一種快速測定飼料用植酸酶酶活力的方法
【專利摘要】本發明公開了一種快速測定飼料用植酸酶酶活力的方法。該測定飼料用植酸酶酶活力的方法，包括如下步驟：將用于測定飼料用植酸酶酶活力的麥麩加入到含有待測飼料用植酸酶的液體中，獲得酶解反應液；將所述酶解反應液進行酶解反應，測定所述酶解反應產生的游離無機磷的含量，得到所述待測飼料用植酸酶的酶活力；以干重計，所述用于測定飼料用植酸酶酶活力的麥麩中淀粉的質量百分含量為≤0.01％。該方法既可以快速檢測飼料用植酸酶在緩沖溶液中的酶活力，又可以快速檢測飼料用植酸酶在離體動物消化液中的酶活力。飼料生產企業和養殖戶可以參照本發明的方法對植酸酶的酶活力進行分析和比較，適用于飼料用植酸酶的研究、生產和應用。
【專利說明】
一種快速測定飼料用植酸酶酶活力的方法
技術領域
[0001] 本發明涉及飼料領域中一種快速測定飼料用植酸酶酶活力的方法。
【背景技術】
[0002] 植酸酶是目前飼料工業中應用最廣的單體酶，也是一種很成熟的飼料酶，約占整 個飼料酶產值的30%左右。植酸酶可水解飼料中的植酸，使其釋放出可利用的磷，從而減少 單胃動物飼料中無機磷的使用量，也可以減少動物糞便中的磷對環境的污染。因此無論從 社會效益和經濟效益來看，植酸酶都是一種很好的飼料添加劑，也是一種極有發展前途的 飼料用酶。
[0003] 隨著植酸酶在飼料中的廣泛應用，對植酸酶酶活力評價方法的需求也越來越迫 切。長期以來，植酸酶酶活力的分析測定一直是飼料工業領域中很有爭議的話題，現有分 析方法所提供的分析數據的實用性和重復性都不理想。目前，植酸酶酶活力的評價主要以 植酸鈉為底物，所用植酸鈉純度高而且易溶于水，但是飼料成分相對比較復雜，所含植酸鹽 基本上都是不溶于水的化合物，而且這些化合物通常與飼料原料中的其它成分（主要是蛋 白、纖維和金屬離子）相互交聯在一起，組成結構復雜的鰲合物，因此純化的植酸鈉不能模 擬植酸酶在體內作用時所面對的復雜底物成分。動物飼養試驗雖然直觀，可靠性也比較好， 但是試驗的時間太長（至少需要2個月），成本很高，在實際生產過程中很難推廣，與科研過 程中的快速分析要求相差甚遠。
[0004] 另外，植酸酶還有很多同工酶，它們對酸堿環境的適應性、對溫度的耐受性以及對 動物消化道環境的抗逆性都有差異，用目前標準的實驗室分析方法是很難區別的，而實際 生產應用卻很需要這些數據。
[0005] 因此，探索并建立一種更為科學、客觀和簡便評價植酸酶酶活力的體外檢測方法 是迫切需要的。
【發明內容】
[0006] 本發明所要解決的技術問題是如何快速、更符合實際地測定飼料用植酸酶的酶活 力。
[0007] 為解決上述技術問題，本發明首先提供了一種測定飼料用植酸酶酶活力的方法。
[0008] 本發明所提供的一種測定飼料用植酸酶酶活力的方法，包括如下步驟：將用于測 定飼料用植酸酶酶活力的麥麩加入到含有待測飼料用植酸酶的液體中，獲得酶解反應液； 將所述酶解反應液進行酶解反應，測定所述酶解反應產生的游離無機磷的含量，得到所述 待測飼料用植酸酶的酶活力；以干重計，所述用于測定飼料用植酸酶酶活力的麥麩中淀粉 的質量百分含量為彡〇· 01% (如〇· 01% )。
[0009] 上述方法中，所述含有待測飼料用植酸酶的液體可為含有待測飼料用植酸酶的緩 沖溶液或含有待測飼料用植酸酶的離體動物消化液。所述含有待測飼料用植酸酶的緩沖溶 液可用所述待測飼料用植酸酶和醋酸-醋酸鈉緩沖溶液配制，所述含有待測飼料用植酸酶 的離體動物消化液可用所述待測飼料用植酸酶和所述離體動物消化液配制。所述離體動物 消化液具體可為離體動物胃液或離體動物腸液，所述離體動物胃液具體可為離體豬胃液， 所述離體動物腸液具體可為離體豬小腸液或離體雞小腸液。
