一種厚樸酚的制備方法及其抗腫瘤應用
【專利摘要】本發明涉及一種厚樸酚的制備方法及其抗腫瘤應用。其制備方法包括以下步驟：（1）取干燥的藥材厚樸，粉碎，過20目篩；（2）超聲波提取；（3）大孔吸附樹脂富集；（4）高速逆流色譜儀分離。本發明具有操作簡單、得率高、污染少、耗能小等優點，適合高純度厚樸酚的生產。經藥效學評價，所得厚樸酚具有明顯的抗腫瘤效果，為開發應用新一代天然來源的抗腫瘤藥物開拓了新徑。
【專利說明】
一種厚樸酚的制備方法及其抗腫瘤應用
技術領域
[0001] 本發明涉及一種厚樸酚的制備方法及其抗腫瘤應用。
【背景技術】
[0002] 厚樸，為木蘭科植物厚樸或凹葉厚樸的干燥樹皮、枝皮后根皮，是我國重要的傳統 中藥。其性溫，味苦辛，入脾、胃、肺、大腸經，具有燥濕消痰、下氣除滿的功能，主治濕滯傷 中、脘痞吐瀉、食積氣滯、腹脹便秘、痰飲喘咳。
[0003] 厚樸的主要有效成分之一為厚樸酚。厚樸酚為棕褐色至白色精細粉末，氣香，味辛 辣，微苦。單體為無色針狀結晶，厚樸酚具有明顯的、持久的中樞性肌肉松弛、中樞神經抑制 作用，抗炎、抗菌、抗病原微生物、抗潰瘍、抗氧化、抗腫瘤等藥理作用。其中，在抗菌作用方 面，厚樸酚對革蘭氏陽性菌、耐酸性菌、絲狀真菌有顯著的抗菌活性，對變形鏈球菌有更加 顯著的抗菌作用，對葡萄球菌的抑制作用最強。臨床上主要用作消除胸腹滿悶、鎮靜中樞神 經、運動員肌肉松弛、抗真菌、抗潰瘍等藥。
[0004] 通過文獻檢索，國內尚未見厚樸酚用于制備抗腫瘤藥物的報道并不多見。
【發明內容】
[0005] 為滿足臨床需要，擴大用藥品種，更好地治療癌癥，本發明提供了一種厚樸酚的制 備方法及其在抗腫瘤藥物中的應用。
[0006] 為了達到上述目的，本發明采用以下技術方案： (1) 原料預處理:取干燥的藥材厚樸，粉碎，過20目篩； (2) 超聲提取:將原料粉末置于頻率為40KHz的超聲裝置中，加入原料3~5倍的60~70%的 乙醇溶液，于60~70°C提取2~3h，趁熱抽濾，濾渣反復提取2次，合并提取液，減壓濃縮，得濃 縮液； (3) 大孔樹脂富集:將所得濃縮液加入大孔吸附樹脂柱，先用2~3BV的蒸餾水洗脫除雜， 再以4~6BV的60~70%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮、干燥，即得厚樸酚粗提物。
[0007] (4)將上述粗品采用高速逆流色譜法分離純化，以氯仿-甲醇-水為兩相溶劑系統， 取上相做固定相、下相為流動相，主機轉速800-1000rpm，流速為2-3mL/min，收集目標流分， 回收試劑，真空干燥得產品。
[0008] 步驟(3)中所述的大孔吸附樹脂類型為D-101、AB-8、HPD300中的任意一種。
[0009] 步驟(4)中所述的氯仿-甲醇-水體積比為8:13: 9。
[0010] 本發明制得的厚樸酚在抗腫瘤藥物中的應用。
[0011] 厚樸酚采用MTT法（四甲基偶氮唑鹽微量酶反應比色法)進行抗腫瘤活性測試。
[0012] 試驗用細胞株： HeLa:人子宮頸癌細胞株;HT-1080:人纖維肉瘤細胞株；B16-BL6:黑色素瘤細胞株。 [0013]方法：（1)〇.25%胰酶消化對數生長期細胞，10%_3的1^0 1640調細胞濃度50000 個/ml。96孔板100ul/孔。設溶劑對照，每組3平行孔。37°C，5%C〇2、95%空氣的培養箱中預培 養24h，棄上清。
[0014] (2)加藥物5個10倍稀釋的濃度(溶劑為有二甲亞砜和水），為10 -4 mol/L。
[0015] (3)細胞連續培養48h，每孔加入10μ1 5mg/ml的MTT溶液（以無血清培養基配制）， 繼續培養4h。
[0016] (4)吸去上清。加入200μ1 DMS0,輕輕振蕩以使甲臜完全溶解。570nm處用酶標儀測 定0D值。
[0017] (5)計算抑制率(％)=(對照0D-藥物0D)/對照0D*100% 實驗結果:厚樸酚的抑制率以相對于對照(添加 DMS0)的結果如下表1。
[0018] 表1厚樸酚的腫瘤細胞增值抑制率％
由表1的結果可知，厚樸酚具有良好的抑制腫瘤細胞生長的活性，且作用呈濃度依賴 性，其可在制備抗腫瘤藥物中得到應用。
[0019] 本發明所述厚樸酚在制備抗腫瘤藥物時，可按照常規的制劑方法以厚樸酚為藥物 活性成分，添加適宜的藥物載體，制成各種藥物劑型，如片劑、膠囊、滴丸、注射劑、緩控釋劑 等等。
[0020] 下面將結合【具體實施方式】進一步說明本發明，但本發明要求保護的范圍并不局限 于下列實施方式。
[0021]
