一種配位化合物的合成、表征與抗癌活性測定方法

一種配位化合物的合成、表征與抗癌活性測定方法
【專利摘要】本發明涉及一種配位化合物，其化學式為[VO2(tpy)]ClO4，該化合物具有特效抗癌活性且有望成為低毒高效的抗癌藥物，該配位化合物[VO2(tpy)]ClO4的合成包括[VO2(tpy)]ClO4單晶合成及[VO2(tpy)]ClO4微晶或粉末合成，具有獨特的抗癌活性，尤其是對肝癌細胞BEL?7402具有特別強的殺傷力，其IC50=0.4±0.2μM，而傳統抗癌藥物順鉑在同樣的條件下，對BEL?7402細胞的IC50值為11.5±1.3μM，該配合物的抗肝癌活性是順鉑的近30倍，能達到如此抗癌活性的藥物目前還非常少見，這是由配合物獨特的結構和釩元素的多氧化態的性質緊密相關的，由于IC50值接近人體所允許的濃度0.3μM，該類化合物并有望開發為新型的低毒、高效的抗癌藥物。
【專利說明】
一種配位化合物的合成、表征與抗癌活性測定方法
技術領域
[0001 ]本發明屬于配位化合物技術領域，涉及一種配位化合物的合成、表征與抗癌活性測定方法。
【背景技術】
[0002]釩是生物體中重要的微量元素之一，在人體中釩的濃度達到0.3μΜ，其化合物已被證實與人類疾病的發病機理和維持正常的生理機能密切相關[1—3] ο自1986年Kieler J報道環戊二烯配合物Cp2VCl2在治療埃利希腹水瘤病中的應用以來[4]，含釩化合物的抗癌活性逐漸引起人們的廣泛重視。研究表明四價釩的釩氧[VivO]2+多吡啶配位化合物有望成為高效、廣譜、低毒副作用的的抗癌藥物[5，6]，其中化合物Metvan (雙_4，7_二甲基-1，10鄰菲啰啉硫酸氧釩)已進入臨床試驗階段m。然而對五價釩的多吡啶配合物的研究相對較少，且目前所合成的是電中性的分子或含配陰離子的化合物，含配陽離子[VvO2 ]+的多吡啶配合物還未見報道。
[0003]綜合以往的研究，本工作的研究意義深遠。一方面，與[VivO]2+的配合物相比，[VvO2]+的配合物作為抗癌藥物更具優勢:(I)在溶液和生理條件下，含[VvO2]+的試劑更加穩定，使其在生物體內有足夠的時間識別并作用于靶細胞;(2)[Vv02]+具有更為高效的抗癌活性，用藥量也會減少，并隨之降低毒副作用帶來的對患者的身體損害和化療的風險。這是因為釩的配合物的抗癌作用是通過在機體中產生活性氧(R0S)，并由此引發一系列的鏈式反應和信號傳遞，最終導致癌細胞凋亡或死亡，產生的活性氧越多，藥效越顯著。由于[VvO2]+接受電子的能力比[VivO]2+更強，類似于高價的鉻化合物(絡酸鹽)在生物體中產生活性氧的作用[8]，因此將會在機體內產生更多的R0S。另一方面，與以往合成的五價釩的中性或陰離子的試劑相比，本工作合成的[Vv02(tpy)]+ (tpy = 2，2’:6’，2’ ’-terpyridine)的優點在于:一價的陽離子配合物，更易穿過細胞膜，甚至是核膜，因此易于被細胞吸收并產生較為豐富的生化反應和優異的活性。這是因為生物體中的陽離子I的相互作用極為普遍也最為重要，配陽離子與跨膜蛋白質中的具有四偶極子的芳香環的電子體系產生較強的相互作用，從而能更好地實現跨膜轉運[9]。從另一角度來看，tpy是親脂性的螯合能力強的配體，僅含一分子tpy的配離子體積小且既具有親水性又具有親脂性，使其作為藥物也易于被生物體吸收與轉運。因此，該類化合物作為新型的抗癌藥物極具潛力，研究成果有望對癌癥的化療起到不可估量的推動作用。
[0004]目前國際上合成含[VvO2]+的化合物，主是腙類化合物作為配體的配位化合物，由于該類配體為負一價的離子L—I因此所合成的化合物[VvO2L]是中性分子，不能得到配陽離子配合物[1()—13]。2000年，Claudia Pifferi等人合成了 [V0(tpy)S04]，雖然含有tpy，但由于硫酸根與V有較強的結合，因此只得到了四價釩的三聯吡啶配合物[14]，未得到與本技術合成的類似的化合物。在我國尚沒有出現三聯吡啶類釩(V)配合物的合成及生物活性相關的研究論文。
[0005]附:參考文獻[1]D.Rehder, The potentiality of vanadium in medicinal applicat1ns,Future Med.Chem., 2012，4，1823-1837.[2]D.Rehder, The coordinat1n chemistry of vanadium as related to itsb1logical funct1ns, Coord.Chem.Rev., 1999，182，297-322.[3]M.T.Pepato, N.M.Khalil, M.P.G1condoj 1.L.Brunetti，Vanadiumand its complexes: the renewed interest in its b1chemistry, Lat.Amer.J.Pharm.， 2008， 27，468-76.