取代嘌呤類衍生物及其制備方法與應用
【專利摘要】本發明公開了一種具有通式Ⅰ所示結構的取代嘌呤類衍生物及其制備方法和應用。本發明還包括取代嘌呤類衍生物的N?氧化物、立體異構體形式、立體異構體混合物或藥學上可接受的鹽。本發明還包括取代嘌呤類衍生物的制備方法以及含有一個或多個此類化合物的組合物在制備抗乙型肝炎藥物中的應用。
【專利說明】
取代嘌昤類衍生物及其制備方法與應用
技術領域
[0001] 本發明屬于醫藥技術領域，具體涉及一種取代嘌呤類衍生物，本發明還涉及這類 衍生物的制備方法及其在制備抗乙型肝炎藥物中的用途。
【背景技術】
[0002] 病毒感染性疾病是嚴重危害人類生命健康的一大類疾病。乙肝病毒(HBV)是乙型 肝炎的主要病原體。雖然目前乙肝疫苗已成功的研發并廣泛推廣，但是乙肝病毒因其極強 的傳染性和致病性，社會危害性仍然極大。此外，干擾素和核苷類藥物的實施是抗乙型肝炎 治療的一項重大突破，但是由于耐藥性的出現及長期服藥的毒性問題極大地限制了該療法 的應用，具有新結構、新機制的抗乙型肝炎藥物的研發刻不容緩。
[0003] 雜環化合物具有廣泛的抗病毒活性，它們一般是作為構成藥效團的基本結構母 核，以適合藥物特殊作用靶點的空間要求，或者是作為活性取代基或環系的組成部分而產 生相應的生物活性。藥物之所以依賴于雜環是因為雜環較脂肪或芳香化合物在體內更不易 代謝分解，且具有更好的生物相容性。苯并咪唑環是一類重要的芳雜環，其衍生物具有廣泛 的生物活性以及臨床應用。本發明基于苯并咪唑類似物良好的抗HBV活性，利用生物電子等 排體嘌呤環取代苯并咪唑環，設計合成了一系列取代嘌呤類衍生物，現有技術中未見此類 化合物及其應用。
【發明內容】
[0004] 本發明針對現有技術的不足，提供一種取代嘌呤類衍生物及其制備方法，本發明 還提供取代嘌呤類衍生物的抗HBV活性篩選結果及其在制備抗乙型肝炎藥物中的應用。
[0005] 本發明的技術方案如下：
[0006] 1.取代嘌呤類衍生物
[0007] 本發明所涉及的是具有如下通式I所示結構的取代嘌呤類衍生物，以及其N-氧化 物、立體異構體形式、立體異構體混合物或藥學上可接受的鹽：
[0008]
[0009] 其中，
[0010] R為氨基、氯原子、氟原子、溴原子、碘原子、羥基、甲基或乙基；
[0011] Ri為芐基、取代芐基、各種取代的六元雜環、各種取代的五元雜環、各種取代的六 元并五元雜環、各種取代的六元并六元雜環、各種取代的五元并五元雜環、各種取代的苯并 五元雜環或各種取代的苯并六元雜環；
[0012] Linker為0-3個碳原子的烷烴鏈或含雜原子的烷烴鏈；
[0013]此為各種取代的六元雜環、各種取代的五元雜環、各種取代的六元并五元雜環、各 種取代的六元并六元雜環、各種取代的五元并五元雜環、各種取代的苯并五元雜環或各種 取代的苯并六元雜環；
[0014] 根據本發明優選的，所述通式I中，
[0015] R為氯原子；
[0016] 為甲基、乙基、芐基或對甲基芐基；
[0017] Linker為長度是0個原子的烷烴鏈、1個碳原子和1個硫原子的烷烴鏈或2個碳原子 和1個硫原子的烷烴鏈；
[0018] R2SN-甲基吡咯甲醛、吲哚甲醛、5-溴吲哚甲醛、N-溴甲基鄰苯二甲酰亞胺或N-(2-溴乙基)鄰苯二甲酰亞胺；
[0019] 本發明中所述的"藥學上可接受的鹽"是指在可靠的醫藥評價范圍內，化合物的鹽 類適于與人或較低等動物的組織相接觸而無不適當的毒性、刺激及過敏反應等，具有相當 合理的收益與風險比例，通常是水或油可溶的或可分散的，并可有效地用于其預期的用途。 包括藥學上可接受的酸加成鹽和藥學上可接受的堿加成鹽，在這里是可做預期的用途并與 式I化合物的化學性質相容的。適宜的鹽的列表參見S.M.Birge等，J.Pharm.Sci.，1977,66， 1-19 頁。
[0020] 本發明中所述的"前藥"是指藥學上可接受的衍生物，以便這些衍生物所得的生物 轉換產物是如式I化合物所定義的活性藥物。
[0021 ]根據本發明，進一步優選的，取代嘌呤類衍生物為如下具體化合物之一：
[0022]
[0023]
[0024] 2.取代嘌呤類衍生物的制備方法：
[0025] 取代嘌呤類衍生物的制備方法，由起始原料2，4_二氯-5-硝基嘧啶經低溫下選擇 性親核取代，得中間體LN-1，中間體LN-1的硝基經氯化亞錫還原得到關鍵中間體LN-2;中間 體LN-2中的氨基與帶醛基的芳雜環生成席夫堿，再在無水三氯化鐵催化下環合得到部分終 產物LN-0系列；中間體LN-2與硫羰基二咪唑反應生成中間體LN-3,再經親核取代得到終產 物LN-S系列，然后由間氯過氧苯甲酸氧化得到亞砜產物。
[0026] 合成路線如下：
[0027]
[0028]試劑及條件：（i)甲胺水溶液、或乙胺水溶液、或芐胺、或對甲基芐胺，二氯甲烷，二 異丙基乙胺，_78°C;(ii)氯化亞錫，無水乙醇，回流；（iii)醛基取代的含氮芳雜環，冰醋酸， 無水甲醇，無水三氯化鐵，室溫；（iv)硫羰基二咪唑，四氫呋喃，回流；（v)碳酸鉀或碳酸氫 鈉，室溫；（iv)間氯過氧苯甲酸，二氯甲烷，室溫。
[0029]其中，其中，辦、恥的定義同上通式I所述。
[0030]本發明所述的室溫為20_3(TC。
[0031 ]本發明更為詳細的，取代嘌呤類衍生物的制備方法，步驟如下：
[0032] (1)稱取2.0g 2,4_二氯-5-硝基嘧啶于100mL茄形燒瓶中，加入20mL二氯甲烷室溫 攪拌溶解，放入低溫反應儀中，降溫至-30°C時，加入3.07mL二異丙基乙胺，至-78°C時，緩慢 滴加用5mL二氯甲烷稀釋的0.885g 40 %甲胺水溶液，滴畢，繼續攪拌4h，TLC監測，反應完 畢，停止反應，恢復至室溫，水洗三次，飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液蒸干 拌樣，硅膠柱層析分離純化，流動相選擇石油醚:乙酸乙酯，體積比8:1，得到中間體LNa-1;
[0033] (2)稱取1.4g中間體LNa-1于250mL燒瓶中，100mL乙醇溶解，攪拌下分批加入6.17g 氯化亞錫，加畢，在氮氣保護下，升溫至80°C回流反應9h，TLC監測，反應完畢，停止反應，待 反應液恢復至室溫，測反應液pH為3，冰水浴下，用1M氫氧化鈉溶液緩慢調pH至8，用硅藻土 抽濾，將濾液中大部分乙醇蒸出，再加入乙酸乙酯萃取三次，合并有機相，飽和食鹽水洗一 次，無水硫酸鈉干燥過夜，過濾，濾液蒸干拌樣，硅膠柱層析分離純化，流動相選擇石油醚： 乙酸乙酯，體積比1:1至1:2，得中間體LNa-2;
