吲哚芳砜類衍生物及其制備方法與應用
【專利摘要】本發明公開了一種如通式I所示的吲哚芳砜類衍生物及其藥學上可接受的鹽、酯或前藥，其制備方法以及含有一個或多個此類化合物的組合物在制備預防和治療人免疫缺陷病毒(HIV)感染中的應用。
【專利說明】
吲哚芳砜類衍生物及其制備方法與應用
技術領域
[0001 ]本發明涉及一種衍生物及其制備方法與應用，特別涉及吲哚芳砜類衍生物及其制 備方法與應用，屬于醫藥技術領域。
【背景技術】
[0002]在HIV復制周期中，其自身多功能性蛋白逆轉錄酶(RT)發揮著至關重要的作用，負 責完成RNA指導的DNA合成、RNA的水解以及DNA指導的DNA合成等多個關鍵環節。因此，以RT 作為藥物設計的靶點來防治艾滋病具有抑制活性高、選擇性好、毒副作用小等優勢，是目前 研發抗HIV/AIDS藥物的重要策略。根據作用機制及化學結構的不同，HIV-1逆轉錄酶抑制劑 主要可分為核苷（酸）（nucleos(t)ide reverse transcriptase inhibitors,N(t)RTIs)和 非核苷（Non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors，NNRTIs)兩類。其中， NNRTI s的作用機制是與距離RT催化活性中心l〇A.的變構性口袋(NNI BP)特異性結合，進而 導致RT重要功能的喪失來抑制病毒的復制。由于其結合的特異性，NNRTIs通常具有高效、低 毒的優點，因而已成為HAART的重要組成部分。目前FDA批準上市的該類藥物有5個 (nevirapine，delavirdine，efavirine，etravirine，rilpivirine) 〇但是由于NNRTIs結合 口袋的氨基酸極易發生突變而導致耐藥病毒株的產生與蔓延，加之現有藥物生物利用度低 以及長期用藥帶來的嚴重毒副作用使得該類藥物的臨床應用受到極大威脅。因此，尋找新 型抗耐藥低毒的NNRTIs仍是當前抗艾滋病藥物研發的重要課題。
[0003]吲噪芳砜類化合物（indolylaryl-sulfone，IAS)最早是由Merk實驗室的Williams 等人報道的一類具有很好活性的HIV-INNRTIs結構骨架。先導化合物L-737，126對野生型 (WT)RT抑制作用可達到3nM，同時對臨床常見變異病毒株K103N、Y181C的抑制作用也可達到 亞微摩爾水平。在隨后的結構改造中，多個化合物的抗HIV-1的活性都明顯提高，特別是針 對臨床常見的耐藥病毒株均具有很強的抑制作用，如化合物EFF對野生型HIV-1的EC 5Q值為 2nM，對多種常見突變病毒株Y181C、K103N、L100I和E138K的抑制活性保持納摩爾水平。因 此，以吲哚芳砜類化合物為模板，進行廣泛的結構修飾，對發現高效廣譜、生物利用度好且 具有自主知識產權的新型抗HIV藥物具有重要意義。
【發明內容】
[0005]針對現有技術的不足，本發明提供了一種吲哚芳砜類衍生物，本發明還提供上述 化合物的制備方法以及活性篩選結果和應用。
[0006] 本發明的技術方案如下：
[0007] 一、吲哚芳砜類衍生物
[0008] 本發明的吲哚芳砜類衍生物或其藥學上可接受的鹽或前藥，具有如下通式I所示 的結構：
[0010] 其中，
[0011] 叼丨噪5-位的取代基X為鹵素，CF3或N〇2;
[0012] n等于〇、1、2或 3;
[0013] m，w各自單獨等于1或2;
[0014] r為(Cl-6)烷基-Ri、（c3-7)環烷基- Ri、（C2-6)鏈烯基-匕-以⑴匕-以⑴抓^-以⑴― R1、-S02-R1、NH-R1、苯基、5-或6-元芳雜環、稠合的苯基-不飽和的或飽和的5-或6-元碳環、 或稠合的苯基-5-或6-元芳雜環；
[0015] 其中R1選自^^^^仏順:^-似-"烷基^-泊-"烷基或順-泊-^烷基^斤述的苯 基、5-或6-元芳雜環、稠合的苯基-不飽和的或飽和的5-或6-元碳環、或稠合的苯基-5-或6-元芳雜環各自依次任選被1至3個獨立選自下列的取代基所取代：（(^ 6)烷基、鹵素、CF3、 ocf3、oh、n〇2、cn、s〇2nh2、s〇 2-(c1-3)烷基、3)烷基、MK&- 3)烷基；
[0016]根據本發明優選的，
[0017]吲哚5-位的取代基X為C1或Br;
[0018] n等于〇或 1;
[0019] m和w同時等于2;
[0020] R為CH2OH、CH2COOCH2CH 3、取代的苯基、吡啶基、呋喃基、噻吩基或取代的三唑基。
[0021]根據本發明，進一步優選的，通式I化合物為下列結構的化合物之一：
[0025] 二、吲哚芳砜類衍生物的制備方法
[0026] 本發明吲哚芳砜類衍生物的制備以5-位取代的吲哚甲酸乙酯（1)為起始原料，與 3，5-二甲基苯硫酚反應制得中間體化合物2，中間體經間氯過氧苯甲酸氧化得到中間體化 合物3，將中間體化合物3的乙酯基水解得到中間體化合物4，中間體化合物4經過酰化反應 并脫去B0C保護基得到母環6，不同的取代基對母環6進行取代制得吲哚芳砜類衍生物I; [0027]合成路線如下：
[0029] 試劑和條件：（i) 3，5-二甲基苯硫酚，1-氯甲基-4-氟-1，4-二氮雜雙環[2.2.2 ]辛 烷二（四氟硼酸)鹽，乙腈；（ii)間氯過氧苯甲酸，二氯甲烷，0°C;(iii)氫氧化鋰，水，四氫呋 喃，50°C;(iv)B 〇C保護的含氮環烷基-氨基，2-(7_偶氮苯并三氮唑）4少少'』'-四甲基脲 六氟磷酸酯，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽，三乙胺，N，N-二甲基甲酰胺； (v)三氟乙酸，二氯甲烷；（vi)碳酸鉀，N，N-二甲基甲酰胺，齒芐，鹵素取代的烷基；（vi)取代 的甲醛，冰乙酸，氰基硼氫化鈉，四氫呋喃/乙腈.
[0030] 其中，X、n、m、w、R的定義同上通式I所述。
[0031] 根據本發明優選的，吲哚芳砜類衍生物的制備方法，包括如下步驟：
[0032] 本發明吲哚芳砜類衍生物的制備以5-氯/溴取代的吲哚甲酸乙酯（T)為起始原 料，與3，5-二甲基苯硫酚反應制得中間體化合物2 '，中間體化合物2 '經間氯過氧苯甲酸氧 化的到中間體化合物3 '，氫氧化鋰將中間體化合物3 '的乙酯基水解得到中間體化合物4 '， 中間體化合物4 '與l-Boc-4-氨基哌啶或l-Boc-4-(氨甲基)-哌啶經過酰化反應得到中間體 化合物5'，并在三氟乙酸作用下脫去Boc保護基得到母環6'，不同的取代基對母環6'進行取 代制得吲哚芳砜類衍生物I;
[0033]合成路線如下：
[0035] 試劑和條件：（i) 3，5-二甲基苯硫酚，1-氯甲基-4-氟-1，4-二氮雜雙環[2.2.2 ]辛 烷二（四氟硼酸)鹽，乙腈；（ii)間氯過氧苯甲酸，二氯甲烷，0°C;(iii)氫氧化鋰，水，四氫呋 喃，50°(：;(")1-80(：-4-氨基哌啶或1-8〇(3-4-(氨甲基)-哌啶，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-^ N'，N'_四甲基脲六氟磷酸酯，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽，三乙胺，N，N-二甲基甲酰胺；（v)三氟乙酸，二氯甲燒；（vi)碳酸鉀，N，N-二甲基甲酰胺，齒芐或鹵素取代 的烷基；（vi)取代的甲醛，冰乙酸，氰基硼氫化鈉，四氫呋喃/乙腈；
[0036] 其中，X為氯或溴，n等于0或1，R為CH20H、CH2COOCH2CH 3、取代的苯基、吡啶基、呋喃 基、噻吩基或取代的三唑基。
[0037]具體的制備方法詳見實施例1-24。
[0038]三、吲哚芳砜類衍生物的應用
[0039] 本發明通式I的吲哚芳砜類衍生物在抑制HIV復制的細胞試驗(MT-4細胞）中表現 出顯著的抗病毒活性、較高的選擇性以及抗耐藥性。因此，本發明還提供：
[0040] 通式I的吲哚芳砜類衍生物在制備抗HIV的藥物中的應用。
[0041] -種抗HIV藥物組合物，包含本發明所述化合物或其藥學上可接受的鹽以及一種 或多種藥學上可接受載體或賦形劑。
[0042] 本發明化合物既可以其本身也可以其藥學上可接受的鹽或溶劑化物的形式使用。 通式I化合物的藥學上可接受的鹽包括與藥學上可接受的無機酸或有機酸、或者無機堿或 有機堿形成的常規鹽。合適的酸加成鹽的例子包括與鹽酸、硫酸、磷酸、硝酸、氫溴酸、高氯 酸、富馬酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、羥基乙酸、甲酸、乳酸、馬來酸、酒石酸、檸檬酸、撲酸、丙二 酸、羥基馬來酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水楊酸、富馬酸、甲苯磺酸、甲磺酸、萘-2-磺酸、苯 磺酸、羥基苯甲酸、氫碘酸、蘋果酸、鞣酸等形成的鹽。合適的堿加成鹽的例子包括與鈉、鋰、 鉀、鎂、鋁、鈣、鋅、N，N'_二芐基乙二胺、氯代普魯卡因、膽堿、二乙醇胺、乙二胺、N-甲基葡糖 按和普魯卡因等形成的鹽。本文中涉及到本發明化合物時，包括通式I化合物及其藥學上可 接受的鹽或溶劑化物。
