一種與人非小細胞肺癌細胞特異結合的核糖核酸適配體及其篩選方法
【專利摘要】本發明涉及一種與人非小細胞肺癌細胞特異結合的核糖核酸適配體(RNA aptamer)及其篩選方法。本發明人基于活體內in vivo-SELEX篩選技術，獲得了一條可以與人非小細胞肺癌細胞特異性結合的核糖核酸適配體(RNA aptamer)。該核糖核酸適配體可應用于與肺癌化療藥物、siRNA等結合，構成靶向性藥物，以實現肺癌的靶向治療。該核糖核酸適配體與熒光染料等結合，可以制備人非小細胞肺癌的診斷試劑。
【專利說明】
一種與人非小細胞肺癌細胞特異結合的核糖核酸適配體及 其篩選方法
技術領域
[0001] 本發明屬于生物醫學領域；更具體地，本發明涉及一種與人非小細胞肺癌細胞特 異結合的核糖核酸適配體及其篩選方法。
【背景技術】
[0002] 癌癥已成為世界人口的主要死亡原因之一，而居全國惡性腫瘤發病率和死亡率第 一位的均是肺癌。目前針對癌癥的診療關鍵在于開發有效的早期診斷方法以及高度特異性 地針對癌細胞的靶向藥物。然而，臨床上能可靠用于癌癥早期診斷或治療的靶點少之又少。 因此開發能特異性識別腫瘤組織而非正常組織的靶向診斷或治療藥物成為抗癌藥物研發 中的重中之重。
[0003] 適配體（aptamer)是可以折疊成三維結構，通過空間構型與革E分子特異性結合的 一段單鏈寡核苷酸序列（ssDNA，RNA或修飾后的RNA)。由于適配體具有與靶標結合的特異 性，具有被開發為特異性的與靶組織結合的核酸藥物的價值。
[0004] 但是，雖然核酸的親和識別特性已經發現20年，但是由于分析手段的限制，人們 對這種特性的來源與化學基礎的理解仍然極為有限。目前本領域對于核酸適配體的研究較 為滯后，真正可實際應用的核酸適配體屈指可數；且目前基于核酸適配體的分析對象都集 中于凝血酶等少數幾個特定靶分子，實際應用遠不及抗體普及，這是由于核酸適配體獲得 難度大導致的。核酸適配體的篩選和結構表征是一個煩瑣耗時的工作，需要長期的經驗和 耐心，很多篩選由于得不到有用的適配體而半途而廢，篩選和表征成為制約核酸適配體廣 泛應用的瓶頸，直接導致目前可用的核酸適配體少之又少。
[0005] 目前，本領域中適配體的篩選主要是基于一種以擴增為基礎的稱之為指數富集的 配體系統（Systematic evolution of ligands by exponential enrichment，SELEX)的篩 選技術。SELEX篩選技術中，首先將ssDNA或RNA文庫與靶蛋白或細胞進行孵育，洗去未結 合的序列，再將結合的序列洗脫作為下一輪篩選的文庫，如此循環往復，多輪篩選，通過克 隆測序，以期篩選與靶標特異結合的適配體序列。但SELEX技術目前尚無標準篩選方法，需 要根據靶標的特點和預期應用來確定。盡管目前發展出了復雜體系篩選、多靶標多文庫篩 選和自動化篩選等，但如何發展為可獲得更多適于生物醫學應用的核糖核酸適配體的篩選 技術，仍然是研究的重點。
[0006] 綜上，盡管已經有SELEX技術應用于篩選核酸適配體，但是本領域中對于臨床真 正有用的適配體的開發和篩選是非常困難的。盡管本領域技術人員進行了大量的研究和篩 選，但是對于特定的癌癥真正具有結合能力的適配體仍然少之又少。
【發明內容】
[0007] 本發明的目的在于提供一種與人非小細胞肺癌細胞特異結合的核糖核酸適配體 及其篩選方法。
[0008] 在本發明的第一方面，提供一種特異性靶向人非小細胞肺癌的核糖核酸適配體， 選自：
[0009] (1)具有如SEQ ID NO: 1所示的核苷酸序列的核糖核酸適配體；或
[0010] (2)在嚴格條件下能夠與SEQ ID NO: 1所示的核苷酸序列雜交且具有特異性結合 人非小細胞肺癌細胞功能的核糖核酸適配體；或
[0011] (3)與SEQ ID NO: 1所示的核苷酸序列有80%以上（較佳地85%以上；更佳地 90%以上；進一步更佳地95%以上）相同性且具有特異性結合人非小細胞肺癌細胞功能的 核糖核酸適配體；或
