一種碳酸酯類光敏試劑及其制備方法、5`-光敏保護核苷的制備方法
【專利摘要】本發明涉及一種碳酸酯類光敏試劑及其制備方法、5'?光敏保護核苷的制備方法。碳酸酯類光敏試劑，其結構式為：其中X為-OX’、咪唑基、取代咪唑基；5'-光敏保護核苷的制備方法步驟包括將2’-脫氧核苷與2-鄰硝基苯-1-丙基碳酸酯類光敏試劑和三乙胺得5'-光敏保護核苷粗產物、粗產物提純得到5'-光敏保護核苷。本發明5'-光敏保護核苷制備方法選擇性平均提高了3.4倍，減化了提純過程，提高了產率，大大降低了生產成本，同時避免了使用劇毒的雙光氣。
【專利說明】
一種碳酸酯類光敏試劑及其制備方法、5光敏保護核苷的制 備方法
技術領域
[0001] 本發明屬于有機合成技術領域，具體涉及一種碳酸酯類光敏試劑及其制備方法、 5 光敏保護核苷的制備方法。
【背景技術】
[0002] 基因芯片技術是利用核酸分子雜交原理與微電子技術相結合而形成的一種高新 生物技術。可廣泛應用于疾病診斷、藥物篩選、生物科學研究，農作物的優選優育、司法鑒 定、食品衛生監督、環境檢測等許多領域。由于原位光刻技術可制備高密度寡核苷酸基因芯 片，目前，以原位光刻技術為基礎的基因芯片被廣泛采用，5 光敏保護核苷及其衍生物5 ' -光敏亞磷酰胺單體是制備該類基因芯片的關鍵原料之一。但是，現有制備5'-光敏保護核苷 的方法(如下所示）中，
[0004]有二個共同的難題：（1)、在引入5'-光敏基團時，由于使用的是酰氯類光敏試劑， 反應缺乏足夠的選擇性，特別是大規模反應，酰氯類光敏試劑的選擇反應條件較難控制，在 生成5'_光敏保護核苷（5'-Photolabile dN)的同時，有相當量的副產物3'-光敏保護核苷 (3'_Photolabile dN)和3'，5'_雙光敏保護核苷（3'，5'_diPhotolabile dN)生成，根據堿 基不同，生成的主產物5'-光敏保護核苷與副產物(3'_光敏保護核苷和3'，5'_雙光敏保護 核苷等）的比例一般為5 :1 至2:1 (參考文獻：Sigrid Buhler，Irene Lago ja等，Helvetica Chimica Acta，2004，v87(3)，620-659)。由于3'-光敏保護核苷與5'-光敏保護核苷分離性 質很相近，使分離5'-光敏保護核苷與3'-光敏保護核苷相當困難。即使分離，由于兩者易 相互交叉，導致5光敏保護核苷產物損失較大，產率偏低。因此，尋找對伯（1°)醇和仲(2°) 醇具有高度選擇性的試劑，提高反應的選擇性非常重要(參考文獻:Abbas-Alli G. Shaikh， Chem Review ,1996, v96,951-976) ; (2)、在制備酰氯類光敏試劑時必須使用雙光氣 (diphosgene)(參考文獻：Woffgang Pfleiderer&Heiner Giegrich，1998，美國專利， US5763599)，雙光氣毒性很大，操作起來很不方便，并且嚴重污染環境，在生產中應盡可能 避免使用。
【發明內容】
[0005] 針對現有技術的不足，本發明提供一種碳酸酯類光敏試劑及其制備方法、5'-光敏 保護核苷的制備方法，本發明合成一種新的碳酸酯類光敏試劑，其與對伯（1°)醇和仲(2°) 醇具有高度反應選擇性，將光敏基團選擇性引入核苷的5'-位，使得5'-光敏保護核苷的產 率大幅提尚。
[0006] 本發明采用的技術方案是：
[0007] 一種碳酸酯類光敏試劑，其結構式為：
