芳基酞嗪化合物及其制備方法和用圖

芳基酞嗪化合物及其制備方法和用圖
【專利摘要】本發明屬藥物合成領域，涉及通式(Ⅰ)的芳基酞嗪化合物及其可藥用鹽，尤其涉及一種含哌嗪或吡咯烷或氮雜環丁烷的芳基酞嗪化合物，及其制備方法和在醫學上的應用。本發明的化合物通過體外Hedgehog信號通路中的靶基因Gli抑制活性測試，結果顯示，所述的化合物具有良好的Hedgehog信號通路抑制活性，可進一步制備新的抗腫瘤藥物。
【專利說明】
芳基酞嗪化合物及其制備方法和用途
技術領域
[0001] 本發明屬藥物合成領域，涉及新型芳基酞嗪化合物，制備方法和應用。具體涉及一 種含哌嗪或吡咯烷或氮雜環丁烷的芳基酞嗪化合物，及其制備方法和在醫學上的應用。
【背景技術】
[0002] 研究報道，惡性腫瘤已成為嚴重危害人民生命健康的常見病。據不完全統計，全世 界每年約有2000萬的新發病例；我國每年的新發病例約為160-200萬，死亡130萬。由于 腫瘤早期具有轉移的能力，臨床診斷原發腫瘤中約50%的患者已產生遠位轉移，腫瘤細胞 増長快、易變異，從而產生多藥耐藥，導致化療失敗，據有關統計，其中90%以上與腫瘤細胞 的多藥耐藥相關，目前臨床上應用的抗腫瘤藥物遠不能滿足治療的要求。
[0003] 分子靶向抗腫瘤藥物的研究已成為當前抗腫瘤藥物研究領域的主要潮流和趨勢。 近年來，靶向Hedgeh 〇g(Hh)信號通路的抗腫瘤藥物成為該領域的研究熱點。研究顯示， Hedgeh〇g(Hh)信號通路在腫瘤的發生發展中發揮著重要的作用，與人類約1/3的腫瘤有著 密切的聯系。異常激活Hh信號傳導，將導致髓母細胞瘤、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、結腸癌、 膀胱癌、卵巢癌等多種腫瘤的發生。Hedgehog是在研究果蠅的發育過程中發現的一種分節 性基因，Hh信號主要是通過跨膜蛋白Ptch和Smo介導向胞內傳遞。無Hh信號時，Ptch與 Smo結合，抑制Smo的作用，導致其下游轉錄因子G1 i轉錄活性的抑制。當有Hh信號時，Hh 與Ptch結合，解除Ptch對Smo的抑制作用，恢復活性的Smo通過級次信號轉遞，激活Gli 轉錄活性，啟動Hh靶基因的轉錄和表達。
[0004] 目前在靶向Hh信號通路的抗腫瘤藥物研究中，已有多個藥物上市或進入臨床研 究，如美國Genentech公司的Vismodegid (⑶C-0449)于2012年已被FDA批準上市，用于皮 膚癌的治療。另外，Erismodegid(LDE225,瑞士 Norvatis 公司）、LEQ_506(瑞士 Norvatis 公司）和LY-2940680 (美國Lilly公司）等正在進行臨床II期及III期，臨床研究顯示對 皮膚癌、腦癌、髓母細胞瘤和其他實體瘤療效顯著。
[0005] 有研究報道了 Hedgehog信號通路抑制劑在治療對酪氨酸激酶抑制劑伊馬替尼產 生耐藥的非小細胞肺癌（CML)患者過程中，不僅能減少CML細胞的數量，還能減少耐伊馬替 尼CML細胞的生長；然而目前已有抗腫瘤藥物耐藥性的問題仍是腫瘤臨床治療面臨的重要 難題。鑒于此，本申請的發明人擬提供新的靶向Hh信號通路的抗腫瘤藥物，其將對改善我 國腫瘤患者的經濟負擔，提高腫瘤臨床治療效果，具有重要的意義。

【發明內容】
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[0006] 本發明的目的是提供具有良好Hedgehog信號通路抑制作用的新型芳基酞嗪化合 物，具體涉及一種含哌嗪或吡咯烷或氮雜環丁烷的芳基酞嗪化合物及其可藥用鹽。
[0007] 本發明的另一目的是提供上述芳基酞嗪化合物的制備方法，尤其涉及制備含哌嗪 或吡咯烷或氮雜環丁烷的芳基酞嗪化合物的方法。
[0008] 本發明的芳基酞嗪化合物具有下述通式（I )的結構及其可藥用鹽：
[0014] R2= H或甲基或甲氧基或氯或羥甲基或羥甲基酯或硝基或氰基或乙酰基
[0015] 本發明中，優選的化合物具有下述化合物1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、 15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25 的結構及其可藥用鹽：
[0016]




[0022] 本發明所述的化合物進行了體外Hedgehog信號通路抑制活性測試試驗，結果顯 示，所述的化合物具有良好的Hedgehog信號通路抑制活性，可進一步制備新型的Hedgehog 信號通路抑制劑，以及制備用于診斷和治療與Hedgehog通路有關的病變，包括但不限于腫 瘤形成、癌癥、瘤形成和非惡性過度增殖性疾病的藥物。
[0023] 本發明通過體外Hedgehog信號通路抑制活性測試試驗，結果顯示，本發明的化合 物顯示出較好的Hedgehog信號通路抑制活性，其中化合物6、7、8、12、14、15、16、18、19、20、 23和25對于Hh信號通路中的靶基因Gli抑制活性IC 5。值小于15nM對于Hh信號通路中 的革巴基因Gli抑制活性IC5。值小于10nM。所述的化合物可以制備Hedgehog信號通路抑制 劑，以及制備用于診斷和治療與Hedgehog通路有關的病變，包括但不限于腫瘤形成、癌癥、 瘤形成和非惡性過度增殖性疾病的藥物。
[0024] 本發明的化合物還用于制備包含治療有效量的所述的化合物及其藥用鹽的藥物 組合物。
[0025] 本發明中，所采用的藥效學試驗方法，是本領域技術人員所熟知的方法；
[0026] 本發明中，所采用的NIH3T3細胞和雙熒光素酶報告檢測試劑盒是本領域技術人 員可通過市購的途徑所獲得的。
[0027] 本發明的含哌嗪或吡咯烷或氮雜環丁烷的芳基酞嗪化合物及其可藥用鹽尤其可 制備Hedgehog信號通路抑制劑及用于診斷和治療與Hedgehog通路有關的病變，包括但不 限于腫瘤形成、癌癥、瘤形成和非惡性過度增殖性疾病。鑒于異常激活Hh信號傳導，將導致 髓母細胞瘤、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、結腸癌、膀胱癌、卵巢癌等多種腫瘤的發生；因此，本 發明所述的惡性腫瘤包括Hedgehog信號通路異常激活所致的相關腫瘤，包括髓母細胞瘤、 乳腺癌、前列腺癌、肺癌、結腸癌、膀胱癌、卵巢癌、皮膚癌。
【具體實施方式】：
[0028] 實施例1 :制備化合物1，N-(l-(4_(l-甲基-吡唑-5-基）_酞嗪-1-基）哌 啶-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0029] 1)合成N-(l_芐基-哌啶-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0030] 50mL的茄形瓶中，依次加入2-三氟甲基-4-氟苯甲酸（546mg，2.63mmol)，超 干 THF(lOmL)，EDC'HCl (1. 0g, 5. 26mmol)，常溫下攪拌 0? 5h，加入 DMAP(65mg, 0? 53mmol)， 氬氣置換反應體系的空氣，滴加化合物N-芐基-3-胺基哌啶（500mg，2.63mmol)的超干 THF(5mL)溶液。滴加完畢，氬氣環境下常溫攪拌16h，TLC(PE:EA = 1:1)檢測反應完全， 加入飽和碳酸氫鈉溶液（150mL)，DCM(50mLX3)萃取，合并有機層，飽和食鹽水（50mLXl) 洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸去溶劑，得粗品9. 8g，硅膠柱層析純化，PE:EA = 2:1洗 脫，得純化的產品：4. 3g (白色固體）產率：56. 0 %。蟲NMR(400MHz，CDC13) S (ppm) : 4 NMR(400MHz，CDCl3)S7.52(dd，J = 8.3,5.5Hz，lH)，7.41(dd，J = 8.9,2.5Hz，lH)，7.32- 7. 20 (m, 6H), 6. 50 (br, 1H), 4. 29 (s, 1H), 3. 55 - 3. 38 (m, 2H), 2. 64 (s, 2H), 2. 45 (s, 1H), 2. 15 (s, 1H), 1. 80 (s, 1H), 1. 79-1. 59 (m, 4H). HPLC-MS (ESI+) : [M+H] + :381. 2.