[0012] (4) SEQ ID NO: 1所示的核苷酸序列的截短體，且具有特異性結合人非小細胞肺癌 細胞功能的核糖核酸適配體；或
[0013] (5)核苷酸序列與（1)_(4)任一限定的核糖核酸適配體的核苷酸序列互補的核糖 核酸適配體。
[0014] 在本發明的了另一方面，提供所述的核糖核酸適配體的用途，用于制備特異性靶 向人非小細胞肺癌的靶向性藥物。
[0015] 在本發明的了另一方面，提供一種特異性靶向人非小細胞肺癌的靶向性藥物，所 述的靶向性藥物包括：所述的核糖核酸適配體，以及與之相連的人非小細胞肺癌治療藥物； 較佳地，所述的人非小細胞肺癌治療藥物包裹于納米微球。
[0016] 在一個優選例中，所述的人非小細胞肺癌治療藥物包括：具有抑制人非小細胞肺 癌的小分子化合物（如化療藥物），核酸藥物（如siRNA或shRNA)或蛋白藥物。一般地，所 述治療藥物本身不具有革G向人非小細胞肺癌的革E1向性。
[0017] 在本發明的了另一方面，提供所述的靶向性藥物在制備抑制人非小細胞肺癌的藥 物中的應用。
[0018] 在本發明的了另一方面，提供所述的核糖核酸適配體的用途，用于制備特異性診 斷人非小細胞肺癌的診斷試劑。
[0019] 在本發明的了另一方面，提供一種特異性診斷人非小細胞肺癌的診斷試劑，所述 的診斷試劑包括：所述的核糖核酸適配體，以及與之相連的可檢測標記物。
[0020] 在一個優選例中，所述的診斷試劑中，所述的可檢測標記物是熒光標記。
[0021] 在另一優選例中，所述的熒光標記包括（但不限于）：Cy3，Cy5,熒光素，FITC，熒光 納米微球。
[0022] 在本發明的了另一方面，提供一種特異性診斷人非小細胞肺癌的診斷試劑盒，所 述的試劑盒中包括：前面任一所述的診斷試劑。
[0023] 在本發明的了另一方面，提供一種特異性治療人非小細胞肺癌的藥盒，所述的藥 盒中包括：所述的特異性革G向人非小細胞肺癌的祀向性藥物。
[0024] 本發明的其它方面由于本文的公開內容，對本領域的技術人員而言是顯而易見 的。
【附圖說明】
[0025] 圖1、用Mfold軟件對本發明的序列進行二級結構模擬的結構示意圖。
[0026] 圖2、RNA序列分別與人非小細胞肺癌NCI-H460細胞結合后的熒光顯微鏡照片。
[0027] A) Cy3標記的RNA起始文庫；
[0028] B) Cy3標記的第五輪篩選后的RNA庫；
[0029] C) Cy3標記的5條隨機RNA ;
[0030] D)Cy3標記的本發明的核糖核酸適配體（RNA aptamer)。
[0031] 圖3、本發明的核糖核酸適配體分別與NCI-H460細胞，293T細胞，Hela細胞的結 合效果。
[0032] A、經活體篩選后所得2'-F-RNA適配體與293T細胞結合后的熒光顯微鏡照片。A) 明場；B)Cy3(紅光）；C)Hoechst33342(藍光）；D)B&C merge。
[0033] B、經活體篩選后所得2'-F_RNA適配體與Hela細胞結合后的熒光顯微鏡照片。A) 明場；B)Cy3(紅光）；C)Hoechst33342(藍光）；D)B&C merge。
[0034] C、經活體篩選后所得2' -F-RNA適配體與NCI-H460細胞結合后的熒光顯微鏡照 片。A)明場；B)Cy3(紅光）；C)Hoechst33342(藍光）；D)B&C merge。
[0035] 圖4、本發明的核糖核酸適配體的篩選過程的流程示意圖。
【具體實施方式】
[0036] 本發明人經過深入的研究，將傳統SELEX篩選技術改進為活體內in vivo-SELEX 篩選技術，獲得了一條可以與人非小細胞肺癌細胞特異性結合的核糖核酸適配體。該核糖 核酸適配體可被應用于與肺癌化療藥物、siRNA等結合，構成靶向性藥物，以實現肺癌的靶 向治療。