[0034] (3)稱取0.3g中間體LNa-2于50mL茄形燒瓶中，15mL無水甲醇溶解，攪拌下分別加 入0.2684g N-甲基-2-吡咯甲醛，0. lmL醋酸，室溫攪拌6h，TLC監測，反應完畢，減壓蒸出溶 劑甲醇和醋酸，再加入15mL無水乙醇溶解，攪拌下加入6.2g 5%FeCl3-Si02,升溫至80°C回 流1.5h，停止反應，冷卻至室溫，過濾出不溶物，將濾液中的乙醇蒸出，加入乙酸乙酯復溶， 水洗三次，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液蒸干拌樣，硅膠柱層析分 離純化，流動相選擇石油醚:乙酸乙酯，體積比1 ο: 1至8:1，即可分離出產物LN-0-1;
[0035] 稱取0.2g中間體LNa-2于50mL前形燒瓶中，15mL無水甲醇溶解，攪拌下分別加入 0.2197g吲哚醛，O.lmL醋酸，室溫攪拌12h，TLC監測，反應完畢，減壓蒸出溶劑甲醇和醋酸， 再加入15mL無水乙醇或二甲基甲酰胺溶解，攪拌下加入溶劑稀釋的0.2045g FeCl3溶液，升 溫至80°C回流10h，停止反應，冷卻至室溫，直接過濾出不溶物，濾餅用水洗，石油醚洗，真空 干燥箱干燥，即可得到產物LN-0-4;
[0036] (4)稱取0.3g中間體LNa-2于50mL燒瓶中，15mL重蒸四氫咲喃溶解，攪拌下加入 0.5057g硫羰基二咪唑，加入0.2871g三乙胺，升溫至70°C回流反應12h，TLC監測，反應完畢， 停止反應，待反應恢復至室溫，蒸出四氫呋喃，再加入乙酸乙酯復溶，冰水浴下，用2M氫氧化 鈉溶液洗有機相三次，水相合并，冰水浴緩慢攪拌下，滴加稀鹽酸，析出固體，過濾，濾餅用 水洗后干燥即得中間體LNa-3;
[0037] (5)稱取0. lg中間體LNa-3于50mL茄形燒瓶中，加入10mL二甲基甲酰胺，室溫攪拌 溶解，先加入〇. l〇3g碳酸鉀，室溫攪拌0.5h后，加入0.139g原料N-(2-溴乙基)鄰苯二甲酰亞 胺，升溫至40°C繼續反應，TLC監測，12h后，反應完畢，停止反應，蒸出溶劑二甲基甲酰胺，乙 酸乙酯復溶，加入水洗三次，飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液蒸干即得產物 粗品，然后用體積分數為95%乙醇重結晶，得純品LN-S-1;
[0038] 稱取O.lg中間體LNa-3于50mL茄形燒瓶中，加入15mL二甲基甲酰胺，室溫攪拌溶 解，加入0.0460g碳酸氫鈉，升溫至40°C攪拌1.5h后，再緩慢滴加0.2393g N-溴甲基鄰苯二 甲酰亞胺的二甲基甲酰胺溶液，2h滴畢，TLC監測，反應完畢，停止反應，蒸出溶劑，乙酸乙酯 復溶，加入水洗三次，飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液蒸干即得產物粗品， 然后用體積分數為95%乙醇重結晶，得純品LN-S-5;
[0039] (6)稱取0. lg產物LN-S-6于50mL茄形燒瓶中，加入10mL重蒸二氯甲烷室溫攪拌溶 解，緩慢滴加〇.1385g間氯過氧苯甲酸的二氯甲烷溶液，滴畢，TLC監測，18h后反應完畢，停 止反應，向反應液中加入過量新配制的硫代硫酸鈉溶液，除去反應中剩余的間氯過氧苯甲 酸，分離有機相，水洗三次，飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液蒸干即得產物 粗品，然后用無水乙醇重結晶，即得產物LN-S-9。
[0040] 3.取代嘌呤類衍生物的抗HBV活性及應用
[00411通過HepG2.2.15細胞株對新合成的20個取代嘌呤類衍生物進行了體外抗HBV活性 研究，以拉米夫定（3TC)為陽性對照藥物，利用ELISA法測定目標化合物在體外抑制HBsAg (表面抗原）和HBeAg(核心抗原）分泌的活性;通過PCR法測定了部分化合物的抑制HBV DNA 復制活性;采用CCK-8法檢測樣品化合物的細胞毒性，從而對樣品化合物的抗HBV活性進行 篩選。它們的抗HBV活性和毒性數據列于表1、2中。
[0042]本發明的取代嘌呤類衍生物可作為非核苷類HBV抑制劑應用。具體地說，作為HBV 抑制劑用于制備抗乙型肝炎藥物。
[0043] 一種抗HBV藥物組合物，包括本發明的取代嘌呤類衍生物和一種或多種藥學上可 接受載體或賦形劑。
[0044]本發明提供了結構全新的取代嘌呤類衍生物及其制備方法，抗HBV活性篩選結果 及其在制備抗乙型肝炎藥物中的應用。經過實驗證明，本發明的取代嘌呤類衍生物可作為 HBV抑制劑應用并具有潛在的應用價值。具體地說，作為HBV抑制劑用于制備抗乙型肝炎藥 物。
【具體實施方式】
[0045] 通過下述實例有助于理解本發明，但是不能限制本發明的內容。
[0046] 實施例中所涉及的合成路線如下：
[0047]
[0048] 實施例1.中間體LN-2的制備方法（以LNa-2為例，R!=甲基）
[0049] 稱取2,4-二氯-5_硝基嘧啶（2.(^，10.4111111〇1)于1001^茄形燒瓶中，加入二氯甲烷 (20mL)室溫攪拌溶解，放入低溫反應儀中，降溫至-30°C時，加入二異丙基乙胺（3.07mL， 19 · Ommo 1)，至-78 °C時，緩慢滴加用二氯甲烷(5mL)稀釋的40 %甲胺水(0 · 885g，11 · 4mmo 1) 溶液，滴畢，繼續攪拌4h，TLC監測，反應完畢，停止反應，恢復至室溫，水洗三次(25mL)，飽和 食鹽水洗一次(25mL)，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液蒸干拌樣，硅膠柱層析分離純化，流動相 選擇石油醚:乙酸乙酯，體積比8:1，得到中間體LNa-Ι;
[0050] 稱取中間體LNa_l (1.4g，7.42mmol)于250mL燒瓶中，乙醇（100mL)溶解，攪拌下分 批加入氯化亞錫(6.17g，29.7mmo 1)，加畢，在氮氣保護下，升溫至80 °C回流反應9h，TLC監 測，反應完畢，停止反應，待反應液恢復至室溫，測反應液pH為3，冰水浴下，用1M氫氧化鈉溶 液緩慢調pH至8,用硅藻土抽濾，將濾液中大部分乙醇蒸出，再加入乙酸乙酯（3X20mL)萃取 三次，合并有機相，飽和食鹽水(60mL)洗一次，無水硫酸鈉干燥過夜，過濾，濾液蒸干拌樣， 硅膠柱層析分離純化，流動相選擇石油醚:乙酸乙酯，體積比1:1至1:2,得中間體LNa-2; [0051 ] 2-氯-N4-甲基嘧啶-4，5-二胺(LNa-2)
[0052] 淺棕色粉末，產率56 · 1 %，熔點：138-140°C ; 4 NMR(400MHz，CDChWppm: 7 · 61 (s， 1H, pur ine-CH), 5.09 (s, 1H, pur ine-NH-CH3), 3.07 (d, 3H ,J = 4.0Hz , purine-NH-CHs) ,1.57 (s,2H,purine-NH2), impurity peaks:3.79,1.25(Ethanol)；ESI-MS:m/z 159.2,161.4[M+ H] + .C5H7C1N4(158.04).