[4]P.Kopf-Maier, H.Kopf , Metallocene complexes: organometalIicantitumor agents.Drugs Future, 1986，11，297-319.[5]A.Bishayee, A.ffaghray, M.A.Patel, M.Chatterjee, Vanadium in thedetect1n, prevent1n and treatment of cancer: The in vivo evidence, CancerLetters, 2010，294,1-12.[6]M.ff.Makinen, M.Salehitazangi, The structural basis of act1n ofvanadyl (VO2+) chelates in cells, Coord.Chem.Rev., 2014，279，1-22.[7]0.J.D’Cruz， F.M.Uckun, Metvan: a novel oxovanadium (IV) complexwith broad spectrum anticancer activity, Expert Investig.Drugs, 2002， 11，1829-1836.[8]K.Jomova, M.Valko, Advances in metal-1nduced oxidative stress andhuman disease, Toxicology, 2011， 283， 65-87.[9]D.A.Dougherty, Cat1n-π interact1ns in chemistry and b1logy: a newview of benzene, Phej Tyrj and Trpj Science, 1996， 271， 163-167.[10]M.R.Maurya，A.A.Khan, A.Azam, S.Ranjan，N.Mondal，A.Kumar, F.Avecillaj J.C.Pessoaj Vanadium complexes having [VivO]2+ and [Vv〇2]+ coreswith binucleating dibasic tetradentate ligands: synthesis, characterizat1n,catalytic and antiamoebic activities, Dalton Trans.，2010，39，1345-1360.[11]P.1.S.Maiaj F.R.Pavanj C.Q.F.Leite, S.S.Lemos, G.F.Sousa, A.A.Batista, 0.R.Nascimento, J.Ellenaj E.E.Castellano, E.Niquetj V.M.DeflonjVanadium complexes with th1semicarbazones: synthesis, characterizat1n,crystal structures and ant1-mycobacterium tuberculosis activity, Polyhedron,2009， 28， 298-406.[12]M.R.Maurya, S.Agarwal, M.Abidj A.Azam, C.Bader, M.Ebel, D.Rehder，synthesis，characterizat1n，reactivity and in vitro antiamoebicactivity of hydrazone based oxovanadium(IV), oxovanadium(V) and y-bis(oxo)bis{oxovanadium(V)} complexes, Dalton Trans., 2006，937-947.[13]V.M.Deflonj D.M.0liveira, G.F.Sousa, A.A.Batista, L.R.Dinelli,E.E.Castellano， Oxovanadium(IVjV) complexes with 2-acetylpyridine-2-furanoylhydrazone (Hapf) as ligand.X-ray crystal structures of [V〇2(apf)]and [V202(y-0)2(apf )2]，Z.Anorg.Allg.Chem., 2002，628，1140-1144.[14]C.Pifferi， M.P.Picchi， R.Cini， Vanadium complexes as models forvanadium species of marine organisms.Synthesis, X-ray structure of oxo(0，0-sulfate)(2，2’:6’，2’’-terpyridine) vanadium (IV) hydrate , and densityfunct1nal geometry optimizat1n analysis of vanadyl complexes, Polyhedron,2000， 19， 69-76.