[0043] 根據本發明，本發明式I化合物可與常規藥物載體或賦形劑組成藥物組合物。該藥 物組合物可通過口服或非腸道途徑給藥。本發明的藥物組合物可按本領域常規方法制備成 各種劑型，包括但不限于片劑、膠囊、溶液、懸浮液、顆粒劑或注射劑等，經口服或非腸道途 徑給藥。
[0044] 本發明在對吲哚芳砜類先導化合物的結合方式和藥效團模型以及晶體研究和分 子模擬研究全面分析的基礎上，設計了一系列針對第二通道的新型吲哚芳砜衍生物。運用 骨架躍迀的藥物設計原理將DAPY類NNRTI s的N-取代哌啶基團引入到吲哚芳砜分子中，使延 伸的基團作用于第二通道，希望哌啶上氮原子可以與周圍氨基酸(G138)形成氫鍵作用。同 時末端的取代基采用結構多樣的基團，但基本都包括一個親水性基團，如親水性短鏈和親 水性取代基取代的芐基等，以適應蛋白/溶劑開口區的微環境并借此改善化合物的水溶性。 活性結果顯示所有化合物都具有顯著的的抗野生型HIV-1作用，EC 5Q值范圍為0.62福到 0.006yM。并且大部分化合物對多種單突變株也顯示出了良好的抑制活性，如變異病毒株 L100I、K103N、Y181C、E138K<J-2和1-12是該系列中抑制活性較為突出的兩個化合物，對野 生型HIV-1的EC 5q值分別為0.006處和0.009yM，SI為1005和1476。構效關系分析發現哌啶上 親水性的體積較小的基團更有利于活性提高。而增強與保守性氨基酸W229的相互作用，降 低對于氨基酸Y18UY188的依賴性，是下一步修飾中提高對突變病毒株活性的策略之一。因 此，吲哚芳砜類衍生物具有較大的開發價值。在本發明的化合物上進行新的結構修飾及深 入研究有助于開發出新的抗HIV藥物。
【具體實施方式】
[0045] 通過下述實施例有助于理解本發明，但是不能限制本發明的內容。
[0046] 實施例丨:N-(丨-(3-甲氧基苯基)哌啶-4-基)- 5-溴-3-(3，5-二甲基苯酚砜基)-1H-B引噪-2-甲酰胺(1-1)的制備
[0047] 5-溴吲哚甲酸乙酯（1'）（0.1(^，0.373111111〇1)置于圓底燒瓶中，加入乙腈101^，室溫 攪拌下依次加入3，5-二甲基苯硫酚(0.0516g，0.373mmol，50yL)，1-氯甲基-4-氟-1，4-二氮 雜雙環[2.2.2]辛烷二（四氟硼酸）鹽(0.10g，0.373mmol)。反應液繼續反應6小時。蒸干乙 腈，加入水30mL，二氯甲烷萃取(3 X 10mL)，有機相合并，飽和食鹽水洗滌后無水硫酸鎂干 燥。過濾濃縮，柱層析純化（乙酸乙酯：石油醚=1:8)。所得白色固體乙酸乙酯/石油醚重結 晶得2'。產率50.5%.
[0048]中間體2 '（0.10g，0.247mmo 1)置于圓底燒瓶中用1 OmL二氯甲烷溶解，冰浴攪拌下 慢慢加入間氯過氧苯甲酸(0.1288,0.742111111〇1)，30分鐘后轉為室溫反應3小時至反應完全。 反應液中加入二氯甲烷稀釋后，依次用亞硫酸氫鈉和碳酸氫鈉的飽和水溶液洗滌3次，無水 硫酸鎂干燥，過濾濃縮，乙酸乙酯重結晶得白色固體3 '。產率:68.8%.11^:205-207°(：.￡51-MS:m/z 436.3(M+l). Ci9Hi8BrN〇4S[435.01],
[0049] 上步制得中間體3 '（0.10g，0.229mmo 1)稱于圓底燒瓶中，加入混合試劑THF/H20 (6mL/6mL)，室溫攪拌下加入氫氧化鋰(0.0165g，0.687mmol)，反應液轉為50°C反應24小時。 反應液蒸干THF，加入蒸餾水稀釋，稀鹽酸調pH至酸性(pH = 2-3)，析出大量白色固體，過濾 并干燥，得中間體4'。產率：66.5% .mp:215-217°C .ESI-MS:m/z 425.3(M+18) .Ci7Hi4BrN〇4S [406.98]。
[0050] 中間體4 '（ 1. Og，2.45mmol)，2-( 7-偶氮苯并三氮唑)，，^』'-四甲基脲六氟磷 酸酯（1.39g，3.67mmol)，Boc-4_氨基哌啶(0.735g，3.67mmol)共稱于圓底燒瓶中，加入N，N_ 二甲基甲酰胺1〇11^，室溫攪拌下加入二異丙基乙胺(0.9498,7.351111]1〇1，1.31]11)，反應液繼續 反應24小時。蒸干大部分溶劑，四氫呋喃lOOmL復溶，飽和的食鹽水的氫氧化鈉水溶液洗滌3 次，四氫呋喃層無水硫酸鎂干燥，過濾濃縮柱層析純化（乙酸乙酯：石油醚=1:4)得白色固 體5'，產率:47.5%。
[0051]中間體5'（0.5g，0.848mmol)置于圓底燒瓶中，加入干燥的二氯甲燒2mL，室溫攪拌 下加入三氟乙酸lmLj小時后反應液出現出現大量白色沉淀，過濾并二氯甲烷洗滌，得中間 體IVa-6'。產率：75.4% .mp:230-23rC，ESI-MS:m/z 490.4(M+l)C22H24BrN3〇3S[489.07]。 [0052] 中間體6'（0.30g，0.496mmol)和碳酸鉀(0.274g，1.98mmol)共置于圓底燒瓶中，加 入N，N-二甲基甲酰胺10mL。室溫攪拌下10分鐘后加入1-(溴甲基）-3_甲氧基苯（0.274g， 0.5992mmol)，繼續室溫攪拌4小時。蒸干大部分N，N-二甲基甲酰胺，加水50mL，乙酸乙酯萃 取(3 XIOmL)，有機相合并，飽和食鹽水洗滌后無水硫酸鎂干燥。過濾濃縮，柱層析純化（乙 酸乙酯:石油醚=1:2)。所得白色固體四氫呋喃/乙酸乙酯重結晶得1-1。產率:43.2%.mp: 175-177 〇C NMR(400MHz,DMS0-d6,ppm)8：13.02(s,lH,Indole-NH),8.95(s,1H,C0NH), 8.09(s,lH,Indole-H),7.62(s,2H,Ph-H),7.50(q,2H,J=8.00Hz,Indole-H),7.26(t,2H,J =8?00Hz，Ph '-H)，6?88(s，2H，Ph '-H)，6?83(d，1H，J = 8?00Hz，Ph-H)，3.86(s，lH, piperidine-H)，3?73(s，3H，0CH3)，3?46(s，2H，benzyl_CH2)，2 ? 79(s，2H，piperidine_H)， 2.31(s,6H,2XCH3),2.14(s,2H,piperidine-H),1.93(s,2H,piperidine-H),1.59(s,2H, piperidine-H). 13C NMR( 100MHz , DMSO-de ,ppm)8 ： 159.73 (C = 0), 158.99,143.05,140.74, 139.43(2 XC) ,137.73,135.14,133.58,129.67,127.60,126.34,124.10(2 XC) ,122.36, 121.34,115.70(2XC),114.58,112.74,111.53,62.49(CH2),55.40(2XCH2),52.07(0-CH 3) ,47.28,31.65(2 XCH2) ,21.24(2 XCH3) .ESI-MS:m/z 610.3(M+l) .C3〇H32BrN3〇4S [609.13],
[0053] 實施例2:5-溴-3-(3,5-二甲基苯砜基)-N-(l-(2-羥乙基）哌啶-4-基)-lH-吲哚- 2-乙酰胺（1-2)的制備
[0054] 1-2的制備方法同1-1，所不同的是使用溴乙醇(0.5992mmol)代替1-(溴甲基)-3_ 甲氧基苯。產率：40 ? 1 % ? mp: 220-222 °C ? NMR(400MHz，DMS〇-d6，ppm) S : 13 ? 20-12 ? 59(b， lH,Indole-NH) ,8.95(d, 1H ,J = 8.00Hz ,C0NH), 8.08(s , 1H, Indole-H), 7.63(s , 2H,Ph-H), 7.50(q,2H,J=8.00Hz,Indole-H),7.26(s,1H,Ph-H),4.44(s,1H,OH),3.86(s,1H, piperidine-H),3.34(s,2H,CH2), 2.91(s,2H,piperidine-H),2.45(s,2H,CH2),2.31(s,6H, 2 X CH3),2.22(s,2H,piperidine-H),1.91(s,2H,piperidine-H),1.60(s,2H,piperidine-H) ,13C NMR( 100MHz,DMS0-d6,ppm) 8： 159.08(C = 0) ,143.10,139.41(2 XC) ,137.89, 135.11,133.66,127.53,126.34,124.11(2XC),122.33,115.73,115.65,111.49,60.59 (CH 2) ,58.98(CH2) ,52.54(2XCH2) ,47.13,31.47(2 XCH2),21.25(2 X CH3).ESI-MS:m/z 534.3(M+1). C24H28BrN3〇4S[533.1 ].