[0010] 上述方法中，所述酶解反應液中，所述植酸酶的濃度可為0. 196-0. 500mg/mL，具體 可為0· 196mg/mL或0· 500mg/mL ;所述麥麩的濃度可為19. 6-25. Omg/mL，具體可為19. 6mg/ mL或25. Omg/mL;所述植酸酶與所述麥麩的質量比可為1 :(50-100),具體可為1:100或 1:50。
[0011] 上述方法中，所述酶解反應的反應溫度可為37-41. 5°C，具體可為37°C。
[0012] 上述方法中，所述酶解反應液的pH值可為2. 4-5. 8,具體可為5. 3-5. 8、2. 4-5. 5、 2· 4、5· 3、5· 5或5. 8 ;所述酶解反應時間可為10-100min，具體可為10-90min、90-100min、 10min、20min、30min、40min、50min、60min、70min、80min、90min 或 100min〇
[0013] 上述方法中，所述無機磷可為磷酸。
[0014] 上述方法中，所述用于測定飼料用植酸酶酶活力的麥麩可按照下述用于測定飼料 用植酸酶酶活力的麥麩的制備方法制備。
[0015] 為解決上述技術問題，本發明還提供了上述用于測定飼料用植酸酶酶活力的麥麩 的制備方法。
[0016] 本發明所提供的用于測定飼料用植酸酶酶活力的麥麩的制備方法，包括如下步 驟：將麥麩進行糊化反應，獲得糊化后的麥麩；向所述糊化后的麥麩中加入淀粉酶得到淀 粉酶反應體系，進行淀粉酶酶解反應，獲得淀粉酶酶解后的麥麩；向所述淀粉酶酶解后的麥 麩中加入糖化酶得到糖化酶反應體系，進行糖化酶酶解反應，獲得糖化酶酶解后的麥麩；將 所述糖化酶酶解后的麥麩進行清洗，得到所述用于測定飼料用植酸酶酶活力的麥麩。
[0017] 上述用于測定飼料用植酸酶酶活力的麥麩的制備方法中，所述糊化反應可為在 95-KKTC反應10-15min，具體可為在98°C反應12min。
[0018] 所述淀粉酶反應體系中，所述淀粉酶可為α -淀粉酶；所述α -淀粉酶和所述糊化 后的麥麩的配比可為40000U a -淀粉酶：(8. 74-12) kg以干重計的所述糊化后的麥麩，所述 a -淀粉酶和所述糊化后的麥麩的配比具體可為40000U a -淀粉酶：8. 74kg以干重計的所 述糊化后的麥麩；所述淀粉酶酶解反應可為在65-70°C反應25-30min，具體可為在65°C反 應 30min。
[0019] 所述a -淀粉酶的一個酶活力單位是指在60°c和pH值為6. 0的條件下，每小時水 解可溶性淀粉產生出1 μ mol麥芽糖所需要的a -淀粉酶的量。
[0020] 所述α-淀粉酶可為北京東華強盛生物工程有限公司的產品，產品目錄號為 107658305。
[0021] 所述糖化酶反應體系中，所述糖化酶和所述淀粉酶酶解后的麥麩的配比可為 1600000U糖化酶：（8. 74-12) kg以干重計的所述淀粉酶酶解后的麥麩，所述糖化酶和所述 淀粉酶酶解后的麥麩的配比具體可為1600000U糖化酶：8. 74kg以干重計的所述淀粉酶酶 解后的麥麩；其中所述淀粉酶酶解后的麥麩的質量以所述糊化后的麥麩的干重計；所述糖 化酶酶解反應可為在95-100°C反應30-90min，具體可為在95°C反應60min。