[0009] 其中X為-0X'、咪唑基、取代咪唑基，所述取代咪唑基為2-甲基咪唑基、1，2,4_三氮 P坐基;-0X'中X'為對硝基苯基(4-nitrophenyl)，五氟苯基(pentafluorophenyl) ,2-吡啶基 (2-pyridyl)，和琥泊酰亞胺基(succinimidyl)。
[0010] -種碳酸酯類光敏試劑的制備方法，步驟包括：
[0011] A、將2-鄰硝基苯-1-丙醇溶于有機溶劑中，加入碳酸二酯類試劑或羰基二唑類試 劑，再加入三乙胺，室溫下攪拌反應6-10h;
[0012] B、將反應后的溶液先后用水和飽和氯化鈉水溶液萃取，保留有機溶液層，有機溶 液用無水硫酸鈉干燥后，過濾，濾液蒸干，真空干燥，得2-鄰硝基苯-1-丙基碳酸酯類光敏試 劑。
[0013] 所述步驟A中有機溶劑選自二氯甲烷，三氯甲烷，乙酸乙酯、甲苯中的一種；
[0014] 所述步驟A中2-鄰硝基苯-1-丙醇、碳酸二酯類試劑或羰基二唑類試劑、三乙胺在 有機溶劑中的濃度分別為 〇 ? 40-0 ? 65mol/L、0 ? 50-0 ? 75mol/L、0 ? 40-0 ? 65mol/L。
[0015] 所述步驟A碳酸二酯類試劑選自雙（對硝基苯)碳酸酯、雙（五氟苯)碳酸酯、碳酸 二-2-吡啶酯、N，N' -琥珀酰亞胺基碳酸酯中的一種;羰基二唑類試劑選自N ' N-羰基二咪唑、 N'N-羰基二(2-甲基咪唑），N'N-羰基二（1，2，4-三氮唑）中的一種；
[0016] 所述步驟A室溫溫度為10-3(TC。
[0017] -種5 光敏保護核苷的制備方法，步驟包括：
[0018] a、將干燥的2 脫氧核苷溶于無水吡啶和二氯甲烷的混合溶劑中，冷卻至-3°C-3 °C，依次加入2-鄰硝基苯-1-丙基碳酸酯類光敏試劑和三乙胺，在室溫下攪拌反應14_22h， 減壓蒸去反應溶劑，得5'-(2_鄰硝基苯-1-丙基碳酸酯)-2'_脫氧核苷粗產物，即5'-光敏保 護核苷粗產物；
[0019] b、將5'-光敏保護核苷粗產物用乙酸乙酯和碳酸氫鈉水溶液的混合液萃取，保留 乙酸乙酯層，乙酸乙酯層先后用水和飽和氯化鈉水溶液洗滌，然后乙酸乙酯層用無水硫酸 鈉干燥，過濾，濾液蒸干，將蒸干后的產物用硅膠柱層析提純，以二氯甲烷/甲醇為洗脫溶 劑，收集產物組分，濃縮得5'_(2_鄰硝基苯-1-丙基碳酸酯)-2'_脫氧核苷即5'-光敏保護核 苷。
[0020]所述步驟a中2 脫氧核苷選自2 脫氧胸苷、2 脫氧尿苷，N-乙酰基-2 脫氧胞 苷、N-苯甲酰基-2'-脫氧腺苷、N-異丁酰基-2'-脫氧鳥苷中的一種；
[0021]所述步驟a中2'-脫氧核苷、2-鄰硝基苯-1-丙基碳酸酯類光敏試劑和三乙胺在無 水吡啶和二氯甲烷的混合溶劑中的濃度分別為0.25-0.35mol/L、0.29-0.39mol/L、0.26-0?36mol/L。
[0022] 所述步驟a中無水吡啶與二氯甲烷的體積比為4-6:1;
[0023] 所述步驟a中室溫溫度為10_30°C;
[0024]所述步驟b中乙酸乙酯和碳酸氫鈉水溶液體積比為1-2:1;碳酸氫鈉水溶液質量百 分濃度為3-5 %;
[0025] 所述步驟b中洗脫溶劑中二氯甲烷與甲醇體積比為20-50:1。
[0026] 5'-光敏保護核苷的制備方法的反應原理如下：
