42,11.97,11.77,10.47〇HRMS(ESI +)m/z:725.3061 [M] +，calcd for C39H43N5O9 725.3086。
[0150] 化合物I9的化學結構式如下：
[0152] 實施例22:N-[2-(l-甲氧基）乙基-2-去乙烯基-二氫卟吩p6二甲酯-73-酰基]-L-天冬氨酸(I 1Q)的制備
[0153] 按實施例13的方法，化合物111與1^8?((?1^)2.!1(：1制得1 1()，收率62.2%。
[0154] MS(ESI+)m/z:758.51[M+H] + (100%)〇
[0155] 4 NMR[(CD3)2S0,300MHz]:S9.81(s，2H)，8.97(s，lH)，7.67(m，lH)，5.98(m，lH)， 4.99(m，lH)，4.59(m，lH)，4.15(s，3H)，4.11(s，3H)，3.76(m，3H)，3.67(m，lH)，3.61(s，3H)， 3.48(s，3H)，3.42(s，3H)，3.23(s，3H),2.34-2.17(m，5H)，2.02(m，4H)，1.82(d，3H),1.63 (m，3H)，-1.12(s，lH)，-1.29(s，lH)。
[0156] 化合物I1Q的化學結構式如下：
[0158] 實施例23:Ν-[2-(1-乙氧基）乙基-2-去乙烯基-二氫卟吩p6二甲酯-73-酰基]-L-天冬氨酸(In)的制備
[0159] 按實施例13的方法，化合物112與1^8?((?1^)2.!1(：1制得1 11，收率65.2%。
[0160] MS(ESI+)m/z:772.48[M+H] + (100%)〇 [0161 ]化合物In的化學結構式如下：
[0163] 實施例24:Ν-[2-(1-正丙氧基）乙基-2-去乙烯基-二氫卟吩p6二甲酯-73-酰基]-L-天冬氨酸（1 12)的制備
[0164] 按實施例13的方法，化合物Π 3與L-Asp^Bu% · HC1制得112，收率67.0%。
[0165] MS(ESI+)m/z:786.44[M+H] + (100%)〇
[0166] 4 NMR[(CD3)2S0,300MHz] :S9.86(s，lH)，9.79(s，lH)，8.94(s，lH)，7.64(m，lH)， 6.00(m，lH)，4.96(m，lH)，4.58(m，lH)，4.14(s，3H)，4.10(s，3H)，3.74(m，3H)，3.67(m，2H)， 3.60(s，3H)，3.49(m，2H)，3.40(s，3H)，3.21(s，3H),2.38-2.15(m，5H)，2.00(m，4H),1.81 (d，3H)，1.68(m，2H)，1.61(m，3H)，0.91(m，3H)，-1.13(s，lH)，-1.28(s，lH)。
[0167] 化合物I12的化學結構式如下：
[0169] 實施例25:Ν-[2-(1-正丁氧基）乙基-2-去乙烯基-二氫卟吩p6二甲酯-73-酰基]-L-天冬氨酸（1 13)的制備
[0170] 按實施例13的方法，化合物Π 4與L-Asp^Bu% · HC1制得113，收率77.1%。
[0171] MS(ESI+)m/z:800.68[M+H] + (100%)〇
[0172] 4 NMR[(CD3)2S0,600MHz]:S9.90(s，lH)，9.80(s，lH)，8.99(s，lH)，7.75(m，lH)， 6.00(m,lH),5.03(m,lH),4.64(m,lH),4.28,(m,lH),4.19(s,3H),4.17(s,3H),3.74(m, 2H) ,3.64(s,3H),3.56(m,2H),3.44(s,3H),3.23(s,3H),2.50-2.30(m,4H),2.10(m,2H), 2.03(m,5H),1.86(d,3H),1.70(m,2H),1.65(m,6H),-1.07(s,lH),-1.21(s,lH)〇