[0053] 2-氯-N4-乙基嘧啶-4,5-二胺(LNb-2)
[0054] 深棕色粉末，產率53.1%，熔點：164-1661^? NMR(400MHz，CDCl3)Sppm:7.54(s， 1H，pur ine-CH)，5 · 33 (s，1H，pur ine-迎-CH2)，3 · 52-3 · 48 (m，2H，NH-CH2-CH3)，3 · 17 (s，2H， purine-NH2)，1 · 25(t，3H，NH-CH2-CH3); 13C 匪R(100MHz，CDCl3)Sppm:156·98，152·35， 140.90,124.OO(purine-C) ,36.03(NH-CH2-CH3) ,14.58(NH-CH2-CH3) ；ESI-MS:m/z 173.3, 175.2[M+H] + .C6H9C1N4(172.05).
[0055] N4-芐基-2-氯嘧啶-4,5-二胺(LNc-2)
[0056] 淺棕色粉末，產率65 · 43%，熔點：183-186°C ; 4 NMR(400MHz，CDChWppm: 7 ·64(s， lH,purine-CH),7.37-7.32(m,5H,Ph-H),5.27(s,lH,purine-NH-CH2),4.68(d,2H,J= 4.0Hz ,purine-NH-Qfe-Ph)，2· 95(s，2H，purine_NH2)，impurity peaks: 1 · 25(Ethanol); 13C 匪R(100MHz，CDChWppm: 157.08,153.00,142.56，128.86(purine-C) ,137.87,128.23, 127·86，123·54(Ph-C)，45·27(NH-CH2~Ph);ESI_MS:m/z 234·7，236·7[M+H]+，257·2，259·2 [M+Na] + .CiiHiiClN4(234.07).
[0057] 2-氯-N4- (4-甲基芐基）嘧啶-4，5-二胺(LNd-2)
[0058] 淺黃色粉末，產率51.0%，熔點：147-150°C ;ESI-MS:m/z 249.4,251 ·4[Μ+Η] + .Ci2Hi3ClN4(248.08).
[0059] 實施例2.中間體LN-3的制備方法（以LNa-3為例，R1=甲基）
[0000 ] 稱取中間體LNa-2 (0.3g，1.89mmo 1)于50mL燒瓶中，重蒸四氫咲喃（15mL)溶解，攪 拌下加入硫羰基二咪唑（0.50578,2.84111111〇1)，加入三乙胺(0.28718,2.84111111〇1)，升溫至70 °(：回流反應12h，TLC監測，顯示原料已大部分反應完畢，停止反應，待反應恢復至室溫，蒸出 大部分四氫呋喃，再加入乙酸乙酯復溶，冰水浴下，用2M氫氧化鈉溶液洗有機相三次，水相 合并，冰水浴緩慢攪拌下，滴加稀鹽酸，析出固體，過濾，濾餅用水洗后干燥即得中間體LNa-3〇
[0061 ] 2-氯-9-甲基-9H-嘌呤-8-硫醇(LNa-3)
[0062] 淺黃色粉末，產率52 · 3 %，熔點：292-294°C ; 4 NMR(400MHz，DMS0-d6)δρρπι: 13 · 57 (s，1Η，-SH)，8·39(s，1Η，purine-CH)，3·56(s，3Η，purine-N-CH3); 13C 匪R(100MHz，DMS0-d6)5ppm:173.05,153.79,152.34,136.70,124.06(purine-C),29.32(purine-N-CH3)；ESI-MS:m/z201 · 2,203 · 2[M+H] + · C6H5CIN4S(199 · 99) ·
[0063] 2-氯-9-乙基-9H-嘌呤-8-硫醇（LNb-3)
[0064] 淺黃色粉末，產率55 · 3 %，熔點：263-266 °C ; 4 NMR(400MHz , DMS0-d6) δρρπι: 8 · 20 (s，lH，purine-CH)，4.19(q，2H，J = 8.0Hz，purine-N-^2-CH3)，1.91(s，lH，-SH)，1.25(t， 3H,J = 8.0Hz,purine-N-CH2-CH3) ；13C NMR(100MHz,DMS〇-d6)5ppm:173.05,153.79, 152.34,136.70,124.06(purine-C),29.32(purine-N-CH 3)；ESI-MS:m/z 215.3,217.4[M+ H] + .C7H7C1N4S(214.01).
[0065] 9-芐基-2-氯-9H-嘌呤-8-硫醇（LNc-3)
[0066] 淺黃色粉末，產率56 · 0%，熔點：231-234°C。
[0067] 2-氯 _9-(4-甲基芐基)-9!1-嘌呤-8-硫醇〇^(1-3)
[0068] 淺黃色粉末，產率54 · 7 %，熔點：206-208 °C ; 4 NMR(400MHz，DMS0-d6) δρρπι: 8 · 05 (s，lH，purine-CH)，7.20(d，2H，J = 8.0Hz，Ph-H)，7.08(d，2H，J = 8.0Hz，Ph-H)，5.31(s，2H， purine-N-CH2~Ph)，2 · 24(s，3H, Ph-CH3)，impurity peaks : 1.71 (Tetrahydrofuran) ； 13C NMR(100MHz，DMS0-d6)Sppm:177·31，174·79，147·86，137·28(purine-C)，136·39，135·37， 129.13,127.99(Ph-C) ,45.24(purine-N-CH2-Ph) ,24.86(Ph-CH3) ；ESI-MS:m/z 291.3, 293.3[M+H] +.Ci3HiiClN4S(290.04).
[0069] 實施例3.目標化合物LN-0-1~LN-0-3的制備方法（以LN-0-1為例，=甲基，R2 = N-甲基-2-吡咯）
[0070] 稱取中間體LNa-2(0.3g，1.89mmol)于50mL前形燒瓶中，無水甲醇（15mL)溶解，攪 拌下分別加入N-甲基-2-吡咯甲醛(0.26848,2.46!11〇1)，醋酸（0.11^)，室溫攪拌611，孔(：監 測，反應完畢，減壓蒸出溶劑甲醇和醋酸，再加入無水乙醇（15mL)溶解，攪拌下加入5% FeCl3-Si02(6.2g)，升溫至80°C回流1~2h，停止反應，冷卻至室溫，過濾出不溶物，將濾液中 的乙醇蒸出，加入乙酸乙酯復溶，水洗(3 X 5mL)三次，飽和食鹽水(5mL)洗一次，有機相無水 硫酸鈉干燥，過濾，濾液蒸干拌樣，硅膠柱層析分離純化，流動相選擇石油醚：乙酸乙酯，體 積比10:1至8:1，即可分離出產物LN-0-1。
[0071 ] 以不同的中間體LN-2和N-甲基-2-吡咯甲醛，用上述方法分別制得化合物LN-0-1 ~LN-0-3的目標產物，結果如下：
[0072]
[0073] 白色粉末，產率33 · 7%，熔點：152-154°C ; 4 NMR(400MHz，DMS0-d6)δρρπι: 8 · 96(s， lH，purine-CH),7.21-7.20,6.95-6.93,6.29-6.27(m，3XlH，pyrrole-CH)，3.97(s，3H， pur ine-N-CH3), 3.86 (s , 3H, pyrrole-N-CH3) ； ESI-MS: m/z 248.3,250.3 [M+H]+. C11H10CIN5 (247.
