一種可聚合季銨鹽改性的抗菌窩溝封閉劑及其制備方法
【專利摘要】本發明公開了一種可聚合季銨鹽改性的抗菌窩溝封閉劑及其制備方法，屬于口腔醫用材料技術領域。包括：40％～80％的樹脂單體基質，15％～40％的活性稀釋劑，3％～25％的功能單體，0.5％～10％的可聚合季銨鹽抗菌單體，1％～20％的納米級填料，0.5％～3％的NaF，0.05％～3％的光敏引發混合物、0.001％～0.05％的阻聚劑及0.3％～5％的顏料。該窩溝封閉劑具有良好的生物安全性，在口腔溫度下固化時間短，可操作時間長，且有著有效持久的抗菌效果；該制備方法操作簡單，綠色環保，適合工業化大規模生產。
【專利說明】
一種可聚合季銨鹽改性的抗菌窩溝封閉劑及其制備方法
技術領域
[0001] 本發明屬于口腔醫用材料技術領域，涉及一種用于窩溝封閉的抗菌型窩溝封閉 劑，具體涉及一種可聚合季銨鹽改性的抗菌窩溝封閉劑及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 人口腔內后牙的咬合面存在的凹陷部位稱為窩溝。能夠起到增大咀嚼面積、增加 摩擦力的作用，有利于把食物充分嚼碎。磨牙的窩溝比雙尖牙還要多且深，在恒牙更為明 顯。窩溝的深度和形狀各不相同，一個典型的磨牙窩溝深度可達1.5毫米，溝口直徑僅0.5毫 米，還有些多孔結構只有在高倍放大鏡下才能看到。但不可忽視的是這些部位裂隙比較深， 容易積聚致齲的細菌，而且不易清除掉，一旦細菌侵入，就能逐漸損壞整個牙齒，縮短牙齒 的壽命，醫學上稱這種齲為窩溝齲。根據口腔流行病學調查，我國青少年90%以上的齲發生 在窩溝部位。"六齡牙"就是窩溝齲的好發部位，它是萌出時間最早的恒磨牙，其咀嚼功能最 強大，對全口的咬合關系有重要作用，但那個時期兒童口腔衛生自我保持差，使其易發生齲 壞，甚至造成過早脫落，所以保護兒童的第一恒磨牙很重要。窩溝封閉是預防恒磨牙窩溝齲 的最有效方法。
[0003] 窩溝封閉是指不損傷牙體組織，將窩溝封閉材料涂布于牙冠咬合面、頰舌面的窩 溝點隙，當它流入并滲透窩溝后固化變硬，形成一層保護性的屏障，覆蓋在窩溝上，能夠阻 止致齲菌及酸性代謝產物對牙體的侵蝕，以達到預防窩溝齲的方法。窩溝封閉是一種無痛、 無創傷的方法，該技術在國際上已有50多年的使用歷史。
[0004] 光固化型的復合樹脂是封閉劑最常用的材料，具有很多優點，但是復合樹脂類材 料會產生聚合收縮，口腔細菌會侵入裂隙并繁殖生長，從而引起繼發齲和充填修復失敗。另 外，一些早期齲壞的牙體組織可能在臨床操作中被封閉至窩溝封閉劑下方，其中的致齲菌 可能會存活甚至繼續生長繁殖，導致齲壞的進一步發展。由此可見，賦予窩溝封閉劑抗菌性 能十分必要。
[0005] 目前臨床常用的抗菌窩溝封閉劑多屬于含氟的窩溝封閉劑，通過材料中氟離子的 釋放來達到抗菌的目的。氟離子的抗菌機制為：1、抑制致齲菌生長;2、抑制菌斑代謝;3、減 少細菌附著。雖然可釋出型抗菌材料具有一定的抗菌性，但抗菌物質只是簡單地分散在材 料中，無法控制抗菌成分的釋出動力學，隨著時間的推移，抗菌效能將逐漸喪失。且由于溶 出成分越來多，材料的機械性能將受到影響。另外釋出的物質有潛在的毒性作用，可能會導 致微生物內在平衡的破壞。
[0006] 季銨鹽類單體是通過與其他基質單體的化學反應，以共價鍵等方式將抗菌功能基 團穩固交聯結合于質材料中，因此抗菌物質不會釋出，主要對接觸到其表面的細菌發揮抑 作用，因而材料的化學、物理性能得以較好地維持，并可獲得久穩定的抗菌效果。
[0007] 但是，目前常用季銨鹽單體如MDPB及DMAE-CB等僅含有一個聚合官能團，與基質單 體發生共聚反應時形成線性合物，如果抗菌組分的含量過高，交聯程度降低，材料的機械性 能也會下降。