[0173] 13CMMR[(CD3)2S0,600MHz]:S173.81，170.62，169.69，167.33，166.09，154.22， 148.20,145.18,140.50,137.08,135.90,134.59,134.03,132.17,128.46,122.37,104.34， 103.10,100.58,93.83,71.95,68.37,52.77,52.24,48.60,48.22,32.78,31.76,31.64， 31.17,28.86,28.57,24.49,23.43,21.99,19.03,18.70,17.57,13.71,12.03,10.77〇
[0174] 化合物I13的化學結構式如下：
[0176] 實施例26:N-[2-(l-正戊氧基）乙基-2-去乙烯基-二氫卟吩p6二甲酯-73-酰基]-L-天冬氨酸（1 14)的制備
[0177] 按實施例13的方法，化合物115與1^8?((?1^)2.!1(：1制得1 14，收率50.2%。
[0178] MS(ESI+)m/z :814.47[M+H] + ( 100% ) 〇
[0179] 4 NMR[(CD3)2S0,600MHz]:S9.83(s，lH)，9.69(s，lH)，8.96(s，lH)，7.95(m，lH)， 5.91(m，lH)，5.00(m，lH)，4.60(m，lH)，4.37(s，lH)，4.15(s，3H)，4.14(s，3H)，3.59(m，4H), 3.56(s,3H),3.43(m,2H),3.37(s,3H),3.14(s,3H),2.57(m,lH),2.09(m,2H),1.96(d,3H), 1.83(d,3H),1.72(m,2H),1.62(m,4H),1.58(m,3H),0.70(t,3H),-1.10(s,lH),-1.25(s, 1Η)〇
[0180] 13C 匪R[(CD3)2SO, 600MHz ] :δ173· 78,172.98,172.19,171.03,169.73,167.28， 166.10,154.21,148.19,145.14,140.54,140.32,137.07,135.85,134.67,134.04,132.15, 128.47,122.40,104.27,103.14,100.63,93.81,71.93,68.63,52.77,52.22,48.60,48.24, 32.67,31.60,29.30,28.78,28.04,24.45,23.43,21.86,18.64,17.50,13.69,11.99, 10.74〇
[0181 ]化合物Iw的化學結構式如下：
[0183] 實施例27:N-[2-(l-正己氧基）乙基-2-去乙烯基-二氫卟吩p6二甲酯-73-酰基]-L-天冬氨酸（1 15)的制備
[0184] 按實施例13的方法，化合物116與1^8?((?1^)2.!1(：1制得1 15，收率48.4%。
[0185] MS(ESI+)m/z : 828.57[M+H] + ( 100% ) 〇
[0186] 化合物115的化學結構式如下：
[0188] 實施例28:Ν-[2-(1-正辛氧基）乙基-2-去乙烯基-二氫卟吩p6二甲酯-73-酰基]-L-天冬氨酸（1 16)的制備
[0189] 按實施例13的方法，化合物Π 7與L-Asp^Bu% · HC1制得116，收率46.8%。
[0190] MS(ESI+)m/z:856.61[M+H] + (100%)〇 [0191 ]化合物Ii6的化學結構式如下：
[0193] 實施例29:N-二氫卟吩p6二甲酯-73-酰基)-L_賴氨酸（In)的制備