[0037] 本發明人致力于針對人非小細胞肺癌的靶向性分子的研究，在長期的研究和篩選 工作中發現，采用傳統SELEX篩選技術，并不能獲得能夠有效地靶向人非小細胞肺癌的核 糖核酸適配體，這可能是由于人非小細胞肺癌細胞表面缺少足夠被有效結合的靶點或其它 不明原因。為此，本發明人進行了 SELEX篩選技術的改造，經過反復的試驗和調整，開發了 一種活體內in vivo-SELEX篩選技術，該技術直接采用活體動物作為篩選革巴標，在動物內進 行SELEX篩選。利用in vivo-SELEX篩選技術，本發明人成功篩選獲得了可以與人非小細 胞肺癌細胞特異性結合的核糖核酸適配體。
[0038] 在本發明的【具體實施方式】中，在裸鼠體內構建人非小細胞肺癌細胞皮下瘤模型， 直接對人非小細胞肺癌NCI-H460荷瘤模型進行體內篩選，采用RNA文庫進行活體SELEX，將 RNA文庫中嘧啶核苷2'位以氟基團修飾后經尾靜脈注射到裸鼠體內，然后將與腫瘤結合的 文庫進行擴增，通過體外轉錄和修飾制備下一輪的篩選產物，如此循環，經多輪篩選后獲得 了一條特異性RNA適配體序列，篩選流程如圖4。
[0039] 本發明的核糖核酸適配體具有SEQ ID NO: 1所示的核苷酸序列，其構成的結構如 圖1所示。
[0040] 本發明的核糖核酸適配體是RNA形式。本發明的核糖核酸適配體的全長核苷酸序 列或其片段通常可以用體外轉錄、重組或人工合成的方法獲得。
[0041] 本發明也涉及在所述的核糖核酸適配體基礎上經過修飾的核糖核酸適配體，例 如，為了提高核糖核酸適配體的穩定性或體內有效作用時間，在序列的兩端或中間位置的 部分堿基上進行一些化學修飾。為了提高核酸的穩定性而進行修飾的手段是本領域技術人 員了解的。
[0042] 多核苷酸的雜交是本領域技術人員熟知的技術，特定的一對核酸的雜交特性指示 它們的相似性或同一性。因此，本發明還包括與本發明的核糖核酸適配體的核苷酸序列雜 交且兩個序列之間具有至少70%，更佳地至少80% (例如85%、90%、95%、96%、97%、或 98% )相同性的多核苷酸，所述核酸也具有特異性結合人非小細胞肺癌細胞的功能。
[0043] 序列"相同性"是指按照位置，相應堿基相同的百分比，其能指示兩條或多條核酸 之間的相似水平（也稱為序列同源性、相似性或同一性）。
[0044] 本發明特別涉及在嚴格條件下與本發明所述多核苷酸可雜交的多核苷酸。"嚴 格條件"是指：（1)在較低離子強度和較高溫度下的雜交和洗脫，如〇. 2 XSSC，0. 1% SDS， 60°C;或（2)雜交時加有變性劑，如50% (v/v)甲酰胺，0. 1%小牛血清/0. l%Ficoll，42°C 等；或⑶僅在兩條序列之間的相同性至少在70%以上、75%以上、80%以上、85%以上或 90%以上，更優選是95%以上時才發生雜交。并且，可雜交的多核苷酸也具有特異性結合人 非小細胞肺癌細胞的功能。
[0045] 本發明也涉及包含所述的多核苷酸的載體，以及也涉及含有所述多核苷酸的宿主 細胞。
[0046] 本發明也涉及一種特異性靶向人非小細胞肺癌的靶向性藥物，所述的靶向性藥物 包括：所述的核糖核酸適配體，以及與之相連的人非小細胞肺癌治療藥物。
[0047] 所述的人非小細胞肺癌治療藥物可以是任何本領域中認為對于人非小細胞肺癌 有抑制作用的藥物，且該治療藥物能夠與核酸發生較為穩定的連接（含偶聯）。所述的治 療藥物例如包括：具有抑制人非小細胞肺癌的小分子化合物（如化療藥物），核酸藥物（如 siRNA或shRNA)或蛋白藥物。一般地，所述治療藥物本身不具有靶向人非小細胞肺癌的靶 向性。
[0048] 本發明的核糖核酸適配體是直接以人類腫瘤組織為篩選靶標模型，利用活 體-SELEX篩選出的可與腫瘤組織特異性結合的適配體，潛在的腫瘤靶向生物標記物均以 天然構象存在于腫瘤組織表面或內部，有利于腫瘤診斷及靶向藥物的開發，能夠大大縮短 基于適配體的靶向核酸藥物進入臨床前試驗期，提高臨床應用的成功率。