[0055] 實施例3:N-(l-(4-磺酰胺苯基)哌啶-4-基)-5-溴-3-(3,5-二甲基苯酚砜基)-lH-n引噪-2-甲酰胺(1 -3)的制備
[0056] I-3的制備方法同I-1，所不同的是使用4-溴甲基苯磺酰胺（0.5992mmo 1)代替1 -(溴甲基）_3_甲氧基苯。產率：42.1% .mpznO-nrCH NMR(400MHz，DMS0-d6，ppm)S:13.01 (s，1H，Indole-NH)，8?97(s，1H，C0NH)，8.09(s，1H，Indole-H)，7.80(d，2H，J=8.00Hz，Ph'-H),7.62(s,2H,Ph-H),7.51-7.44(m,4H,Indole-H,Ph'-H),7.32(s,2H,S0NH 2) ,7.27(s,1H, Ph-H),3.87(s,lH,piperidine-H),3.56(s,2H,benzyl-CH2) ,2.81(d,2H,J=12.00Hz, piperidine-H),2.31(s,6H,2XCH3),2.20(t,2H ,J=12.00Hz,piperidine-H),1.93(d,2H, J = 8.00Hz,piperidine-H) ,1.63(q，2H, J=12.00Hz,piperidine-H) .13C 匪R(100MHz, DMS0-d6,ppm)8： 158.99(C = 0) ,143.39,143.20,143.03,139.44(2 XC) ,137.70,135.16, 133.54,129.41 (2 XC) ,127.63,126.30,126.11(2 XC) ,124.10(2 XC) ,122.36,115.71, 115.69，111.55,61.88(CH2)，52.10(2XCH2)，47.23(CH)，31.65(2XCH2)，21.25(2XCH 3) ,ESI-MS:m/z 659.4(M+l).C29H3iBrN4〇5S2[658.09].
[0057] 實施例4:N-(l-(4-氯苯基）哌啶-4-基）-5-溴-3-(3,5-二甲基苯酚砜基)-lH-吲 噪-2-甲酰胺(I -4)的制備
[0058] 1-4的制備方法同1-1，所不同的是使用1-溴甲基-4-氯苯(0.5992mmol)代替1-(溴 甲基）-3_ 甲氧基苯。產率：46.2%.11^:229-230°(：.111匪1?(40冊1^，0150-(16卬口111)5 :13.07-12.94(br,lH,Indole-NH),8.97(d,lH,J=8.00Hz,C0NH),8.09(s,1H,Indole-H),7.62(s, 2H,Ph-H) ,7.50(q,2H,J = 8.00Hz,Indole-H),7.30(d,2H,J = 8.00Hz,Ph，-H),7.35(d,2H,J =8.00Hz,Ph，-H),7.26(s,lH,Ph-H),3.86(s,lH,piperidine-H),3.48(s,2H,benzyl-CH 2) ,2.80 (d,2H,J= 12.00Hz, piperidine-H) ,2.31 (s,6H, 2 XCH3) ,2.17 (t,2H,J = 12.00 Hz,piperidine-H),1.93(d,2H,J=12.00 Hz,piperidine-H),1.61(q,2H,J = 12.00Hz,piperidine-H). 13C NMR( 100MHz ,DMS〇-de ,ppm)8 ： 158.99(C = 0), 143.02,139.43 (2 XC) ,138.12,137.71,135.15,133.54,131.84,130.93(2 XC) ,128.62(2 XC) ,127.62, 126.29,124.10(2XC),122.35,115.71,115.68,111.55,61.60(CH 2),51.99(2XCH2),47.24 (CH)，31.64(2XCH2)，21.24(2XCH 3).ESI-MS:m/z 614.3(M+l).C29H29BrClN3〇3S[613.08]. [0059] 實施例5:N-(l-(3-氰苯基）哌啶-4-基)-5-溴-3-(3,5-二甲基苯酚砜基)-lH-吲 噪-2-甲酰胺(I -5)的制備
[0060] 1-5的制備方法同1-1，所不同的是使用1-溴甲基-3-氰基苯(0.5992mmol)代替1-(溴甲基）-3-甲氧基苯。產率：42 ? 3% ? mp: 223-236°C ? 4 NMR(400MHz，DMS〇-d6，ppm)S: 13 ? 03 (s，lH，Indole-NH)，8.97(d，lH，J = 8.00Hz，C0NH)，8.09(s，lH，Indole-H)，7.76(d，2H，J = 12.00Hz，Ph'-H)，7.69(d，1H，J = 8.00Hz，Ph'-H)，7.63(s，2H，Ph-H)，7.58(t，1H，J = 8.00Hz，Ph'-H)，7.50(q，2H，J=8.00Hz，Indole-H)，7.26(s，lH，Ph-H)，3.87(s，lH， piperidine-H),3.56(s,2H,benzyl-CH2) ,2.81(d,2H,J = 12.00Hz ,piperidine-H) ,2.31 (s,6H,2XCH3) ,2.21(t,2H,J= 12.00Hz, piperidine-H) ,1.94 (d,2H,J= 12.00Hz, piperidine-H),1.63(q,2H,J = 12.00Hz,piperidine-H). 13C NMR(100MHz,DMS〇-d6,ppm)8： 158.98(C = 0) ,143.01,139.43(2 XC) ,137.67,135.16,134.05,133.58,133.52,132.48, 131.28,129.95,127.64,126.29,124.11(2XC),122.36,119.38,115.72,115.67,111.69, 111.57,61.36(CH2)，51.95(2XCH2)，47.18(CH)，31.61(2XCH2)，21.24(2XCH 3).ESI-MS: m/z 605 ? 4(M+1) ? C3〇H29BrN4〇3S[604? 11 ] ?
[0061] 實施例6:5-溴-3-(3,5-二甲基苯苯砜基pN-d-(吡啶- 3-基甲基）哌啶-4-基）-1H-H引噪-2-甲酰胺（1-6)的制備
[0062] 1-6的制備方法同1-1，所不同的是使用3-(溴甲基)吡啶鹽酸鹽(0.5992mmol)代替 1_(溴甲基）_3_甲氧基苯。產率：47.8% .mp:220-221°C "H 匪R(400MHz，DMS0-d6，ppm)S: 13.02(s,lH,Indole-NH),8.97(d,1H,J=8.00Hz,C0NH),8.51(s,lH,pyridine-H),8.48(d, 1H, J = 4.OOHz ,pyridine-H) ,8.09(s, 1H, Indole-H) ,8.48(d, 1H, J = 8.00Hz ,pyridine-H), 7.63(s,2H,Ph-H) ,7.50 (q,2H, J = 8.00Hz, Indole-H) ,7.38(dd,lH,Ji = 8.00Hz, J2 = 4.OOHz,pyridine-H),7.26(s,lH,Ph-H),3.86(s,lH,piperidine-H),3.52(s,2H,benzyl-CH 2) ,2.81(d,2H,J=12.00Hz,piperidine-H) ,2.31(s,6H,2XCH3) ,2.19(t,2H,J = 12.OOHz,piperidine-H),1.93(d,2H,J=12.OOHz,piperidine-H),1.61(q,2H,J = 12 ? OOHz，piperidine-H) ? 13C NMR( 100MHz，DMS〇-d6，ppm)S: 159 ? 01 (C = 0)，150 ? 43，148 ? 74, 143.02,139.42(2XC),137.73,136.90,135.14,134.38,133.54,127.61,126.28,124.11(2 XC) ,123.90,122.35,115.70,115.68,111.55,59.67(CH2) ,51.97(2XCH2) ,47.22(CH), 31 ? 62 (2 X CH2)，21 ? 24 (2 X CH3) ? ESI-MS: m/z 581 ? 1 (M+l) ? C28H29BrN4〇3S [ 580 ? 11 ]?