【發明內容】

[0006]為克服上述的技術缺點，本發明提供一種配位化合物的合成、表征與抗癌活性測定方法，它能夠避免使用陰離子配體和配位能力強的陰離子作為抗衡離子，通過控制反應條件，使四價的釩配合物充分氧化，具有獨特的抗癌活性，尤其是對肝癌細胞BEL-7402具有特別強的殺傷力。
[0007]本發明解決其技術問題所采用的技術方法是:一種配位化合物，其化學式為[VO2(tpy)]C104，該配位化合物具有特效抗癌活性且有望成為低毒高效的抗癌藥物，該配位化合物[￥0心?7)](:104的合成包括[￥02加7)](:104單晶合成及[￥02加7)](:104微晶或粉末合成，其中[V02(tpy)]C104單晶合成步驟是:
首先選取V0S04水溶液與Ba(ClO4)2溶液混合，經攪拌過濾后獲得[VO(H2O)5] (ClO4)2水溶液，向該[VO (H2O) 5 ](Cl 04) 2水溶液加入tpy乙醇溶液獲得[VO (H2O) 2 (tpy) ] (Cl O4) 2乙醇、水混合溶液，再通過旋轉蒸發除去乙醇獲得[VO(H2O)2 (tpy) ] (C104)2水溶液，該[VO(H2O)2(tpy)](C104)2水溶液則在攪拌的過程下被空氣氧化形成[V02(tpy)]C104水溶液，最后經過緩慢蒸發制得[V02(tpy)]C104單晶；
在[V02(tpy)]C104微晶或粉末合成過程中則是將Ba(ClO4)2溶液替換成BaCl2溶液，經攪拌過濾生成[VO(H2O)5 ]Cl2水溶液，再向[VO(H2O)5]Cl2水溶液加入tpy乙醇溶液獲得[VO(H2O) 2 (tpy) ] Cl2乙醇、水混合溶液，再經過旋轉蒸發除去乙醇獲得[VO (H2O) 2 (tpy) ] Cl 2水溶液，該[V0 (H2O) 2 (tpy) ] Cl2水溶液再在攪拌的過程下被空氣氧化形成[VO2 (tpy) ] Cl水溶液，向[V02(tpy) ]C1水溶液中加入飽和NaClO4并不斷攪拌最后制備出[V02(tpy) ]C104微晶或粉末。
[0008]配位化合物的表征包括[V02(tpy)]C104單晶表征及[V02(tpy)]C104微晶或粉末表征，其中[V02(tpy)]C104單晶的表征則通過X-ray單晶衍射獲得分子結構鍵參數及晶體學數據并生成粉末衍射模擬圖，[V02(tpy)]C104微晶或粉末表征用X-ray粉末衍射并與單晶的粉末衍射模擬圖進行對照，結合電噴霧質譜確定配離子式量及元素分析實驗測定C、H、N的含量，從而確定粉末樣品的組成，結構與純度，并通過紅外光譜確定官能團結構。
[0009]該配位化合物的抗癌活性測定方法，其測定步驟是:首先進行配位化合物[VO2(七卩7)](:104癌細胞毒實驗，測定105()確定該配位化合物[￥02(丨?7)](:104最敏感細胞，通過活性氧測定確定配合物是否引發活性氧的產生，通過凋亡實驗確定細胞凋亡率，通過線粒體膜電位的測定確定線路提膜的損傷程度，通過彗星實驗確定細胞凋亡情況，最后通過上述測定獲得凋亡機理。
[0010]本發明的有益效果是:首先利用中性的三聯吡啶配體，采用弱配位作用的抗衡陰離子及其充分氧化的條件下合成了固相以及溶液相在近生理條件下(pH約為7)均穩定的含五價釩三聯吡啶配陽離子的配合物及其單晶，該類配合物在國內、國際均未見報道;其次合成的配合物具有獨特的抗癌活性，尤其是對肝癌細胞BEL-7402具有特別強的殺傷力，其IC50=0.4 土 0.2 μΜ，而傳統抗癌藥物順鉑在同樣的條件下，對BEL-7402細胞的IC5q值為11.5