[0031] 2)合成N-(哌啶-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0032] 50mL的茄形瓶中，依次加入N-(l-芐基-哌啶-3-基）-4_氟-2-三氟甲基苯甲 酰胺（360mg，0? 95mmol)，Et0H(20mL)，置換氬氣三次，加入Pd/C(100mg)，置換氫氣三次， 常溫攪拌18h，TLC(PE:EA = 1:1)檢測反應完全，濾除Pd/C，直接減壓蒸去溶劑，得產品 0. 24g(白色固體），產率：87%。無需純化，直接用于下一步反應。
[0033] 3)合成N-(l_(4-氯-酞嗪-1-基）哌啶-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0034] 50mL的茄形瓶中，依次加入N-(哌啶-3-基）-4_氟-2-三氟甲基苯 甲酰胺（0? 24g, 0? 83mmol)，DMF(lOmL)，K2C03(573mg, 4. 15mmol)，1，4-二氯酞嗪 (200mg，0. 99mmol)，氬氣置換體系里的空氣，氬氣環境下80°C攪拌12h，TLC(PE:EA = 1:1)檢測反應完全，真空下蒸去DMF，加入EA和水各25mL，水層EA(20mLX3)萃取，合 并有機層，飽和食鹽水（50mLXl)洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸去溶劑，得粗品680mg， 硅膠柱層析純化，PE:EA = 2:1~1:1洗脫，得純化的產品270mg(白色固體）產率： 72.0%〇1HMMR(400MHz，CDCl 3)S(ppm):8.21(dd，J = 6.3,3.1Hz，lH)，8.09(dd，J =6. 4, 3. 1Hz, 1H), 7. 96 - 7. 88 (m, 2H), 7. 59 (dd, J = 8. 4, 5. 4Hz, 1H), 7. 38 (dd, J =8. 9, 2. 5Hz, 1H) , 7. 29 (dd, J = 8. 0, 2. 4Hz, 1H) , 4. 45 (s, 1H) , 3. 83 (dd, J = 13. 0, 2. 8Hz, 1H), 3. 66 - 3. 50 (m, 3H), 2. 10 - 1. 94 (m, 4H). HPLC-MS (ESI+) : [M+H] + :453. 1.
[0035] 4)合成N-(l-(4-(l-甲基-吡唑-5-基）-酞嗪-1-基）哌啶-3-基）-4-氟-2-三 氟甲基苯甲酰胺
[0036] 將N-(l-(4-氯-酞嗪-1-基）哌啶-3-基）-4_氟-2-三氟甲基苯甲酰胺 (lOOmg, 0. 22mmol)和1-甲基-P比挫-5-硼酸頻哪醇酯（92mg, 0. 44mmol)溶于間二甲苯 (3mL)中，再加入磷酸鉀三水合物（117mg,0.44mmol)，氟化鉀（26mg,0.44mmol)，用氬氣置 換反應瓶中的空氣，再加入催化量的四三苯基磷鈀（25mg，0. 022mmol)，微波反應（biotage microwave reacter, 120°C，High absorption)福射 3h，TLC(EA)檢測反應，顯不反應完全， 后處理，將溶劑二甲苯旋干，加入20mL水，用乙酸乙酯（3 X20mL)萃取，合并有機層，飽和 氯化鈉（2X10mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。過濾，得粗品260mg，制備薄層純化，EA展開得 純化的產品 32mg(淡黃色固體），產率 16% ? 4 NMR(400MHz，CDC13) S (ppm) :8. 14(d，J = 8. 1Hz, 1H), 8. 03 (d, J = 8. 0Hz, 1H), 7. 89 (t, J = 7. 1Hz, 1H), 7. 82 (t, J = 7. 1Hz, 1H), 7. 68 -7. 56 (m, 2H), 7. 37 (dd, J = 8. 9, 2. 4Hz, 1H), 7. 30 - 7. 26 (m, 1H), 6. 56 (d, J = 1. 9Hz, 1H), 4. 80 (br, 2H), 4. 48 (s, 1H), 3. 96 (s, 3H), 3. 75 - 3. 56 (m, 3H), 2. 11 - 2. 00 (m, 2H) ,1.91-1. 78 (m, 2H) ? HPLC-MS (ESI+) : [M+H]+: 499. 3.。
[0037] 實施例2 :制備化合物2, N-甲基-N- (1- (4- (1-甲基-吡唑-5-基）-酞嗪-1-基） 哌啶-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0038] 1)合成N-甲基-N_(l-叔丁氧羰基-哌啶-3-基）_4_氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0039] 50mL的前形瓶中，依次加入2-三氟甲基-4-氟苯甲酸（1. 5g, 7. lmmol)，超干 THF(25mL)，EDC'HCl (1. 8g, 9. 3mmol)，常溫下攪拌 0? 5h，加入 DMAP (120mg, 0? 93mmol)，氬氣 置換反應體系的空氣，滴加化合物N-叔丁氧羰基-3-胺甲基哌啶（1.0g，4.7mm〇l)的超干 THF(5mL)溶液。滴加完畢，氬氣環境下常溫攪拌16h，TLC(PE:EA= 1:1)檢測反應完全，加 入飽和碳酸氫鈉溶液（50mL)，DCM(50mLX3)萃取，合并有機層，飽和食鹽水（50mLXl)洗 滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸去溶劑，得粗品4. 3g，硅膠柱層析純化，PE:EA = 2:1洗脫，得純 化的產物 2. 6g(白色固體）產率：84. 2%。HPLC-MS(ESI+) : [M+H] + :405. 3.
[0040] 2)合成N-甲基-N-(哌啶-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺三氟甲磺酸鹽
[0041] 50mL的茄形瓶中，依次加入N-甲基-N- (1-叔丁氧羰基-哌啶-3-基）-4-氟-2-三 氟甲基苯甲酰胺（l.〇g，2. 5mmol)，DCM(lOmL)，三氟醋酸（1.5g，12. 5mmol)，常溫攪拌5h， TLC(PE:EA = 1:1)檢測反應完全，直接蒸干溶劑，得產物1. lg(白色固體）產率：99%。無 需純化，直接用于下一步反應。
[0042] 3)合成N-甲基-N-(l-(4-氯-酞嗪-1-基）哌啶-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯 甲酰胺
[0043] 50mL的茄形瓶中，依次加入N-甲基-N-(哌啶-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯 甲酰胺三氟甲磺酸鹽（1. lg，2. 5mmol)，DMF (25mL)，K2C03 (1. 8g，12. 5mmol)，1，4-二氯 酞嗪（600mg，3. Ommol)，氬氣置換體系里的空氣，氬氣環境下80°C攪拌12h，TLC(PE:EA =1:1)檢測反應完全，真空下蒸去DMF，加入EA和水各50mL，水層EA(50mLX3)萃 取，合并有機層，飽和食鹽水（50mLXl)洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸去溶劑，得粗品 1. 6g，硅膠柱層析純化，PE:EA = 4:1~2:1洗脫，得純化的產物0. 4g(白色固體）產 率：34.0 %。4 NMR (400MHz，CDC13) S (ppm) : 8.21 (dd，J = 6.3,3. 1Hz，1H)，8.09 (dd，J =6. 4, 3. 1Hz, 1H), 7. 96 - 7. 88 (m, 2H), 7. 59 (dd, J = 8. 4, 5. 4Hz, 1H), 7. 38 (dd, J = 8. 9, 2. 5Hz, 1H), 7. 29 (dd, J = 8. 0, 2. 4Hz, 1H), 5. 03 (s, 1H), 3. 96-3. 89 (m, 2H), 3. 38 -3. 17 (m, 1H), 3. 09 (d, J = 14. 4Hz, 2H), 2. 76 (s, 3H), 2. 12-1. 90 (m, 4H). HPLC-MS (ESI+) : [M +H] + :467. 1.
[0044] 4)合成N-甲基-N-(l-(4-(l-甲基-吡唑-5-基）-酞嗪-1-基）哌 啶-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0045] 將N-甲基-N-(l-(4-氯-酞嗪-1-基）哌啶-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰 胺（300mg, 0? 64mmol)和1-甲基-吡唑_5_硼酸頻哪醇酯（270mg, 1. 3mmol)溶于間二甲 苯（8mL)中，再加入磷酸鉀三水合物（350mg, 1. 3mmol)，氟化鉀（76mg, 1. 3mmol)，用氬氣置 換反應瓶中的空氣，再加入催化量的四三苯基磷鈀（74mg，0. 064mmol)，微波反應（biotage microwave reacter, 120°C，High absorption)福射 3h，TLC(EA)檢測反應，顯不反應完全， 后處理，將溶劑二甲苯旋干，加入20mL7K，用乙酸乙酯（3X20mL)萃取，合并有機層，飽和氯 化鈉（2X10mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。過濾，得粗品460mg，制備薄層純化，EA展開得純 化的產物：12311^(淡黃色固體），產率37.5%.111匪1?(4001抱，0)(：13)5化口111) :8.05(^ = 7. 5Hz, 1H), 7. 92 (t, J = 7. 6Hz, 1H), 7. 82 (dd, J = 7. 8, 4. 8Hz, 2H), 7. 65 (d, J = 1. 6Hz, 1H) ,7. 41-7. 30 (m, 3H), 6. 59 (dd, J = 7. 7, 1. 7Hz, 1H), 5. 08 (s, 1H), 4. 13 - 3. 77 (m, 5H), 3. 44 -3. 24 (m, 1H), 3. 11 (d, J = 11. 8Hz, 1H), 2. 78 (s, 2H), 2. 15-2. 03 (m, 2H), L 93-1. 70 (m, 2H). HPLC-MS(ESI+) : [M+H] + :513. 3.。
[0046] 實施例3 :制備化合物3, 2-(4-(1-甲基吡唑-5-基）酞嗪-1-基）-6-(2-三氟甲 基_4_氣-苯甲酰基）-2, 6-二氮雜螺[3, 3]庚燒
[0047] 1)合成2-叔丁氧羰基-6-(2-三氟甲基-4-氟-苯甲酰基）-2, 6-二氮雜螺[3, 3] 庚烷
[0048] 50mL的前形瓶中，依次加入2-三氟甲基-4-氟苯甲酸（1. 5g, 7. lmmol)，超干 THF(25mL)，EDC'HCl (1. 8g, 9. 3mmol)，常溫下攪拌 0? 5h，加入 DMAP (120mg, 0? 93mmol)，氬氣 置換反應體系的空氣，滴加化合物ll(1.0g，7.4mm〇l)的超干THF(5mL)溶液。滴加完畢，氬 氣環境下常溫攪拌16h，TLC(PE:EA= 1:3)檢測反應完全，加入飽和碳酸氫鈉溶液（50mL)， DCM(50mLX3)萃取，合并有機層，飽和食鹽水（50mLXl)洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸去 溶劑，得粗品2. 3g，硅膠柱層析純化，PE:EA = 1:1~1:3洗脫，得純化的產物：1. 4g(白色 固體）產率：50.8%。HPLC-MS(ESI+):[M+H] + :389.2.