[0028] 在式中，BR為胸腺嘧啶（Thymine，簡稱T)、N4_乙酰胞嘧啶(N 4_Acetyl Cytosine,簡 稱Ac-C)，N6-苯甲酰基腺嘌呤(N6-Benzoyl-Adenine，簡稱Bz-A)，和N2-異丁酰基鳥嘌呤(N 2-ibu-Guanine,簡稱ibu-G)等。由于5'-(2-鄰硝基苯-1-丙基碳酸酯）中與鄰硝基苯相連的碳 原子具有手性，所得5'-光敏保護核苷產物應為比例約為1:1的二個非對映異構體的混合 物，在對產物1H HMR和HPLC分析中，可清晰地觀察到二個非對映異構體的存在。
[0029]本發明使用對伯（1°)醇和仲(2°)醇具有高度反應選擇性的碳酸酯類光敏試劑，選 擇性地與脫氧核苷或堿基保護的脫氧核苷中的伯（1°)醇5'-OH反應，選擇性生成5'-光敏 保護核苷，將生成所需產物(5'_光敏保護核苷)與副產物(3'_光敏保護核苷和3'，5'_雙光 敏保護核苷)的比例從5:1至2:1(平均為3.5:1)提高到14:1至10:1(平均為12:1)，選擇性平 均提高了3.4倍，減化了提純過程，提高了產率，大大降低了生產成本，同時避免了使用劇毒 的雙光氣，為制備廣泛用于基因芯片技術的5'-光敏保護核苷及其衍生物提供了一種高效 實用的新工藝方法，具有很高的應用價值。
【具體實施方式】
[0030] 實施例1:
[0031] 5'-NPP0C_dT(互)的制備
[0032] la.光敏試劑的制備反應步驟：
[0034]室溫25°C，在反應容器中，將2-鄰硝基苯-1-丙醇丄[2-(2-11；[1：1'(^1161171)口1'(^311-1-01，54.4g，0.30mol ]溶于二氯甲燒（544ml)中，加入雙（對硝基苯）碳酸酯蘭[1318(4-nitrophenyl) carbonate，0 ? 33mol ]，再加入三乙胺(0 ? 303mol);室溫攪拌反應體系，6小時 后，HPLC表明反應完全，停止反應，反應溶液先后用水(2x 300ml，表示用300ml水萃取后，再 用300ml水萃取一次，共萃取2次)和飽和氯化鈉水溶液(300ml)萃取，保留有機(二氯甲燒） 層，二氯甲烷層用無水硫酸鈉干燥后，過濾，濾液蒸干，真空干燥，得對硝基苯碳酸(2-鄰硝 基苯)_1_丙酯g，87.3g，HPLC純度為96%，產率為84%。
[0035] lb.選擇偶聯反應步驟：
[0037] 將干燥的2'-脫氧胸苷！(Thymidine，0? 20mol)溶于無水吡啶（485ml)和二氯甲燒 (97ml)中，冷卻，在0°C先后依次加入硝基苯碳酸（2-鄰硝基苯)-1_丙酯}(0.224m〇l)和三 乙胺（0.204mol)，加畢，在室溫25°C攪拌反應體系，14小時后，HPLC表明反應完全，停止反 應，減壓蒸去反應溶劑，得5'-[對硝基苯碳酸(2-鄰硝基苯)-1_丙基碳酸酯]-2'-脫氧胸苷互 (5 ' -NPPOC-dT)反應粗產物。此時，HPLC表明產物(5 ' -光敏保護核苷）與副產物(3 ' -光敏保 護核苷和3 '，5 雙光敏保護核苷)的比例為14:1。
[0038] lc、提純步驟：
[0039] 將上述5 ' -NPPOC-dT反應粗產物用乙酸乙酯（500ml)和3 %碳酸氫鈉水溶液 (300ml)萃取，保留乙酸乙酯層，乙酸乙酯層先后用水(300ml)和飽和氯化鈉水溶液(300ml) 洗滌，然后乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液蒸干，得5 ' -NPPOC-dT粗產物。5 ' -NPP0C-dT粗產物用硅膠柱層析提純，以二氯甲烷/甲醇為洗脫溶劑，收集產物組分，濃縮得 5'-(2-鄰硝基苯-1-丙基碳酸酯）-2'_脫氧胸苷5'-NPPOC-dT)，73.7g，HPLC純度為 98.3%，產率為82%。5 ' -(2-鄰硝基苯-1-丙基碳酸酯）-2 ' -脫氧胸苷g5 ' -NPPOC-dT)的化 學結構通過1H NMR和LC-MS(M+)證實。