土 1.3 μΜ，因此本發明合成的配合物的抗肝癌活性是順鉑的近30倍，能達到如此抗癌活性的藥物目前還非常少見，這是由配合物獨特的結構和釩元素的多氧化態的性質緊密相關的，由于IC5q值接近人體所允許的濃度0.3 μΜ，該類化合物并有望開發為新型的低毒、高效的抗癌藥物。
[0011]
【附圖說明】
[0012]圖1是合成配合物[V02(tpy)]C104單晶方框結構示意圖；
圖2是合成配合物[V02(tpy)]C104(微晶或粉末)方框結構示意圖；
圖3是配合物[V02(tpy)]C104單晶及[V02(tpy)]C104微晶或粉末表征示意圖；
圖4是配合物[V02(tpy)]C104抗癌活性的測定方案示意圖；
圖5是單晶配合物的X-ray衍射測定的單元結構圖；
圖6是細胞BEL-7402的線粒體膜電位測定實驗(a)空白組，(b) (c)分別用0.5 μΜ和1.0μΜ的對照圖；
圖7是配合物[V02(tpy)]C104的晶體數據和結構精修參數圖；
圖8是配陽離子的鍵長和鍵角示意圖；
圖9是粉末衍射圖譜；
圖10是配合物對所選細胞株IC5q值示意圖；
圖ll是細胞BEL-7402的EB染色彗星實驗(a)EB染色的控制組，(b)加入0.5 μΜ的配合物孵育24小時，b中的細胞呈現明顯慧尾對照圖。
【具體實施方式】
[0013]下面結合附圖及實施例對本發明進一步說明。
[0014]
實施例1:
配合物[V02 (tpy) ] C104單晶制備和單晶結構的測定
參見圖1，制備過程是:首先取0.6 mmol VOSO4.3出0溶于25 ml水中得溶液A，稱取0.6mmol Ba(ClO4)2溶于25 ml水中得溶液B，攪拌下將溶液B緩慢滴加到溶液A中，產生BaSO4白色沉淀，過濾得藍色溶液C。將含0.5 mmol的tpy的乙醇溶液(15 ml)，在攪拌下滴加到溶液C中，室溫攪拌30分鐘，得一綠色溶液，旋轉蒸發至約25 ml左右，室溫攪拌5天，至溶液變成橙黃色，過濾，濾液在室溫下緩慢自由蒸發，45天左右得橙色塊狀晶體[V02(tpy)]C104。
[0015]參見圖3，單晶結構測定:將配合物單晶粘在玻璃毛上，插入銅管后，將其置于Bruker SMART 1000 CCD四圓衍射儀的樣品臺上，用石墨單色器分光的Μο_Κα(λ= 0.71073Α)射線作為光源，在296Κ下進行測定。采用ω掃描技術在1.78 < θ< 25.00°范圍內收集衍射強度數據，收集4009個衍射點。晶體結構用SHELXTL-97的直接法解出，采用全矩陣最小二乘法在上進行個向異性修正。最后對2745個觀測點(F > 4.0 σ(尸))及235個變量的精修獲得收斂。在對所有的非氫原子用各向異性位移參數精修之后，對配體上的氫原子的坐標及其位移參數進行各向同性的精修。在精修中，氫原子將被相對固定在其母原子上，隨母原子的移動而移動，即騎在母原子上，氫原子和碳原子的距離利用程序的預設值C一H =0.96 A。所有氫原子都進行各向同性溫度因子校正。有關的晶體學數據和結構精修參數見圖7。配合物陽離子的部分鍵長，鍵角列于圖8，參見圖5。
實施例2:
配合物[V02(tpy)]Cl 04微晶制備及表征
參見圖2，制備:取0.6 mmol VOSO4.3H20溶于25 ml水中得溶液A，稱取0.6 mmol BaCl2溶于25 ml水中得溶液B，攪拌下將溶液B緩慢滴加到溶液A中，產生BaSO4白色沉淀，過濾得藍色溶液C。將含0.5 mmol的tpy的乙醇溶液(15 ml)，在攪拌下滴加到溶液C中，室溫攪拌30分鐘，得一綠色溶液，旋轉蒸發除去乙醇，加水稀釋至溶液的總體積80 ml，室溫攪拌7天，至溶液變成橙黃色，過濾，于攪拌條件下，在濾液中滴加飽和NaClO4溶液，至沉淀完全，繼續室溫攪拌4小時，得橙黃微晶，抽濾，用水洗滌3次(每次5 ml)，再用乙醇洗滌兩次(每次5ml),放入真空干燥器中3天得產品，收率42%。