[0049] 2)合成2-(2_三氟甲基-4-氟-苯甲酰基）-2,6_二氮雜螺[3,3]庚烷三氟甲磺 酸鹽
[0050] 50mL的茄形瓶中，依次加入2-叔丁氧羰基-6- (2-三氟甲基-4-氟-苯甲酰 基）-2, 6-二氮雜螺[3, 3]庚烷（1. 0g，2. 6mmol)，DCM(lOmL)，三氟醋酸（1. 5g，12. 5mmol)， 常溫攪拌5h，TLC(PE:EA= 1:1)檢測反應完全，直接蒸干溶劑，得產物1. lg(白色固體）產 率：99%。無需純化，直接用于下一步反應。
[0051 ] 3)合成2- (4-氯酞嗪-1-基）-6- (2-三氟甲基-4-氟-苯甲酰基）-2, 6-二氮雜 螺[3, 3]庚烷
[0052] 50mL的茄形瓶中，依次加入2-(2_三氟甲基-4-氟-苯甲酰基）-2, 6-二氮雜螺 [3, 3]庚烷三氟甲磺酸鹽（1. lg，2. 6mmol)，DMF(25mL)，K2C03(1. 8g，12. 5mmol)，1，4-二氯酞 嗪（600mg，3. Ommol)，氬氣置換體系里的空氣，氬氣環境下80°C攪拌12h，TLC(PE:EA = 1:1) 檢測反應完全，真空下蒸去DMF，加入EA和水各50mL，水層EA (50mLX 3)萃取，合并有機層， 飽和食鹽水（50mLXl)洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸去溶劑，得粗品1.6g，硅膠柱層析純 化，PE:EA = 1:1~1:3洗脫，得純化的產物0. 28g(白色固體）產率：23. 8%。HPLC-MS(ES 1+) : [M+H] + :451. 1.
[0053] 4)合成2-(4-(1-甲基吡唑-5-基）酞嗪-1-基）-6-(2-三氟甲基-4-氟-苯甲 酰基）-2, 6-二氮雜螺[3, 3]庚烷
[0054] 將2- (4-氯酞嗪-1-基）-6- (2-三氟甲基-4-氟-苯甲酰基）-2, 6-二氮雜螺 [3, 3]庚烷（200mg，0? 44mmol)和1-甲基-吡唑-5-硼酸頻哪醇酯（270mg，1. 3mmol)溶 于間二甲苯（8mL)中，再加入磷酸鉀三水合物（350mg, 1. 3mmol)，氟化鉀（76mg, 1. 3mmol)， 用氬氣置換反應瓶中的空氣，再加入催化量的四三苯基磷鈀（74mg，0.064mmol)，微 波反應（biotage microwave reacter，l2〇 °C ，High absorption)福射 3h， TLC(EA) 檢測反應，顯示反應完全，后處理，將溶劑二甲苯旋干，加入20mL水，用乙酸乙酯 (3X20mL)萃取，合并有機層，飽和氯化鈉（2X10mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。過濾， 得粗品460mg，制備薄層純化，DCM:MeOH = 15:1展開得純化的產物23mg(淡黃色固 體），產率 3. 5 % NMR (400MHz，CDC13) S (ppm) : 7. 99 (d，J = 8. 1Hz，1H)，7. 90 (d，J = 8. 0Hz, 1H), 7. 81 (t, J = 7. 1Hz, 1H), 7. 62 (t, J = 7. 1Hz, 1H), 7. 46 - 7. 40 (m, 2H), 7. 36 (dd, J =8. 9, 2. 4Hz, 1H), 7. 32 - 7. 28 (m, 1H), 6. 52 (d, J = 1. 9Hz, 1H), 4. 75 (s, 2H), 4. 68 (s, 2H), 4 .46 (s, 2H), 4. 13 (s, 2H), 3. 98 (s, 3H). HPLC-MS (ESI+) : [M+H]+: 497. 3. 〇
[0055] 實施例4 :制備化合物4, N-(l-(4-(1-甲基-吡唑-5-基）酞嗪-1-基）氮雜環 丁烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0056] 1)合成N-(l_叔丁氧羰基-氮雜環丁烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0057] 50mL的前形瓶中，依次加入2-三氟甲基-4-氟苯甲酸（900mg, 4. 4mmol)，超干 THF(lOmL)，EDC，HC1 (1. lg, 5. 8mmol)，常溫下攪拌 0? 5h，加入 DMAP(71mg, 0? 58mmol)，氬氣置 換反應體系的空氣，滴加化合物1-叔丁氧羰基-氮雜環丁 -3-胺（500mg，2. 9mmol)的超干 THF(5mL)溶液。滴加完畢，氬氣環境下常溫攪拌16h，TLC(PE:EA= 1:1)檢測反應完全，加 入飽和碳酸氫鈉溶液（50mL)，DCM(50mLX3)萃取，合并有機層，飽和食鹽水（50mLXl)洗 滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸去溶劑，得粗品9. 8g，硅膠柱層析純化，PE:EA = 1:1洗脫，得純 化的產物 1. lg(白色固體）產率：69. 0%。HPLC-MS(ESI+) : [M+H] + :363. 2.
[0058] 2)合成N-(氮雜環丁烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺三氟醋酸鹽
[0059] 50mL的茄形瓶中，依次加入N- (1-叔丁氧羰基-氮雜環丁烷-3-基）-4-氟-2-三 氟甲基苯甲酰胺（1. 〇g，2. 76mmol)，DCM(20mL)，三氟醋酸（1. 6g，18. 8mmol)，常溫攪拌5h， TLC(PE:EA= 1:1)檢測反應完全，直接減壓蒸去溶劑，得產物1. lg(白色固體）產率：99%。 無需純化，直接用于下一步反應。
[0060] 3)合成N-(l_ (4-氯酞嗪-1-基）氮雜環丁烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰 胺
[0061 ] 50mL的茄形瓶中，依次加入N-(氮雜環丁烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲 酰胺三氟醋酸鹽（〇? 76g，1. lmmol)，DMF (20mL)，K2C03 (760mg，5. 5mmol)，1，4-二氯酞嗪 (440mg，2. 2mmol)，氬氣置換體系里的空氣，氬氣環境下80°C攪拌12h，TLC(PE:EA = 2:1)檢 測反應完全，真空下蒸去DMF，加入EA和水各50mL，水層EA (20mLX 3)萃取，合并有機層，飽 和食鹽水（50mLXl)洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸去溶劑，得粗品1.4g，硅膠柱層析純化， PE:EA = 2:1~1:2洗脫，得純化的產物：0? 27g(白色固體）產率：57.8%。[M+H] + :425. 1.
[0062] 4)合成N-(l-(4-(l-甲基-吡唑-5-基）酞嗪-1-基）氮雜環丁 烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0063] 將N-(l_ (4-氯酞嗪-1-基）氮雜環丁烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺 (lOOmg, 0. 24mmol)和1_甲基-P比挫_5_棚酸頻哪醇酯（92mg, 0. 44mmol)溶于間二甲苯 (3mL)中，再加入磷酸鉀三水合物（117mg,0.44mmol)，氟化鉀（26mg,0.44mmol)，用氬氣置 換反應瓶中的空氣，再加入催化量的四三苯基磷鈀（25mg，0. 022mmol)，微波反應（biotage microwave reacter, 120°C，High absorption)福射 3h，TLC (EA)檢測反應，顯不反應完全， 后處理，將溶劑二甲苯旋干，加入20mL7K，用乙酸乙酯（3X20mL)萃取，合并有機層，飽和氯 化鈉（2X10mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。過濾，得粗品160mg，制備薄層純化，EA展開三次得 純化的產物：22mg(淡黃色固體），產率 10. 6% ? 4 NMR(400MHz, CDC13) S (ppm) :7. 94(dt, J =8. 9, 5. 9Hz, 2H), 7. 84 - 7. 65 (m, 2H), 7. 62 (t, J = 2. 1Hz, 1H), 7. 48 - 7. 39 (m, 1H), 7. 38 -7. 22 (m, 2H), 6. 51 (s, 1H), 6. 00-5. 71 (m, 1H), 5. 34 - 5. 31 (m, 1H), 3. 94 (s, 3H), 3. 84-3. 79 (m ,2H), 3. 21-3. 17(m, 2H)HPLC-MS(ESI+) : [M+H] + :471. 3.。
[0064] 實施例5 :制備化合物5, N-甲基-N-(l-(4-(1-甲基-吡唑-5-基）酞嗪-1-基） 氮雜環丁烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0065] 1)合成N-甲基-N_(l-叔丁氧羰基-氮雜環丁烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯 甲酰胺
[0066] 50mL的前形瓶中，依次加入2-三氟甲基-4-氟苯甲酸（1. 7g, 8. lmmol)，超干 THF(20mL)，EDC.HC1 (2. lg, 10. 8mmol)，常溫下攪拌 0? 5h，加入 DMAP(132mg, 1. 08mmol)， 氬氣置換反應體系的空氣，滴加化合物（1-叔丁氧羰基-氮雜環丁烷-3_基）_甲胺 (1.0g，5.4mm 〇l)的超干THF(5mL)溶液。滴加完畢，氬氣環境下常溫攪拌16h，TLC(PE:EA =1:1)檢測反應完全，加入飽和碳酸氫鈉溶液（50mL)，DCM(50mLX3)萃取，合并有機層， 飽和食鹽水（50mLXl)洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸去溶劑，得粗品2. 4g，硅膠柱層析純 化，PE:EA = 1:1洗脫，得純化的產物：1. lg(白色固體）產率：36. 1%。HPLC-MS(ESI+) : [M +H] + :377. 3.