【具體實施方式】： 實施例1: 取干燥的藥材厚樸，粉碎，過20目篩;將原料粉末置于頻率為40KHz的超聲裝置中，加入 原料3倍的60%的乙醇溶液，于60°C提取2h，趁熱抽濾，濾渣反復提取2次，合并提取液，減壓 濃縮，得濃縮液;將所得濃縮液加入D-101大孔吸附樹脂柱，先用2BV的蒸餾水洗脫除雜，再 以4BV的60%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮、干燥，即得厚樸酚粗提物。取氯仿-甲醇-水 按8:13:9體積比置于分液漏斗中，混勻后，靜置，放出上層作為固定相，下層作為流動相，將 粗品用下相溶解，開啟制備型高速逆流色譜儀，先將固定相栗入色譜柱中，再以2mL/min流 速栗入流動相，并通過進樣閥連續進樣，控制轉速為800r/min，收集目標流分，濃縮，干燥得 產品，經高效液相色譜檢測，其純度為95.6%。
[0022] 實施例2: 取干燥的藥材厚樸，粉碎，過20目篩;將原料粉末置于頻率為40KHz的超聲裝置中，加入 原料4倍的65%的乙醇溶液，于70°C提取3h，趁熱抽濾，濾渣反復提取2次，合并提取液，減壓 濃縮，得濃縮液;將所得濃縮液加入AB-8大孔吸附樹脂柱，先用3BV的蒸餾水洗脫除雜，再以 5BV的65%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮、干燥，即得厚樸酚粗提物。取氯仿-甲醇-水按 8:13:9體積比置于分液漏斗中，混勻后，靜置，放出上層作為固定相，下層作為流動相，將粗 品用下相溶解，開啟制備型高速逆流色譜儀，先將固定相栗入色譜柱中，再以2mL/min流速 栗入流動相，并通過進樣閥連續進樣，控制轉速為l〇〇〇r/min，收集目標流分，濃縮，干燥得 產品，經高效液相色譜檢測，其純度為98.3%。
[0023] 實施例3: 取干燥的藥材厚樸，粉碎，過20目篩;將原料粉末置于頻率為40KHz的超聲裝置中，加入 原料5倍的70%的乙醇溶液，于65°C提取3h，趁熱抽濾，濾渣反復提取2次，合并提取液，減壓 濃縮，得濃縮液;將所得濃縮液加入HPD300大孔吸附樹脂柱，先用3BV的蒸餾水洗脫除雜，再 以6BV的70%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮、干燥，即得厚樸酚粗提物。取氯仿-甲醇-水 按8:13:9體積比置于分液漏斗中，混勻后，靜置，放出上層作為固定相，下層作為流動相，將 粗品用下相溶解，開啟制備型高速逆流色譜儀，先將固定相栗入色譜柱中，再以3mL/min流 速栗入流動相，并通過進樣閥連續進樣，控制轉速為900r/min，收集目標流分，濃縮，干燥得 產品，經高效液相色譜檢測，其純度為97.5%。
[0024] 實施例4: 本發明藥物顆粒劑 將厚樸酚加入乙醇作黏合劑，加入淀粉作填充劑，制成顆粒。
[0025] 實施例5: 本發明藥物片劑 將厚樸酚，加入淀粉、糊精、硬脂酸鎂等，混合制成濕粒，壓片，每片含厚樸酚200mg。
【主權項】
1. 一種厚樸酚的制備方法，其特征在于包括以下步驟： (1) 原料預處理:取干燥的藥材厚樸，粉碎，過20目篩； (2) 超聲提取:將原料粉末置于頻率為40KHz的超聲裝置中，加入原料3~5倍的60~70%的 乙醇溶液，于60~70°C提取2~3h，趁熱抽濾，濾渣反復提取2次，合并提取液，減壓濃縮，得濃 縮液； (3) 大孔樹脂富集:將所得濃縮液加入大孔吸附樹脂柱，先用2~3BV的蒸餾水洗脫除雜， 再以4~6BV的60~70%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮、干燥，即得厚樸酚粗提物； (4) 將上述粗品采用高速逆流色譜法分離純化，以氯仿-甲醇-水為兩相溶劑系統，取上 相做固定相、下相為流動相，主機轉速800-1 OOOrpm，流速為2-3mL/min，收集目標流分，回收 試劑，真空干燥得產品。2. 根據權利要求1所述的一種厚樸酚的制備方法，其特征在于，步驟(3)中所述的大孔 吸附樹脂類型為D-101、AB-8、HPD300中的任意一種。3. 根據權利要求1所述的一種厚樸酚的制備方法，其特征在于，步驟(4)中所述的氯仿-甲醇-水體積比為8:13:9。4. 根據權利要求1所述方法制得的厚樸酚在制備具有抗腫瘤作用的藥物中的應用。
【文檔編號】A61P35/00GK106045821SQ201610307141
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年5月11日
【發明人】楊成東
【申請人】南京澤朗醫藥科技有限公司