[0049] 本發明的核糖核酸適配體與抗體功能類似，但比抗體具有更多的優勢，具有更高 的親和力與特異性；無免疫原性；能夠大規模化學合成，成本低；穩定性好，易于保存等優 點。因此，本發明的核糖核酸適配體具有廣泛的應用前景。
[0050] 傳統的體外核糖核酸適配體的篩選方法利用體外表達的蛋白及細胞進行篩選，無 法模擬蛋白在體內的天然空間構象、抗原表位的暴露、與其他生物分子作用和影響，以及蛋 白在體內的表達水平、分布形式等，導致靠體外篩選到的適配體可能根本無法靶向到靶標， 因此發展高效有力的體內篩選方法顯得尤為重要。本發明利用構建的NCI-H460皮下瘤模 型，將荷瘤鼠內腫瘤直接作為篩選的靶標，直接模擬體內腫瘤環境，篩選到的適配體更有利 于癌癥診斷及治療藥物的開發。
[0051] 在以往進行適配體研究過程中，均是在篩選出潛在的適配體分子后，再進行后續 的序列修剪、末端加帽、PEG修飾等優化處理，本發明在活體SELEX篩選過程中，利用T7RNA 聚合酶突變型（Y639F)插入2'-氟修飾的嘧啶堿基，制備能夠抗核糖核酸酶的RNA ;且每一 輪篩選過程中均對RNA文庫進行PEG修飾，提高其穩定性和體內半衰期，得到的本發明的適 配體具有抗核酸酶活性，且不會因為后期的修飾改變其三維結構。
[0052] 將本發明的核糖核酸適配體用熒光染料Cy3進行標記，將標記的核糖核酸適配體 與人非小肺癌NCI-H460細胞及其他細胞作用，其能夠特異性且高親和力的與人非小肺癌 NCI-H460細胞結合。利用本發明的核糖核酸適配體對其結合的靶分子進行研究，可以得到 該腫瘤標志物，這對于肺癌的早期檢測具有重要意義，在肺癌的診斷方面有良好的應用前 景。將本發明的核糖核酸適配體與化療藥物、siRNA等結合，能夠實現肺瘤的靶向治療，對 于肺癌的治療方面也有良好的應用前景。
[0053] 下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用于說明本發明 而不用于限制本發明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規條 件如J.薩姆布魯克等編著，分子克隆實驗指南，第三版，科學出版社，2002中所述的條件， 或按照制造廠商所建議的條件。
[0054] 實施例1、篩選核糖核酸適配體
[0055] 本實施例的上述可用于檢測人非小細胞肺癌NCI-H460細胞的核糖核酸適配體主 要采用以下篩選方法篩選得到，具體包括以下步驟：
[0056] 1、合成以下序列所示的隨機單鏈DNA文庫和引物
[0057] 隨機文庫：
[0058] 5 ' -CACTAATACGACTCACTATAGGGAGAGAACAATGACCTNGAGTGCATTGCATCACGTCAGTAG-3 ' (SEQ ID NO:2)；
[0059] 5' 引物：5' -CACTAATACGACTCACTATAGGGAGAGAACAATG-3'（SEQ ID N0:3);
[0060] 3' 引物：5' -CTACTGACGTGATGCAATGCACTC-3'（SEQ ID N0:4)。
[0061] 2、NCI-H460 (簡稱H460)皮下瘤模型構建
[0062] 1640培養基加10 %胎牛血清培養人非小細胞肺癌細胞株NCI-H460細胞（購自中 國科學院上海生科院細胞資源中心）至鋪滿瓶底95%，去除培養基后用10mL PBS洗滌，用 0. 25%胰酶消化后以2X l〇7mL的濃度懸于PBS溶液中，于5周齡裸鼠腋下接種細胞，每只 鼠接種100 y L。接種后每天觀察裸鼠的腫瘤生長情況，腫瘤直徑長至5mm以上，認為模型構 建成功，即可用于篩選。
[0063] 3、PEG修飾的RNA文庫構建
[0064] 3. 1 RNA文庫體外轉錄
[0065] 以上述隨機單鏈 DNA 文庫為模板，以 2' F-dCTP、2' F-dUTP，CTP，ATP，amin〇-GMP 為 底物，進行體外轉錄反應。反應條件為：37°C，8h。反應完成后用DNase I去除DNA模板，以 苯酚/氯仿抽提、乙醇沉淀法得到純化的RNA文庫。