[0067] 2)合成N-甲基-N-(氮雜環丁烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺三氟醋酸 鹽
[0068] 50mL的茄形瓶中，依次加入N-甲基-N_(l-叔丁氧羰基-氮雜環丁 烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺（1. 0g，2. 66mmol)，DCM(20mL)，三氟醋酸 (1.68，18.8臟〇1)，常溫攪拌511，11(：(?￡54=1 :1)檢測反應完全，直接減壓蒸去溶劑，得產 物1. lg(白色固體）產率：99%。無需純化，直接用于下一步反應。
[0069] 3)合成N-甲基-N-(l-(4-氯酞嗪-1-基）氮雜環丁烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲 基苯甲酰胺
[0070] 50mL的茄形瓶中，依次加入N-甲基-N-(氮雜環丁烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基 苯甲酰胺三氟醋酸鹽（L 7g，4. 7mmol)，DMF(20mL)，K2C03(3. 3g，23. 5mmol)，1，4-二氯酞嗪 (1. 2g，5. 6mmol)，氬氣置換體系里的空氣，氬氣環境下80°C攪拌12h，TLC(PE:EA = 1:1)檢 測反應完全，真空下蒸去DMF，加入EA和水各50mL，水層EA (20mLX 3)萃取，合并有機層，飽 和食鹽水（50mLXl)洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸去溶劑，得粗品1.4g，硅膠柱層析純化， PE:EA = 2:1~1:2洗脫，得純化的產物0? 27g(白色固體）產率：13. 1%。HPLC-MS(ESI+) :[M+H] + :439. 1.
[0071] 4)合成N-甲基-N-(l-(4-(l-甲基-吡唑-5-基）酞嗪-1-基）氮雜環丁 烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0072] 將N-甲基-N- (1- (4-氯酞嗪-1-基）氮雜環丁烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲 酰胺（160mg, 0. 36mmol)和1-甲基-P比唑-5-硼酸頻哪醇酯（114mg, 0. 55mmol)溶于間二甲 苯（3mL)中，再加入磷酸鉀三水合物（200mg, 0. 73mmol)，氟化鉀（48mg, 0. 73mmol)，用氬氣 置換反應瓶中的空氣，再加入催化量的四三苯基磷鈀（46mg, 0. 04mmol)，微波反應（biotage microwave reacter, 120°C，High absorption)福射 3h，TLC(EA)檢測反應，顯不反應完全， 后處理，將溶劑二甲苯旋干，加入20mL7K，用乙酸乙酯（3X20mL)萃取，合并有機層，飽和氯 化鈉（2X10mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。過濾，得粗品160mg，制備薄層純化，DCM:Me0H展開 得純化的產物：16mg(淡黃色固體），產率6. 0% ? 4 NMR(400MHz，CDC13) S (ppm) :7. 96(dt，J =8. 9, 5. 9Hz, 2H), 7. 74 - 7. 55 (m, 2H), 7. 52 (t, J = 2. 1Hz, 1H), 7. 37 - 7. 28 (m, 1H), 7. 26 - 7. 12 (m, 2H), 6. 44 (s, 1H), 6. 00-5. 71 (m, 1H), 5. 34 - 5. 31 (m, 1H), 3. 94 (s, 3H), 3. 84-3. 79 (m ,2H), 3. 21-3. 17 (m, 2H), 2. 83 (s, 3H). HPLC-MS (ESI+) : [M+H] + :485. 3. 〇
[0073] 實施例6 :制備化合物6, N-(l-(4_(l-甲基-吡唑-5-基）_酞嗪-1-基）吡 咯-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0074] 1)合成N-(l_叔丁氧羰基-吡咯-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0075] 50mL的前形瓶中，依次加入2-三氟甲基-4-氟苯甲酸（2. 0g, 9. 6mmol)，超干 THF(50mL)，EDC'HC1(4. 4g, 19. 2mmol)，常溫下攪拌 0? 5h，加入 DMAP(235mg, 1. 92mmol)，氬氣 置換反應體系的空氣，滴加化合物1-叔丁氧羰基-3-胺基吡咯（1. 79g，9. 6mmol)的超干 THF(5mL)溶液。滴加完畢，氬氣環境下常溫攪拌16h，TLC(PE:EA= 1:1)檢測反應完全，加 入飽和碳酸氫鈉溶液（150mL)，DCM(100mLX3)萃取，合并有機層，飽和食鹽水（lOOmLXl) 洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸去溶劑，得粗品3. 3g，硅膠柱層析純化，PE:EA = 2:1洗脫，得 純化的產物 2. 3g(白色固體）產率：63. 6%。HPLC-MS(ESI+) : [M+H] + :377. 2.
[0076] 2)合成N-(吡咯-3-基）_4_氟-2-三氟甲基苯甲酰胺三氟甲磺酸鹽
[0077] 50mL的茄形瓶中，依次加入N- (1 -叔丁氧羰基-吡咯-3-基）-4-氟-2-三氟 甲基苯甲酰胺（2. 2g，5. 84mmol)，DCM(50mL)，三氟醋酸（1.6g，18. 8mmol)，常溫攪拌 5h， TLC(PE:EA= 1:1)檢測反應完全，直接減壓蒸去溶劑，得產物2. 2g(白色固體）產率：99%。 無需純化，直接用于下一步反應。
[0078] 3)合成N-(l_(4-氯-酞嗪-1-基）吡咯-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0079] 50mL的茄形瓶中，依次加入N-(吡咯-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰 胺三氟甲磺酸鹽（2. 2g，5. 9mmol)，DMF(20mL)，K2C03(4. 0g，29mmol)，1，4-二氯酞嗪 (1. 4g，7. 08mmol)，氬氣置換體系里的空氣，氬氣環境下80°C攪拌12h，TLC(PE:EA = 1:1)檢 測反應完全，真空下蒸去DMF，加入EA和水各50mL，水層EA (50mLX 3)萃取，合并有機層，飽 和食鹽水（50mLXl)洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸去溶劑，得粗品3. 6g，硅膠柱層析純化， PE:EA = 4:1~1:1~1:2洗脫，得純化的產物2. 3g(白色固體）產率：88. 9%。HPLC-MS( ESI+) : [M+H] + :439. 9.
[0080] 4)合成N-(l-(4_(l-甲基-吡唑-5-基）_酞嗪-1-基）吡咯-3-基）-4_氟-2-三 氟甲基苯甲酰胺
[0081] 將N-(l_(4-氯-酞嗪-1-基）吡咯-3-基）_4_氟-2-三氟甲基苯甲酰胺 (200mg, 0. 46mmol)和I-甲基-P比挫-5_棚酸頻哪醇酯（189mg, 0? 92mmol)溶于間二甲苯 (3mL)中，再加入磷酸鉀三水合物（245mg，0.92mmol)，氟化鉀（54mg，0.92mmol)，用氬氣置 換反應瓶中的空氣，再加入催化量的四三苯基磷鈀（58mg，0. 05mmol)，微波反應（biotage microwave reacter, 120°C，High absorption)福射 3h，TLC(EA)檢測反應，顯不反應完 全，將溶劑二甲苯旋干，加入20mL水，用乙酸乙酯（3X20mL)萃取，合并有機層，飽和氯化 鈉（2X10mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。過濾，得粗品260mg，制備薄層純化，EA展開三次 得純化的產物35mg(淡黃色固體），產率13.8%. 111匪1?(40011抱，〇)(：13)5化口111):8.24- 8. 02 (m, 1H), 8. 01 - 7. 92 (m, 1H), 7. 86 - 7. 64 (m, 2H), 7. 55 - 7. 46 (m, 2H), 7. 41-7. 29 (m, 5 H), 5. 47 (br, 1H), 4. 20-3. 74 (m, 5H), 2. 45 (s, 3H), 2. 26 - 1. 91 (m, 2H). HPLC-MS (ESI+) : [M +H] + :485. 3. 〇
[0082] 實施例7 :制備化合物7，1，4_二氯酞嗪N-甲基-N-(l-(4_(4-甲基-苯基）_酞 嗪-1-基）吡咯-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0083] 1)合成N-甲基-N_(l-叔丁氧羰基-吡咯-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0084] 50mL的前形瓶中，依次加入2-三氟甲基-4-氟苯甲酸（1. 2g, 5. 8mmol)，超干 THF(50mL)，EDC'HCl (1. 9g, 9. 6mmol)，常溫下攪拌 0? 5h，加入 DMAP (140mg, 0? 96mmol)，氬氣 置換反應體系的空氣，滴加化合物1-叔丁氧羰基-3-胺甲基吡咯（1.0g，4.8mm〇l)的超干 THF(5mL)溶液。滴加完畢，氬氣環境下常溫攪拌16h，TLC(PE:EA= 1:1)檢測反應完全，加 入飽和碳酸氫鈉溶液（50mL)，DCM(50mLX3)萃取，合并有機層，飽和食鹽水（50mLXl)洗 滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸去溶劑，得粗品2. lg，硅膠柱層析純化，PE:EA = 2:1洗脫，得純 化的產物 1. 〇g(白色固體）產率：44. 2%。HPLC-MS(ESI+) : [M+H] + :391. 2.