【發明內容】
[0008] 為了克服上述現有技術存在的缺陷，本發明的目的在于提供一種可聚合季銨鹽改 性的抗菌窩溝封閉劑及其制備方法，該窩溝封閉劑具有良好的生物安全性，在口腔溫度下 固化時間短，可操作時間長，且有著有效持久的抗菌效果;該制備方法操作簡單，綠色環保， 適合工業化大規模生產。
[0009] 本發明是通過以下技術方案來實現：
[0010] 一種可聚合季銨鹽改性的抗菌窩溝封閉劑，以質量百分比計，包括:40%~80%的 樹脂單體基質，15 %~40 %的活性稀釋劑，3 %~25 %的功能單體，0.5 %~10 %的可聚合季 銨鹽抗菌單體，1 %~20 %的納米級填料，0.5 %~3 %的NaF，0.05 %~3 %的光敏引發混合 物、0 · 001 %~0 · 05 %的阻聚劑及0 · 3 %~5 %的顏料。
[0011] 所述樹脂單體基質為雙酚A雙甲基丙烯酸縮水甘油酯、氨基甲酸酯雙甲基丙烯酸 酯或二甲基丙烯酸改性環氧樹脂。
[0012] 所述活性稀釋劑為雙甲基丙烯酸二縮三乙二醇酯、二乙二醇二甲基丙烯酸酯或三 縮丙二醇二丙烯酸酯。
[0013] 所述功能單體為甲基丙烯酸羥乙酯、10-甲基丙烯酰氧癸基磷酸酯或4-甲基丙烯 酰乙氧基苯三酸酐。
[0014] 所述可聚合抗菌單體為甲基丙烯酰氧乙基-芐基-二甲基氯化銨、甲基丙烯酰氧乙 基-正十六烷基-二甲基氯化銨、甲基丙烯酰氧乙基-間氯芐基-二甲基氯化銨、二甲基丙烯 酰氧乙基-正十二烷基-甲基溴化銨或二甲基丙烯酰氧乙基-正十六烷基-甲基溴化銨。
[0015] 所述納米級填料為硅烷化納米級二氧化硅、氣相納米二氧化硅或聚甲基丙烯酯類 聚合物納米顆粒。
[0016] 所述的納米級填料的粒徑為10~500nm。
[0017] 所述光敏引發混合物由光引發劑和光敏促進劑組成，光引發劑與光敏促進劑的質 量比為1:(1.5~2);其中，光引發劑為安息香、聯苯酰或樟腦醌;光敏促進劑為對二甲氨基 苯甲酸乙酯、二甲基對甲苯胺或甲基丙烯酸二甲氨基乙酯。
[0018] 所述阻聚劑為2.5-二叔丁基對苯二酚、對苯酚單丁醚或對苯二酚;顏料為鈦白粉。
[0019] 本發明還公開了制備上述可聚合季銨鹽改性的抗菌窩溝封閉劑的方法，包括以下 步驟：
[0020] 1)取活性稀釋劑與樹脂單體基質，充分混勻，得到組分A;取可聚合抗菌單體與功 能單體，充分混勻，得到組分B;將組分A與組分B充分混合均勻，得到基質樹脂；
[0021 ] 2)取納米級填料、NaF及顏料，分別放入瑪瑙研缽中研磨，研磨后依次過200目和 500目的篩網，將過濾出的材料分多次加入步驟1)制得的基質樹脂中，攪拌均勻后，超聲混 勻；
[0022] 3)在避光條件下，向步驟2)制得的混合物體系中，加入光敏引發混合物，攪拌均勻 后，再加入阻聚劑，充分攪拌均勻，抽真空、靜置，除去氣泡，裝入避光瓶中，制得抗菌窩溝封 閉劑。
[0023] 與現有技術相比，本發明具有以下有益的技術效果：
[0024] 本發明公開的抗菌窩溝封閉劑，選用可聚合季銨鹽單體作為抗菌成分，季銨鹽單 體內含有雙甲基丙烯酸酯單體，具有兩個官團交聯型抗菌單體既可與Bis_GMA、UDMA等功能 單體發生共聚反應，自身之間亦可均聚反應，因此合物的交聯度較高。在不影響材料機械性 能、生物安全的前提下，材料中的添加量可更高，因此能使改性材料抗菌性能更好。同時，采 用納米級填料，其粒徑很小，表面積大，表面吸附力強，表面能大，化學純度高、分散性能好、 具有優越的穩定性、補強性、增稠性，因而賦予了本品優越的機械性能。此外，本發明的抗菌 窩溝封閉劑流動性好，可操作時間長，固化時間短，因此有希望成為臨床非常理想的窩溝封 閉材料。
[0025] 本發明公開的抗菌窩溝封閉劑的制備方法，操作簡單，對設備要求低，綠色環保， 適合工業化大規模生產。