[0022] 所述糖化酶的一個酶活力單位是指在40°C和pH值為4. 6的條件下，每小時水解可 溶性淀粉產生lmg葡萄糖所需要的糖化酶的量。
[0023] 所述糖化酶可為北京東華強盛生物工程有限公司的產品，產品目錄號為1003301。
[0024] 所述清洗用水進行，所述清洗的次數可為3-4次，具體可為3次。
[0025] 上文中，所述麥麩為大麥麩。
[0026] 本發明所提供的上述方法在鑒別飼料用植酸酶酶活力中的應用也屬于本發明的 保護范圍。
[0027] 實驗證明，本發明的測定飼料用植酸酶酶活力的方法能夠直觀、簡便，客觀全面 地測定飼料用植酸酶的酶活力。本發明的測定飼料用植酸酶酶活力的方法，以淀粉含量 <0.01 %的麥麩為底物，既可以快速檢測飼料用植酸酶在緩沖溶液中的酶活力，又可以快 速檢測飼料用植酸酶在離體動物消化液中的酶活力。飼料生產企業和養殖戶可以參照本發 明的方法對植酸酶的酶活力進行分析和比較，適用于飼料用植酸酶的研究、生產和應用。
【具體實施方式】
[0028] 下面結合【具體實施方式】對本發明進行進一步的詳細描述，給出的實施例僅為了闡 明本發明，而不是為了限制本發明的范圍。
[0029] 下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規方法。
[0030] 下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。
[0031] 下述實施例中的植酸酶A為鞏義市益康生物科技有限公司的產品（5000型），植 酸酶B為河南集美化工產品有限公司的產品（PW5型），植酸酶C為江蘇奕農生物工程有 限公司的產品（植酸酶5000)，植酸酶D為江蘇遠方中匯生物科技有限公司的產品（植酸 酶5000)，植酸酶X為上海紀亭實業有限公司的產品（植酸酶5000)，植酸酶Y為蘇州厚 金化工有限公司的產品（植酸酶5000)，植酸酶Z為廣州全奧化工產品有限公司的產品 (CAS37288-11)。
[0032] 下述實施例中的a-淀粉酶為北京東華強盛生物工程有限公司的產品，產品目錄 號為107658305 ;該a -淀粉酶的一個酶活力單位是指在60°C和pH值為6. 0的條件下，每 小時水解可溶性淀粉產生出1 μ mol麥芽糖所需要的a -淀粉酶的量。
[0033] 下述實施例中的糖化酶為北京東華強盛生物工程有限公司的產品，產品目錄號為 1003301 ;該糖化酶的一個酶活力單位是指在40°C和pH值為4. 6的條件下，每小時水解可 溶性淀粉產生lmg葡萄糖所需要的糖化酶的量。
[0034] 實施例1、用于測定飼料用植酸酶酶活力的麥麩的制備
[0035] 稱取10kg普通商品麥麩，用60kg清水在常溫（20-30°C )浸泡24h,清洗其中的泥 渣和其它可溶性雜物，撇除漂浮的皮殼和麥秸等粗纖維。用清水反復清洗3次，然后再過 濾、擠壓，獲得潔凈的麥麩，麥麩中含水量為65%。將獲得的麥麩分批平攤在托盤上，挑除 其中沒有破碎的麥粒，得到麥麩原料，該麥麩原料的干重為8. 74kg。在容量為100L的不銹 鋼容器中，加入8. 74kg上述麥麩原料，再加入45kg蒸餾水，然后通蒸汽加熱升溫至98°C， 保溫12min，充分糊化麥麩中殘留的淀粉。糊化結束后冷卻至65°C，加入10g淀粉液化酶 (a -淀粉酶，酶活為4000u/g)，反應30min。然后逐步加熱至95°C，再加入20g糖化酶（酶 活為80000u/g)，反應60min，以充分糖化殘留的淀粉成為溶解于水的葡萄糖和麥芽糖。糖 化結束后自然冷卻至室溫（20-30°C )，過濾，擠壓，獲得濾渣，再用蒸餾水清洗濾渣3次，以 充分濾除殘留的葡萄糖和麥芽糖，獲得純凈的麥麩，麥麩中的含水量為65%，重量為22kg。 把含水量為65%的22kg麥麩分批平攤在托盤上進行常溫（20-30°C)氣流干燥24h，得到用 于測定飼料用植酸酶酶活力的麥麩7. 6kg。以干重計，該用于測定飼料用植酸酶酶活力的麥 麩中淀粉質量百分含量為〇. 01 %。