[0074]
[0075] 操作同實施例3,所不同的是將中間體LNa-2替換為LNb-2。
[0076] 白色粉末，產率53 · 6 %，熔點：140-142°C ; 4 NMR(400MHz，DMS0-d6) δρρπι: 9 · 00 (s， lH，purine-CH) ,7.22-7.21,6.84-6.83，6·30-6.29(m，3XlH，pyrrole-CH)，4.41(q，2H，J = 8.0Hz ,purine-N-CH2~CH3),3.94(s,3H,pyrrole-N-CH3) ,1.41(t,3H,J = 8.0Hz ,purine-N-CH2-CH3) ；ESI-MS:m/z 262.2,264.2[M+H]+. C12H12CIN5(261.08).
[0077]
123 操作同實施例3,所不同的是將中間體LNa-2替換為LNc-2。 2 淡黃色粉末，產率28 · 5 %，熔點：130-132°C ; 4 NMR(400MHz，DMS0-d6)δρρπι: 9 · 08 (s，lH，purine-CH),7.35-7.29,7.08-7.06(m，5H，Ph-H)，7·17，6.46,6.16(s，3X1Η， pyrrole-CH),5.60(s,2H,N~CH2~Ph),3.93(s,3H,pyrrole-N-CH3), impurity peak:1.23, 0.85(n-hexane);ESI-MS:m/z 324.4,326.5[M+H]+.Ci7Hi4ClN5(323.09). 3 實施例4.目標化合物LN-0-4~LN-0-8的制備方法（以LN-0-3為例，=甲基，R2 = 1-H-3-吲哚基）
[0081 ] 稱取中間體LNa-2(Ο · 2g，1 · 26mmol)于50mL前形燒瓶中，無水甲醇（15mL)溶解，攪 拌下分別加入吲哚醛(〇. 2197g，1.5 lmmo 1)，醋酸(0. lmL)，室溫攪拌12h，TLC監測，顯示原料 已反應完畢，減壓蒸出溶劑甲醇和醋酸，再加入無水乙醇或二甲基甲酰胺（15mL)溶解，攪拌 下加入溶劑稀釋的？6(：1 3(0.20458，1.26111111〇1)溶液，升溫至80°(：回流1011，停止反應，冷卻至 室溫，直接過濾出不溶物，濾餅用水洗，石油醚洗，真空干燥箱干燥，即可得到產物LN-0-4。
[0082] 以不同的中間體LN-2和吲哚甲醛或5-溴吲哚甲醛，用上述方法分別制得化合物 LN-0-4~LN-0-8的目標產物，結果如下：
[0083]
[0084] 淡黃色粉末，產率35 · 3 %，熔點：>320Γ ; 4 NMR(400MHz，DMS0-d6)δρρπι: 12 · 11 (s， lH，indole-NH),8.95(s，lH，purine-CH),8.52，7.55(m，5H，indole-CH),4.01(s，3H，N-CH 3) ；ESI-MS:m/z 284.3,286.2[M+H]+. CwHioCINs(283.06).
[0085]
[0086] 操作同實施例4,所不同的是將中間體LNa-2替換為LNb-2。
[0087] 白色粉末，產率41.0%，熔點：315-317°C JH NMR(400MHz，DMS0-d6)Sppm:12.34 (s,lH,indole-NH),8.97(s,lH,purine-CH),8.51,8.25,7.58,7.28-7.23(m,5H,indole-CH) , 4 . 55 ( q , 2H , N-CH2-CH3), 1.42(t, 3H, N-CH2-CH3) ；ESI-MS: m/z 298.5,300.4[M+H]+ .Ci5Hi2ClN5(297.08).
[0088]
[0089 ] 侏T N HJ頭她W 4，/J/M、I η」定將個IH」1傘LNa-2替換為LNc-2。
[0090]白色粉末，產率39 · 1 %，熔點：>320°C ; 4 匪R(400MHz，DMS0_d6)δρρπι: 11 · 91 (s， lH，indole-NH)，9.05(s，lH，purine-CH)，8.55-8.53,7.85,7.49,7.15-7.13(m，5H，indole-CH),7.34-7.32,7.27-7.25(m,5H,Ph-H),5.80(s,2H,N-CH2-Ph)；ESI-MS:m/z 360.4,362.4 [M+H] + .C2〇Hi4ClN5(359.09).
[0091]
[0092] 操作同實施例4,所不同的是將取代基吲哚甲醛替換為5-溴吲哚甲醛。
[0093] 淡褐色粉末，產率 14 · 7 %，熔點：>300°C ; 4 NMR(400MHz，DMS0_d6)δρρπι: 12 · 30(s， lH，indole-NH)，9.02(s，lH，purine-CH)，9.02,8.72,8.42,7.54-7.42(m，4H，indole-CH)， 4.01 (s, 3H,N-CH3) ；ESI-MS:m/z 362.3,364.3,366.3[M+H]+. CwHgBrCINs(360.97).
[0094]
[0095] 操作同實施例4,所不同的是將中間體LNa-2替換為LNb-2,將取代基吲哚甲醛替換 為5-溴吲哚甲醛。
[0096] 淡黃色粉末，產率 18 · 0 %，熔點：>300°C ; 4 NMR(400MHz，DMS0_d6)δρρπι: 12 · 26(s， lH，indole-NH)，9.04(s，lH，purine-CH),8.71,8.33,7.53-7.42(m，4H，indole-CH),4.56 (m, 2H,N-OT2-CH3), 1.42(t, 3H,N-CH2-CH3), impurity peaks: 4.34,3.43,1.06(Ethanol)； ESI-MS:m/z376.3,378.4,380.4[M+H]+. CisHnBrClNs(374.99).
[0097]
[0098] 操作同實施例4,所不同的是將中間體LNa-2替換為LNc-2,將取代基吲哚甲醛替換 為5-溴吲哚甲醛。
[0099] 白色粉末，產率24 · 7%，熔點：>300°C ; 4 匪R(400MHz，DMS0-d6)δρρπι: 12 · 10(s， lH，indole-NH)，9.13(s，lH，purine-CH),8.73,7.93,7.78,7.48-7.46,7.40-7.38(m，4H, indole-CH) ,7.35-7.27,7.14-7.13(m，5H，Ph-H)，5.81(m，2H,N-迎2-Ph), impurity peaks: 4.49,3.43,1.06(Ethanol)，1.44(Cyclohexane);ESI-MS:m/z 438·4,440·4,442·4[Μ+Η]+ .C2〇Hi3BrClN5(437.00).