[0040] 5 ' -(2-鄰硝基苯-1-丙基碳酸酯）-2 ' -脫氧胸苷g(5 ' -NPPOC-dT): 4 NMR(CDC13， 4001抱）5化口111)8.65(8，順，非對映異構體），8.63(8，順，非對映異構體），7.76(111，1-厶廣11，11-NPP0C)，7 ? 57(t，1-Ar-H，H-NPP0C)，7 ? 40(m，2Ar-H，H-NPP0C)，7 ? 31 (s，H-6，非對映異構體）， 7.28(8，11-6，非對映異構體），6.33(^-1'，非對映異構體），6.29(^-1'，非對映異構體）， 4.31-3.87(m，6H，H-3'，H-4'，2H-5'，NPP0C的-CH2)，3.76(m，lH，NPP0(^9-CH)，2.61-2.58 (dd，lH，3'-OH),2.39-2.18(m，2H，H-2'），1.85,1.74(2s，3H，5-CH3)，l.38,1.35(2d，3H， NPP0C的-CH3); LC-MS: m/z f or (M+H) +，計算值C2QH24N3O9，450 ? 41 ?;實測值450 ? 4。
[0041 ] 實施例2:
[0042] 5'-NPP0C-N-Ac-dC(竺)的制備 [0043] 2a.光敏試劑的制備反應步驟：
[0045]室溫20<€下，在反應容器中，將2-鄰硝基苯-1-丙醇1[2-(2-11；[1：1'(^116117141'(^&11-1-01，0.30mol]溶于三氯甲燒（544ml)中，加入雙（五氟苯）碳酸酯蘭[Bis (pentaf luorophenyl )carbonateO ? 33mol ]，再加入三乙胺（0 ? 303mol)。室溫攪拌反應體系， 9小時后，HPLC表明反應完全，停止反應，反應溶液先后用水(2x 300ml)和飽和氯化鈉水溶 液(300ml)萃取，保留有機(三氯甲烷)層;三氯甲烷層用無水硫酸鈉干燥后，過濾，蒸干，真 空干燥，得五氟苯碳酸(2-鄰硝基苯)-1_丙酯^，95.1 8，即^：純度為97%，產率為81%。
[0046] 2b ?選擇偶聯反應步驟：
[0048] 將干燥的N-乙酰基-2'-脫氧胞苷g(N-Ac-dC，0.20mol)溶于無水吡啶（540ml)和二 氯甲烷（108ml)中，冷卻，在0°C先后依次加入五氟苯碳酸（2-鄰硝基苯）-1_丙酯Z (0.224mol)和三乙胺(0.204mol)，加畢，在室溫20°C攪拌反應體系，18小時后，HPLC表明反 應完全，停止反應，減壓蒸去反應溶劑，得5 ' - (2-鄰硝基苯-1-丙基碳酸酯)-N-乙酰基-2 ' -脫氧胞苷&(5 ' -NPPOC-N-Ac-dC)反應粗產物。此時，HPLC表明產物(5 ' -光敏保護核苷）與副 產物(3 光敏保護核苷和3 '，5 雙光敏保護核苷)的比例為12:1。
[0049] 2c.提純步驟：