[0036] 將該用于測定飼料用植酸酶酶活力的麥麩分裝在密封的容器中，于4°C冰箱中保 存備用。
[0037] 實施例2、飼料用植酸酶在醋酸-醋酸鈉緩沖溶液中的酶活力測定
[0038] 醋酸-醋酸鈉緩沖溶液的配制：在5000mL蒸餾水中加入4. 5mL冰醋酸和34. 85g 無水醋酸鈉，攪拌l〇min，使醋酸鈉徹底溶解得到醋酸-醋酸鈉緩沖溶液，該醋酸-醋酸鈉緩 沖溶液中醋酸根離子的濃度為〇. lmol/L，pH值為5. 5。
[0039] 含有飼料用植酸酶A的緩沖溶液的配制：向燒杯中加入1. 000g粉狀飼料用植酸酶 A，然后加入50mL上述醋酸-醋酸鈉緩沖溶液，磁力攪拌30min后轉移到100mL容量瓶中， 并用上述醋酸-醋酸鈉緩沖溶液定容至l〇〇mL，配置成質量百分濃度為1 %的飼料用植酸酶 A的緩沖溶液。
[0040] 取9個500mL的三角瓶，依次編號為1、2、3、4、5、6、7、8和9，分別向每個三角瓶中 加入250mL上述醋酸-醋酸鈉緩沖溶液，再向每個三角瓶中分別加入50g實施例1的用于 測定飼料用植酸酶酶活力的麥麩，在37°C恒溫水浴中放置30min，然后再向9個三角瓶中按 編號從1至9的順序依次分別加入5mL質量百分濃度為1 %的飼料用植酸酶A的緩沖溶液， 分別得到1-9號飼料用植酸酶A的酶解反應液。
[0041] 將9個裝有飼料用植酸酶A的酶解反應液的三角瓶放置在37°C恒溫水浴中，按照 編號順序從1-9號三角瓶中（與加入飼料用植酸酶A溶液的順序一致），每隔10min抽取一 個三角瓶（第l〇min抽取1號三角瓶，第20min抽取2號三角瓶，第30min抽取3號三角瓶， 第40min抽取4號三角瓶，第50min抽取5號三角瓶，第60min抽取6號三角瓶，第70min抽 取7號三角瓶，第80min抽取8號三角瓶，第90min抽取9號三角瓶），將三角瓶中的酶解反 應后的溶液在相對離心力為2000g條件下離心3min獲得酶解反應后的上清液，依次得到1 號三角瓶中的酶解反應后的上清液，2號三角瓶中的酶解反應后的上清液，3號三角瓶中的 酶解反應后的上清液，4號三角瓶中的酶解反應后的上清液，5號三角瓶中的酶解反應后的 上清液，6號三角瓶中的酶解反應后的上清液，7號三角瓶中的酶解反應后的上清液，8號三 角瓶中的酶解反應后的上清液和9號三角瓶中的酶解反應后的上清液。取4mL酶解反應后 的上清液，加入4mL鑰酸銨溶液，采用鑰酸銨比色法依次測定1-9號三角瓶中所獲得酶解反 應后的上清液中磷酸的濃度，結果如表1所示。
[0042] 表1、醋酸-醋酸鈉緩沖溶液（pH值為5. 5)中植酸酶A的酶活力測定結果
[0044] 本實施例中飼料用植酸酶A的一個酶活力單位是指在37°C和pH值為5. 5的條件 下，每分鐘從實施例1的用于測定飼料用植酸酶酶活力的麥麩中釋放出1 μ mol無機磷所需 要的飼料用植酸酶A的量。
[0045] 實施例3、飼料用植酸酶在離體豬胃液中的酶活力測定