[0100] 實施例5.目標化合物LN-S-1~LN-S-4的制備通法（以LN-S-1為例，=甲基，R2 = N-乙基鄰苯二甲酰亞胺基）
[Ο?Ο? ] 稱取中間體LNa-3 (0 . lg，0.498mmol)于50mL前形燒瓶中，加入二甲基甲酰胺 (10mL)室溫攪拌溶解，先加入碳酸鉀(0.103g，0.748mmo 1)，室溫攪拌0.5h后，加入原料N-(2-溴乙基）鄰苯二甲酰亞胺(0 · 139g，0 · 548mmol)，升溫至40°C繼續反應，TLC監測，12h后， 反應完畢，停止反應，蒸出大部分溶劑，乙酸乙酯（6mL)復溶，加入水洗三次(3 X 5mL)，飽和 食鹽水(5mL)洗一次，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液蒸干即得產物粗品，然后用體積分數為 95%乙醇重結晶，得純品LN -S-1。
[0102] 以不同的中間體LN-3和N-(2-溴乙基)鄰苯二甲酰亞胺，用上述方法分別制得化合 物LN-S-1~LN-S-4的目標產物，結果如下：
[0103]
[0104] 白色晶體，產率39 · 7 %，熔點：213-214°C ; 4 NMR(400MHz，DMS0-d6) δρρ??: 8 · 57 (S， lH,purine-CH),7.77-7.73(m,4H,Ph-H),4.07(t,2H,J=8.0Hz,S-CH2-CH2-N),3.71(t,2H,J =8.0Hz, S-CH2-CH2-N), 3.55 (s, 3H, N-CH3) ； 13C NMR( 100MHz, DMS〇-d6) 5ppm :168.13 (N-CO = C)，157.97,155.29,151.80,131.81，123.40(purine-C)，134.78,133.37,123.40 (isoindoline-1，3-dione-C)，37 · 74(S-CH2-迎2-N)，30 · 57(N-CH3)，29 · 31 (S-迎2-CH2-N); ESI-MS:m/z 374.3,376.4[M+H] + ,396.1[M+Na] + .Ci6Hi2ClN5〇2S(373.04).
[0105]
[0106] 探作冋買施例5，所個冋的是將中| H」體LNa-3替換為LNb-3。
[0107] 白色晶體，產率41 · 6%，熔點：227-229°C ; 4 NMR(400MHz，DMS0-d6) δρρπι: 8 · 59(s， lH，purine-CH)，7.78-7.75(m，4H，isoindoline-l，3-dione-CH)，4.09-4.05(m，4H，S-CH2_ Ol2-N, N-CH2-CH3), 3.74 (t, 2H ,J = 8.0Hz , S-CH2-CH2-N), 1.29 (t, 3H ,J = 8.0Hz , N-CH2-CH3) ;13C匪R(100MHz，CDCl3)Sppm: 168.05(N-⑶=C) ,156.11,154.93,152.68,145.80,133.63 (purine-C),134.13,131.88 123.29(isoindoline-1,3-dione-C),38.19(S-CH2-CH2-N), 37.17(N-〇l2-CH3),30.18(S-CH2-CH2-N) ,14.31(N-CH2-CH3)；ESI-MS:m/z 387.9,389.9[M+ H] +, 410 · 2 [M+Na] + · C17H14CIN5O2S (387 · 06) ·
[0108]
[0109] 操作同實施例5,所不同的是將中間體LNa-2替換為LNc-2。
[0110] 白色晶體，產率36 · 0%，熔點：186-188°C ; 4 NMR(400MHz，DMS0-d6) δρρπι: 8 · 66(s， lH，purine-CH),7.80-7.77(m，4H，isoindoline-l，3-dione-CH),7.35-7.28,7.18(m，5H， Ph-H) ,5.29(s,2H,N-CH2-Ph),4.09(t,2H,J = 4.0Hz,S-CH2-CH2-N),3.70(t,2H,J = 4.0Hz, S-CH2-CH2-N)；13C NMR( 100MHz,DMS0-d6)5ppm: 168.12(N-C0 = C) ,157.77,155.27,152.06, 146.46,127·56(purine-C)，135.21,133.38,129.27(Ph-C),134.80,131.87,123.45 (isoindoline-l，3-dione-C)，46.13(N-迎2-Ph)，37.49(S-CH 2-迎2-N)，30.49(S-迎2-CH2-N);ESI-MS:m/z 450 · 4[M+H] + ·C22Hi6C1N5〇2S(449 ·07) ·
[0111]
[0112] 操作同實施例5,所不同的是將中間體LNa-2替換為LNd-2。
[0113] 白色絮狀晶體，產率37.4%，熔點：204-205°(：;1!1匪1?(4001泡，0150-(16) 5??111: 8.65(s,lH,purine-CH),7.80-7.78(m,4H,is〇indoline-l,3-dione-CH),7.13(d,2H,J= 8.0Hz,Ph-H),7.07(d,2H ,J = 8.0Hz,Ph-H) ,5.23(s,2H,N-CH2-Ph) ,4.09( t, 2H ,J = 4.0Hz , S-CH2-CH2-N),3.70(t,2H,J = 4.0Hz,S-OT2-CH2-N) ,2.25(s,3H,Ph-CH3) ；13C NMR(100MHz, CDCl3)Sppm:167·99(Ν-⑶=C),156.61，155.24,152.94,145.99,131.29(purine-C)， 138.28,133.18,129.54,127.98(Ph-C),134.11,131.86,123.29(isoindoline-l,3-dione-0,46.14( N-ai2-Ph-CH3 ),37.12( S-CH2-〇l2-N) ,30.39( S-CH2-CH2-N) ,21.15( Ph-Ols) ； ESI -MS :m/z 464.4,466.4[M+H] +,486.5[M+Na] +. C23Hi8C1N5〇2S(463.09).
[0114] 實施例6.目標化合物LN-S-5~LN-S-8的制備通法（以LN-S-5為例，=甲基，R2 = N-甲基鄰苯二甲酰亞胺基）
[0115] 稱取中間體LNa_3(0. lg，0.4984mmol)于50mL前形燒瓶中，加入二甲基甲酰胺 (15mL)室溫攪拌溶解，加入碳酸氫鈉(0.0460g，0.5482mmol)升溫至40°C攪拌1.5h后，再緩 慢滴加 N-溴甲基鄰苯二甲酰亞胺(0.2393g，0.9968mmo 1)的二甲基甲酰胺溶液，滴畢（2h)， TLC監測，反應完畢，停止反應，蒸出大部分溶劑，乙酸乙酯（6mL)復溶，加入水洗三次（3 X 5mL)，飽和食鹽水(5mL)洗一次，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液蒸干即得產物粗品，然后用體 積分數為95%乙醇重結晶，得純品1^-3_5。
[0116] 以不同的中間體LN-3和N-溴甲基鄰苯二甲酰亞胺用上述方法分別制得化合物LN-S-5~LN-S-8的目標產物，結果如下：
[0117]
淡褐色針狀晶體，產率37.8%，熔點：210-2121^? NMR(400MHz，CDCl3)Sppm:8.80 (s,lH,purine-CH),7.90-7.88(m,2H,Ph-H),7.78-7.75(m,2H,Ph-H),5.69(s,2H,S-CH2-N)，3.69(s，3H，N-CH 3) ;13C 匪R(100MHz,CDChWppm: 166.54(N-C0 = C) ,155.12,153.26, 146.95,123.87(purine-C),134.63,133.27,123.87(isoindoline-l,3-dione-C),38.85 (S-CH2-N), 29.00 (N-CH3) ； ESI-MS: m/z 360.4,362.4 [M+H]+, 382.3 [M+Na]+. C15H10CIN5O2S (359.02).