[0050] 將上述5'-即?0(：-^4(3-(1(：反應粗產物用乙酸乙酯（50〇1111)和和3%碳酸氫鈉水溶 液（300ml)萃取，保留乙酸乙酯層，乙酸乙酯層先后用水（300ml)和飽和氯化鈉水溶液 (300ml)洗滌，然后乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液蒸干，得5 ' -NPPOC-N-Ac-dC粗 產物。5 ' -NPPOC-N-Ac-dC粗產物用硅膠柱層析提純，以二氯甲烷/甲醇為洗脫溶液，收集產 物組分，濃縮得5 ' -(2-鄰硝基苯-1-丙基碳酸酯）-N-乙酰基-2 ' -脫氧胞苷^(5'-即?0(：，-Ac-dC)，75.3g，HPLC純度為98.1 %，產率為79 %。5 ' -(2-鄰硝基苯-1-丙基碳酸酯)-N-乙酰 基-2' _脫氧胞苷&(5' -NPPOC-N-Ac-dC)的化學結構通過1H NMR和LC-MS(M+)證實。
[0051 ] 5 ' - (2-鄰硝基苯-1-丙基碳酸酯）-N-乙酰基-2 脫氧胞苷&(5 ' -NPPOC-N-Ac-dC) :咕 NMR(CDCl3,400MHz)S(ppm)8.92(br，乙酰基-NH,非對映異構體），8.89(br,乙酰基-NH, 非對映異構體），7.92((1，11-6，非對映異構體），7.89((1，11-6，非對映異構體），7.74(111，1-八廣 H，H-NPPOC)，7 ? 55(t，1 -Ar-H，H-NPPOC)，7 ? 38(m，2Ar-H，H-NPPOC)，7 ? 29(d，H-5，非對映異構 體），7.26((1，11-5非對映異構體），6.24(^-1'，非對映異構體），6.19(^-1'，非對映異構 體），4.32-3.89(m，6H，H-3'，H-4'，2H-5'，NPP0C的-CH2)，3.75(m，lH，NPP0(^9-CH)，2.62-2.59(dd，lH，3，-OH)，2.38-2.17(m，2H，H-2，），2.14,2.11(2s，3H，CH3C = 0)，l .40,1.37(2(1， 3H，NPPOC的-CH3); LC-MS:m/z for(M+H) +，計算值C21H25N4O9，477 ? 44 ?;實測值477 ? 5。
[0052] 實施例3:
[0053] 5'-NPP0C-N-Bz-dA(p)的制備 [0054] 3a.光敏試劑的制備反應步驟：
[0056] 室溫25°C下，在反應容器中，將2-鄰硝基苯-1-丙醇1[2-(2-11；[1：1'(^116117141'(^已11- 1-01，0 ? 30mol ]溶于乙酸乙酯（ 540ml )中，加入N 'N-羰基二咪唑1_^(1，1/-Carbonyldiimidazole，0 ? 33mol)，再加入三乙胺(0 ? 303mol)。室溫攪拌反應體系，7小時后， HPLC表明反應完全，停止反應，反應溶液先后用水(2x 300ml)和飽和氯化鈉水溶液(300ml) 萃取，保留有機（乙酸乙酯）層；乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥后，過濾，蒸干，真空干燥，得 N-咪唑碳酸(2-鄰硝基苯)-1 -丙酯U，69.4g，HPLC純度為96 %，產率為84 %。
[0057] 3b.選擇偶聯反應步驟：