【附圖說明】
[0026] 圖1為各實施例制得的產品試樣照片；（a)~（e)分別為實施例1~實施例5制得的 產品試樣照片；
[0027] 圖2為各實施例制得的產品的抗菌實驗結果。
【具體實施方式】
[0028] 下面結合具體的實施例對本發明做進一步的詳細說明，所述是對本發明的解釋而 不是限定。
[0029] 實施例1
[0030] 一種抗菌窩溝封閉劑，以質量百分比計，包括:50%~60%的雙酚A雙甲基丙烯酸 縮水甘油酯BisGMA，25%~30%的雙甲基丙烯酸二縮三乙二醇酯TEGDMA，8%~10%的甲基 丙烯酸羥乙酯HEMA，1 %~10 %的硅烷化納米級二氧化硅，1 %~5 %的二甲基丙烯酰氧乙 基-正十二烷基-甲基溴化銨MAE-DB，0.5~3%NaF，0.1%~1%的光敏引發混合物(二甲氨 基苯甲酸乙酯:樟腦醌比例為：1:1.2-1:2)，0.3%~2%的著色劑鈦白粉，0.001%~0.01% 的2.5-二叔丁基對苯二酚。
[0031 ]上述抗菌窩溝封閉劑的制備方法，包括以下步驟：
[0032] 1)取雙甲基丙烯酸二縮三乙二醇酯TEGDMA與雙酚A雙甲基丙烯酸縮水甘油酯 (BisGMA)，充分混勻，得到組分A;取二甲基丙烯酰氧乙基-正十二烷基-甲基溴化銨MAE-DB 與甲基丙烯酸羥乙酯HEMA，充分混勾，得到組分B;將組分A與組分B充分混合均勾，得到基質 樹脂；
[0033] 2)取硅烷化納米級二氧化硅、NaF及鈦白粉，分別研磨過篩，分多次加入步驟1)制 得的基質樹脂中，攪拌均勻后，超聲混勻；
[0034] 3)在避光條件下，向步驟2)制得的混合物體系中，加入光敏引發混合物(二甲氨基 苯甲酸乙酯:樟腦醌比例為：1:1.2-1:2)，攪拌均勻后，再加入2.5-二叔丁基對苯二酚，充分 攪拌均勻，抽真空、靜置，除去氣泡，裝入避光瓶中，制得抗菌窩溝封閉劑。
[0035] 實施例2
[0036] 一種抗菌窩溝封閉劑，以質量百分比計，包括:53%~62 %的氨基甲酸酯雙甲基丙 烯酸酯UDMA，20 %~26 %的雙甲基丙烯酸二縮三乙二醇酯TE⑶MA，10 %~12 %的甲基丙烯 酸羥乙酯HEMA，5%~10%的聚甲基丙烯酯類聚合物納米顆粒VP(502)，1%~5%的甲基丙 烯酰氧乙基-正十六烷基-二甲基氯化銨DMAE-CB，0.5~3%NaF，0.1%~1%的光敏引發混 合物(二甲氨基苯甲酸乙酯:樟腦醌比例為：1:1.5-1:1.7)，0.1 %~0.6%的著色劑鈦白粉， 0.001 %~0.03%的對苯酚單丁醚。
[0037]制備方法同實施例1。
[0038] 實施例3
[0039] 一種抗菌窩溝封閉劑，以質量百分比計，包括:48%~60%的雙酚A雙甲基丙烯酸 縮水甘油酯BisGMA，18%~26%的雙甲基丙烯酸二縮三乙二醇酯TEGDMA，10%~12%的甲 基丙烯酸羥乙酯HEMA，5%~10%的聚甲基丙烯酯類聚合物納米顆粒VP(362)，1%~5%的 甲基丙烯酰氧乙基-正十六烷基-二甲基氯化銨DMAE-CB，1~2 % NaF，0.1 %~1 %的光敏引 發混合物（二甲氨基苯甲酸乙酯:樟腦醌比例為：1:1.5-1: 2)，0.1 %~0.6 %的著色劑鈦白 粉，0.03 %~0.05 %的對苯二酚。
[0040]制備方法同實施例1。
[0041 ] 實施例4
[0042] 一種抗菌窩溝封閉劑，以質量百分比計，包括:50%~60%的雙酚A雙甲基丙烯酸 縮水甘油酯BisGMA，25%~30%的二乙二醇二甲基丙烯酸酯DEGDMA，8%~10%的甲基丙烯 酸羥乙酯HEMA，5%~10%的氣相二氧化硅，6%~10%的二甲基丙烯酰氧乙基-正十六烷 基-甲基溴化銨MAE-ΗΒ，0.5~1 % NaF，0.6 %~1 %的光敏引發混合物（甲基丙烯酸二甲氨基 乙酯：聯苯酰比例為：1:1.5-1:1.9)，0.1 %~1.5%的著色劑鈦白粉，0.0001 %~0.01 %的 2,5-二叔丁基對苯二酚。