[0063] 實施例7: 5-溴-3-(3，5-二甲基苯苯砜基）- N-(卜(吡啶-4-基甲基）哌啶-4-基）-1H-H引噪-2-甲酰胺（I -7)的制備
[0064] 1-7的制備方法同1-1，所不同的是使用4-(溴甲基)吡啶鹽酸鹽(0.5992mmol)代替 1_(溴甲基）_3_甲氧基苯。產率：46.6% .mp:243-244°C "H 匪R(400MHz，DMS0-d6，ppm)S: 13? 03(s，1H，Indole-NH)，8? 98(d，1H，J = 8? 00Hz，C0NH)，8.53(d，2H，J = 4.00Hz，pyridine-H)，8.09(s，lH，Indole-H)，7.63(s，2H，Ph-H)，7.50(q，2H，J=8.00Hz，Indole-H)，7.35(d， 2H,J=8.00Hz,pyridine-H),7.27(s,lH,Ph-H),3.88(s,lH,piperidine-H),3.53(s,2H, benzyl-CH2),2.81(d,2H ,J=12.00Hz,piperidine-H),2.31(s,6H,2XCH3),2.21(t,2H ,J = 8.OOHz ,piperidine-H), 1.94(d,2H, J = 8.OOHz ,piperidine-H) ,1.61(q,2H,J = 8.OOHz , piperidine-H).13CMffi(100MHz，DMS0-d6，ppm)S :159.01(C = 0)，150.02(2XC)，148.27， 143.01,139.43(2 XC) ,137.70,135.16,133.52,127.64,126.27,124.11(4 XC) ,122.35, 115.72，115.67，111.57,61.15(CH2)，52.13(2XCH2)，47.14(CH)，31.60(2XCH2)，21.14(2 X CH3) ? ESI-MS: m/z 581 ? 3 (M+l) ? C28H29BrN4〇3S [ 580 ? 11 ]?
[0065] 實施例8:N-(l-(4-氨基甲酰基苯基)哌啶-4-基)-5-溴-3-(3，5-二甲基苯砜基)-1H-吲哚-2-甲酰胺（1-8)的制備
[0066] 1-8的制備方法同1-1，所不同的是使用4-(溴甲基）苯酰胺（0.5992mmol)代替1-(溴甲基）_3_甲氧基苯。產率：48.1% .mpznS-ner.1!! NMR(400MHz，DMS0-d6，ppm)S:13.02 (s，lH，Indole-NH)，8.97(d，1H，J=8.00Hz，C0NH)，8.09(s，1H，Indole-H)，7.94(s，lH， NH2)，7.86(d，2H，J = 8.00Hz，Ph'-H)，7.63(s，2H，Ph-H)，7.50(q，2H，J = 8.00Hz，Indole-H),7.40(d,2H,J = 8.OOHz,Ph'-H),7.33(s,1H,NH2) ,7.27(s,lH,Ph-H),3.86(s,lH, piper idine-H), 3.54(s, 2H, benzyl-CH2) ,2.81(d,2H,J = 12. OOHz , piper idine-H) ,2.31 (s,6H,2XCH3) ,2. 18 (t,2H,J = 8. OOHz , piper idine-H) , 1.93 (d , 2H , J = 8 . OOHz , piper idine-H), 1.62(q, 2H, J = 8. OOHz , piper idine-H). 13C NMR( 100MHz ,DMS〇-d6,ppm)8 ： 168.23(C = 0),158.99(C = 0),143.02,142.50,139.43(2XC),137.71,135.15,133.53, 133.46,128.86(2 XC) ,127.93(2 XC) ,127.62,126.29,124.11(2 XC) ,122.36,115.71, 115.68,111.55,60.23(CH2) ,52.09(2XCH2) ,47.25(CH), 31.65(2 X CH2), 21.24(2 X CH3) .ESI-MS:m/z 623.1 (M+l).C3〇H3iBrN4〇4S[622.12],
[0067] 實施例9: N-(!-(4-磺甲基苯基)哌啶-4-基)-5-氯- 3-( 3，5-二甲基苯酚砜基)-1H-n引噪-2-甲酰胺(1 -9)的制備
[0068] 1-9的制備方法同1-1，所不同的是起始原料使用5-氯-吲噪甲酸乙酯(0.373mmol) 代替5-溴-吲哚甲酸乙酯，最后一步取代基使用4-溴甲基苯磺酰胺(0.5992mmol)代替1-(溴 甲基）-3_甲氧基苯。產率：55.1% .mpzng-lSCTCH NMR(400MHz，DMS0-d6，ppm)S:13.01(s， lH，Indole-NH)，8.98(d，lH，J = 8.00Hz，0NH)，7.94(s，lH，Indole-H)，7.91(d，2H，J = 8.00Hz，Ph'-H)，7.63(s，2H，Ph-H)，7.61(d，2H，J = 8.00Hz，Ph'-H)，7.55(d，lH，J = 8.00Hz， Indole-H)，7.56(d，lH，J=8.00Hz，Indole-H)，7.26(s，lH，Ph-H)，3.87(s，lH，piperidine-H),3.61(s,2H,benzyl-CH2) ,3.21 (s,2H,S〇2CH3),2.81(d,2H,J = 8.00Hz,piperidine-H), 2.31(s,6H,2XCH3) ,2.22(t,2H,J=12.00Hz,piperidine-H) ,1.94(d,2H,J = 8.00Hz, piperidine-H),1.61(q,2H,J = 12.00Hz,piperidine-H). 13C NMR(100MHz,DMS〇-d6,ppm)8： 159.03(C = 0) ,145.49,143.04,139.86,139.44(2 XC) ,137.87,135.15,133.29,129.76(2 XC),127.68,127.43(2XC) ,125.71,125.10,124.12(2XC),119.34,115.33,111.72, 61.80(CH2)，52.11(2XCH2)，47.19(CH)，44.08(CH 3)，31.65(2XCH2)，21.25(2XCH3).ESI-MS:m/z 614.3.4(M+1).C3〇H32C1N3〇5S2[613.15].
[0069] 實施例10:5-氯-3_(3,5-二甲基苯基砜基)-N_(l-(吡啶-3-基甲基)哌啶-4-yl)_ 1H-吲哚-甲酰胺（1-10)的制備
[0070] 1-10的制備方法同1-9,所不同的是使用3-溴甲基吡啶鹽酸鹽(0.5992mmol)代替 4-溴甲基苯磺酰胺。產率：50 ? 0% ? mp: 224-225°C ? NMR(400MHz，DMS〇-d6，ppm)S: 13 ? 01 (s， lH,Indole-NH),8.97(d,lH,J = 8.00Hz,C0NH) ,8.51(s,lH,pyridine-H) ,8.48(d,lH,J = 4.00Hz,pyridine-H),7.95(s,1H,Indole-H),7.73(d,lH,J=8.00Hz,pyridine-H),7.63 (s,2H,Ph-H) ,7.55(d,lH,J = 8.00Hz,pyridine-H) ,7.38(q,2H,J = 8.00Hz,Indole-H), 7.26(s,lH,Ph-H),3.86(s,lH,piperidine-H),3.53(s,2H,benzyl-CH2) ,2.81(d,2H,J = 8.00Hz,piperidine-H),2.31(s,6H,2XCH3),2.19(t,2H ,J = 8.00Hz,piperidine-H),1.93 (d，2H，J = 8.00Hz，piperidine-H) ,1.62(q，2H，J= 12.00Hz，piperidine-H) .13C 匪R (100MHz,DMS0-d6,ppm)8： 159.02(C = 0), 150.43,148.74,143.04,139.42(2 XC) ,137.87, 136.90,135.14,134.39,133.29,127.68,125.71,125.09,124.12(2XC),123.89,119.35, 115.33,111.73,59.67(CH2) ,51.97(2XCH2) ,47.22(CH), 31.62(2 X CH2), 21.24(2 X CH3) ? ESI-MS:m/z 537 ? 4(M+1) ? C2sH29C1N4〇3S[536 ? 16] ?
[0071] 實施例11:5-氯-3-(3,5-二甲基苯基砜基pN-d-(吡啶- 3-基甲基)哌啶-4-yl)-1H-吲哚-甲酰胺（1-11)的制備(原始記錄見0002466-43)
[0072] 1-11的制備方法同1-9,所不同的是使用4-溴甲基吡啶鹽酸鹽(0.5992mmol)代替 4-溴甲基苯磺酰胺。產率：50 ? 5% ? mp: 240-241°C ? NMR(400MHz，DMS〇-d6，ppm)S: 13 ? 02(s， lH,Indole-NH),8.98(d,lH,J = 8.00Hz,C0NH) ,8.52(d,2H,J = 4.00Hz,pyridine-H)7.95 (s，1H, Indole-H) ,7.63(s，2H，Ph-H) ,7.55(d，lH，J = 8.00Hz，Indole-H) ,7.35(d，3H，J = 8.00Hz,Indole-H,pyridine-H),7.26(s,lH,Ph-H),3.87(s,1H,piperidine-H),3.53(s, 2H,benzyl-CH2),2.81(d,2H ,J = 12.00Hz,piperidine-H), 2.31 (s,6H, 2 XCH3), 2.22(t,2H, J = 12.00Hz ,piper idine-H),1.93(d,2H,J=12.00Hz , piper idine-H) ,1.62(q,2H,J = 12 ? 00Hz，piperidine-H) ? 13C NMR( 100MHz，DMS〇-d6，ppm)S: 159 ? 03(C = 0)，150 ? 02(2 X C)， 148.26,143.03,139.43(2XC),137.85,135.15,133.28,127.69,125.71,125.11,124.12(2 XC),124.09(2XC),119.55,115.33,111.74,61.16(CH2),52.13(2XCH2),47.15(CH), 31 ? 62 (2 X CH2)，21 ? 24 (2 X CH3) ? ESI-MS: m/z 537 ? 6 (M+l) ? C28H29CIN4O3S [ 536 ? 16 ]?