[0059] 將干燥的N-苯甲酰基-2 ' -脫氧腺苷B(N-BZ-dA，71. lg，0.20mol)溶于無水吡啶 (710ml)和二氯甲烷（142ml)中，冷卻，在0°C先后依次加入N-咪唑碳酸（2-鄰硝基苯)-1_丙 酯U (0.224mol)和三乙胺(0.204mol)，加畢，在室溫25°C攪拌反應體系，16小時后，HPLC表 明反應完全，停止反應，減壓蒸去反應溶劑，得5 '-(2-鄰硝基苯-1-丙基碳酸酯)-N-苯甲酰 基-2 ' -脫氧腺苷5 ' -NPPOC-N-Bz-dA)反應粗產物。此時，HPLC表明產物(5 ' -光敏保護核 苷)與副產物(3 光敏保護核苷和3 '，5 雙光敏保護核苷)的比例為11:1。
[0060] 3c ?提純步驟：
[0061 ] 將上述5'-即?0(：-182-(^反應粗產物用乙酸乙酯（60〇1111)和和3%碳酸氫鈉水溶 液（400ml)萃取，保留乙酸乙酯層，乙酸乙酯層先后用水（400ml)和飽和氯化鈉水溶液 (400ml)洗滌，然后乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液蒸干，得5 ' -NPPOC-N-Bz-dA粗 產物。5 ' -NPPOC-N-Bz-dA粗產物用硅膠柱層析提純，以二氯甲烷/甲醇為洗脫溶劑，收集產 物組分，濃縮得5 ' -(2-鄰硝基苯-1-丙基碳酸酯)-N-苯甲酰基-2 ' -脫氧腺苷以(5'-即?0(：-N-Bz-dA)，90. lg，HPLC純度為98.2%，產率為80%。5 ' -(2-鄰硝基苯-1-丙基碳酸酯)-N-苯 甲酰基-2' -脫氧腺苷巧(5' -NPPOC-N-Bz-dA)的化學結構通過1H NMR和LC-MS(M+)證實。 [0062] 5 ' -(2-鄰硝基苯-1-丙基碳酸酯)-N-苯甲酰基-2 ' -脫氧腺苷以(5'-陬?0(：，-82- dA):咕 NMR(CDCl3,400MHz)S(ppm)9.29(br，苯甲酰基-NH,非對映異構體），9.25(br,苯甲 酰基-NH，非對映異構體），8.61 (s，H-2，非對映異構體），8.58(s，H-2，非對映異構體），8.19 (s，H-8，非對映異構體），8.16(s，H-8，非對映異構體），7.86(m，2H，苯甲酰基的Ar-H)，7.75 (m，1-Ar-H，H-NPP0C)，7 ? 56(t，1-Ar-H，H-NPP0C)，7 ? 45-7 ? 44(m，3H，苯甲酰基的Ar-H)，7 ? 37 (m，2Ar-H，H-NPP0C)，6.35(t，H-r，非對映異構體），6.31 (t，H-r，非對映異構體），4.31_ 3?88(m，6H，H-3 '，H-4 '，2H-5 '，NPPOC的-CH2)，3?74(m，1H，NPPOC的-CH)，2?83-2?80(dd，1H， 3'-OH),2.39-2.17(m，2H，H-2'），1.41，1.38(2d，3H，NPP0C的-CH3);LC-MS:m/z for(M+H)+， 計算值 C27H27N6〇8，563 ? 53 ?;實測值563 ? 5。
[0063] 實施例4:
[0064] 5'-NPP0C_dT(互)的制備 [0065] 4a.光敏試劑的制備反應步驟：
[0067] 室溫26°C下，在反應容器中，將2-鄰硝基苯-1-丙醇丄[2-(2-11；[1：1'(^1161171)口1'(^已11-1-01，54 ? 4g，0 ? 30mol ]溶于二氯甲燒（540ml)中，加入碳酸二_2_吡啶酯 14(Di_2-pyridyl carbonate，0.33mol )，再加入三乙胺(0.303mol)。室溫攪拌反應體系，10小時后，HPLC表明 反應完全，停止反應，反應溶液先后用水(2x 300ml)和飽和氯化鈉水溶液(300ml)萃取，保 留有機(二氯甲烷)層;二氯甲烷層用無水硫酸鈉干燥后，過濾，蒸干，真空干燥，得(2-吡啶） 碳酸-2-鄰硝基苯-1-丙酯叢，74 ? 4g，HPLC純度為97 %，產率為82 %。