[0043]制備方法同實施例1。
[0044] 實施例5
[0045] -種抗菌窩溝封閉劑，以質量百分比計，包括:45 %~65 %的氨基甲酸酯雙甲基丙 烯酸酯UDMA，25 %~30 %的雙甲基丙烯酸二縮三乙二醇酯TEGDMA，7 %~11 %的10-甲基丙 烯酰氧癸基磷酸酯10_MDP，5%~10%的氣相二氧化硅，1%~5%的二甲基丙烯酰氧乙基-正十二烷基-甲基溴化銨MAE-DB，0.2~2.5% NaF，0.6%~1%的光敏引發混合物（甲基丙烯 酸二甲氨基乙酯:安息香比例為：1:1.5-1:1.8)，0.2%~3%的著色劑鈦白粉，0.0001 %~ 0.01 %的2，5-二叔丁基對苯二酚。
[0046]制備方法同實施例1。
[0047] 以上各實施例制得的產品照片如圖1所示。
[0048] 本發明方法制得的抗菌窩溝封閉劑試樣材料的各項性能試驗如下：
[0049] 1、抗菌性試驗 [0050] 1)試件制備
[0051] 在避光條件下，按上述實施例各配方配制待測材料倒入直徑10mm，高1.5mm的圓柱 狀有機玻璃模具中，模具上下兩面要覆蓋載玻片及聚乙烯薄膜，并加壓以去除多余的材料， 光固化燈分別照射模具上下表面，固化時間為60s，待充分固化后脫模并去掉試件四周毛 邊，試件浸入無菌蒸餾水中，期間振蕩2h去除未聚合的樹脂成分，干燥，環氧乙烷熏蒸消毒 后備用。對照組為不含抗菌單體的純樹脂試件，每組6個樣本進行實驗。
[0052] 2)細菌培養
[0053]將變形鏈球菌UA159菌落接種于無菌的BHI肉湯培養基中，在溫度為37°C厭氧培養 箱中培養24h。將所得產物用無菌BHI肉湯培養基稀釋至比濁儀讀數為0.5后再稀釋100倍， 待用，此時估計所得菌液變形鏈球菌濃度大約為1 X 106CFU/mL。
[0054] 抗菌試件表面對細菌生長的影響：取24孔板，每孔加入2.5mL的BHI肉湯培養液及 20yL變形鏈球菌菌液(稀釋后），充分混合。將各組試件放入混合液中，37°C下進行24h厭氧 培養。之后取出試件，用無菌PBS漂洗3次以去除浮游細菌，再將試件放入20mL無菌離心管， 加入無菌BHI 2mL。使用漩渦混合器劇烈震蕩3min震落粘附于試件表面的細菌，方便收集。 將所得菌液進行梯度稀釋，每個菌液稀釋濃度都取l〇〇yL接種于BHI瓊脂平板上，用無菌玻 璃涂布棒涂均，之后厭氧培養一天，菌落計數。使用SPSS 17.0統計軟件進行數據分析，菌落 計數用單因素方差分析和Tukey HSD檢驗進行分析，檢驗標準α = 0.05。
[0055] 結果參見圖2,圖中，對照組為不含抗菌單體的基質樹脂組;各應用實例與對照組 之間具有顯著的統計學差異(Ρ〈〇.05)，各應用實例間無顯著的統計學差異(Ρ>0.05)。
[0056] 2、生物安全性測試
[0057] 按照ΥΥ/Τ0268-2008 口腔醫療器械生物學評價規定試驗方法和要求，對新研制的 抗菌型窩溝封閉劑行以下幾個生物安全性試驗：
[0058] 采用GB/T16886.5-2003規定方法進行細胞毒性試驗(CCK8法）；
[0059] 采用GB/T16886.10-2003規定方法進行黏膜刺激試驗；
[0060] 采用GB/T16886.10-2003規定方法進行短期全身毒性試驗；
[00611 采用GB/T0127.1-1993規定方法進行急性溶血試驗。
[0062] 1)體外細胞毒性試驗