[0119]
[0120] 操作同實施例6,所不同的是將中間體LNa-3替換為LNb-3。
[0121] 淡黃色針狀晶體，產率35.4%，熔點：157-1581^? NMR(400MHz，CDCl3)Sppm:8.80 (s，lH，purine-CH)，7.89-7.77(m，4H，isoindoline-l，3-dione-CH)，5.70(s，2H，S-CH2-N), 4.21(q，2H，J = 8.0Hz，N-^2-CH3)，1.29(t，3H，J = 8.0Hz，N-CH2-^3);13CMffi(100MHz， DMS0-d6)Sppm:166.88(N-⑶=C),155.13,154.92,152.38,147.45,131.87(purine-C)， 135 ·40，133 · 58，123 · 99( isoindoline-1，3-dione-C)，39 · 52(S-CH2-N)，38 · 66(N-迎2-CH3)， 14.58(N-CH2-CH3) ；ESI~MS:m/z 374 · 3，376 · 4[M+H]+，396 · 1 [M+Na]+ · C16H12CIN5O2S (373.04).
[0122]
[0123] 探忭冋頭施例6，所個冋的定符甲I日」1本UNa-ii替換為LNc-3。
[0124] 淡黃色針狀晶體，產率41 · 2%，熔點：182_184°C ; 4 NMR(400MHz，CDCl3)Sppm: 8 · 67 (s，lH，purine-CH),7.90-7.87,7.79-7.75(m，4H，isoindoline-l，3-dione-CH),7.59-7.57 (m，2H，Ph-H),7.33-7.28(m，3H，Ph-H)，6.17(s，2H，N-CH2-Ph)，5.48(s，2H，S-CH2_N) ;13C 匪R(100MHz，DMS0-d6)Sppm:166.81(N-C0=C),155.75,155.31,152.69,147.79,129.20 (purine-C),133.50,131.86,123.98(isoindoline-l,3-dione-C),135.35,127.65(Ph-C), 46.34(N-CH 2-Ph),39.52(S-CH2-N) ；ESI-MS:m/z 436.4,438.4[M+H]+,458.4,460.4[M+Na ] + .C2iHi4ClN5〇2S(435.06).
[0125]
12 操作同實施例6,所不同的是將中間體LNa-3替換為LNd-3。 2 淡黃色針狀晶體，產率39.4%，熔點：189-1911^? NMR(400MHz，CDCl3)Sppm:8.83 (s,lH,purine-CH),7.87-7.84,7.78-7.75(m,4H,is〇indoline-l,3-dione-CH),7.18(d, 2H,J = 8.0Hz,Ph-H) ,7.07(d,2H,J = 8.0Hz,Ph-H) ,5.62(s,2H,N-CH2-Ph),5.26(s,2H,S-CH2-N)，2 · 25 (s，3H，Ph-CH3); 13C NMR(1 OOMHz，DMS0-d6) δρρπι: 166 · 80 (N-⑶=C)，155 · 73， 155.25,152.67,147.78,132.43(purine-C),135.35,131.86,123.97(isoindoline-l,3-dione-C),137.76,133.48,129.73,127.68(Ph-C),46.14(N-ai2-Ph-CH3),39.36(S-CH2-N), 21.10(Ph-〇l3)；ESI-MS:m/z450.3,452.2[M+H] +,472.3[M+Na] + .C22Hi6ClN5〇2S(449.07).
[0128] 實施例7.目標化合物LN-S-9、LN-S-10和LN-S-11的制備通法（以LN-S-9為例，R 1 = 乙基，R2 = N-甲基鄰苯二甲酰亞胺基）
[0129] 稱取產物LN-S-6(0. lg，0.2675mmol)于50mL茄形燒瓶中，加入重蒸二氯甲烷 (10mL)室溫攪拌溶解，緩慢滴加間氯過氧苯甲酸（0.1385g，0.8025mmol)的二氯甲烷溶液 (10mL)，滴畢，TLC監測，18h后反應完畢，停止反應，向反應液中加入過量新配制的硫代硫酸 鈉溶液，除去反應中剩余的間氯過氧苯甲酸，分離有機相，水洗三次(3 X5mL)，飽和食鹽水 (5mL)洗一次，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液蒸干即得產物粗品，然后用無水乙醇重結晶，即 得產物LN-S-9。
[0130] 以不同的終產物LN-S-6、LN-S-2或LN-S-8,用上述方法分別制得化合物LN-S-9、 LN-S-10和LN-S-11的目標產物，結果如下：
[0131]
[0132] 白色絮狀晶體，產率39.5%，熔點：198-199°C JH 匪R(400MHz，CDCl3Mppm:8.74 (s，lH，purine-CH),7.76-7.69(m，4H，isoindoline-l，3-dione-CH),4.75-4.56(m，2H，N-CH2-CH3),4.36-4.22(m, 2H, SO-CH2-CH2-N), 4.16-4.10,3.89-3.83 (m, 2H, SO-CH2-CH2-N), 1.59(t，3H，J = 8.0Hz，N-CH2-ffl3) ;13C 匪R(100MHz，DMS0-d6)Sppm: 167.10(N-⑶=C)， 156.32,154.39,151.88,131.59(purine-C),135.70,132.59,123.97(isoindoline-l,3-dione-C) ,57.59(N-CH2-CH3) ,15.52(N-CH2-CH3);ESI-MS:m/z 391 ·5[M+H] + ·C16H12CIN5O3S (389.03).
[0133]
12 操作同實施例7,所不同的是將LN-S-6替換為LN-S-2。 2 白色絮狀晶體，產率32.7%，熔點：221-222°C JH 匪R(400MHz，CDCl3Mppm:8.93 (s，1H，purine-CH)，7·88-7·86，7·81-7·79(m，4H，isoindoline-1，3-dione-CH)，5·59-5·44 (m, 2H, SO-CH2-N), 4.68-4.66 (m, 2H, N-CH2-CH3), 1.58 (t, 3H ,J = 8.0Hz , N-CH2-〇l3) ； 13C NMR (100MHz，DMS0-d6)Sppm:167.92(N-⑶=C),156.83,154.34,151.84，131.85(purine-C)， 134.87,132.14,123.44( isoindoline-l，3-dione-C) ,50.81 (SO-迎2-CH2-N)，31.08(S0-CH2-CH2-N,N-CH2-CH3) ,15.50 (N-CH2-CH3) ；ESI-MS:m/z 404.4[M+H] +, 426.2 [M+Na] + .Ci7Hi4ClN5〇3S(403.05).