[0046] 在屠宰場收集30個豬胃（豬的體重在95_130kg之間），收集豬胃內的內容物，混 合均勻，用8層醫用紗布擠壓過濾混勻后的豬胃內容物，收集過濾液，獲得2000mL豬胃食糜 過濾液，然后將豬胃食糜過濾液在l〇〇〇rpm條件下離心lmin,獲得1600mL豬胃食糜過濾液 上清液并進行pH值測定，pH值為2. 4,作為分析飼料用植酸酶酶活力的離體豬胃液。
[0047] 取4個500mL三角瓶，分別加入0. lg飼料用植酸酶A、飼料用植酸酶B、飼料用植 酸酶C和飼料用植酸酶D (都是粉狀酶），每個三角瓶中只加入一種酶，將只加入飼料用植 酸酶A的三角瓶編號為A，將只加入飼料用植酸酶B的三角瓶編號為B，將只加入飼料用植 酸酶C的三角瓶編號為C，將只加入飼料用植酸酶D的三角瓶編號為D ;再分別向編號為A、 B、C和D的三角瓶中各加入200mL上述作為分析飼料用植酸酶酶活力的離體豬胃液，磁力 攪拌2min后在37°C恒溫水浴保溫2min，使得飼料用植酸酶充分溶解，得到含有植酸酶A的 離體豬胃液，含有植酸酶B的離體豬胃液，含有植酸酶C的離體豬胃液和含有植酸酶D的離 體豬胃液。向含有植酸酶A的離體豬胃液，含有植酸酶B的離體豬胃液，含有植酸酶C的離 體豬胃液和含有植酸酶D的離體豬胃液中依次（間隔為30秒）加入5g實施例1的用于測 定飼料用植酸酶酶活力的麥麩，獲得飼料用植酸酶A的酶解反應液、飼料用植酸酶B的酶解 反應液、飼料用植酸酶C的酶解反應液和飼料用植酸酶D的酶解反應液。在37°C恒溫水浴 中反應30min，獲得飼料用植酸酶A的酶解反應后的溶液、飼料用植酸酶B的酶解反應后的 溶液、飼料用植酸酶C的酶解反應后的溶液和飼料用植酸酶D的酶解反應后的溶液。將飼 料用植酸酶A的酶解反應后的溶液、飼料用植酸酶B的酶解反應后的溶液、飼料用植酸酶C 的酶解反應后的溶液和飼料用植酸酶D的酶解反應后的溶液依次在相對離心力為2000g條 件下離心3min，獲得飼料用植酸酶A的酶解反應后的上清液、飼料用植酸酶B的酶解反應 后的上清液、飼料用植酸酶C的酶解反應后的上清液和飼料用植酸酶D的酶解反應后的上 清液，收集上述各種飼料用植酸酶的酶解反應后的上清液。取4mL酶解反應后的上清液，加 入4mL鑰酸銨溶液，采用鑰酸銨比色法依次測定飼料用植酸酶A的酶解反應后的上清液中 磷酸的濃度、飼料用植酸酶B的酶解反應后的上清液中磷酸的濃度、飼料用植酸酶C的酶解 反應后的上清液中磷酸的濃度和飼料用植酸酶D的酶解反應后的上清液中磷酸的濃度，結 果如表2所示。
[0048] 表2、離體豬胃液中四種飼料用植酸酶的酶活力測定結果
[0049]
[0050] 本實施例中飼料用植酸酶的一個酶活力單位是指在37°C和pH值為2. 4的條件下， 每分鐘從實施例1的用于測定飼料用植酸酶酶活力的麥麩中釋放出1 μ mol無機磷所需要 的飼料用植酸酶的量。
[0051] 表2中根據四種飼料用植酸酶在相同實驗條件下釋放磷酸的量表明，飼料用植酸 酶C的功效最顯著。
[0052] 實施例4、飼料用植酸酶在離體豬小腸液中的酶活力測定
[0053] 在屠宰場收集20副豬小腸（豬的體重在95_130kg之間），收集豬小腸道內的內容 物，混合均勻。用紗布包埋擠壓過濾混勻后的豬小腸內容物，收集過濾液，獲得2000mL豬小 腸食糜過濾液。將獲得的豬小腸食糜過濾液存放在一個塑料桶中，4°C冰箱中存放24h，然后 在相對離心力為2000g條件下離心2min，獲得1600mL豬小腸食糜過濾液上清液并進行pH 值測定，pH值為5. 3,作為分析飼料用植酸酶酶活力的離體豬小腸液。