[0194] 化合物IV( 110mg，0 · 180mmol)溶解在30mL干燥二氯甲燒，加入EDCI (41 · 5mg， 0.21 6mmo1，1 · 2equiv.)和H0Bt(29· 2mg，0· 21 6mmo1，1 · 2equiv·)，氮氣保護冰鹽浴下攬摔反 應30min，將1^-叔丁氧羰基-L-賴氨酸甲酯鹽酸鹽（Ne-Boc-L-Lys-〇Me · HC1) (64 . lmg， 0.216mmol，1.2equiv.)和DIPEA(0·038mL，0·216mmol，l·2equiv·)溶于10mL二氯甲烷后，滴 加入反應液，氮氣保護室溫條件下攪拌反應過夜。然后加入200mL二氯甲烷，依次用5 %檸檬 酸水溶液、飽和食鹽水和水洗滌，無水硫酸鈉干燥，回收溶劑。固體殘留物溶于15mL THF，加 1^0!1(33.611^，1.4111111〇1，8.〇691^￥.)水溶液（511^)和甲醇（1〇1^)，室溫攪拌反應211，反應完 畢。反應液加水(50mL)稀釋，用飽和NH4C1液調節pH至5-6，用二氯甲烷萃取(20mL X 3)，無水 Na2S04干燥，減壓除去二氯甲烷，P2〇5真空干燥得黑色固體。上述黑色固體重新溶于15mL干 燥二氯甲烷，冰浴下加5mL三氟乙酸(TFA)反應lh，反應完畢后加85mL二氯甲烷稀釋，用飽和 NaHC03中和未反應TFA至反應液由綠色轉變為紫褐色，分取有機層，減壓回收有機溶劑，經 硅膠Η柱色譜分離，梯度洗脫劑CH 2C12:MeOH=4:1~2:1 (v/v)，得黑色粉末In 56，5mg，收率 42.50%〇
[0195] MS(ESI+)m/z : 739.43[M+H] + ( 100% ) 〇
[0196] 化合物In的化學結構式如下：
[0198] 實施例30:Ν-[2-(1-甲氧基）乙基-2-去乙烯基-二氫卟吩p6二甲酯-73-酰基]-L-賴氨酸(118)的制備
[0199] 按實施例29的方法，化合物111與，-8〇(^-1^-016.!1(：1制得1 18，收率45.2%。
[0200] MS(ESI+)m/z:771.48[M+H] + (100%)〇 [0201 ]化合物118的化學結構式如下：
[0203] 實施例31:Ν-[2-(1-乙氧基）乙基-2-去乙烯基-二氫卟吩p6二甲酯-73-酰基]-L-賴氨酸(119)的制備
[0204] 按實施例29的方法，化合物n：^Ne-Boc-L-Lys-〇Me · HC1制得119，收率40.8%。
[0205] MS(ESI+)m/z:785.51[M+H] + (100%)〇
[0206] 化合物119的化學結構式如下：
[0208] 實施例32:Ν-[2-(1-正丙氧基）乙基-2-去乙烯基-二氫卟吩p6二甲酯-73-酰基]- L-賴氨酸（I2Q)的制備
[0209] 按實施例29的方法，化合物113與，-8〇(^-1^-016.!1(：1制得1 2()，收率47.4%。
[0210] MS(ESI+)m/z:799.54[M+H] + (100%)〇
[0211] 化合物I2q的化學結構式如下：
[0213] 實施例33:N-[2-(l-正丁氧基）乙基-2-去乙烯基-二氫卟吩p6二甲酯-73-酰基]- L-賴氨酸（121)的制備
[0214]按實施例29的方法，化合物114與1^-8〇(^-1^-〇16.!1(：1制得121，收率48.5%。
[0215] MS(ESI+)m/z:813.43[M+H] + (100%)〇
[0216]化合物I21的化學結構式如下：
[0218] 實施例34:N-[2-(l-正戊氧基）乙基-2-去乙烯基-二氫卟吩p6二甲酯-73-酰基]- L-賴氨酸（122)的制備
[0219]按實施例29的方法，化合物115與1^-8〇(^-1^-〇16.!1(：1制得1 22，收率38.2%。
[0220] MS(ESI+)m/z:827.58[M+H] + (100%)〇
[0221] 化合物122的化學結構式如下：
[0223] 實施例35:Ν-[2-(1-正己氧基）乙基-2-去乙烯基-二氫卟吩p6二甲酯_73-酰基]-L-賴氨酸（123)的制備
[0224] 按實施例29的方法，化合物116與，-8〇(^-1^-016.!1(：1制得1 23，收率43.7%。
[0225] MS(ESI+)m/z:841.47[M+H] + (100%)〇
[0226] 化合物123的化學結構式如下：
[0228] 實施例36:Ν-[2-(1-正辛氧基）乙基-2-去乙烯基-二氫卟吩p6二甲酯-7 3-酰基]-L-賴氨酸（124)的制備