[0073]實施例 12:5-氯-3-(3，5-二甲基苯基砜基)-N-(l-( (4-甲基-5-氧-4，5-二氫-lH-1，2，4-三唑-3-基）甲基)哌啶-4-基)-1H-吲哚-甲酰胺（1-12)的制備 [0074] 1-12的制備方法同1-9,所不同的是使用5_(溴甲基)_4_甲基-2氫_1，2,4_三唑基-3(4氫）（0.5992111111〇1)代替4-溴甲基苯磺酰胺。產率 ：53.1%.111?:274-275°(：.111麗1? (400MHz,DMS0-d6,ppm)8：13.02(s,lH,Indole-NH),11.52(s,lH,triazole-NH),8.95(d, 1H,J = 8.00Hz,C0NH) ,7.94(s,lH,Indole-H) ,7.63(s,2H,Ph-H) ,7.55(d,lH,J = 8.00Hz, Indole-H),7.36(d,lH,J=8.00Hz,Indole-H),7.26(s,lH,Ph-H),3.85(s,lH,piperidine-H),3.41(s,2H,benzyl-CH 2),3.17(s,3H,CH3) ,2.81 (d,2H,J=12.00Hz,piperidine-H), 2.31(s,6H,2XCH3) ,2.24(t,2H,J=12.00Hz,piperidine-H) ,1,93(d,2H,J=12.00Hz, piperidine-H),1.62(q,2H,J = 12.00Hz,piperidine-H). 13C NMR(100MHz,DMS〇-d6,ppm)8： 159.04(C = 0) ,155.89(C = 0) ,145.35,143.03,139.43(2 XC) ,137.84,135.15,133.28, 127.68,125.70,125.09,124.12(2XC),119.35,115.32,111.73,53.41(CH 2),51.79(CH2), 49.07(CH2) ,47.05(CH),31.52(2XCH2),27.28(CH3),21.23(2XCH3).ESI-MS:m/z 557.3(M +l).C26H29ClN6〇4S[556.17].
[0075] 實施例13:N-(l-(4-磺酰胺苯基)哌啶-4-基)-5_氯-3_(3,5-二甲基苯酚砜基)_ 1H-吲哚-2-甲酰胺（1-13)的制備
[0076] 1-13的制備方法同1-9,所不同的是使用4-溴甲基苯磺酰胺(0.5992mmol)代替4-溴甲基苯磺酰胺。產率：52.1% .mp:215-217°C "H NMR(400MHz，DMS0-d6，ppm)S:13.01(s， lH，Indole-NH)，8.97(d，lH，J = 8.00Hz，0NH)，7.94(s，lH，Indole-H)，7.81(d，2H，J = 8.00Hz，Ph'-H)，7.63(s，2H，Ph-H) ,7.55-7.50(m，3H，Indole-H，S0NH2)，7.36-7.32(111，3H, Ph ，-H,S0NH2),7.26(s,lH,Ph-H),3.87(s,lH,piperidine-H),3.57(s,2H,benzyl-CH 2), 2.81(d,2H,J=12.00Hz,piperidine-H) ,2.31 (s,6H, 2 XCH3) ,2.20(t,2H,J= 12.00Hz, piperidine-H), 1.94(d,2H,J = 12.00Hz ,piperidine-H), 1.63(q,2H,J=12.00Hz, piperidine-H). 13C NMR( 100MHz ,DMS〇-de,ppm)8 ： 159.01 (C = 0), 143.20,143.03,139.44(2 XC),137.84,135.15,133.29,129.41(2XC),127.69,126.11(2XC),125.72,125.10, 124.11(2XC),119.35,115.34,111.72,61.87(CH2),52.10(2XCH2),47.22(CH),31.65(2X CH 2), 21.24(2 X CH3). ESI-MS:m/z 615.3(M+l). C29H31CIN4O5S2[614.14],
[0077] 實施例md-G-氨基甲酰基苯基)哌啶-4-基)-5-氯- 3-(3,5-二甲基苯砜基)-1H-吲哚-2-甲酰胺（1-14)的制備
[0078] 1-14的制備方法同1-9,所不同的是使用4-(溴甲基）苯酰胺(0.5992mmol)代替4-溴甲基苯磺酰胺。產率：56.6% .mp:153-155°C "H NMR(400MHz，DMS0-d6，ppm)S:13.01(s， lH，Indole-NH)，8.97(d，lH，J = 8.00Hz，0NH)，7.94(s，2H，Indole-H)，7.86(d，2H，J = 8.00Hz，Ph'-H)，7.63(s，2H，Ph-H),7.55-7.53(d，lH，Indole-H),7.40-7.32(m，4H，Ph'-H, CONH2),7.26(s,lH,Ph-H),3.87(s,lH,piperidine-H),3.54(s,2H,benzyl-CH2), 2.81 (d, 2H,J= 12.00Hz, piperidine-H) , 2.31 ( s , 6H , 2 X CH3) , 2 . 18 (t, 2H, J = 12.00Hz , piperidine-H), 1.94(d,2H,J = 12.00Hz ,piperidine-H), 1.63(q,2H,J=12.00Hz, piperidine-H) .13C 匪R(100MHz，DMS0-d6，ppm)S: 168.25(C = 0) ,159.01 (C = 0), 143.03， 139.43(2 XC) ,137.87,135.15,133.46,133.28,128.87,127.93(4 XC) ,127.68,125.70, 125.10,124.12(2XC),119.35,115.33,111.72,60.22(CH2),52.09(2XCH2),47.25(CH), 31.64(2 X CH2), 21.24(2 X CH3). ESI-MS:m/z 615.3(M+l). C30H31CIN4O4S[578.18],
[0079] 實施例15:5-氯-3_(3,5-二甲基苯基砜基)-N_(l-(噻吩-3-甲基)哌啶-4-基)-lH-n引噪-2-甲酰胺(1-15)的制備
[0080] 中間體6 '稱于圓底燒瓶中加入混合溶劑四氫呋喃/甲醇（1/2) 30mL后加熱至溶液 澄清，30-40 °C攪拌下滴入乙酸至pH為4-5，加入3-噻吩-甲醛(0.060g，0.535mmol)反應40分 鐘，隨后加入氰基硼氫化鈉(0. 〇56g，0.89mmol)，繼續反應10小時。反應液直接濃縮柱層析 純化（乙酸乙酯）。產率：70.2% .mp:230-231°C "H NMR(400MHz，DMS0-d6，ppm)S: 12.92(s, lH,Indole-NH),8.99(d,lH,J=8.00Hz,C0NH),7.94(s,lH,Indole-H),7.63-7.54(m,4H, thiophene-H,Ph-H) ,7.44(d,lH,J = 8.00Hz , Indole-H) ,7.24(d,lH,J = 8.00Hz , Indole-H),7.15-7.13(m,2H,thiophene-H,Ph-H),4.21(s,2H,thiophene-CH2),3.99(s,1H, piperidine-H),3.34(s,2H,piperidine-H),3.00(s,2H,piperidine-H),2.20(s,6H,2 X CH3),2.04(s,2H,piperidine-H),1.64(s,2H,piperidine-H).ESI-MS:m/z 542.4(M+1) .C27H28ClN3〇3S2[541.13].