[0054] 取3個500mL三角瓶，分別加入0. lg飼料用植酸酶X、飼料用植酸酶Y和飼料用 植酸酶Z，每個三角瓶中只加入一種酶，將只加入飼料用植酸酶X的三角瓶編號為X，將只加 入飼料用植酸酶Y的三角瓶編號為Y，將只加入飼料用植酸酶Z的三角瓶編號為Z ;再分別 向編號為X、Y和Z的三角瓶中各加入200mL上述作為分析飼料用植酸酶酶活力的離體豬 小腸液，在37°C恒溫水浴保溫5min，使得飼料用植酸酶充分溶解，得到含有植酸酶X的離體 豬小腸液，含有植酸酶Y的離體豬小腸液和含有植酸酶Z的離體豬小腸液。向含有植酸酶 X的離體豬小腸液，含有植酸酶Y的離體豬小腸液和含有植酸酶Z的離體豬小腸液中依次 加入5g實施例1的用于測定飼料用植酸酶酶活力的麥麩，獲得飼料用植酸酶X的酶解反應 液、飼料用植酸酶Y的酶解反應液和飼料用植酸酶Z的酶解反應液。在37°C恒溫水浴中反 應lOOmin，獲得飼料用植酸酶X的酶解反應后的溶液、飼料用植酸酶Y的酶解反應后的溶液 和飼料用植酸酶Z的酶解反應后的溶液。將飼料用植酸酶X的酶解反應后的溶液、飼料用 植酸酶Y的酶解反應后的溶液和飼料用植酸酶Z的酶解反應后的溶液依次在相對離心力為 2000g條件下離心3min，獲得飼料用植酸酶X的酶解反應后的上清液、飼料用植酸酶Y的酶 解反應后的上清液和飼料用植酸酶Z的酶解反應后的上清液，收集上述各種飼料用植酸酶 的酶解反應后的上清液。取4mL酶解反應后的上清液，加入4mL鑰酸銨溶液，采用鑰酸銨比 色法依次測定飼料用植酸酶X的酶解反應后的上清液中磷酸的濃度、飼料用植酸酶Y的酶 解反應后的上清液中磷酸的濃度和飼料用植酸酶Z的酶解反應后的上清液中磷酸的濃度， 結果如表3所示。
[0055] 表3、離體豬小腸液中三種飼料用植酸酶的酶活力測定結果
[0056]
[0057] 本實施例中飼料用植酸酶的一個酶活力單位是指在37°C和pH值為5. 3的條件下， 每分鐘從實施例1的用于測定飼料用植酸酶酶活力的麥麩中釋放出1 μ mol無機磷所需要 的飼料用植酸酶的量。
[0058] 表3中根據三種飼料用植酸酶在相同實驗條件下釋放磷酸的量表明，飼料用植酸 酶X的功效最顯著。
[0059] 實施例5、飼料用植酸酶在離體肉雞小腸液中的酶活力測定
[0060] 在肉雞屠宰加工廠收集屠宰的肉雞小腸500個（肉雞的體重在2. 5-3. 0kg之間）， 收集肉雞小腸道內的內容物，混合均勻，放置在一個不銹鋼保溫桶中（隔層中加入冰水）。 放置3h后，用8層醫用紗布擠壓過濾混勻后的肉雞小腸內容物，收集過濾液，獲得1300mL 肉雞小腸內容物過濾液，放置在玻璃試劑瓶中，在4°C條件下靜止存放24h，然后在相對離 心力為3000g條件下離心3min，獲得llOOmL肉雞小腸內容物過濾液上清液并進行pH值測 定，pH值為5. 8,放置在玻璃試劑瓶中，作為分析飼料用植酸酶酶活力的離體肉雞小腸液。
[0061] 取3個500mL三角瓶，分別加入0. lg飼料用植酸酶X、飼料用植酸酶Y和飼料用植 酸酶Z，每個三角瓶中只加入一種酶，將只加入飼料用植酸酶X的三角瓶編號為X，將只加入 飼料用植酸酶Y的三角瓶編號為Y，將只加入飼料用植酸酶Z的三角瓶編號為Z ;再分別向 編號為X、Y和Z的三角瓶中各加入200mL離體肉雞小腸液，在37°C恒溫水浴保溫5min，使 得飼料用植酸酶充分溶解，得到含有植酸酶X的離體肉雞小腸液，含有植酸酶Y的離體肉雞 小腸液和含有植酸酶Z的離體肉雞小腸液。向含有植酸酶X的離體肉雞小腸液，含有植酸 酶Y的離體肉雞小腸液和含有植酸酶Z的離體肉雞小腸液中依次加入（間隔為30s) 5g實 施例1的用于測定飼料用植酸酶酶活力的麥麩，獲得飼料用植酸酶X的酶解反應液、飼料用 植酸酶Y的酶解反應液和飼料用植酸酶Z的酶解反應液。