[0085] 2)合成N-甲基-N-(吡咯-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺三氟甲磺酸鹽
[0086] 50mL的茄形瓶中，依次加入N-甲基-N- (1-叔丁氧羰基-吡咯-3-基）-4-氟-2-三 氟甲基苯甲酰胺（0. 9g，2. 3mmol)，DCM(lOmL)，三氟醋酸（0. 9g，9. 4mmol)，常溫攪拌5h， TLC(PE:EA = 1:1)檢測反應完全，直接減壓蒸去溶劑，得產物：1.0g(白色固體）產率： 99%。無需純化，直接用于下一步反應。
[0087] 3)合成N-甲基-N_(l-(4-氯-酞嗪-1-基）吡咯-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯 甲酰胺
[0088] 50mL的茄形瓶中，依次加入N-甲基-N-(吡咯-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯 甲酰胺三氟甲磺酸鹽 a〇g，2.2mmol)，DMF(20mL)，K2C03(1.8g，12.8mmol)，l，4-二氯酞 嗪（0. 61g，3. lmmol)，氬氣置換體系里的空氣，氬氣環境下80°C攪拌12h，TLC(PE:EA = 1:1)檢測反應完全，真空下蒸去DMF，加入EA和水各50mL，水層EA(50mLX3)萃取，合 并有機層，飽和食鹽水（50mLXl)洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸去溶劑，得粗品1.3g， 硅膠柱層析純化，PE:EA= 1:1~1:2洗脫，得純化的產物0. 78g(白色固體）產率： 78. 3 %。4匪1?(4001抱，〇)(：13)5&口111) :8.22 - 8.05(111，211)，7.91-7.78(111，211)，7.46- 7. 26 (m, 3H), 5. 43 (br, 1H), 4. 25 - 3. 63 (m, 5H), 2. 81 (s, 3H), 2. 43 - 2. 07 (m, 2H). HPLC-MS (E SI+) : [M+H] + :453. 1.
[0089] 4)合成N-甲基-N-(l-(4-(4-甲基-苯基）-酞嗪-1-基）吡 咯-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0090] 將N-甲基-N-(l-(4-氯-酞嗪-1-基）吡咯-3-基）-4_氟-2-三氟甲基苯 甲酰胺（200mg,0.44mmol)和4-甲基苯硼酸頻哪醇酯（120mg,0.88mmol)溶于間二甲苯 (3mL)中，再加入磷酸鉀三水合物（235mg，0.88mmol)，氟化鉀（52mg，0.88mmol)，用氬氣置 換反應瓶中的空氣，再加入催化量的四三苯基磷鈀（51mg，0. 044mmol)，微波反應（biotage microwave reacter, 120°C，High absorption)福射 3h，TLC(EA)檢測反應，顯不反應完全， 后處理，將溶劑二甲苯旋干，加入20mL水，用乙酸乙酯（3 X20mL)萃取，合并有機層，飽和 氯化鈉（2X10mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。過濾，得粗品250mg，制備薄層純化，EA展開三 次得純化的產物33mg(淡黃色固體），產率14.7%. 111匪1?(40011抱，〇)(：13)5化口111):8.28- 8. 06 (m, 1H), 8. 05 - 7. 94 (m, 1H), 7. 85 - 7. 68 (m, 2H), 7. 65 - 7. 49 (m, 2H), 7. 43-7. 33 (m, 5H) ,5. 47 (br, 1H), 4. 20-3. 74 (m, 5H), 2. 83 (s, 3H), 2. 45 (s, 3H), 2. 26 - 1. 91 (m, 2H). HPLC-MS (E SI+) : [M+H] + :509. 3.。
[0091] 實施例8 :制備化合物8，1，4-二氯酞嗪N-甲基-N- (1- (4- (4-羥甲基-苯基）-酞 嗪-1-基）吡咯-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0092] 將N-甲基-N-(l-(4-氯-酞嗪-1-基）吡咯-3-基）-4_氟-2-三氟甲基苯 甲酰胺（200mg，0.44mmol)和4-輕甲基苯硼酸頻哪醇酯（208mg，1.37mmol)溶于間二氧 六環（3mL)中，再加入碳酸銫（446mg，1.37mmol)，氟化鉀（80mg，1.37mmol)，用氬氣置換 反應瓶中的空氣，再加入催化量的四三苯基磷鈀（51mg，0. 044mmol)，微波反應（biotage microwave reacter, 120°C，High absorption)福射 3h，TLC(EA)檢測反應，顯不反應完全， 后處理，將溶劑二氧六環旋干，加入20mL水，用乙酸乙酯（3 X20mL)萃取，合并有機層，飽和 氯化鈉（2X10mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。過濾，得粗品320mg，制備薄層純化，EA展開三次 得純化的產物：27mg(淡黃色固體），產率11.7%. 111匪1?(40011抱，〇)(：13)5化口111):8.28-8. 08 (m, 1H), 7. 96 (d, J = 7. 8Hz, 1H), 7. 84 - 7. 69 (m, 2H), 7. 69 - 7. 57 (m, 2H) ,7.52-7. 28 (m, 5H), 5. 45 (br, 1H), 4. 77 (s, 2H), 4. 30 - 3. 68 (m, 5H), 2. 83 (s, 2H), 2. 21 - 1. 87 (m, 2H) ? HPLC-MS (ESI+) : [M+H]+: 525. 3.。
[0093] 實施例9 :制備化合物9,3-(N-(4-(l-甲基-吡唑-5-基）-酞嗪-1-基））氨 基-1-(4-氟-2-三氟甲基-苯甲酰基）-吡咯
[0094] 1)合成3- (N- (4-氯-酞嗪-1-基））氨基-1-叔丁氧羰基-吡咯
[0095] 10mL微波管中，將1，4-二氯酞嗪（800mg, 4. 5mmol)和1-叔丁氧羰基-3-氨基P比 略（800mg,4.0mmol)溶于間氮甲基吡略燒酮（5mL)中，再加入三乙胺（1.8mL，12.9mmol)， 用氬氣置換反應瓶中的空氣，微波反應（biotage microwave reacter, 180 °C, High absorption)福射2h，TLC(PE:EA = 1:1)檢測反應，顯示反應完全，后處理，反應液加入到 50mL7jC，用乙酸乙酯（3X50mL)萃取，合并有機層，飽和氯化鈉（3X30mL)洗滌，無水硫酸鈉 干燥。過濾，得粗品1. 9g，硅膠柱層析純化，PE:EA = 2:1~1:1洗脫，得純化的產物27mg(淡 黃色固體），產率 11. 7%. 4 NMR(400MHz, CDC13) S (ppm) :8. 16(d, J = 7. 5Hz, 1H), 7. 93(d，J =7. 5Hz, 1H), 7. 90 - 7. 81 (m, 2H), 5. 59 (s, 1H), 4. 90-4. 86 (m, 1H), 3. 83 (br, 1H), 3. 55 -3. 38 (m, 3H), 2. 33 (br, 1H), 2. 09 (br, 1H), L 43 (s, 9H). HPLC-MS (ESI+) : [M+H]+: 525. 1.
[0096] 2)合成3-(N-(4-(1-甲基-吡唑-5-基）-酞嗪-1-基））氨基-1-叔丁氧羰基-吡 咯
[0097] 將3-(N-(4-氯-酞嗪-1-基））氨基-1-叔丁氧羰基-吡略（900mg, 2. 3mmol) 和1-甲基-吡唑-5-硼酸頻哪醇酯（973mg, 4. 7mmol)溶于二甲苯（3mL)中，再加入磷 酸鉀三水合物（1.25g，4. 7mmol)，氟化鉀（273mg，4. 7mmol)，用氬氣置換反應瓶中的空 氣，再加入催化量的四三苯基磷鈀（266mg，0.23mmol)，微波反應（biotage microwave reacter, 120°C，High absorption)福射2h，TLC(EA)檢測反應，顯示反應完全，后處理， 將溶劑二氧六環旋干，加入50mL水，用乙酸乙酯（2X50mL)萃取，合并有機層，飽和氯化鈉 (lX50mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。過濾，得粗品1. 7g，硅膠柱層析純化，PE:EA = 2:1~ 1:1~1:3洗脫得純化的產物700mg(淡黃色固體），產率77. 2% NMR(400MHz，CDC13) 8 (ppm) : 8. 04 (s, 1H), 7. 94 (d, J = 7. 0Hz, 1H), 7. 86 - 7. 72 (m, 2H), 7. 60 (s, 1H), 6. 51 (s, 1H ),5. 94 (br, 1H), 5. 07 - 4. 93 (m, 1H), 3. 97 (s, 3H), 3. 93 - 3. 74 (m, 1H), 3. 66 - 3. 35 (m, 3H), 2 .38 (br, 1H) ,2.11 (br, 1H), L 43 (s, 9H). HPLC-MS (ESI+) : [M+H]+: 395. 3.