[0229] 按實施例29的方法，化合物117與，-8〇(^-1^-016 · HC1制得124,收率47.6%。
[0230] MS(ESI+)m/z : 869.63[M+H] + ( 100% ) 〇
[0231] 化合物124的化學結構式如下：
[0233]實施例37:本發明部分優選二氫卟吩p6類氨基酸衍生物的體外PDT抗腫瘤活性試 驗。
[0234] 1.材料
[0235] 細胞株選用小鼠黑色素瘤細胞(B16-F10)和人黑色素瘤細胞(A375)，購自中國科 學院上海細胞庫。
[0236]激光光源采用恩耐激光技術（上海)有限公司研制的660nm半導體激光治療儀，最 大輸出功率為2W。
[0237] 2.方法
[0238] 1)細胞培養:B16-F10和A375細胞分別培養于加入了 2mg/mL的碳酸氫鈉、4.5mg/mL 葡萄糖、100yg/mL鏈霉素硫酸鹽、40mg/mL慶大霉素、100U/mL青霉素、10 % (v/v)熱滅活胎牛 血清（FBS)的 RPMI 1640 培養基（Hyclone，Logan，UT，USA)或 DMEM 培養基（Hyclone，Logan， UT，USA)，后置于5%二氧化碳溫度為37°C的恒溫培養箱中培養。
[0239] 2)藥液配制：取本發明待測化合物和陽性對照藥物維替泊芬(>61^6口〇奸；[11，1^0-MA)溶于DMS0，配成300mM濃度的藥物儲存液。
[0240] 3)細胞暗毒性:于96孔板每孔上(Costar，Cambridge，MA，USA)接種5 X 103個B16- F10或A375細胞，然后培養于上述條件下培養。取待測樣品配成已知濃度的待測液，稀釋成 不同濃度加入細胞培養液，后再培養48小時。
[0241] CCK-8測定法：將細胞培養液吸出，加入含10% (v/v)CCK-8(D〇jind〇 Laboratories，Japan)的培養液200yL，繼續培養1 . 5小時，然后用酶標儀（Tecan， Switzer land)波長450nm，測定每孔的吸光度值。
[0242] 4)細胞光毒性:B16-F10或A375細胞按照上述條件培養，加入已知濃度的待測樣 品，培養24小時。然后用660nm波長光照射，光劑量10J/cm 2，繼續培養24小時。再選用CCK-8 法測定細胞的存活率。
[0243] 3.結果
[0244] 本發明部分中間體和優選目標化合物對體外腫瘤細胞的暗毒性和TOT殺傷效應結 果，見表2。
[0245] 表2部分中間體和目標化合物對腫瘤細胞的半數抑制濃度Κ：5〇(μΜ)
[0247] 上述實驗結果顯示：
[0248] 在光照劑量為lOJ/cm2條件下，絕大多數測試化合物對受試腫瘤細胞株均具有優 良的PDT抗癌活性，且其治療指數(暗毒和光毒比）顯著優于同類上市的陽性對照光敏藥物 維替泊芬（verteporf ?η,ΒΡ?-ΜΑ)。
[0249] 以上已對本發明創造的較佳實施例進行了具體說明，但本發明創造并不限于所述 實施例，熟悉本領域的技術人員在不違背本發明創造精神的前提下還可作出種種的等同的 變型或替換，這些等同的變型或替換均包含在本申請權利要求所限定的范圍內。
【主權項】
1. 一種二氫卟吩p6類氨基酸衍生物及其藥用鹽，所述的二氫卟吩p6類氨基酸衍生物的 化學結構如式(I)所示：式⑴中， Ri代表氨基酸殘基； R2 代表 CH=CH2、CH( 0R3) CH3; R3代表H、低級烷基、高級烷基、（CH2)m0R4或(CH2CH 20)kR5; R4代表H、低級烷基； R5代表H、低級烷基； m表示3-6之間的整數； k表示1-6之間的整數； 所述的低級烷基，指含1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基； 所述的高級烷基，指含7-18個碳原子的直鏈或支鏈烷基。2. 