[0066] 3. 2 PEG 修飾
[0067] 將乙醇沉淀后的RNA懸于100 y L DEPC-H20中，加入等體積0. 2MNaHC03溶液，再加 入適量NHS-PEG (30kD)干粉，室溫反應2h，加入終濃度為20mM的Tris-HCl緩沖液中和未反 應的NHS，即得PEG修飾的RNA文庫。
[0068] 4、In vivo-SELEX篩選獲得NCI-H460 (簡稱H460)特異核糖核酸適配體文庫。
[0069] 4. 1尾靜脈注射
[0070] 用400 y L結合緩沖液溶解lnmol上述PEG修飾的RNA文庫，95°C變性3min，置于 37°C緩慢折疊成二級結構；然后將折疊后的RNA文庫尾靜脈注射3只荷瘤裸鼠。
[0071] 4. 2腫瘤提取
[0072] 將RNA通過尾靜脈注射入裸鼠體內后，待其在體內循環5~6h ;將裸鼠脫頸椎處 死，取出腫瘤組織，用PBS淋洗3遍后，稱重。
[0073] 4. 3 RNA 抽提
[0074] 將提取的腫瘤組織用干烤過的眼科剪刀剪成小碎塊，加入適量Trizol，用一次性 研磨件研磨成懸液，室溫放置5min ;加入1/5體積的氯仿，劇烈振蕩15sec，室溫放置3min。 12,000rpm 4°C離心10min ;吸取上層水相轉移至干凈的離心管中，加入等體積異丙醇，混 勾，室溫放置20min。12,000rpm 4°C離心10min，棄上清；加入lmL 75%乙醇洗滌沉淀。 12, OOOrpm 4°C離心5min，棄上清。室溫干燥lOmin ;懸于一定量的DEPC_H20。
[0075] 4. 4 DNase I 及 RNase A 處理
[0076] 將上一步提取的RNA取出1/2進行DNase I及RNase A處理，反應條件為37°C， lh。將酶滅活后即為篩選所得H460的特異核糖核酸適配體文庫。
[0077] 5、進行反轉錄-PCR擴增文庫
[0078] 取100 y L篩選所得的H460特異核糖核酸適配體文庫進行常規反轉錄，條件為：
[0079] 1)RNA與引物孵育：70°C lOmin，冰上急冷2min ;
[0080] 2)反轉錄：42°C lh，70°C 15min，冰上急冷2min ;然后以反轉錄后產物為模板進行 常規PCR擴增，擴增條件為：94°C 3min ;94°C 30sec，62°C 30sec，72°C 30sec，經合適循環輪 數；72°C 3min ;每一輪篩選后需先進行預擴增確定合適的循環輪數，再進行本步驟的擴增， 得到擴增產物。
[0081] 6、重復篩選
[0082] 將步驟5得到的DNA擴增產物代替步驟3. 1中的DNA隨機文庫，重復上述步驟3~ 5所示的RNA文庫構建、體內篩選及反轉錄-PCR擴增過程。隨著篩選輪數的增加，逐漸減少 尾靜脈注射的RNA文庫用量，至5輪篩選后，將所得產物進行克隆測序，對測序結果進行分 析后，最終獲得富集度高的一條序列，即為本發明的可與人非小細胞肺癌NCI-H460細胞 特異結合的核糖核酸適配體。
[0083] 本發明的核糖核酸適配體的序列如下（SEQ ID NO: 1):
[0085] 用Mfold軟件對本發明的核糖核酸適配體進行二級結構模擬。用Mfold軟件對本 發明的序列進行二級結構模擬后的結構示意圖如圖1所示。
[0086] 實施例2、本發明的核糖核酸適配體的結合性能的觀測
[0087] 本實施例中，應用熒光顯微鏡檢測前述篩選獲得的核糖核酸適配體與人非小細胞 肺癌NCI-H460細胞的結合效果。
[0088] 在12孔板中培養人非小細胞肺癌NCI-H460細胞，倒出培養基，用PBS將H460細 胞洗滌三次，然后分別與含200nM的本發明的核糖核酸適配體（標記有Cy3)、RNA文庫（標 記有Cy3)以及其他5條混合序列（5random RNA mixture，標記有Cy3)的結合緩沖液37°C 孵育1小時，倒出反應液，用結合緩沖液洗滌三次，最后加入200 y L結合緩沖液用于檢測， 檢測結果如圖2所示。