[0136]
[0137] 操作同實施例7,所不同的是將LN-S-6替換為LN-S-8。
[0138] 白色晶體，產率34.6%，熔點：171-1731^? NMR(400MHz，CDCl3)Sppm:8.96(s，lH， purine-CH) ,7.84-7.78(m，4H，isoindoline-1，3-dione-CH)，7.40((1,2H，J= 12.0Hz，Ph-H) ,7.12(d,2H,J = 8.0Hz, Ph-H) ,5.78(q,2H,J= 16.0Hz ,J= 12.0Hz,N-CH2-Ph) ,5.31 (q, 2H ,J= 12.0Hz ,J= 12.0Hz, S-CH2-N) ,2.29(s,3H,Ph-CH3) .impurity peaks: 1.55(H20), 1.25(Ethanol-CH3); 13CMffi(100MHz，CDCl3)Sppm:166.52(N-C0 = C)，151.17，134.81， 129.66(purine-C),134.81,128.72(Ph-C),131.49,124.07(isoindoline-l,3-dione-C), 57.13(N-CH2-Ph-CH 3),46.82(S-CH2-N),21.36(Ph-ai3)；ESI-MS:m/z 466.3[M+H] + ,488.3[M +Na] +，931 · 3[2M+H] +，953 · 4[M+Na] + · C22H16CIN5O3S(465 · 07) ·
[0139] 實驗例1:目標化合物的體外抗HBV活性測試實驗
[0140] 測試原理
[0141] HBV轉基因肝癌細胞系--HepG2.2.15細胞株能分泌病毒顆粒于培養上清，包括病 毒DNA、HBsAg和HBeAg。在加入待測目標化合物后，細胞分泌HBsAg和HBeAg含量會有所變化。 因此，通過檢測細胞分泌到培養上清中病毒顆粒含量，對比未加藥對照組含量，可以獲得樣 品藥物的抗病毒能力，同時還可以檢測樣品藥物對細胞的毒性大小。以拉米夫定(3TC)為陽 性對照藥，用ELISA法檢測樣品藥物達到抑制病毒HBsAg的和HBeAg分泌的50 %時的濃度數 值為1(^;用？0?法檢測樣品藥物抑制冊￥0嫩復制量的50%時的濃度數值1(：5();用00(-8法 檢測樣品藥物導致50%細胞毒性死亡時的濃度數值為CC 5Q;通過公式:SI = CC5Q/IC5Q，計算 出待測化合物的"選擇系數"（selectivity index，SI)。由于化合物的溶解度不同，因此每 個化合物初篩濃度也不同。（活性結果見表1和表2)
[0142] 其中，首先將活性試驗所得到的0D值換算成抑制率，然后再根據濃度梯度將其轉 化成IC5Q和CC5Q值，由改良寇式法計算，公式如下：
[0143] lgIC5〇 = Xm-I(P-(3-Pm-Pn)/4)；
[0144] Xm: lg最大劑量;I: lg(最大劑量/相臨劑量）；
[0145] P:陽性反應率之和;Pm:最大陽性反應率;Pn:最小陽性反應率
[0146] 測試病毒株
[0147] HBV轉基因肝癌細胞系HepG2.2.15細胞株。HepG2.2.15可以穩定表達乙肝病毒顆 粒，該細胞株由山東大學馬春紅教授課題組提供。
[0148] 測試方法
[0149] 培養上清的收集
[0150] 將HepG2.2.15細胞接種于96孔板中，次日加入不同濃度的樣品藥物(每濃度3復 孔），在第四天更換培養液及同濃度的樣品藥物，于第九天收集培養上清液待測。
[0151] 細胞毒性實驗(CCK-8法）
[0152] 向96孔板中的細胞加 CCK-8，4小時后加 CCK-8溶解液反應過夜，次日在酶標儀上測 〇D45Q。根據0D值計算出樣品藥物對HepG2.2.15細胞的毒性作用以及影響細胞生長的狀況， 最后計算出導致半數細胞死亡量所需的濃度(CC 50)。
[0153] 酶聯免疫法檢測培養上清中HBeAg和HBsAg的含量
[0154]向包被好的條形板中分別加入50yL的培養上清液，并加入等量的HBeAg和HBsAg用 酶標結合物(空白對照孔不加），充分混勻，貼上膠紙，置37°C下孵育60分鐘后棄去條形板內 液體，并用洗滌液洗滌，重復5次，然后拍干。最后每孔加入混合后的發光底物50yL，充分混 勻室溫避光孵育10分鐘后加入終止液(50yL)終止反應，用酶標儀測定0D45Q/63Q，并根據0D值 計算樣品對HBV抗原的半數抑制率(IC 50)。
[0155] PCR法檢測培養上清中HBV DNA的含量
[0156] HepG2 2.2.15細胞在96孔細胞培養板中培養4小時后，加入所配不同濃度含藥培 養液，繼續培養8天(每4天換液一次），收集上清液，用熒光探針法進行PCR檢測。
[0157] 表1.新型嘌呤非核苷類抑制劑的抗乙肝病毒初篩活性
[0158]
[0160]
[0161 ]注:活性化合物用粗體表示;aND:未測定。[0162] 表2.部分化合物的抗HBsAg和HBeAg分泌活性
[0165] 注：bIC50 :抑制50 % HBsAg或HBeAg分泌時化合物的濃度；CCC50 :抑制50 %細胞生長 時化合物的濃度;dSI:選擇指數，CC5Q/IC5Q的比值; eNA:無活性。
[0163] 1
[0166] 結論：
[0167] 由表1可以看出，本發明的取代嘌呤類衍生物是一系列結構新穎的非核苷類HBV抑 制劑，表現出了不同的抑制抗原(HBsAg和HBeAg)分泌活性。其中，化合物LN-S-4、LN-S-6、 LN-S-9和LN-S-10對兩種抗原的抑制率超過50%。在最大初篩濃度下，除化合物LN-0-5、LN-0-7、LN-0-8和LN-S-8的DNA復制抑制率達到40 %，大部分化合物幾乎不具有HBV DNA復制抑 制活性。基于初篩結果，進一步篩選了化合物LN-S-4、LN-S-6、LN-S-9和LN-S-10對抗原的抑 制活性(表2)。其中，化合物LN-S-10活性最好，對HBsAg的活性為IC 5Q = 6.63μΜ，SI = 1.17，對 HBeAg的活性為IC5Q = 4.43μΜ，SI = 1.72。因此該類取代嘌呤類衍生物具有進一步研究與開 發的價值，可作為抗HBV的先導化合物加以利用。
【主權項】