[0016]參見圖3，表征:
(1)粉末衍射:數據和實驗圖譜在BrukerD8 Advance X_ray衍射儀上進行測定和獲取，其中Cu-Ka靶，λ=0.154 nm，石墨單色器衍射束單色比，高壓50 KV，管流20 mA。模擬衍射圖譜根據X-ray單晶數據，采用SHELXTL-XP0W程序計算獲得。通過實驗圖譜(Experimental)和模擬圖譜(Simulated)，見圖9，峰的位置和相對強度高度一致，這說明所得微晶具有單晶同樣的結構；
(2)紅外光譜:利用BrukerVECT0R22 FT-1R紅外光譜儀和KBr壓片技術進行測定，各峰指派為(cm-1):1600, 1480 (C=Ctpy, C=Ntpy), 1080，953 (V=O)；
(3)電噴霧質譜:電噴霧質譜(ES-MS)用LCQ系統(FinniganMAT, USA)記錄，選用DMSO作流動相。[DMSO，m/z]: 316.6 ([V02(tpy)] + )，實驗值與理論值吻合。
[0017](4)元素分析:元素分析(C、H、N)用Elementar Var1 EL元素分析儀測定。測試結果(％): C 43.37, H 2.81, N 10.05。計算值(Ci5 Hn ClN3 O6 V, %): C 43.34, H 2.67,N 10.11。實驗值與計算值基本一致。
[0018]
參見圖4，配合物[V02(tpy)]C104抗腫瘤活性研究
(I)體外細胞毒性實驗:收集對數生長期的細胞，調整細胞懸液濃度為5 X 14 -1? 5 X 15個/m L，取96孔板每孔100 yL。將接種好的96孔板置于培養箱中孵育(5% CO2，37°C)，待孔底單層細胞長至80%左右時棄掉培養液，加入1640培養液90yL和設定好濃度梯度的藥物10yL，繼續孵育48 h，棄去培養液，補加90 yL1640培養液和10 yL的MTT (5 mg.m L—O，培養箱中繼續孵育4 h。取出至培養箱外，棄去培養液，每孔加入100 yL的DMS0，振搖10 min，用酶標儀測定其490 nm處的吸光度值，計算ICso值結果見圖10，結果顯示，本合成的化合物，比目前廣泛使用的抗癌藥物順鉑(cisplatin)的活性都好，尤其是對肝癌細胞BEL-7402，本化合物的抗癌活性是順鉑的近30倍。以下實驗(2)至(5)均采用BEL-7402細胞。
(2)Α0/ΕΒ染色檢測凋亡實驗:取12孔板，每孔接種細胞I X 15?2X 15個。待單層細胞長至90%左右時，加入相應濃度的藥物。培養箱中孵育24 h后，棄去培養液，PBS洗兩遍。滴加Α0/ΕΒ染色液(100 yg-m L—O覆蓋玻片，37°C染色30 min，棄去染液，PBS洗滌三次，熒光顯微鏡下觀察、拍照記錄，僅0.5 μΜ的配合物作用BEL-7402細胞24 h，然后對細胞進行AO/EB雙染，細胞被AO染色成綠色，凋亡細胞染色質固縮染色加深;但EB沒能透過細胞膜(未出現呈橘紅色)，這正是細胞早期凋亡的特征。說明這個配合物能高效率地誘導肝癌細胞BEL-7402的凋亡。
[0019]