[0063] 試件制備：將五組應用實例配方制作成直徑10mm，厚1.5mm標準試件，每組3個試 件，按抗菌性實驗中雙側光照固化法光固化60s后，儲存于細胞培養箱中（溫度37 °C，98 %相 對濕度)24h。試件的雙面用紫外線各照射30min，使其充分固化并消毒，之后將試件放入無 菌離心管中，加入胎牛血清的細胞(10%)培養液。
[0064]浸提液制備:試件表面積/浸提液體積所得結果為1.25cm2/mL，37 °C下浸提24h，用 濾器過濾去除細菌。
[0065]細胞接種:取冷凍保存的人牙髓成纖維細胞，接種于含10%胎牛血清的α-ΜΕΜ培養 液中，在培養箱中（溫度37 °C、5 % C02、飽和濕度)復蘇、培養、傳代。取第5代細胞用于試驗， 用0.3%胰蛋白酶消化，最后得到濃度為2.5 X 104個/mL的細胞懸液，將其接種于96孔培養 板，每孔200yL(即5000個細胞/孔），細胞培養箱內培養至細胞貼壁(大約時間為24h，溫度濕 度同前），每組8個復孔。原培養液24h后丟棄，再在各應用實例組每孔分別加入200yL各自的 浸提液，對照組則加入200yL含10 %胎牛血清的α-ΜΕΜ培養基。放入細胞培養箱中分別培養 1、3、5天后終止培養。每孔分別加入20yL CCK-8試劑，并設置含200yL細胞培養液和20yL CCK-8試劑，空白孔不含細胞，培養4h后用酶標儀測定每個孔的吸光度值(波長:450nm)。 [0066] 評價標準:根據下述公式計算細胞的相對增殖率(Relative Growth Rate,RGR)， 記錄每組8個平行樣吸光度值，取其平均值用于計算RGR。根據RGR值將細胞毒性等級分為6 級來評價實驗材料的毒性(見表1)，其中〇或1級為合格。
[0067] 公式:RGR( % )=實驗組的平均吸光度值/陰性對照組的平均吸光度值X 100% [0068]基于RGR的細胞毒性等級分類標注如表1所示，本發明各個實施例制得的產品細胞 毒性等級分類數值結果如表2所示：
[0069] 表1基于RGR的細胞毒性等級分類標準
[0070]
[0071] 注:實驗結果為0或1級為合格，實驗結果為2~5級為不合格。
[0072]實驗結果如表2所示：
[0073] 表2各實施實例細胞毒性等級分類數值
[0074]
[0075] 注:實驗結果為0或1級為合格，實驗結果為2~5級為不合格。
[0076] 2) 口腔黏膜刺激試驗
[0077] 試件制備:將各實施例按配方配好后倒入直徑6_，厚1mm的有機玻璃模具，固化方 法同前，試件脫模后儲存(溫度37°C，98%相對濕度)24h以保證試件固化完全。對照組為不 含抗菌成分的上述實施實例制備同樣規格的圓片試件作為陰性。所有圓片試件需打磨以保 證表面及邊緣光滑圓鈍，沒有毛邊，并在中心處打兩個直徑為0.8_的小孔作為縫合孔，兩 小孔相距需要大于等于2_。清洗試件、并將其滅菌，干燥后備用。
[0078] 實驗流程：金黃鼠15只，每種應用實例3只，盡量保證每組黃金鼠體重相似。按 1.5mL/kg的比例向腹腔注射2 %戊巴比妥鈉生理鹽水溶液。待麻醉起效后將金黃鼠仰臥固 定，用棉簽沾取1%碘酊，對每只黃金鼠口腔黏膜進行清潔和消毒，隨后將各實施實例與其 對照組試件分別縫合固定于金黃鼠兩側口腔頰囊內的黏膜上，左側為實驗組，右側為對照 組;縫合要牢固，且要注意材料與黏膜組織有直接接觸但無壓迫，否則重新縫合。手術后正 常飼養20d，通過肉眼和組織學觀察評價(具體內容詳見國家標準)各組實施實例對黏膜組 織刺激程度如何。
[0079]黏膜刺激性觀察:第20d時，再次用上述方法將黃金鼠麻醉，先觀察試件的固定情 況，確定其是否依然固定良好。確認后拆除試件，先肉眼觀察雙側試件接觸部位黏膜情況有 無明顯不同，如黏膜有無充血、水腫、糜爛、潰瘍等情況。之后切取接觸部位的黏膜組織，4% 多聚甲醛固定，石蠟包埋，用組織切片機切去取厚度為6μπι連續切片，HE染色，中性樹膠封片 后在顯微鏡下觀察，進行組織病理學評價。