根據權利要求1所述的一種二氫卟吩p6類氨基酸衍生物及其藥用鹽，其特征在于，式 ⑴中， Ri代表賴氨酸、谷氨酸或天冬氨酸； R2 代表 CH=CH2、CH (OCH3) CH3、CH (OC2H5) CH3、CH (0-n-C3H7) CH3、CH( 0-n-C4H9) CH3、CH (0-n-C5H11) CH3、CH (〇-n-C6Hii) CH3、CH (0-n-C8Hi7) CH3 〇3. 根據權利要求2所述的一種二氫卟吩p6類氨基酸衍生物及其藥用鹽，其特征在于，所 述的二氫卟吩p6類氨基酸衍生物中Ri和R 2分別組合如下：4. 根據權利要求1、2或3所述的一種二氫卟吩p6類氨基酸衍生物及其藥用鹽，其特征在 于，所述的藥用鹽為堿金屬鹽。5. 如權利要求1所述的一種二氫卟吩p6類氨基酸衍生物及其藥用鹽的制備方法，其特 征在于，該方法包括以下步驟： 以紫紅素-18為原料，依次經內酸酐堿開環、羧基甲基化和酯水解制得的二氫卟吩p6二 甲酯為關鍵中間體，二氫卟吩P6二甲酯結構中的7-丙羧基與氨基酸縮合或其2-乙烯基和7-丙羧基分別與醇和氨基酸發生加成和縮合反應，合成二氫卟吩p6類氨基酸衍生物。6. 根據權利要求5所述的一種二氫卟吩p6類氨基酸衍生物及其藥用鹽的制備方法，其 特征在于，所述的合成原料紫紅素-18是用葉綠素a經酸、堿及氧化降解制備得到的。7. 根據權利要求5所述的一種二氫卟吩p6類氨基酸衍生物及其藥用鹽的制備方法，其 特征在于，該方法包括以下步驟： A、以葉綠素a(chlorophyll a，VDI)為原料制備二氫卟吩p6二甲酯（chlorin p6 dimethylester，IV)，反應流程如下，反應方法為A1至A2:八1、制備紫紅素-18(口11印111'；[11-18，￥1) 首先，市售糊狀葉綠素的乙醚溶液，在〇~5°C條件下與等體積量濃鹽酸攪拌反應0.5h 生成脫鎂葉綠酸a(phe〇ph〇rbide a，W);然后，化合物W在25%氫氧化鉀的正丙醇液中通 氧氣反應2制得VI; A2、制備二氫卟吩p6二甲酯（chlorin p6 dimethylester，IV) 化合物VI溶于四氫呋喃-甲醇（1:4，v/v)，加等體積0.5mol. L-1氫氧化鈉反應2h制得不 穩定產物二氫卟吩p6(chlorine p6)后迅速與重氮甲燒反應制得二氫B卜吩p6三甲酯 (chlorin p6 trimethylester，V)，化合物V經25%HC1 水解制得IV; B、用化合物IV制備目標化合物二氫卟吩p6類氨基酸衍生物I，反應流程如下，反應方法 為B1至B2:bi、制備二氫卟吩P6醚類衍生物n 將化合物IV與過量的33 %HBr冰醋酸液室溫反應24h制得中間體m，中間體m在過量 K2c〇3存在下與各種醇(r3〇h)反應制得化合物n ; B2、制備二氫卟吩p6類氨基酸目標衍生物I: 將化合物IV或n的二氯甲烷液在1-(3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽 (EDCI)、N-羥基苯并三唑(HOBt)和N，N-二甲基異丙基胺(DIPEA)存在下分別與各種羧基或/ 和氨基保護的酸性或堿性氨基酸鹽酸鹽(Ri'_NH 2 ? HC1)反應24h后再經三氟醋酸(TFA)脫去 叔丁基或叔丁氧羰基或和氫氧化鋰脫甲基酯制得二氫卟吩P6類氨基酸目標衍生物I。8. 如權利要求1、2或3所述的一種二氫卟吩p6類氨基酸衍生物及其藥用鹽在制備抗腫 瘤藥物中的應用。9. 根據權利要求8所述的一種二氫卟吩p6類氨基酸衍生物及其藥用鹽在制備抗腫瘤藥 物中的應用，其特征在于，所述的抗腫瘤藥物為光動力治癌藥物。10. 如權利要求1所述的一種二氫卟吩P6類氨基酸衍生物及其藥用鹽在制備光動力治 療老年性黃斑變性、鮮紅斑痣，或尖銳濕疣藥物中的應用。
【文檔編號】A61P27/02GK106046008SQ201610356755
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年5月25日
【發明人】姚建忠, 孟志, 張萬年, 盛春泉, 繆震元, 董國強, 賈寧陽, 韓貴焱, 劉明輝, 劉娜
【申請人】中國人民解放軍第二軍醫大學