在37°C恒溫水浴中反應60min， 獲得飼料用植酸酶X的酶解反應后的溶液、飼料用植酸酶Y的酶解反應后的溶液和飼料用 植酸酶Z的酶解反應后的溶液。將飼料用植酸酶X的酶解反應后的溶液、飼料用植酸酶Y 的酶解反應后的溶液和飼料用植酸酶Z的酶解反應后的溶液依次在相對離心力為2000g條 件下離心3min，獲得飼料用植酸酶X的酶解反應后的上清液、飼料用植酸酶Y的酶解反應后 的上清液和飼料用植酸酶Z的酶解反應后的上清液，收集上述各種飼料用植酸酶的酶解反 應后的上清液。取4mL酶解反應后的上清液，加入4mL鑰酸銨溶液，采用鑰酸銨比色法依次 測定飼料用植酸酶X的酶解反應后的上清液中磷酸的濃度、飼料用植酸酶Y的酶解反應后 的上清液中磷酸的濃度和飼料用植酸酶Z的酶解反應后的上清液中磷酸的濃度，結果如表 4所示。
[0062] 表4、離體肉雞小腸液中三種飼料用植酸酶的酶活力測定結果
[0065] 本實施例中飼料用植酸酶的一個酶活力單位是指在37°C和pH值為5. 8的條件下， 每分鐘從實施例1的用于測定飼料用植酸酶酶活力的麥麩中釋放出1 μ mol無機磷所需要 的飼料用植酸酶的量。
[0066] 表4中根據三種飼料用植酸酶在相同實驗條件下釋放磷酸的量表明，飼料用植酸 酶X的功效最顯著。
【主權項】
1. 一種測定飼料用植酸酶酶活力的方法，包括如下步驟：將用于測定飼料用植酸酶酶 活力的麥麩加入到含有待測飼料用植酸酶的液體中，獲得酶解反應液；將所述酶解反應液 進行酶解反應，測定所述酶解反應產生的游離無機磷的含量，得到所述待測飼料用植酸酶 的酶活力；以干重計，所述用于測定飼料用植酸酶酶活力的麥麩中淀粉的質量百分含量為 彡 0· 01%〇2. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述酶解反應的反應溫度為37-41. 5°C。3. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述酶解反應液的pH值為2. 4-5. 8。4. 根據權利要求1至3中任一所述的方法，其特征在于：所述用于測定飼料用植酸酶 酶活力的麥麩的制備方法包括將麥麩進行糊化反應，獲得糊化后的麥麩；向所述糊化后的 麥麩中加入淀粉酶得到淀粉酶反應體系，進行淀粉酶酶解反應，獲得淀粉酶酶解后的麥麩； 向所述淀粉酶酶解后的麥麩中加入糖化酶得到糖化酶反應體系，進行糖化酶酶解反應，獲 得糖化酶酶解后的麥麩；將所述糖化酶酶解后的麥麩進行清洗，得到所述用于測定飼料用 植酸酶酶活力的麥麩。5. 根據權利要求4所述的方法，其特征在于：所述糊化反應在9 5-100°C反應 10_15min〇6. 根據權利要求4所述的方法，其特征在于：所述淀粉酶酶解反應在65-70°C反應 25-30min〇7. 根據權利要求4所述的方法，其特征在于：所述糖化酶酶解反應在95-100°C反應 30-90min〇8. 根據權利要求4所述的方法，其特征在于：所述清洗用水進行，所述清洗的次數為 3-4 次。9. 權利要求4至8中任一所述的用于測定飼料用植酸酶酶活力的麥麩的制備方法。10. 權利要求1-9中任一所述方法在鑒別飼料用植酸酶酶活力中的應用。
【文檔編號】C12Q1/34GK105986005SQ201510044028
【公開日】2016年10月5日
【申請日】2015年1月28日
【發明人】蔣慧
【申請人】北京晟亞育達生物科技有限公司