[0081] 實施例16:5-氯-3-(3,5-二甲基苯基砜基)-N-(l-(噻吩-2-甲基)哌啶-4-基)-lH-吲哚-2-甲酰胺（1-16)的制備
[0082] 1-16的制備方法同1-15,所不同的是使用2-噻吩-甲醛(0.535mmol)代替3-噻吩- 甲醛。產率：69? 6% .mp: 225-256。(： ? ESI-MS:m/z 542? 4(M+1) ? C27H28ClN3〇3S2[541 ? 13L [0083] 實施例17:N-(l-(4-(三氟甲基)苯基)哌啶-4-基)-5-氯-3-(3,5-二甲基苯砜基)-1H-吲哚-2-甲酰胺（1-17)的制備
[0084] 1-17的制備方法同1-15,所不同的是使用4-(三氟甲基）苯甲醛(0.535mmol)代替 3-噻吩-甲醛。產率：69.8% .mp:209-21(TC NMR(400MHz，DMS0-d6，ppm)S:13.00(s，lH， Indole-NH)，8.97(d，lH，J = 8.00Hz，C0NH)，7.95(s，lH，Indole-H)，7.70(d，2H，J = 8.00Hz, Ph'-H)，7.63(s，2H，Ph-H) ,7.56-7.53(m，3H，J = 8.00Hz，Indole-H,Ph'-H) ,7.35(d，lH，J = 8.00Hz,Indole-H),7.26(s,lH,Ph-H),3.88(s,lH,piperidine-H),3.59(s,2H,benzyl-CH 2) ,2.81 (d,2H,J= 12.00Hz, piperidine-H) ,2.31 (s,6H, 2 XCH3) ,2.21 (t,2H,J = 12.00 Hz,piperidine-H),1.94(d,2H,J=12.00 Hz,piperidine-H),1.64(q,2H,J = 12 ? 00Hz，piperidine-H) ? 13C NMR( 100MHz，DMS〇-d6，ppm)S: 159 ? 02(C = 0)，144 ? 21，143 ? 05, 139.43(2 XC) ,137.87,135.14,133.31,129.71(2 XC) ,128.18,127.87,127.68,126.61, 125.73,125.47,125.08,124.11(2XC),119.35,115.34,111.72,61.83(CH 2), 52.08(2X CH2),47.21(CH) ,31.66(2XCH2) ,21.23(2XCH3).ESI-MS:m/z 604.4(M+1) .C30H29CIF3N3O3S [603.16],
[0085] 實施例18:5-氯-3-(3,5-二甲基苯基砜基)-N-(l-(呋喃-3-甲基)哌啶-4-基)-lH-吲哚-2-甲酰胺（1-18)的制備
[0086] 1-18的制備方法同1-15,所不同的是使用3-呋喃-甲醛(0.535mmol)代替3-噻吩- 甲醛。產率：68.8%.11^:223-224。(：.111匪1?(4001抱，0150-(16，口口111)5 :12.91(8，111，111(1〇16-NH),8.98(d,lH,J=8.00Hz,C0NH),7.79(s,lH,Indole-H),7.72(s,lH,furan-H),7.53(s, 2H,Ph-H),7.44(d,lH ,J = 8.00Hz, Indole-H), 7.24(d,lH,J = 8.00Hz, Indole-H) ,7.14(s, 1H,Ph-H),6.57(s,1H,furan-H),6.46(s,1H,furan-H),4.24(s,2H,thiophene-CH 2), 3.98 (s,1H,piperidine-H),3.31(s,2H,piperidine-H),2.98(s,2H,piperidine-H),2.20(s, 6H,2XCH3),2.00(s,2H,piperidine-H),1.65(s,2H,piperidine-H).ESI-MS:m/z 526.2(M +l).C27H28ClN3〇4S[525.15].
[0087] 實施例19:N-(l-(4-硝基苯基)哌啶-4-基)-5-氯-3-(3,5-二甲基苯砜基)-lH-吲 噪-2-甲酰胺（1_19)的制備
[0088] 1-19的制備方法同1-15,所不同的是使用3-硝基-苯甲醛（0.535mmol)代替3-噻 吩-甲醛。產率:65.6% .mp:258-259°C，分解。4 NMR(400MHz，DMS0-d6，ppm)S:13.01(s，lH， Indole-NH) ,8.97(d,lH,J = 8.00Hz,C0NH) ,8.21(d,2H,J = 8.00Hz,Ph，-H) ,7.94(s,lH, Indole-H),7.63-7.60(m,4H,Ph-H,Ph，-H),7.55(d,lH,J=8.00Hz,Indole-H),7.35(d,lH, J=8.00Hz,Indole-H),7.26(s,lH,Ph-H),3.88(s,lH,piperidine-H),3.63(s,2H,benzyl-CH2),2.81(d,2H,J = 8.00Hz,piperidine-H),2.31(s,6H,2XCH3) ,2.23(t,2H,J = 8.00Hz, piperidine-H) , 1.95(d,2H,J=12.00Hz,piperidine-H) , 1.64(q,2H,J = 8.00Hz, piperidine-H) ,13C NMR( 100MHz ,DMS〇-de ,ppm)8 ： 159.01 (C = 0), 147.59,147.01,143.03, 139.43(2XC),137.84,135.15,133.29,130.02(2XC),127.68,125.71,125.10,124.11(2 XC) ,123.85(2XC),119.35,115.53,111.72,61.55(CH2),52.08(2XCH2),47.14(CH), 31 ? 65 (2 X CH2)，21 ? 24 (2 X CH3) ? ESI-MS: m/z 581 ? 4 (M+l) ? C29H29CIN4O5S [ 580 ? 15 ]?
[0089] 實施例20:5-氯-3-(3,5-二甲基苯基砜基)-N-((l-(2-羥乙基)哌啶-4-基）甲基)- 1H-吲哚-2-甲酰胺（I -20)的制備
[0090] 1-20的制備方法同1-9,所不同的是中間體IVa-6由1-叔丁氧羰基-4-氨甲基哌啶 (3.67mmol)代替Boc-4-氨基哌啶制得，最后一步取代基使用溴乙醇(0.5992mmol)代替4-溴 甲基苯磺酰胺。產率：50 ? 0 % ? mp: 255-256 °C ? NMR(400MHz，DMS〇-d6，ppm) S: 13 ? 02 (s，1H， Indole-NH)，9.08(d，1H，J=4.00Hz，C0NH)，7.88(s，1H，Indole-H)，7.65(s，2H，Ph-H)，7.55 (s，lH，J = 8.00Hz，Indole-H)，7.35(s，lH，J = 8.00Hz，Indole-H)，7.27(s，lH，Ph-H)，5.28 (s，1H，0H)，3.37(s，2H，CH2)，3.50(s，2H，CH2)，3.40(s，2H，CH2)，3.11(s，2H，CH2)，2.31(s， 6H，2XCH3)，2.29(s，2H，CH2)，1.98(s，2H，CH2)，1.86(s，1H，CH)，1.53(s，2H，CH2) .ESI-MS: m/z 504.3(M+1) .C25H3〇C1N3〇4S[503.16].
[0091] 實施例氨基甲酰苯基)哌啶-4-基）甲基)-5-氯-3-( 3,5-二甲基苯砜 基)-lH-吲哚-2-甲酰胺（1-21)的制備
[0092] 1-21的制備方法同1-20,所不同的是使用4-(溴甲基)苯甲酰氨基(0.5992mmol)代 替溴乙醇。產率：52.3% .mp:259-260°C "H 匪R(400MHz，DMS0-d6，ppm)S: 12.93(s，lH, Indole-NH),8.98(d,lH,J = 8.00Hz,C0NH),7.92-7.90(m,2H,Indole-H,NH2), 7.83(d,2H,J = 8.00Hz,Ph，-H),7.61(s,2H,Ph-H),7.54(d,lH ,J = 8.00Hz,Indole-H),7.37-7.52(m,5H, Indole-H,NH2Ph-H,Ph' -H), 3.50(s,2H,benzyl-CH2),3.32-3.24(m, 2H,CONH-CH2), 2.83(d, 2HJ=12.00Hz,piperidine-H),2.30(s,6H,2XCH3),1.98(t,2H,J = 8.00Hz,piperidine-H),1.76(d,2H,J = 8.00Hz , piperidine-H), 1.57( s , 1H, piperidine-H) ,1.62(q,2H,J = 8?00Hz，piperidine-H)?ESI-MS:m/z 593?5(M+1)?C3iH33ClN4〇4S[592?19]?
[0093] 實施例22:N-((l-(2-氟苯基）哌啶-4-基）甲基）-5-氯-3-(3,5-二甲基苯砜基）- 1H-吲哚-2-甲酰胺（1-22)的制備
[0094] 1-22的制備方法同1-20,所不同的是使用4-(溴甲基)-2_氟苯(0.5992mmol)代替 溴乙醇。產率：46.5% .mpzigS-igrC.1!! NMR(400MHz，DMS0-d6，ppm)S:13.00(s，lH，Indole- NH),8.97(d,lH ,J = 8.00Hz,C0NH), 7.92(d,lH,J= 12.00Hz, Indole-H), 7.61 (s,2H,Ph-H), 7.54(d,lH J = 8.00Hz,Indole-H),7.37-7.31(m,2H,Indole-H,Ph，-H),7.26(s,lH,Ph-H), 7.14-7.04(m,3H,Ph ，-H),3.47(s,2H,benzyl-CH2),3.27(t,2H J = 8.00Hz,C0NH-CH2),2.82 (d,2H,J=12.00Hz,piperidine-H) ,2.30(s,6H,2XCH3) ,1.97(t,2H,J=12.00Hz, piper idine-H), 1.94(d, 2H, J = 2.00Hz , piper id ine-H), 1.57(s , lH,piperidine-H) ,1.30 (q，2H, J = 12 ? 00Hz，piperidine-H) ? ESI-MS:m/z 568 ? 5(M+1) ? C3qH3iC1FN3〇3S[567 ? 18] ? [0095] 實施例23:N-((l-(2-氰基苯基)哌啶-4-基）甲基)-5-氯-3-(3,5-二甲基苯砜基)-1H-吲哚-2-甲酰胺（1-23)的制備
[0096] 1-23的制備方法同1-20,所不同的是使用4-(溴甲基)苯甲腈(0.5992mmol)代替溴 乙醇。產率：52.6% .11^:213-214。(： NMR(400MHz，DMS0-d6，ppm)S:13.00(s，lH，Indole-NH)，8.96(d，lH，J = 8.00Hz，C0NH)，7.92(s，lH，Indole-H)，7.80(d，lH，J = 4.00Hz，Ph'-H)， 7.68(t，lH，J=8.00Hz，Ph'-H)，7.61(s，2H，Ph-H),7.57-7.30(m，4H，Indole-H，Ph'-H)， 7.24(s，lH，Ph-H)，3.63(s，2H，benzyl-CH2)，3.26(t，2H，J=8.00Hz，C0NH-CH2)，2.82(d，2H， J = 12.00Hz，piperidine-H)，2.30(s，6H，2XCH3)，2.06(t，2H，J=12.00Hz，piperidine-H),1.76(d,2H,J=12.00Hz,piperidine-H),1.59(s,lH,piperidine-H),1.29(q,2H,J= 12?00Hz，piperidine-H)?ESI-MS:m/z 575?5(M+1)?C3iH3iC1N4〇3S[574?18]?