[0098] 3)合成3-(N-(4-(1-甲基-吡唑-5-基）-酞嗪-1-基））氨基-吡咯三氟甲磺酸 鹽
[0099] 50mL的茄形瓶中，依次加入3-(N-(4-(l-甲基-吡唑-5-基）-酞嗪-1-基））氨 基-1-叔丁氧羰基-吡咯（70011^，1.77臟〇1)，0011(501^)，三氟醋酸（1.68，18.8臟〇1)，常溫 攪拌5h，TLC(PE:EA = 1:1)檢測反應完全，直接減壓蒸去溶劑，得產物：800mg(白色固體） 產率：99%。無需純化，直接用于下一步反應。
[0100] 4)合成3-(N-(4-(1-甲基-吡唑-5-基）-酞嗪-1-基））氨基-吡咯
[0101] 化合物3-(N-(4-(1-甲基-吡唑-5-基）-酞嗪-1-基））氨基-吡咯三氟甲磺酸 鹽（800mg，1. 7mmol)，溶解于碳酸鈉的飽和溶液（100mL)，40%氫氧化鈉水溶液調pH至10 左右，正丁醇萃取（4X 50mL)，蒸干的粗品900mg，直接用于下一步反應。
[0102] 5)合成3-(N-(4-(l-甲基-吡唑-5-基）-酞嗪-1-基））氨基-1-(4-氟-2-三 氟甲基-苯甲酰基）-吡咯
[0103] 50mL的前形瓶中，依次加入4-氟-2-三氟甲基苯硼酸（400mg, 1. 92mmol)，超干 THF(50mL)，EDC'HCl (600mg, 3. 13mmol)，常溫下攪拌 0? 5h，加入 DMAP(140mg, 0? 33mmol)， 氬氣置換反應體系的空氣，滴加化合物3-(N-(4-(1-甲基-吡唑-5-基）-酞嗪-1-基）） 氨基-吡咯（300mg，1. Ommol)的超干THF (5mL)溶液。滴加完畢，氬氣環境下常溫攪 拌16h，TLC(EA)檢測反應完全，加入飽和碳酸氫鈉溶液（50mL)，DCM(50mLX3)萃取， 合并有機層，飽和食鹽水（50mLXl)洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸去溶劑，得粗品 560mg，制備薄層純化，EA展開三次，得純化的產物27mg(淡黃色固體），產率5. 6% . 4 NMR (400MHz，CDC13) S (ppm) : 7. 94 (dt，J = 8. 9, 5. 9Hz，2H)，7. 84 - 7. 65 (m，2H)，7. 62 (t，J = 2. 1Hz, 1H), 7. 48 - 7. 39 (m, 1H), 7. 38 - 7. 22 (m, 2H), 6. 51 (s, 1H), 6. 00-5. 71 (m, 1H), 5. 19 -4. 96 (m, 1H), 4. 09 - 4. 01 (m, 1H), 3. 94 (s, 3H), 3. 86 - 3. 72 (m, 1H), 3. 40 - 3. 30 (m, 1H), 2-? 54-2. 47(m, 1H), 2. 31 - 2. 13(m, 1H). HPLC-MS(ESI+) : [M+H] + :485. 3.。
[0104] 實施例l〇 :制備化合物10, N-(l-(4-(1-甲基-吡唑-4-基）酞嗪-1-基）氮雜 環丁烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0105] 將N-(l_(4-氯酞嗪-1-基）氮雜環丁烷-3-基）_4_氟-2-三氟甲基苯甲酰胺 (200mg, 0. 47mmo1)和I-甲基-P比唑-5_棚酸頻哪醇酯（148mg, 0? 55mmol)溶于間二甲苯 (3mL)中，再加入磷酸鉀三水合物（200mg, 0? 73mmol)，氟化鉀（48mg, 0? 73mmol)，用氬氣置 換反應瓶中的空氣，再加入催化量的四三苯基磷鈀（46mg，0. 04mmol)，微波反應（biotage microwave reacter, 120°C，High absorption)福射 3h，TLC(EA)檢測反應，顯不反應完 全，后處理，將溶劑二甲苯旋干，加入20mL7K，用乙酸乙酯（3X20mL)萃取，合并有機層，飽 和氯化鈉（2X10mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。過濾，得粗品160mg，制備薄層純化，DCM:Me0H =20:1展開得純化的產物：22mg(淡黃色固體），產率9. 95% NMR(400MHz，CDC13) 8 (ppm) : 7. 94 (dt, J = 8. 9, 5. 9Hz, 2H), 7. 84 - 7. 65 (m, 2H), 7. 62 (t, J = 2. 1Hz, 1H), 7. 48 -7. 39 (m, 1H), 7. 38 - 7. 22 (m, 2H), 6. 51 (s, 1H), 6. 00-5. 71 (m, 1H), 5. 34 - 5. 31 (m, 1H), 3. 94 ( s, 3H), 3. 84-3. 79(m, 2H), 3. 21-3. 17(m, 2H)HPLC-MS(ESI+) : [M+H] + :471. 3.。
[0106] 實施例11 :制備化合物11，N-甲基-N-(l-(4-(l-甲基-吡唑-4-基）酞嗪-1-基） 氮雜環丁烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0107] 將原料N-甲基-N-(l-(4-氯酞嗪-1-基）氮雜環丁烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲 基苯甲酰胺（160mg, 0. 36mmol)和1-甲基-吡唑-5-硼酸頻哪醇酯（114mg, 0. 55mmol)溶于 間二甲苯（3mL)中，再加入磷酸鉀三水合物（200mg, 0? 73mmol)，氟化鉀（48mg, 0? 73mmol)， 用氬氣置換反應瓶中的空氣，再加入催化量的四三苯基磷鈀（46mg，0.04mmol)，微波反 應（biotage microwave reacter, 120 °C，High absorption)福射 3h，TLC(EA)檢測反 應，顯示反應完全，后處理，將溶劑二甲苯旋干，加入20mL水，用乙酸乙酯（3X20mL)萃 取，合并有機層，飽和氯化鈉（2X10mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。過濾，得粗品160mg，制 備薄層純化，DCM:MeOH = 15:1展開得純化的產物18mg(淡黃色固體），產率10. 2% . 4 NMR (400MHz，CDC13) S (ppm) : 7. 96 (dt，J = 8. 9, 5. 9Hz，2H)，7. 74 - 7. 55 (m，2H)，7. 52 (t，J = 2. 1Hz, 1H), 7. 37 - 7. 28 (m, 1H), 7. 26 - 7. 12 (m, 2H), 6. 44 (s, 1H), 6. 00-5. 71 (m, 1H), 5. 34 - 5. 31 (m, 1H), 3. 94 (s, 3H), 3. 84-3. 79 (m, 2H), 3. 21-3. 17 (m, 2H), 2. 83 (s, 3H). HPLC-MS (ESI+ ):[M+H] + :485. 3. 〇
[0108] 實施例12 :制備化合物12, N-(l-(4-(2-氯-苯基）-酞嗪-1-基）吡 咯-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0109] 將N-(l-(4-氯-酞嗪-1-基）吡咯-3-基）-4_氟-2-三氟甲基苯甲酰胺 (200mg，0.46mmol)和2-氯-苯硼酸頻哪醇酯（146mg，0.91mmol)溶于間二甲苯（3mL)中， 再加入磷酸鉀三水合物（245mg，0. 92mmol)，氟化鉀（54mg，0. 92mmol)，用氬氣置換反應瓶 中的空氣，再加入催化量的四三苯基磷鈀（58mg, 0. 05mmol)，微波反應（biotage microwave reacter, 120°C，High absorption)福射3h，TLC(EA)檢測反應，顯示反應完全，后處理， 將溶劑二甲苯旋干，加入20mL水，用乙酸乙酯（3X20mL)萃取，合并有機層，飽和氯化鈉 (2X10mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。過濾，得粗品260mg，制備薄層純化，EA展開三次得純 化的產物：36mg (淡黃色固體），產率 15. 2 % 4 NMR(400MHz, CDC13) S (ppm) : 8. 09 (d, J =7. 9Hz, 1H), 7. 92 (d, J = 6. 7Hz, 1H), 7. 70 - 7. 59 (m, 2H), 7. 58 - 7. 49 (m, 1H), 7. 49 - 7. 39 (m, 2H), 7. 39 - 7. 15 (m, 3H), 7. 05 (t, J = 7. 0Hz, 1H), 4. 81 (s, 1H), 4. 32 - 4. 09 (m, 2H), 3. 87-3. 77(m, 1H), 2. 30-2. 12(m, 2H). HPLC-MS(ESI+) : [M+H] + :515. 1.。
[0110] 實施例13 :制備化合物13, N-(l-(4-(1-甲基-吡唑-4-基）酞嗪-1-基）吡咯 烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0111] 同化合物14的合成，加入1-甲基-吡挫-4-硼酸頻哪醇酯（189mg, 0. 92mmol)。
[0112] 產品：33mg(淡黃色固體）產率：15. 1 %。4 NMR(400MHz,DMS0-d6) 8 (ppm) : 8. 88 (d, J = 6. 5Hz, 1H) , 8. 30 - 8. 26 (m, 1H) , 8. 22 (s, 1H) , 8. 19 - 8. 14 (m, 1H),7.91 - 7.84(m,3H),7.69(dd,J = 9.2,2.1Hz,lH),7.63-7. 55 (m, 2H), 4. 55 (d, J = 6. 4Hz, 1H) , 4. 16 (dd, J = 11. 0, 5. 9Hz, 1H) , 4. 05-3. 92 (m, 4H), 3. 85 (dd, J = 13. 4, 9. 2Hz, 1H), 3. 74 (dd, J = 11.0,3. 5Hz, 1H), 2. 24 (dd, J = 12. 7, 5. 5Hz, 1H), 2. 10-2. 01(m, 1H). HPLC-MS(ESI+) : [M+H] + :485. 3.。