[0089] 由圖2可見，本發明獲得的核糖核酸適配體對于人非小細胞肺癌細胞具有極其優 異的結合能力。
[0090] 實施例3、本發明的核糖核酸適配體的結合特異性
[0091] 本實施例中，應用熒光顯微鏡檢測本發明的核糖核酸適配體與人非小細胞肺癌 NCI-H460細胞結合的特異性。
[0092] 在12孔板中分別培養人非小細胞肺癌NCI-H460細胞和人293T細胞，Hela細胞， 倒出培養基，用PBS將H460細胞，293T細胞，Hela細胞洗滌三次，然后分別與含200nM的 本發明的核糖核酸適配體（標記有Cy3)的結合緩沖液37°C孵育1小時，倒出反應液，用結 合緩沖液洗滌三次，最后加入H 〇echst33342進行細胞核染色，用PBS洗滌細胞2次，再加入 200 y L結合緩沖液用于檢測，檢測結果如圖3A-C所示。
[0093] 由圖3可見，本發明獲得的核糖核酸適配體能夠特異性地結合人非小細胞肺癌細 胞，且發生結合的比例非常高（根據細胞計數統計，與90%以上的肺癌細胞結合），而與其 它細胞不發生交叉結合。
[0094] 在本發明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻被單獨 引用作為參考那樣。此外應理解，在閱讀了本發明的上述講授內容之后，本領域技術人員可 以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的范 圍。
【主權項】
1. 一種特異性靶向人非小細胞肺癌的核糖核酸適配體，其特征在于，選自： (1) 具有如SEQ ID NO: 1所示的核苷酸序列的核糖核酸適配體；或 (2) 在嚴格條件下能夠與SEQ ID NO: 1所示的核苷酸序列雜交且具有特異性結合人非 小細胞肺癌細胞功能的核糖核酸適配體；或 (3) 與SEQ ID NO: 1所示的核苷酸序列有80%以上相同性且具有特異性結合人非小細 胞肺癌細胞功能的核糖核酸適配體；或 (4) SEQ ID NO: 1所示的核苷酸序列的截短體，且具有特異性結合人非小細胞肺癌細胞 功能的核糖核酸適配體；或 (5) 核苷酸序列與（1)-(4)任一限定的核糖核酸適配體的核苷酸序列互補的核糖核酸 適配體。2. 權利要求1所述的核糖核酸適配體的用途，用于制備特異性靶向人非小細胞肺癌的 靶向性藥物。3. -種特異性靶向人非小細胞肺癌的靶向性藥物，其特征在于，所述的靶向性藥物包 括：權利要求1所述的核糖核酸適配體，以及與之相連的人非小細胞肺癌治療藥物；較佳 地，所述的人非小細胞肺癌治療藥物包裹于納米微球。4. 權利要求3所述的靶向性藥物在制備抑制人非小細胞肺癌的藥物中的應用。5. 權利要求1所述的核糖核酸適配體的用途，用于制備特異性診斷人非小細胞肺癌的 診斷試劑。6. -種特異性診斷人非小細胞肺癌的診斷試劑，其特征在于，所述的診斷試劑包括： 權利要求1所述的核糖核酸適配體，以及與之相連的可檢測標記物。7. 如權利要求6所述的診斷試劑，其特征在于，所述的可檢測標記物是熒光標記。8. 如權利要求7所述的診斷試劑，其特征在于，所述的熒光標記包括：Cy3, Cy5,熒光 素，FITC，熒光納米微球。9. 一種特異性診斷人非小細胞肺癌的診斷試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒中包括： 權利要求6-8任一所述的診斷試劑。10. -種特異性治療人非小細胞肺癌的藥盒，其特征在于，所述的藥盒中包括：權利要 求3所述的特異性靶向人非小細胞肺癌的靶向性藥物。
【文檔編號】C12N15/115GK106032534SQ201510053718
【公開日】2016年10月19日
【申請日】2015年2月2日
【發明人】王含璐, 劉日河, 蔣永平
【申請人】蘇州方舟基因藥業有限公司