[0097] 實施例24:乙基3-(4-((5-氯-3-(3,5-二甲基苯砜基）1H-吲哚-2-甲酰胺）甲基)哌 啶-1-基)丙酸(1-24)的制備
[0098] 1-24的制備方法同1-20,所不同的是使用乙基3-溴乙酸（0.5992mmol)代替溴乙 醇。產率：45.6% .mpzigd-igsr.1!! NMR(400MHz，DMS0-d6，ppm)S:13.01(s，lH，Indole-NH)， 8.96(s，lH，C0NH)，7.92(s，lH，Indole-H)，7.61(s，2H，Ph-H)，7.80(d，lH，J=8.00Hz, Indole-H) ,7.34(d,lH ,J = 8.00Hz,Indole-H),7.26(s,lH,Ph-H) ,4.07(q, 2H ,J = 4.00Hz , 0-CH2),3.25(t,2H J = 4.00Hz,C0-CH2),2.82(d,2H,J= 12.00Hz,piperidine-H) ,2.57(d, 2H,J = 8.00Hz,CH2) ,2.46(d,2H,J = 8.00Hz,CH2) ,2.31(s,6H,2XCH3) ,1.98(t,2H,J = 12.00Hz,piperidine-H),1.75(d,2H,J=12.00Hz,piperidine-H),1-56(s,1H, piperidine-H)，1?25-1?15(m，5H,piperidine-H，CH 3)?ESI-MS:m/z 560.4(M+l) .C28H34ClN3〇5S[559.19].
[0099] 實施例25:抗HIV活性實驗(MT-4細胞模型）
[0100] 術語解釋：
[0101] MT-4細胞:人急性淋巴母細胞白血病細胞。
[0102] MTT分析法:MTT即為3- (4，5-二甲基噻唑-2) -2，5-二苯基四氮唑溴鹽，商品名：噻 唑藍。
[0103] Nevirapine:抗艾滋病上市藥物奈韋拉平。
[0104] Efavirenz :抗艾滋病上市藥物依法韋侖。
[0105] Delavirdine:抗艾滋病上市藥物地拉韋啶。
[0106] Etravirine:抗艾滋病上市藥物依曲韋林。
[0107] DMS0:二甲基亞砜。
[0108] 測試原理
[0109]由于HIV感染的MT-4細胞在一定時間內（5-7天)會發生病變，因此向HIV感染的MT- 4細胞懸濁液中加入適當濃度的待檢測化合物溶液，經過一段時間（5-7天)的培養后，用MTT 分析法測定MT-4細胞活力，得到保護50%細胞免于細胞病變的藥物濃度(EC5Q)即可得出目 標化合物的抗HIV的活性。同時得到目標化合物使50%未感染HIV的細胞發生病變的濃度 (CC50)，計算出選擇系數(selectivity index，SI = CC5〇/EC5〇) 〇
[0110] MIT分析法原理:MIT即溴化-3-( 4，5-二甲基-2-噻唑基)-2，5-二苯基四唑氮，可與 活的細胞內琥珀酸脫氫酶相結合，而不與死亡細胞發生反應。目前MTT法是一種快速、簡潔 反映細胞活力的酶分析方法。
[0111] 測試材料和方法
[0112] (1)HIV-1(IIIB)、HIV-2(R0D)毒株、HIV-1 雙突變(K103N/Y181C)耐藥株RES056:由 比利時Leuven大學Rega研究院微生物與免疫學研究所提供。
[0113] (2)MT_4細胞：由比利時Leuven大學Rega研究院微生物與免疫學研究所提供。
[0114] (3)MTT:購自美國 Sigma 公司。
[0115] (4)樣品處理:樣品臨用前溶于DMS0配成適當濃度，并用雙蒸水作5倍稀釋，各5個 稀釋度。
[0116] (5)陽性對照藥：Nevirapine(NVP)、Efavirenz(EFV)、Delavirdine(DLV)、 Etravirine(ETV)〇
[0117] (6)測試方法:樣品稀釋后加入到HIV感染MT-4細胞懸濁液中，經過一段時間后用 MTT比色法測定細胞活力，于酶標儀中，在590nm下記錄吸光度(A)值，計算出EC5〇、CC5q以及 SI〇
[0118] (7 )MTT染色法:加入樣品培養一段時間后，再向每孔加入MTT溶液(5mg/mL) 20yL， 繼續培養若干小時，棄染色液，并向每孔加入150yL DMSO，充分混合，于酶標儀中，在590nm 下記錄吸光度。
[0119] 具體操作如下：將化合物用DMS0或水溶解后用磷酸鹽緩沖液稀釋，將3X105MT_4 細胞與1 〇〇yL不同濃度的化合物溶液在37 °C共同預孵育lh。然后向該混合物中加入1 OOyL適 當濃度的病毒稀釋液，將細胞于37°C孵育lh。洗滌三次后，將細胞再次分別懸浮于含有或不 含化合物的培養基質中。接著將細胞在5%C0 2環境中，于37°C下再孵育7天，并于感染后的 第三天用含有或不含化合物的培養基質補充原培養液。每種培養條件都重復操作兩次。對 病毒的細胞病變作用每天都用反向光學顯微鏡監控。一般來講，本實驗中所用的病毒稀釋 液常常會在病毒感染后第五天發生細胞病變。藥物抑制濃度以藥物對病毒致細胞病變作用 產生50%抑制作用而同時對細胞無直接毒性的濃度(EC 5Q)表示。值得強調的是，當化合物水 溶性較差，需要用DMS0才能溶解時，DMS0體積比濃度相對于水來講，一般會低于10 % (DMS0 在MT-4細胞培養介質中最終濃度小于2 % )。因為DMS0能影響測試化合物抗病毒活性，對含 有相同濃度DMS0溶液的抗病毒活性對比空白實驗也應該平行操作進行。另外，DMS0最終濃 度（1/1000)遠遠低于影響HIV-1在MT-4細胞中復制所需濃度。
[0120]目標化合物的體外抗HIV-l(IIIB)及HIV-1雙突變RES056耐藥株活性篩選數據由 比利時Leuven大學Rega研究院微生物與免疫學研究所提供，所有的活性數據都經過至少兩 次獨立、平行的實驗測得，結果見表1，2，3。
[0122] 表1化合物抗野生型HIV-1 (IIIB)及雙突變株(F227L/V106A，RES056)的細胞活性 和毒性
[0125] a:半數有效濃度;b:野生型HIV-1毒株;°:雙突變HIV-1毒株; d:半數致死濃度.
[0126] 表2 化合物抗HIV-1 單突變株(L100I，K103N，Y181C，Y188L，E138K)的細胞活性
[0129] a:同表1;6:單突變型HIV-1毒株.
[0130] 表3 化合物抗野生型HIV-l(IIIB)及多種單（L100I，K103N，Y181C，Y188L，E138K) 或雙(F227L/V106A，RES056)突變株的選擇指數(SI)
[0133] b'c'e:同表l;f:治療指數。
[0134] 實施例26:抗逆轉錄酶活性測試實驗
[0135] 本實驗采用色度法逆轉錄酶活性測定實驗，所使用試劑盒Re verse Transcriptase Assay,colorimetric Version 13.0購自羅氏公司，陽性對照藥物選用奈 韋拉平和依曲偉林。（參見① Hofman，A ? D ? &Banapour，B ? &Levy，J ? A ? (1985) Viro logy 147， 326-335?②Ukkonen，P.et al?(1988)Eur.J.Cl in.Microbiol.&Infect.Dis?7，518-523?)