(3)彗星實驗:即單細胞凝膠電泳實驗，BEL-7402細胞在0.5μΜ的配合物作用下，37°C孵育24 h，并用胰蛋白酶化法收集細胞。三層法制備凝膠板，電解液為300 mM NaOH,1.2 mM EDTA，電泳在25 V,300 mA下進行。電泳后用400 mM Tris, HCl, pH 7.5的溶液將膠板洗至中性，用EB (20yg/m L)在暗處染色20分鐘，用熒光顯微鏡拍照。參見圖11，和對照組比較，經配合物處理的細胞均出現慧尾，這說明配合物進入到細胞核，與DNA作用，并使DNA斷裂不同長度的碎片，這是細胞凋亡重要的啟動信號。
[0020]
(4)線粒體膜電位檢測:收集對數期細胞，調整細胞懸液濃度。取12孔板，每孔接種IX 15 - 2 X 15個。待單層細胞長至80%左右時，加入相應濃度的藥物。培養箱中孵育24h后，往陽性對照組加入I yL的CCCP繼續孵育20 min，棄去12孔板中的培養液，用冷的I3BS洗滌三次，加入0.5 m L細胞培養液和0.5 m L JC-1染色工作液充分混勻。將細胞置于培養箱中37°C孵育20 min，與此同時取3 m L JC-1染色緩沖液加入12 mL雙蒸水稀釋5倍置于冰上。待孵育結束后，棄掉染色液，并用JC-1染色緩沖液洗滌兩次，加入I m L細胞培養液，在熒光顯微鏡下觀察，拍照記錄。線粒體膜電位的檢測以JC-1為熒光探針，細胞內線粒體膜電位較高時JC-1以聚合物的形式存在于線粒體基質中發紅色熒光，細胞內線粒體膜電位較低時JC-1以單體的形式存在發綠色熒光，所以檢測JC-1的熒光就可以檢測到線粒體膜電位的變化。細胞凋亡早期細胞線粒體內膜通透性會增加，線粒體膜電位會發生下降，一旦線粒體膜電位崩潰細胞就只能走向凋亡。本方法合成的配合物作用BEL-7402細胞后，JC-1染色細胞，熒光顯微鏡拍照記錄，可見線粒體膜電位檢測實驗結果顯示配合物能使BEL-7402細胞線粒體膜電位降低。參見圖6:
該圖為利用JC-1染色法分析細胞BEL-7402的線粒體膜電位測定實驗(a)空白組，(b)(c)分別用0.5μΜ的配合物孵育24小時，b，c組均全部成為綠色熒光，說明配合物的作用使線粒體膜電位下降，這是線粒體釋放細胞色素，并引發細胞凋亡的鏈式反應的關鍵。
[0021](4)活性氧檢測:收集對數期細胞，調整細胞懸液濃度。取6孔板，每孔接種4 X15個。待單層細胞長至90%左右時，加入相應濃度的藥物，培養箱中孵育24 h后，棄去6孔板中的培養液，用PBS洗滌兩次，I m L胰酶消化，收集細胞于2 m L的EP管中離心(3000 rpm，5min)，棄掉上清液，加入I m L不含血清的培養液重懸細胞，離心(3000 rpm，5 min)，棄掉上清液，加入I: 1000稀釋好的DCFH-DA，置于細胞培養箱中37°C孵育20 min，每隔3?5 min顛倒混勻一次，然后用不含血清的培養液洗滌兩次，離心(3000 rpm，5 min)，棄掉上清液并加入300 yL無血清的培養基混勻并移入流式管，上機檢測。配合物[V02(tpy)]C104作用BEL-7402細胞后二氯二氫熒光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)染色細胞，流式細胞儀檢測DCF熒光強度，DCFH-DA本身沒有熒光，能穿過細胞膜進入細胞，進入細胞后被細胞內的酯酶水解成DCFH，而DCFH不能穿過細胞膜，DCFH進一步被細胞內的活性氧氧化成發綠色熒光的DCF，所以可以通過DCF的熒光強度來反映細胞內的活性氧水平。實驗結果表明配合物能升高BEL-7402細胞內的活性氧水平。參見圖7:
該圖為利用H2DCF-DA作為熒光探針對BEL-7402細胞內活性氧的測定實驗(a)空白組，卬)1?08卯陽性控制組，((3)用0.5 μΜ的配合物孵育24小時。c組與b—樣，發出綠色的熒光，這說明進入細胞的配合物能誘導了活性氧的產生，因而產生的活性氧使DCFH發生氧化生成發熒光的DCF。