[0080] 實驗結果：
[0081] 20d后檢查發現各組試件在金黃鼠黏膜均上固位良好，無試件脫落或壓迫粘膜的 現象。拆除試件后，肉眼觀察發現雙側接觸部位黏膜形態完好，無明顯充血、腫脹、糜爛、潰 瘍等炎癥反應。顯微鏡下各組接觸部位黏膜的組織病理學檢查顯示:各實施實例組和其對 照組黏膜上皮結構均清晰完整，無潰瘍、過度角化、上皮異常增生、基底細胞變性或其它明 顯異常變化;皮下結締組織無血管充血、組織細胞水腫、炎癥細胞浸潤或基質瘢痕形成。各 實施實例組與其對照組相比，組織病理學表現也無明顯差異，由此可認為上述五組實施實 例中所含成分對口腔黏膜組織均無明顯刺激。
[0082] 3)短期全身毒性試驗
[0083]試件制備：將上述五組實施例制成直徑10mm、厚1.5mm的標準試件，固化、清洗、消 毒方法同前
[0084]浸提液制備：以生理鹽水為浸提液，標準為:試件表面積/浸提液體積為1.25cm2/ mL，37 °C浸提24h，并用0.20μπι濾器過濾除菌。
[0085]實驗方法:36只8周大體型相似的SD大鼠，雌雄比例保證各半，隨機分為5組，即每 組6只，之后對分組進行統計學分析保證性別分配均勻，各實驗組動物稱重，每天灌胃給服 實驗材料浸提液(比例5mL/kg)，對照組動物按相同比例灌胃給服生理鹽水，灌胃前需禁食 4-8h。連續灌胃7d，再繼續觀察7d;
[0086]評價標準:每天觀察動物有無出現臨床毒性體征，如運動功能是否減退、呼吸是否 困難、有無震顫現象、有無腹瀉及其他毒性癥狀或是否死亡;每日稱重并記錄每只大鼠的體 重變化量及食物消耗量，以此計算每只動物的體重相對增長率及食物利用率(公式如下，結 果見表3);觀察14d后麻醉處死大鼠，進行病理解剖，觀察心、肝、脾、肺、腎等重要臟器有無 異常變化，并按上述方法制備組織病理切片，顯微鏡下進行組織病理學觀察。
[0087]相關公式如下：
[0088]食物利用率=體重增長量(g)/消耗食物量(g)X 100,即每消耗100g食物所增長的 體重數
[0089] 體重相對增長率=體重增長量(g)/原始體重(g) X 100%
[0090] 實驗結果如表3所示：
[0091 ]表3實驗組與對照組大鼠兩周后的體重相對增長率及食物利用率 [0092]
LUUM」 tt: 1口」一外十工仞、imnjtfj赴i|HJ兀明亞ιΗ'、」?%1Τ子左開ViVD.DO；。
[0095] 4)急性溶血試驗
[0096] 抗凝家兔全血的制備方法：將家兔仰臥位并固定于操作臺上，注射器抽取心血 l〇mL，置于無菌離心管中，隨后立即向血中加入濃度為20g/L草酸鉀生理鹽水溶液0.5mL，即 可制得。
[0097] 稀釋方法:取8mL抗凝兔全血加入10mL生理鹽水制成稀釋抗凝兔全血。取稀釋后的 抗凝兔血〇.2mL加入含10mL蒸餾水的離心管中，經恒溫水浴箱孵育及離心后吸取上清液，檢 測其于545nm處的吸光度值，若吸光度值在0.8 ±0.3范圍內，則符合要求，否則需調整抗凝 兔全血的稀釋程度并重新檢測。制備好的稀釋兔全血貯存于4°C冰箱內待用。
[0098]試樣制備：用五組實施實例配方制作直徑10mm，厚1.5mm標準試件，固化、清洗、干 燥和消毒方法同前，實驗組每組分別稱取5g實施實例材料放置于含10mL生理鹽水的離心管 內，陰性對照組是含10mL生理鹽水的離心管，陽性對照組是含10mL蒸餾水的離心管，各組制 備3個平行樣。