[0113] 實施例14 :制備化合物14, N-(l-(4-(4-甲基苯基）酞嗪-1-基）吡咯 烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0114] 同化合物12的合成，加入4-甲基-苯硼酸頻哪醇酯（200mg, 0. 92mmol)。
[0115] 產品：27mg(淡黃色固體）產率：12. 1 %。4 NMR(400MHz,DMS0-d6) 8 (ppm) : 8. 89 (d, J = 6. 5Hz, 1H), 8. 30 (d, J = 8. 1Hz, 1H), 7. 90 - 7. 78 (m, 3H), 7. 69 (dd, J =9. 3, 2. 2Hz, 1H) , 7. 65 - 7. 58 (m, 2H) , 7. 49 (d, J = 8. 0Hz, 2H), 7. 34 (d, J = 8. OHz, 2H), 4. 55 (s, 1H), 4. 19 (dd, J = 11.0,5. 9Hz, 1H), 4. 08 - 3. 98 (m, 1H), 3. 88 (dd, J =13. 3, 9. 4Hz, 1H), 3. 78 (dd, J = 11. 1, 3. 4Hz, 1H), 2. 39 (s, 3H), 2. 25 (dd, J = 12. 7, 5. 6Hz, 1H), 2. 10-2. 01(m, 1H). HPLC-MS(ESI+) : [M+H] + :495. 3.。
[0116] 實施例15 :制備化合物15, N-(l-(4-(4-氯苯基）酞嗪-1-基）吡咯 烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0117] 同化合物12的合成，加入4-氯-苯硼酸頻哪醇酯（220mg，0? 92mmol)。
[0118] 產品：31mg(淡黃色固體）產率：13. 4 %。4 NMR(400MHz，DMS0-d6) 8 (ppm) : 8. 89 (d, J = 6. 4Hz, 1H), 8. 34 (d, J = 7. 8Hz, 1H), 7. 90-7. 78 (m, 3H), 7. 73 -7. 56 (m, 7H), 4. 56 (s, 1H), 4. 22 (dd, J = 11. 0, 5. 9Hz, 1H), 4. 08 - 3. 98 (m, 1H), 3. 91 (dd, J =13. 3, 9. 4Hz, 1H) ,3.81 (dd, J = 11.1,3. 4Hz, 1H) , 2 . 25 (dd, J = 12. 7, 5. 6Hz, 1H), 2. 10-2. 01(m, 1H). HPLC-MS(ESI+) : [M+H] + :515. 1.。
[0119] 實施例16 :制備化合物16, N-(l-(4-(4-羥甲基苯基）酞嗪-1-基）吡咯 烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0120] 同化合物12的合成，加入4-氯-苯硼酸頻哪醇酯（220mg，0. 92mmol)。
[0121] 產品：37mg(淡黃色固體）產率：16. 1 %。4 NMR(400MHz，DMS0-d6) 8 (ppm) :8. 89 (d, J = 6. 5Hz, 1H), 8. 31 (d, J = 8. 0Hz, 1H), 7. 89-7. 80 (m, 3H), 7. 6 9 (dd, J = 9. 4, 2. 0Hz, 1H), 7. 64 - 7. 53 (m, 4H), 7. 48 (d, J = 8. 0Hz, 2H), 5. 30 (t, J =5. 7Hz, 1H), 4. 62 - 4. 53 (m, 3H), 4. 19 (dd, J = 11. 1, 5. 9Hz, 1H), 4. 04 (dd, J = 18. 1, 7. 5Hz, 1H), 3. 89 (dd, J = 13. 3, 9. 1Hz, 1H), 3. 79 (dd, J = 11. 1, 3. 4Hz, 1H), 2. 25 (dd, J =12. 9, 5. 6Hz, 1H), 2. 10-2. 01(m, 1H). HPLC-MS(ESI+) : [M+H] + :511. 3.。
[0122] 實施例17 :制備化合物17, N-(l_ (4-苯基酞嗪-1-基）吡咯 烷-3-基）-4-氟一2-三氟甲基苯甲酰胺
[0123] 同化合物12的合成，加入苯硼酸頻哪醇酯（188mg, 0. 92mmol)。
[0124] 產品：31mg(淡黃色固體）產率：14. 3 %。4 NMR(400MHz,DMS0-d6) 8 (ppm) :8. 89 (d, J = 6. 3Hz, 1H), 8. 33 (d, J = 8. 0Hz, 1H), 7. 90-7. 79 (m, 3H), 7.69(dd,J = 9. 4, 2. 0Hz, 1H) , 7. 64 - 7. 47 (m, 7H), 4. 56 (s, 1H), 4. 21 (dd, J = 11. 0, 6. 0Hz, 1H), 4. 05 (dd, J = 18. 0, 7. 8Hz, 1H), 3. 90 (dd, J = 13. 3, 9. 1Hz, 1H), 3. 80 (dd, J =11. 1,3.4Hz, 1H), 2.26 (dd，J = 13. 4,5.6Hz, 1H), 2. 10-2. 01 (m，lH).HPLC-MS(ESI+):[M +H] + :481. 3.。
[0125] 實施例18 :制備化合物18, N-(l-(4_(4-硝基苯基）酞嗪-1-基）吡咯 烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0126] 同化合物12的合成，加入對硝基苯硼酸頻哪醇酯（229mg，0? 92mmol)。
[0127] 產品：17mg(淡黃色固體）產率：7. 2 %。4 NMR(400MHz，DMS0-d6) 8 (ppm) : 8. 90 (d, J = 6. 3Hz, 1H), 8. 39-8. 34 (m, 2H), 7. 96 - 7. 82 (m, 4H), 7. 69 (d, J = 9. 2Hz, 1H), 7. 62-7. 51 (m, 4H), 4. 56 (s, 1H), 4. 23 (dd, J = 10. 9, 5. 8Hz, 1H), 4. 07 (dd, J = 18. 0, 7. 8Hz, 1H), 3. 93 (dd, J = 13. 3, 9. 1Hz, 1H), 3. 83 (dd, J = 11. 1, 3. 4Hz, 1H), 2. 25 (dd, J =13. 4, 5. 6Hz, 1H), 2. 10-2. 01(m, 1H). HPLC-MS(ESI+) : [M+H] + :526. 3.。
[0128] 實施例19 :制備化合物19, N-(l-(4_(4-氰基苯基）酞嗪-1-基）吡咯 烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0129] 同化合物12的合成，加入對硝基苯硼酸頻哪醇酯（210mg, 0. 92mmol)。
[0130] 產品：22mg(淡黃色固體）產率：9. 7 %。4 NMR(400MHz,DMS0-d6) 8 (ppm) : 8. 89 (d, J = 6. 5Hz, 1H), 8. 34 (d, J = 8. 6Hz, 1H), 8. 01 (d, J = 8. 3Hz, 2H), 7. 92 -7. 76 (m, 5H), 7. 69 (dd, J = 9. 3, 2. 2Hz, 1H), 7. 64 - 7. 54 (m, 2H), 4. 56 (s, 1H), 4. 22 (dd, J =11. 2, 5. 9Hz, 1H), 4. 06 (dd, J = 18. 5, 7. 4Hz, 1H), 3. 96 - 3. 89 (m, 1H), 3. 82 (dd, J = 11. 2, 3. 4Hz, 1H), 2. 26 (dd, J = 13. 0, 5. 3Hz, 1H), 2. 13 - 2. 07 (m, 1H). HPLC-MS (ESI+) : [M +H] + :506. 3. 〇
[0131] 實施例20 :制備化合物20, N-(l-(4-(吡啶-4-基）酞嗪-1-基）吡咯 烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺（24)
[0132] 同化合物12的合成，加入R比啶-3-硼酸頻哪醇酯（189mg, 0. 92mmol)。
[0133] 產品：28mg(淡黃色固體）產率：12. 9 %。4 NMR(400MHz,DMS0-d6) 8 (ppm) : 8. 89 (d, J = 6. 1Hz, 1H), 8. 74 (d, J = 4. 6Hz, 2H), 8. 34 (d, J = 7. 7Hz, 1H), 7. 91-7. 82 (m, 3H), 7. 70-7. 55 (m, 5H), 4. 56 (s, 1H), 4. 23 (dd, J = 10. 8, 5. 8Hz, 1H), 4. 06 (dd, J = 18. 5, 7. 4Hz, 1H), 3. 92 (dd, J = 13. 3, 9. 1Hz, 1H), 3. 82 (dd, J = 11. 2, 3. 4Hz, 1H), 2. 25 (dd, J =13. 0, 5. 3Hz, 1H), 2. 13 - 2. 07(m, 1H). HPLC-MS(ESI+) : [M+H] + :482. 3.。