[0136] 測試原理
[0137]色度法逆轉錄酶活性測定使用模板/引物聚合物poly (A) X ol igo (dT)作為起始原 料，并用地高辛和生物素標記的核苷酸代替用放射性同位素[3H]_或[32P]_標記的核苷酸， 這些是此方法的優勢之處。所合成出的DNA是測定逆轉錄酶活性的重要參數，檢測和定量 DNA使用了以下三明治式的ELISA測定方法:生物素標記的DNA能夠與包被了抗生物素鏈霉 菌素的微版模塊(MP)的表面進行結合。在接下來的一步中，聚合了過氧化物酶的地高辛抗 體需要結合到地高辛標記的DNA上。最終，加入過氧化物酶的底物2，2-聯氮-二(3-乙基-苯 并噻唑-6-磺酸)二銨鹽(ABTS )，使它們在酶的催化作用下分解，產生帶有明顯顏色的產物。 通過酶標儀測定載有樣品的微板吸光度，此吸光度值與逆轉錄酶的活性呈現直接的關聯， 通過公式計算可得到化合物對逆轉錄酶的抑制濃度。
[0138] 測試方法
[0139] (1)首先配置各種工作溶液，并將樣品用適量二甲基亞砜(DMS0)溶解，并用裂解緩 沖液稀釋成5個濃度梯度。在各個不同的反應管中，將4-6ng重組HIV-1-RT用裂解緩沖液(20 yL/well)稀釋。同時，準備只有裂解緩沖液而沒有RT的陰性對照組。然后每個反應罐加入20 此含有不同濃度所測試樣品的緩沖溶液以及20此反應物混合液，在37攝氏度下孵育一個小 時。
[0140] (2)準備足夠的微版模塊，按照方向牢固地安裝在框架內。將孵育好的樣品(60此） 轉移到微板的孔中，用薄膜覆蓋好后第二次37攝氏度孵育一小時。
[0141] 將溶液移除，每孔用洗液仔細地沖洗5遍，每遍用250此，保留30秒。每孔加入200yL 抗地高辛-過氧化物酶聚合物，將微板用薄膜覆蓋好后第三次在37攝氏度下孵育一小時。
[0142] (3)將溶液移除，每孔用洗液仔細地沖洗5遍，每遍用250yL，保留30秒。每孔加入 200yL ABTS溶液，在15-25攝氏度下孵育，直到綠顏色出現并足夠通過光度檢測(一般為10-30分鐘）。
[0143] (4)用酶標儀測定載有樣品在波長405nm處的吸光度值，通過以下公式計算可得化 合物對逆轉錄酶的抑制濃度。
[0144] 抑制率％ =(陽性對照熒光強度-樣品熒光強度)/(陽性對照熒光強度-背景熒光 強度）X 100%進行線性回歸，將抑制率帶入線性方程，求得的濃度C既是IC5Q，單位是(yg/ mL)，再根據化合物分子量轉化為yM，此實驗選取了 一個細胞活性最好的代表性化合物，以 及陽性對照藥奈韋拉平(NVP)和依曲韋林(ETV)，實驗結果見表4。
[0145] 表4代表化合物對HIV-1逆轉錄酶抑制活性
[0147]上述實驗結果表明：具有本發明通式I的化合物是一類具有新型結構骨架的HIV-1 抑制劑，如上表1所示，所有系列IVa的化合物都具有顯著的的抗野生型HIV-1作用，EC5Q值范 圍為0.62yM到0.006yM。并且大部分化合物對多種單突變株也顯示出了良好的抑制活性，如 變異病毒株L100I、K103N、Y181C、E138K。化合物1-2和1-12抑制活性較突出，對野生型HIV-1 的EC 5〇值分別為0.006yM和0.009yM，SI為1005和1476，優于上市藥物NVP和DLV，與上市藥物 EFV、ETV及先導化合物EFF屬于同一數量級。1-2和1-12對L100I、K103N、Y181C、E138K和 F227L/V106A等單或雙突變株都保持亞微摩爾以上的活性，普遍優于上市藥物NVP和DLV。而 對于某些單突變病毒株如L100I和K103N，I-2的抑制作用略強于上市藥物EFV，且與先導化 合物EFF處于同一水平。特別強調的是，對吲哚芳砜類化合物非常敏感的Y188L突變病毒株， 1-12的EC 5Q值為0.84yM，優于先導化合物EFF(EC5Q=1.3yM)，取得了意想不到的效果。此外， 1-14對臨床最嚴重的雙突變病毒株Y181C/K103N的抑制活性優于上市藥物DLV，與先導EFF 和上市藥物NVP處于同一水平。鑒于本發明所涉及的吲哚芳砜類衍生物結構的新穎性、對野 生型以及多種突變型HIV-1的顯著的抑制活性以及相對某些現有化合物的進步性，因而具 有較大的開發價值。在此基礎上進行新的結構修飾及深入研究有助于獲得更加優異的效 果，并具有發展成為一類全新結構抗HIV新藥的潛力。
【主權項】
1. 嗎I噪芳諷類衍生物或其藥學上可接受的鹽或前藥，其特征在于，具有如下通式I所示 的結構：其中， 嗎I噪5-位的取代基X為面素，C的或n〇2 ; η等于0、1、2或3; 111，訊各自單獨等于1或2; R為（。-6)烷基-R1、（ C3-7)環烷基-R1、（ C2-6)鏈締基-1?1、-(：(0地、-"0)01?1、-5(0)-尺1、- S化-Ri、NH-Ri、苯基、5-或6-元芳雜環、稠合的苯基-不飽和的或飽和的5-或6-元碳環、或稠 合的苯基-5-或6-元芳雜環； 其中R1選自H、OH、SH、畑2、0-(Ci-4)烷基、S-(Ci-4)烷基或NH-(Ci-4)烷基；所述的苯基、5- 或6-元芳雜環、稠合的苯基-不飽和的或飽和的5-或6-元碳環、或稠合的苯基-5-或6-元芳 雜環各自依次任選被1至3個獨立選自下列的取代基所取代：（Ci-6)烷基、面素、CF3、0CF3、0H、 N02、CN、S02畑2、S〇2-(Cl-3)烷基、C(0)畑2、C(0)(Cl-3)烷基、NH(Ci-3)烷基。2. 如權利要求1所述的化合物，其特征在于，通式I中， 嗎I噪5-位的取代基X為C1或化； η等于0或1; m和W同時等于2; R為C出0H、C出COOC出C出、取代的苯基、化晚基、巧喃基、嚷吩基或取代的Ξ挫基。3. 如權利要求1或2所述的化合物，其特征在于為下列結構的化合物之一：4.如權利要求1或2所述的嗎I噪芳諷類衍生物的制備方法，包括如下步驟：W5-位取代 的嗎I噪甲酸乙醋（1)為起始原料，與3,5-二甲基苯硫酪反應制得中間體化合物2,中間體經 間氯過氧苯甲酸氧化得到中間體化合物3，將中間體化合物3的乙醋基水解得到中間體化合 物4，中間體化合物4經過酷化反應并脫去BOC保護基得到母環6，不同的取代基對母環6進行 取代制得嗎I噪芳諷類衍生物I; 合成路線如下：試劑和條件：（i) 3，5-二甲基苯硫酪，1 -氯甲基-4-氣-1，4-二氮雜雙環[2.2.2 ]辛燒二 (四氣棚酸)鹽，乙臘；（ii)間氯過氧苯甲酸，二氯甲燒，〇°C;(iii)氨氧化裡，水，四氨巧喃， 50°C;(iv)Boc保護的含氮環烷基-氨基，2-(7-偶氮苯并Ξ氮挫)-N，N，N'，N'-四甲基脈六氣 憐酸醋，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽，Ξ乙胺，N，N-二甲基甲酯胺；（ν)Ξ 氣乙酸，二氯甲燒；（Vi)碳酸鐘，Ν，Ν-二甲基甲酯胺，面節，面素取代的烷基；（Vi)取代的甲 醒，冰乙酸，氯基棚氨化鋼，四氨巧喃/乙臘. 其中，X、n、m、w、R的定義同權利要求1或2中的通式I所述。5.如權利要求3所述的嗎I噪芳諷類衍生物的制備方法，包括如下步驟：W5-氯/漠取代 的嗎I噪甲酸乙醋（Γ)為起始原料，與3,5-二甲基苯硫酪反應制得中間體化合物2'，中間體 化合物2'經間氯過氧苯甲酸氧化的到中間體化合物3'，氨氧化裡將中間體化合物3'的乙醋 基水解得到中間體化合物4'，中間體化合物4'與l-Boc-4-氨基贓晚或l-Boc-4-(氨甲基)- 贓晚經過酷化反應得到中間體化合物5'，并在Ξ氣乙酸作用下脫去Boc保護基得到母環6'， 不同的取代基對母環6 '進行取代制得嗎I噪芳諷類衍生物I; 合成路線如下：試劑和條件：（i) 3，5-二甲基苯硫酪，1-氯甲基-4-氣-1，4-二氮雜雙環[2.2.2 ]辛燒二 (四氣棚酸)鹽，乙臘；（ii)間氯過氧苯甲酸，二氯甲燒，〇°C;(iii)氨氧化裡，水，四氨巧喃， 50°C;(iv)l-B0C-4-氨基贓晚或l-Boc-4-(氨甲基)-贓晚，2-(7-偶氮苯并Ξ氮挫)-N，N，N'， Ν'-四甲基脈六氣憐酸醋，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽，Ξ乙胺，N，N-二甲 基甲酯胺；（ν)Ξ氣乙酸，二氯甲燒；（Vi)碳酸鐘，N，N-二甲基甲酯胺，面節或面素取代的燒 基；（Vi)取代的甲醒，冰乙酸，氯基棚氨化鋼，四氨巧喃/乙臘； 其中，X為氯或漠，η等于0或1，R為C也細、C也COOC也C也、取代的苯基、化晚基、巧喃基、嚷 吩基或取代的Ξ挫基。6. 如權利要求1-3任一項所述化合物在制備抗HIV藥物中的應用。7. -種抗HIV藥物組合物，包含權利要求1-3任一項所述化合物或其藥學上可接受的鹽 W及一種或多種藥學上可接受載體或賦形劑。
【文檔編號】A61P31/18GK105968095SQ201610305158
【公開日】2016年9月28日
【申請日】2016年5月10日
【發明人】劉新泳, 李瀟, 展鵬
【申請人】山東大學