[0099] 溶血率的測定:將上述各組離心管置于37°C恒溫水浴箱中30min，之后每個離心管 中分別加入制備好的稀釋抗凝兔全血〇.2mL充分混勻，置于恒溫水浴箱（溫度37°C)中 60min。隨后用離心機在750倍重力下離心5min，每個離心管取200yL上清液置于96孔板內， 使用酶標儀于讀取吸光度值(波長:545nm)。要求陰性對照組的吸光度值應不大于0.03,陽 性對照組的吸光度值應在0.8±0.3范圍內，記錄每組3個平行樣的吸光度值并取其平均值 記作吸光度值，并根據下述公式計算每組實施實例的溶血率：
[0100] 公式：溶血率（％ )=(實驗組吸光度值-陰性對照組吸光度值)/(陽性對照組吸光 度值-陰性對照組吸光度值）X100%
[0101] 實驗結果如表4所示：
[0102] 表4三組實驗材料的溶血吸光度值及溶血率
[0103]
[0104] 注:結果表明五組應用實例材料溶血率均低于5%，符合國家醫藥行業標準中關于 溶血率的規定，因此五組應用實例材料均無急性溶血作用。
[0105] 3、物理性能測試
[0106] 1)表面硬度
[0107]樣本的分組及制備
[0108] 實驗樣本的分組同上。采用內徑為8mm，高2mm聚四氟乙烯模具制取
[0109] 試件，模具上下兩端均用透明玻璃片覆蓋，雙側光固化為30s，每組制作5個試樣。 完成后的試件依次用600，1200，2000目砂紙打磨拋光，隨后置于37 °C環境下儲存于無菌蒸 餾水中24h備用。每組均為3個試件。
[0110]表面顯微硬度的測定
[0111]采用數字式顯微硬度計測試維氏硬度值的，加力值25g，持續15s，每個試樣表面不 同的位置測量3個值，計算平均值。并與臨床常用的窩溝封閉劑進行了表面硬度的對比。 [0112]實驗結果如表5所不：
[0113] 表5各組分表面硬度值
[0114]
[0115] 注:上述數值表明五組應用實例的表面硬度均不次于目前臨床常用的商品窩溝封 閉劑。
[0116] 2)固化深度
[0117] 具體方法同國家標準:YY 0622-2008/IS0 6874:1988,將各實施實例倒入內徑為 5mm，高3mm聚四氟乙烯模具制圓柱形的試件模具內，排氣泡，蓋上薄膜，按廠家規定時間用 牙科專用固化燈照射(這里統一規定照射時間為20s)，取出，擦去未固化的液膜，測微計測 量試件高度，測試5個試樣，有兩個及以上深度小于1.5_則不合規定。
[0118] 實驗結果如表6所示：
[0119] 表6各組分固化深度
[0120]
[0121]注:上述數值表明五組應用實例的固化深度均達到國家標準且不次于目前臨床常 用的商品窩溝封閉劑。
[0122] 3)對環境光敏感性
[0123] 具體方法同國家標準:YY 0622-2008/IS0 6874:1988,將各應用實例的樣品放入 樣品槽(深度2mm)，各組為5個樣本，暴露于光照度為80001χ的光源下，熱電偶記錄光照開始 至溫度線性增加出現偏差所需時間，每組5個樣品至少4次記錄時間不少于25s。
[0124]實驗結果如表7所不：
[0125] 表7各組溫度線性增加出現偏差所需時間
[0126]
[0127] 注:上述數值表明五組應用實例的對環境光敏感性均達到國家標準且不次于目前 臨床常用的商品窩溝封閉劑。
[0128] 4)未固化膜厚度
[0129] 具體方法同國家標準:YY 0622-2008/IS0 6874:1988,將各應用實例的樣品滴一 滴在載玻片上，蓋蓋玻片，形成近似圓形，用規定固化時間照射，每組制作5個樣品，室溫放 置5min后光學顯微鏡（放大倍數至少50倍）下觀察邊緣，固化與未固化部分可見明顯分界 線，測量固化與未固化分界線至邊緣距離，5個樣品有4次固化膜厚度值不大于0.1mm則合 格。
[0130] 實驗結果如表8所示：
[0131]表8各組未固化膜厚度
[0132]