[0134] 實施例21 :制備化合物21，R-N-(l-(4-(4-乙酰氧基代甲基苯基）酞嗪-1-基） 吡咯烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0135] 50mL三頸瓶中加入R-N-(l-(4-(4-羥甲基苯基）酞嗪-1-基）吡咯 烷-3-基）-4_氟-2-三氟甲基苯甲酰胺（500mg，0. 98mmol)，加入超干THF(lOmL)溶解，加 入K2C03(40 5mg，2. 93mmol)，氬氣置換反應體系的空氣，注射器加入醋酐（0. 3g，2. 93mmol)， 回流攪拌4h，TLC(EA)監測反應完全，減壓下蒸干溶劑，殘余物加入乙酸乙酯、水各20mL， 分液，水層EA(20mLX2)萃取，合并有機層，飽和氯化鈉（50mLXl)洗滌，無水硫酸鈉干燥， 旋干溶劑，得粗品540mg，制備薄層層析純化，EA展開，得純化的產物410mg (淡黃色固體） 產率：75.7 %。4 NMR(400MHz，DMS0-d6) S (ppm):8.90(d，J = 6.5Hz，lH)，8.34(d，J = 7. 9Hz, 1H), 7. 92 - 7. 81 (m, 3H), 7. 71 (dd, J = 9. 4, 2. 3Hz, 1H), 7. 65-7. 62 (m, 3H), 7. 56 (d, J =8. 2Hz, 2H), 5. 20 (s, 2H), 4. 58 (br, 1H), 4. 27-4. 20 (m, 1H), 4. 11 - 4. 03 (m, 1H), 3. 93-3. 89 (m, 1H), 3. 83-3. 80 (m, 1H), 2. 29-2. 26 (m, 1H), 2. 13 (s, 3H), 2. 10-2. 07 (m, 1H). HPLC-MS (ESI +) : [M+H] + :552. 8. 〇
[0136] 實施例22 :制備化合物22, S-N- (1- (4- (4-羥甲基苯基）酞嗪-1-基）吡咯 烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0137] 化合物16手性HPLC拆分得到S構型的化合物22, [ a ]D= 55. 7(25°C，C = lg/lOOmL)，ee = 95 %。
[0138] 4匪1?(4001抱，0150-(16)5&口111):9.56(8，111)，7.99-7.93(111，211)，7.84(8，111)，7. 77-7. 51 (m, 6H), 7. 44 - 7. 24 (m, 2H), 4. 63 (s, 1H), 4. 31 (s, 1H), 4. 17 - 3. 85 (m, 3H), 3. 61-3. 44 (m, 2H), 2. 41 (s, 2H), 2. 30 (br, 1H), 2. 16 (br, 1H). HPLC-MS (ESI+) : [M+H] + :511. 3. 〇
[0139] 實施例23 :制備化合物23, R-N- (1- (4- (4-羥甲基苯基）酞嗪-1-基）吡咯 烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0140] 化合物16手性HPLC拆分得到R構型的化合物23, [ a ]D= -54. 8(25°C，C = lg/lOOmL)，ee = 94%。
[0141] :H NMR (400MHz, DMS〇-d6) 8 (ppm) :9.57(s, lH),7.84(s, 1H),7.81- 7. 71 (m, 1H), 7. 59 (s, 3H), 7. 34 - 7. 24 (m, 1H) ,7.13- 6. 92 (m, 3H) , 6. 58 (d, J = 7. 3Hz, 2H), 4. 76 (s, 1H), 4. 48 - 4. 29 (m, 1H), 4. 08 (dd, J = 10. 7, 5. 3Hz, 1H) ,3.76- 3. 64 (m, 1H)，3. 59-3. 57 (m, 1H)，2. 40 (s, 4H)，2. 30-2. 22 (m, 2H) ? HPLC-MS (ESI+) : [M +H] + :511. 3. 〇
[0142] 實施例24 :制備化合物24, S-N- (1- (4- (4-甲基苯基）酞嗪-1-基）吡咯 烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0143] 化合物14手性柱拆分得到S構型的化合物24, [ a ]D= 57. 6 (25 °C，C = lg/100mL)，ee = 95 %。
[0144] :H NMR (400MHz, DMS〇-d6) 8 (ppm) :9.28(s,lH),7.86(s,lH),7.74- 7. 53 (m, 4H) , 7. 27 (d, J = 7. 1Hz, 3H) , 6. 98 (t, J = 7. 3Hz, 1H) , 6. 77 (d, J = 7. 2Hz, 2H) , 4. 69 (d, J = 11. 6Hz, 3H) , 4. 34 (d, J = 7. 1Hz, 1H) , 4. 07 (d, J = 5. 3Hz, 1H), 3. 76 - 3. 49 (m, 2H), 2. 81 - 2. 64 (m, 1H), 2. 31-2. 25 (m, 2H). HPLC-MS (ESI+) : [M +H] + :495. 3. 〇
[0145] 實施例25 :制備化合物25, R-N- (1- (4- (4-甲基苯基）酞嗪-1-基）吡咯 烷-3-基）-4-氟-2-三氟甲基苯甲酰胺
[0146] 化合物14手性柱拆分得到R構型的化合物25, [ a ]D= -58. 4 (25 °C，C = lg/100mL)，ee = 95 %。
[0147] :H NMR (400MHz, DMS〇-d6) 8 (ppm) :9.27(s, lH),7.85(s, 1H),7.76-7. 66 (m, 1H), 7. 59 (s, 3H), 7. 27 (d, J = 6. 8Hz, 3H), 6. 99 (t, J = 7. 4Hz, 1H), 6. 76 (d, J =7. 3Hz, 2H), 4. 70 (s, 3H) ,4.42 - 4. 29 (m, 1H), 4. 09-4. 05 (m, 1H), 3. 68 (d, J = 10. 0Hz, 1H), 3. 59 (d, J = 10. 8Hz, 1H), 2. 56-2. 50 (m, 1H), 2. 38 - 2. 23 (m, 2H). HPLC-MS (ESI+ ):[M+H] + :495. 3. 〇
[0148] 實施例26 :體外Hedgehog信號通路抑制活性測試試驗
[0149] 轉錄因子Gli的雙熒光素酶報告基因實驗：NIH3T3細胞接種至48孔板，24h后以 lipo2000 轉染試劑轉染 Gli-firefly luciferase reporter 和 TK-Renilla luciferase r印orter載體至NIH3T3細胞。轉染36h后，將鼠源重組的SHH及待測藥物加至48孔板（每 組設3復孔；n = 3)。常規培養36h后，細胞用PBS洗1次，以雙熒光素酶報告檢測試劑盒 (Promega公司）測定Gli-luciferase活性，作為判斷Hh通路活性指標。
[0150] 結果表明（如表1所示），所述的化合物顯示出較好的Hedgehog信號通路抑制活 性，其中化合物6、7、8、12、14、15、16、18、19、20、23和25對于Hh信號通路中的靶基因Gli 抑制活性IC 5。值小于15nM。所述的化合物可以進一步研制開發Hedgehog信號通路抑制劑， 作為新型抗腫瘤藥物。
[0151] 表1是本發明化合物的Hedgehog信號通路的體外抑制活性結果。
[0152] 表 1
[0153]
b.
【主權項】
1. 芳基獻嗦化合物，其特征在于，所述的化合物為含贓嗦或化咯燒或氮雜環下燒的芳 基獻嗦化合物，具有通式（I)的結構及其可藥用鹽，一 Rz= H或甲基或甲氧基或氯或徑甲基或徑甲基醋或硝基或氯基或乙酷基。2. 根據權利要求1所述的芳基獻嗦化合物，其特征是，所述的化合物為具有下述結構 的化合物1，JL O3. 根據權利要求1所述的芳基獻嗦化合物，其特征是，所述的化合物為具有下述結構 的化合物2， 么〇.4. 根據權利要求1所述的芳基獻嗦化合物，其特征是，所述的化合物為具有下述結構 的化合物3，5. 根據權利要求 化合物為具有下述結構的化合物4，6. 根據權利要求 化合物為具有下述結構 的化合物5，7. 根據權利要求 化合物為具有下述結構 的化合物6，8. 根據權利要求 化合物為具有下述結構 的化合物7，9. 根據權利要求1所述的芳基獻嗦化合物，其特征是，所述的化合物為具有下述結構 的化合物8，10. 根據權利I t合物為具有下述結構14. 根據權利要求1所述的芳基獻嗦化合物，其特征是，所述的化合物為具有下述結構 的化合物13， 的化合物9，11. 根據權利I t合物為具有下述結構 的化合物10，12. 根據權利I t合物為具有下述結構 的化合物11，13. 根據權利I t合物為具有下述結構 的化合物12，15. 根據權利要^ i合物為具有下述結構19. 根據權利要求1所述的芳基獻嗦化合物，其特征是，所述的化合物為具有下述結構 的化合物18， 的化合物14，16. 根據權利要^ i合物為具有下述結構 的化合物15，17. 根據權利要^ i合物為具有下述結構 的化合物16，18. 根據權利要^ i合物為具有下述結構 的化合物17，20. 根據權利要 含物為具有下述結構的化合物19，21. 根據權利要 含物為具有下述結構 的化合物20，22. 根據權利要 含物為具有下述結構 的化合物21，23. 根據權利要 含物為具有下述結構 的化合物22，24. 根據權利要求1所述的芳基獻嗦化合物，其特征是，所述的化合物為具有下述結構 的化合物23，25. 根據權利要5 h合物為具有下述結構 的化合物24，26. 根據權利要5 h合物為具有下述結構 的化合物25， O27. 權利要求1的芳基獻嗦化合物及其可藥用鹽在制備化dgehog信號通路抑制劑中的 用途。28. 權利要求1的芳基獻嗦化合物在制備治療惡性腫瘤藥物中的用途。29. 按權利要求28的用途，其特征在于，所述的惡性腫瘤是化dgehog信號通路異常激 活所致的相關腫瘤，包括髓母細胞瘤、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、結腸癌、膀脫癌、卵巢癌、皮 膚癌。30. 包含治療有效量的權利要求1所述的化合物及其藥用鹽的藥物組合物。
【文檔編號】A61K31/502GK105985319SQ201510070469
【公開日】2016年10月5日
【申請日】2015年2月11日
【發明人】董肖椿, 陸秀宏, 王娟, 譚文福, 趙偉利, 鮑小龍, 彭元求, 楊君, 劉原
【申請人】復旦大學