[0068] 4b.選擇偶聯反應步驟：
[0070] 將干燥的N-異丁酰基-2 ' -脫氧鳥苷遲(N-ibu-dG，0.20mol)溶于無水吡啶(670ml) 和二氯甲烷（134ml)中，冷卻，在0°C先后依次加入（2-吡啶）碳酸-2-鄰硝基苯-1-丙酯也 (0.224mol)和三乙胺(0.204mol)，加畢，在室溫26°C攪拌反應體系，22小時后，HPLC表明反 應完全，停止反應，減壓蒸去反應溶劑，得5'-(2_鄰硝基苯-1-丙基碳酸酯)-N-異丁酰基- 2 ' -脫氧鳥苷5 ' -NPPOC-N-ibu-dG)反應粗產物。此時，HPLC表明產物(5 ' -光敏保護核苷） 與副產物(3 光敏保護核苷和3 '，5 雙光敏保護核苷)的比例為10:1。
[0071] 4c ?提純步驟：
[0072] 將上述5 ' -NPPOC-N-ibu-dG反應粗產物用乙酸乙酯(600ml)和和3 %碳酸氫鈉水溶 液（400ml)萃取，保留乙酸乙酯層，乙酸乙酯層先后用水（400ml)和飽和氯化鈉水溶液 (400ml)洗滌，然后乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液蒸干，得5 ' -NPPOC-N-ibu-dG 粗產物。5 ' -NPPOC-N-ibu-dG粗產物用硅膠柱層析提純，以二氯甲烷/甲醇為洗脫溶劑，收集 產物組分，濃縮得5'-(2-鄰硝基苯-1-丙基碳酸酯）-.異丁酰基-2'-脫氧鳥苷1^(5'_ NPPOC-N-ibu-dG)，82.8g，HPLC純度為98.0%，產率為76%。5 ' -(2-鄰硝基苯-1-丙基碳酸 酯)4-異丁酰基-2'-脫氧鳥苷立(5'-即?0(：4-讓11-(16)的化學結構通過 111匪1?和^：-]^(]\〇 證實。
[0073] 5 ' -(2-鄰硝基苯-1-丙基碳酸酯)-N-異丁酰基-2 ' -脫氧鳥苷立(5 ' -NPP0C-N-ibu- dG): NMR(CDCl3,400MHz)S(ppm)10.25(s，鳥嘌呤-NH,非對映異構體），10.21(s,鳥嘌呤- NH,非對映異構體），9.28(br,異丁酰基-NH,非對映異構體），9.24(br,異丁酰基-NH,非對 映異構體），7.97(8，11-8，非對映異構體），7.94(8，11-8，非對映異構體），7.74(111，14^11-NPP0C)，7.57(t，l-Ar-H，H-NPP0C)，7.38(m，2Ar-H，H-NPP0C)，6.19(t，H-l'，非對映異構 體），6.16(t，H-l'，非對映異構體），4.33-3.90(m，6H，H-3'，H-4'，2H-5'，NPP0C的-CH2)， 3.73(111，111，陬？0(：的-〇1)，2.77-2.74(111，111，異丁酰基的-〇〇,2.61-2.58((1(1，111，3'-〇1〇， 2.39-2.17(m，2H，H-2'），1.42，1.39(2d，3H，NPP0C的-CH3)，1.21，1.18(dd，6H,異丁酰基的-CH3); LC-MS :m/z for(M+H) +,計算值C24H29N6O9，545 ? 51,實測值545 ? 5。