[0022]
綜合以上抗癌活性實驗，初步推測抗癌機理為:配合物進入細胞核，產生活性氧，氧化斷裂DNA，產生凋亡信號，并移位至線粒體，使線粒體膜電位崩潰，進一步釋放釋放凋亡信號，如細胞色素C，并引發一系列的級聯反應(如caspase級聯反應)，導致癌細胞凋亡，有關詳細而深入的抗癌機理的有待于進一步系統的研究。
[0023]結論:本方法的重復性好，產品純度高。所合成的[VO2 (tpy)] C14具有極高的抗癌活性，有望開發為新型的高效、廣譜、低毒副作用的癌癥治療的化療藥物。
【主權項】
1.一種配位化合物，其化學式為[V02(tpy)]C104，該配位化合物具有特效抗癌活性且有望成為低毒高效的抗癌藥物，其特征是在于，該配位化合物[V02(tpy)]C104的合成包括[V〇2(tpy)]C104單晶合成及[V02(tpy)]C104微晶或粉末合成，其中[V02(tpy)]C104單晶合成步驟是: 首先選取V0S04水溶液與Ba(ClO4)2溶液混合，經攪拌過濾后獲得[VO(H2O)5] (ClO4)2水溶液，向該[VO (H2O) 5 ](Cl 04) 2水溶液加入tpy乙醇溶液獲得[VO (H2O) 2 (tpy) ] (Cl O4) 2乙醇、水混合溶液，再通過旋轉蒸發除去乙醇獲得[VO(H2O)2 (tpy) ] (C104)2水溶液，該[VO(H2O)2(tpy)](C104)2水溶液則在攪拌的過程下被空氣氧化形成[V02(tpy)]C104水溶液，最后經過緩慢蒸發制得[V02(tpy)]C104單晶； 在[V02(tpy)]C104微晶或粉末合成過程中則是將Ba(ClO4)2溶液替換成BaCl2溶液，經攪拌過濾生成[V0(H20)5]C12水溶液，再向[V0(H20)5]C12水溶液加入tpy乙醇溶液獲得[V0(H2O) 2 (tpy) ] Cl2乙醇、水混合溶液，再經過旋轉蒸發除去乙醇獲得[VO (H2O) 2 (tpy) ] Cl 2水溶液，該[VO (H2O) 2 (tpy) ] Cl2水溶液再在攪拌的過程下被空氣氧化形成[VO2 (tpy) ] Cl水溶液，向[V02(tpy) ]C1水溶液中加入飽和NaClO4并不斷攪拌最后制備出[V02(tpy) ]C104微晶或粉末。2.如權利要求1所述配位化合物的表征其特征是:包括[V02(tpy)]C104單晶表征及[VO2(tpy)]C104微晶或粉末表征，其中[V02(tpy)]C104單晶的表征則通過X-ray單晶衍射獲得分子結構鍵參數及晶體學數據并生成粉末衍射模擬圖，[V02(tpy) ]C104微晶或粉末表征用X-ray粉末衍射并與單晶的粉末衍射模擬圖進行對照，結合電噴霧質譜確定配離子式量及元素分析實驗測定C、H、N的含量，從而確定粉末樣品的組成，結構與純度，并通過紅外光譜確定官能團結構。3.—種如權利要求1所述配位化合物的抗癌活性測定方法，其特征在于測定步驟是:首先進行配位化合物[￥02(^口7)](:104癌細胞毒實驗，測定105()確定該配位化合物[￥02(^口7)]ClO4最敏感細胞，通過活性氧測定確定配合物是否引發活性氧的產生，通過凋亡實驗確定細胞凋亡率，通過線粒體膜電位的測定確定線路提膜的損傷程度，通過彗星實驗確定細胞凋亡情況，最后通過上述測定獲得凋亡機理。
【文檔編號】C07F9/00GK106008591SQ201510723249
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2015年10月29日
【發明人】洪顯蘭
【申請人】韶關學院