[0133] 注:上述數值表明五組應用實例均達到國家標準
[0134] 綜上所述，本發明各組實施例制得的可聚合季銨鹽改性的窩溝封閉劑的各項指標 均達到國家標準，物理性能優越，該窩溝封閉劑具有良好的生物安全性，在口腔溫度下固化 時間短，可操作時間長，且有著有效持久的抗菌效果;該制備方法操作簡單，綠色環保，適合 工業化大規模生產。
【主權項】
1. 一種可聚合季銨鹽改性的抗菌窩溝封閉劑，其特征在于，以質量百分比計，包括： 40 %~80%的樹脂單體基質，15 %~40 %的活性稀釋劑，3%~25 %的功能單體，0.5 %~ 10 %的可聚合季銨鹽抗菌單體，1 %~20 %的納米級填料，0.5 %~3 %的NaF，0.05 %~3 % 的光敏引發混合物、〇. 001 %~〇. 05%的阻聚劑及0.3%~5%的顏料。2. 根據權利要求1所述的可聚合季銨鹽改性的抗菌窩溝封閉劑，其特征在于，所述樹脂 單體基質為雙酚A雙甲基丙烯酸縮水甘油酯、氨基甲酸酯雙甲基丙烯酸酯或二甲基丙烯酸 改性環氧樹脂。3. 根據權利要求1所述的可聚合季銨鹽改性的抗菌窩溝封閉劑，其特征在于，所述活性 稀釋劑為雙甲基丙烯酸二縮三乙二醇酯、二乙二醇二甲基丙烯酸酯或三縮丙二醇二丙烯酸 酯。4. 根據權利要求1所述的可聚合季銨鹽改性的抗菌窩溝封閉劑，其特征在于，所述功能 單體為甲基丙烯酸羥乙酯、10-甲基丙烯酰氧癸基磷酸酯或4-甲基丙烯酰乙氧基苯三酸酐。5. 根據權利要求1所述的可聚合季銨鹽改性的抗菌窩溝封閉劑，其特征在于，所述可聚 合抗菌單體為甲基丙烯酰氧乙基-芐基-二甲基氯化銨、甲基丙烯酰氧乙基-正十六烷基-二 甲基氯化銨、甲基丙烯酰氧乙基-間氯芐基-二甲基氯化銨、二甲基丙烯酰氧乙基-正十二烷 基-甲基溴化銨或二甲基丙烯酰氧乙基-正十六烷基-甲基溴化銨。6. 根據權利要求1所述的可聚合季銨鹽改性的抗菌窩溝封閉劑，其特征在于，所述納米 級填料為硅烷化納米級二氧化娃、氣相納米二氧化娃或聚甲基丙稀酯類聚合物納米顆粒。7. 根據權利要求1或6所述的可聚合季銨鹽改性的抗菌窩溝封閉劑，其特征在于，所述 的納米級填料的粒徑為1 〇~500nm 〇8. 根據權利要求1所述的可聚合季銨鹽改性的抗菌窩溝封閉劑，其特征在于，所述光敏 引發混合物由光引發劑和光敏促進劑組成，光引發劑與光敏促進劑的質量比為1:(1.5~ 2)； 其中，光引發劑為安息香、聯苯酰或樟腦醌;光敏促進劑為對二甲氨基苯甲酸乙酯、二 甲基對甲苯胺或甲基丙烯酸二甲氨基乙酯。9. 根據權利要求1所述的可聚合季銨鹽改性的抗菌窩溝封閉劑，其特征在于，所述阻聚 劑為2.5-二叔丁基對苯二酚、對苯酚單丁醚或對苯二酚;顏料為鈦白粉。 1 〇.制備權利要求1~9中任意一項所述的可聚合季銨鹽改性的抗菌窩溝封閉劑的方 法，其特征在于，包括以下步驟： 1) 取活性稀釋劑與樹脂單體基質，充分混勻，得到組分A;取可聚合抗菌單體與功能單 體，充分混勻，得到組分B;將組分A與組分B充分混合均勻，得到基質樹脂； 2) 取納米級填料、NaF及顏料，分別放入瑪瑙研缽中研磨，研磨后依次過200目和500目 的篩網，將過濾出的材料分多次加入步驟1)制得的基質樹脂中，攪拌均勻后，超聲混勻； 3) 在避光條件下，向步驟2)制得的混合物體系中，加入光敏引發混合物，攪拌均勻后， 再加入阻聚劑，充分攪拌均勻，抽真空、靜置，除去氣泡，裝入避光瓶中，制得抗菌窩溝封閉 劑。
【文檔編號】C08F222/20GK106008812SQ201610464024
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年6月22日
【發明人】陳吉華, 常剛, 唐立輝, 黃鸝, 夏雨凝, 楊彥偉
【申請人】中國人民解放軍第四軍醫大學