【主權項】
1. 一種5 光敏保護核巧的制備方法，步驟包括： a、 將干燥的2'-脫氧核巧溶于無水化晚和二氯甲燒的混合溶劑中，冷卻至-3°C-3°C，依 次加入2-鄰硝基苯-1-丙基碳酸醋類光敏試劑和Ξ乙胺，在室溫下攬拌反應14-2化，減壓蒸 去反應溶劑，得5 '-(2-鄰硝基苯-1-丙基碳酸醋)-2 ' -脫氧核巧粗產物，即5 ' -光敏保護核巧 粗產物； b、 將5'-光敏保護核巧粗產物用乙酸乙醋和碳酸氨鋼水溶液萃取，保留乙酸乙醋層，乙 酸乙醋層先后用水和飽和氯化鋼水溶液洗涂，然后乙酸乙醋層用無水硫酸鋼干燥，過濾，濾 液蒸干，將蒸干后的產物用硅膠柱層析提純，W二氯甲燒/甲醇為洗脫溶劑，收集產物組分， 濃縮得5 ' -(2-鄰硝基苯-1 -丙基碳酸醋)-2 ' -脫氧核巧即5 ' -光敏保護核巧。2. 如權利要求1所述的制備方法，其特征在于:所述步驟a中2'-脫氧核巧選自2'-脫氧 胸巧、2'-脫氧尿巧，N-乙酷基-2'-脫氧胞巧、N-苯甲酯基-2'-脫氧腺巧、N-異下酷基-2'-脫 氧鳥巧中的一種。3. 如權利要求1所述的制備方法，其特征在于:所述步驟a中2'-脫氧核巧、2-鄰硝基苯- 1-丙基碳酸醋類光敏試劑和Ξ乙胺在無水化晚和二氯甲燒的混合溶劑中的濃度分別為 0.25-0.35mol/L、0.29-0.39mol/L、0.26-0.36mol/L。4. 如權利要求1所述的制備方法，其特征在于:所述步驟a中無水化晚與二氯甲燒的體 積比為4-6:1。5. 如權利要求1所述的制備方法，其特征在于:所述步驟b中乙酸乙醋和碳酸氨鋼水溶 液體積比為1-2:1;碳酸氨鋼水溶液質量百分濃度為3-5%;洗脫溶劑中二氯甲燒與甲醇體 積比為20-50:1。6. 如權利要求1所述的制備方法，其特征在于:所述2-鄰硝基苯-1-丙基碳酸醋類光敏 試劑的結構式為：其中X為-OX'、咪挫基、取代咪挫基;-OX'中X'為對硝基苯基、五氣苯基、2-化晚基、和班 巧酷亞胺基。7. 如權利要求6所述的制備方法，其特征在于： 所述2-鄰硝基苯-1-丙基碳酸醋類光敏試劑的制備步驟包括： A、 將2-鄰硝基苯-1-丙醇溶于有機溶劑中，加入碳酸二醋類試劑或幾基二挫類試劑，再 加入Ξ乙胺，室溫下攬拌反應6-lOh; B、 將反應后的溶液先后用水和飽和氯化鋼水溶液萃取，保留有機溶液層，有機溶液用 無水硫酸鋼干燥后，過濾，濾液蒸干，真空干燥，得2-鄰硝基苯-1-丙基碳酸醋類光敏試劑。8. 如權利要求7所述的制備方法，其特征在于:所述步驟A中有機溶劑選自二氯甲燒，Ξ 氯甲燒，乙酸乙醋或甲苯中的一種。9. 如權利要求7所述的制備方法，其特征在于:所述步驟A中2-鄰硝基苯-1-丙醇、碳酸 二醋類試劑或幾基二挫類試劑、Ξ乙胺在有機溶劑中的濃度分別為0.40-0.65111〇1/1、0.50- 0.75mol/L、0.4〇-〇.65mol/L。10.如權利要求7所述的制備方法，其特征在于:所述步驟A碳酸二醋類試劑選自雙(對 硝基苯)碳酸醋、雙(五氣苯)碳酸醋、碳酸二-2-化晚醋、N，N'-班巧酷亞胺基碳酸醋中的一 種;幾基二挫類試劑選自N'N-幾基二咪挫、N' N-幾基二(2-甲基咪挫），N' N-幾基二（1，2，4- Ξ氮挫）中的一種。
【文檔編號】C07C205/43GK105968016SQ201610325613
【公開日】2016年9月28日
【申請日】2015年2月12日
【發明人】石平, 林金來
【申請人】石平, 林金來