1. 具有如下通式I所示結構的取代嘌呤類衍生物，以及其N-氧化物、立體異構體形式、 立體異構體混合物或藥學上可接受的鹽：其中， R為氨基、氯原子、氟原子、溴原子、碘原子、羥基、甲基或乙基； R1為芐基、取代芐基、各種取代的六元雜環、各種取代的五元雜環、各種取代的六元并五 元雜環、各種取代的六元并六元雜環、各種取代的五元并五元雜環、各種取代的苯并五元雜 環或各種取代的苯并六元雜環； Linker為0-3個碳原子的烷烴鏈或含雜原子的烷烴鏈； R2為各種取代的六元雜環、各種取代的五元雜環、各種取代的六元并五元雜環、各種取 代的六元并六元雜環、各種取代的五元并五元雜環、各種取代的苯并五元雜環或各種取代 的苯并六元雜環。2. 如權利要求1所述的取代嘌呤類衍生物，其特征在于，所述通式I中， R為氯原子； Ri為甲基、乙基、芐基或對甲基芐基； Linker為長度是0個原子的烷烴鏈、1個碳原子和1個硫原子的烷烴鏈或2個碳原子和1 個硫原子的烷烴鏈； R2為N-甲基吡咯甲醛、B引噪甲醛、5-溴吲哚甲醛、N-溴甲基鄰苯二甲酰亞胺或N- (2-溴乙 基)鄰苯二甲酰亞胺。3. 如權利要求1或2所述的取代嘌呤類衍生物，其特征在于，為如下化合物之一： ft合物 ，_ ft合物 ，一LN^S-I4. 如權利要求1所述的取代嘌呤類衍生物的制備方法，其特征在于，由起始原料2，4-二 氯-5-硝基嘧啶經低溫下選擇性親核取代，得中間體LN-I，中間體LN-I的硝基經氯化亞錫還 原得到關鍵中間體LN-2;中間體LN-2中的氨基與帶醛基的芳雜環生成席夫堿，再在無水三 氯化鐵催化下環合得到部分終產物LN-O系列；中間體LN-2與硫羰基二咪唑反應生成中間體 LN-3，再經親核取代得到終產物LN-S系列，然后由間氯過氧苯甲酸氧化得到亞砜產物； 合成路線如下：試劑及條件：（i)甲胺水溶液、或乙胺水溶液、或芐胺、或對甲基芐胺，二氯甲烷，二異丙 基乙胺，-78°C;(ii)氯化亞錫，無水乙醇，回流；（iii)醛基取代的含氮芳雜環，冰醋酸，無水 甲醇，無水三氯化鐵，室溫；（iv)硫羰基二咪唑，四氫呋喃，回流；（V)碳酸鉀或碳酸氫鈉，室 溫；（iv)間氯過氧苯甲酸，二氯甲烷，室溫； 其中，其中，辦、1?2的定義同上通式I所述。5. 如權利要求4所述的取代嘌呤類衍生物的制備方法，其特征在于，步驟如下： (1) 稱取2.Og 2,4_二氯-5-硝基嘧啶于IOOmL茄形燒瓶中，加入20mL二氯甲烷室溫攪拌 溶解，放入低溫反應儀中，降溫至-30°C時，加入3.07mL二異丙基乙胺，至-78°C時，緩慢滴加 用5mL二氯甲烷稀釋的0.885g 40 %甲胺水溶液，滴畢，繼續攪拌4h，TLC監測，反應完畢，停 止反應，恢復至室溫，水洗三次，飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液蒸干拌樣， 硅膠柱層析分離純化，流動相選擇石油醚:乙酸乙酯，體積比8:1，得到中間體LNa-I; (2) 稱取1.4g中間體LNa-I于250mL燒瓶中，IOOmL乙醇溶解，攪拌下分批加入6.17g氯化 亞錫，加畢，在氮氣保護下，升溫至80°C回流反應9h，TLC監測，反應完畢，停止反應，待反應 液恢復至室溫，測反應液PH為3，冰水浴下，用IM氫氧化鈉溶液緩慢調pH至8，用硅藻土抽濾， 將濾液中大部分乙醇蒸出，再加入乙酸乙酯萃取三次，合并有機相，飽和食鹽水洗一次，無 水硫酸鈉干燥過夜，過濾，濾液蒸干拌樣，硅膠柱層析分離純化，流動相選擇石油醚：乙酸乙 醋，體積比1:1至1:2，得中間體LNa -2; (3) 稱取0.3g中間體LNa-2于50mL前形燒瓶中，15mL無水甲醇溶解，攪拌下分別加入 0.2684g N-甲基-2-吡咯甲醛，0.1 mL醋酸，室溫攪拌6h，TLC監測，反應完畢，減壓蒸出溶劑 甲醇和醋酸，再加入15mL無水乙醇溶解，攪拌下加入6.2g 5 %FeCl3-SiO2,升溫至80°C回流 1.5h，停止反應，冷卻至室溫，過濾出不溶物，將濾液中的乙醇蒸出，加入乙酸乙酯復溶，水 洗三次，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液蒸干拌樣，硅膠柱層析分離 純化，流動相選擇石油醚:乙酸乙酯，體積比10:1至8:1，即可分離出產物LN-O-I; 稱取0.2g中間體LNa-2于50mL前形燒瓶中，15mL無水甲醇溶解，攪拌下分別加入 0.2197g吲哚醛，O.lmL醋酸，室溫攪拌12h，TLC監測，反應完畢，減壓蒸出溶劑甲醇和醋酸， 再加入15mL無水乙醇或二甲基甲酰胺溶解，攪拌下加入溶劑稀釋的0.2045g FeCl3溶液，升 溫至80°C回流10h，停止反應，冷卻至室溫，直接過濾出不溶物，濾餅用水洗，石油醚洗，真空 干燥箱干燥，即可得到產物LN-0-4; (4) 稱取0.3g中間體LNa-2于50mL燒瓶中，15mL重蒸四氫咲喃溶解，攪拌下加入0.5057g 硫羰基二咪唑，加入0.287Ig三乙胺，升溫至70°C回流反應12h，TLC監測，反應完畢，停止反 應，待反應恢復至室溫，蒸出四氫呋喃，再加入乙酸乙酯復溶，冰水浴下，用2M氫氧化鈉溶液 洗有機相三次，水相合并，冰水浴緩慢攪拌下，滴加稀鹽酸，析出固體，過濾，濾餅用水洗后 干燥即得中間體LNa_3; (5) 稱取0.1 g中間體LNa-3于50mL茄形燒瓶中，加入IOmL二甲基甲酰胺，室溫攪拌溶解， 先加入0.103g碳酸鉀，室溫攪拌0.5h后，加入0.139g原料N-( 2-溴乙基)鄰苯二甲酰亞胺，升 溫至40°C繼續反應，TLC監測，12h后，反應完畢，停止反應，蒸出溶劑二甲基甲酰胺，乙酸乙 酯復溶，加入水洗三次，飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液蒸干即得產物粗 品，然后用體積分數為95%乙醇重結晶，得純品LN-S-I; 稱取0 . Ig中間體LNa-3于50mL前形燒瓶中，加入15mL二甲基甲酰胺，室溫攪拌溶解，加 入0.0460g碳酸氫鈉，升溫至40 °C攪拌1.5h后，再緩慢滴加0.2393g N-溴甲基鄰苯二甲酰亞 胺的二甲基甲酰胺溶液，2h滴畢，TLC監測，反應完畢，停止反應，蒸出溶劑，乙酸乙酯復溶， 加入水洗三次，飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液蒸干即得產物粗品，然后用 體積分數為95 %乙醇重結晶，得純品LN-S-5; (6) 稱取0.1 g產物LN-S-6于50mL茄形燒瓶中，加入IOmL重蒸二氯甲烷室溫攪拌溶解，緩 慢滴加0.1385g間氯過氧苯甲酸的二氯甲烷溶液，滴畢，TLC監測，18h后反應完畢，停止反 應，向反應液中加入過量新配制的硫代硫酸鈉溶液，除去反應中剩余的間氯過氧苯甲酸，分 離有機相，水洗三次，飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液蒸干即得產物粗品， 然后用無水乙醇重結晶，即得產物LN-S-9。6. 權利要求1-3任一項所述的化合物在制備抗HBV的藥物中的應用。7. -種抗HBV藥物組合物，包含權利要求1-3任一項所述化合物和一種或多種藥學上可 接受載體或賦形劑。
【文檔編號】C07D473/00GK106008506SQ201610486112
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年6月27日
【發明人】劉新泳, 劉娜, 展鵬, 賈海永
【申請人】山東大學