一種利用微波提取灰樹花多糖的方法
【專利摘要】本發明涉及一種利用微波提取灰樹花多糖的方法，其方法如下：（1）灰樹花子實體預處理，（2）索氏提取脫脂，（3）配液，（4）微波浸提，（5）醇沉，（6）離心，（7）凍干，（8）精制；本發明可高效釋放灰樹花中多糖的成分，從而提高多糖的提取率和加工效率。
【專利說明】
一種利用微波提取灰樹花多糖的方法
技術領域
[0001] 本發明涉及一種利用微波提取灰樹花多糖的方法，屬于灰樹花多糖提取技術領 域。
【背景技術】
[0002] 灰樹花(拉丁名：Griflola frondosa)，是擔子菌亞門，層菌綱，無隔擔子菌亞 綱，非裙菌目，多孔菌屬中的一種大型真菌，又名貝葉多孔菌(polyporus frondosus)、栗子 蘑、佛菌以及重燕等，日本稱之為舞蘑(maitake)，主要分布在亞熱帶至溫帶森林中，外觀 灰白色，其子實體中富含氨基酸、多糖以及微量元素等在內的多種營養成份。
[0003] 灰樹花多糖（Polysaccharides of Grifola frondosa，PGF)是灰樹花眾多生 物活性物質中最主要的一類活性成分，它系從灰樹花的子實體或菌絲體與發酵液中分離得 到的一類富含β-1，6_及β-1，3_糖苷鍵的真菌多糖。研究表明，灰樹花多糖具有非常廣 泛的生物學活性，在抗腫瘤、降血糖、抗肝炎、抗HIV(艾滋病病毒）以及改善免疫系統功能 等方面均有很好的作用;為此，人們對灰樹花多糖的研究興趣愈來愈濃，不斷有關于其生物 活性及藥理功能的動物實驗和臨床研究報道產生，眾多科研工作者也都積極投入到其制 備、結構分析、構效關系及生物活性等相關性質的研究中去，使灰樹花多糖的相關性質研究 已成為當前該領域的研究熱點之一。多糖是由許多單糖分子經過糖苷鍵結合的一類具有較 高營養價值和生物活性的天然混合物，具有特殊的藥理活性。
[0004] 現有技術中灰樹花多糖的提取方法有喊提法、酸提法、鹽提法和熱水浸提法等，如 何提尚從灰樹花子實體中多糖的釋放效率是制約多糖提取率的關鍵因素，而在稀酸、稀喊 下易使多糖發生糖苷鍵斷裂，部分多糖水解而減少多糖提取，增加產品中的雜質含量，同時 存在試劑用量大，生產周期長的問題，從而增加加工成本，降低生產效率和商業價值。
[0005] 微波法是指通過微波的熱效應使細胞內極性物質吸收能量產生大量的熱量能使 細胞內壓力升高，細胞破裂，有成分從內部溶出。微波是頻率介于300MHz和300GHz之間的非 電離電磁波，微波提取的原理是微射線輻射于溶劑并透過細胞壁到達細胞內部，由于溶劑 及細胞液吸收微波能細胞內部溫度升高，壓力增大，當壓力超過細胞壁的承受能力時，細 胞壁破裂，位于細胞內部的有效成份從細胞中釋放出來，傳遞轉移到溶劑周圍被溶劑溶解。 微波技術應用于植物細胞破壁，有效地提高了收率。具有穿透力強、選擇性高、加熱效率高 等特點。
【發明內容】
[0006] 本發明的目的是針對現有技術的缺陷，提供一種利用微波提取灰樹花多糖的方 法，可高效釋放灰樹花中多糖的成分，從而提高多糖的提取率和加工效率。
[0007] 本發明是通過如下的技術方案予以實現的： 一種利用微波提取灰樹花多糖的方法，其方法如下： (1)灰樹花子實體預處理：將灰樹花子實體放入烘箱中，控制溫度為45°C±2°C烘干 16h，隨后放入粉碎機粉碎，再經200目篩網過篩制得灰樹花粉末； (2) 脫脂:將灰樹花粉末置于索氏提取器中，加入有機溶劑，控制溫度為150~170°C，進 行索氏提取4h脫除脂肪，隨后趁熱抽濾，收集提取液和殘渣，殘渣于45°C±2°C下烘干2h; (3) 配液:取步驟(2)所得提取液和殘渣配成料液，殘渣的質量和提取液的體積比為1: 20(g/ml)，并浸泡60min; (4) 微波浸提：將料液于功率480W或560W的微波下提取3min或4min或5min或7min或 9min或1 Omin或12min，并重復提取4次； (5) 醇沉:將經步驟(4)的料液于水浴上蒸干進行濃縮，濃縮至原體積的三分之一得濃 縮液，隨后邊攪拌邊緩慢加入乙醇，使濃縮液與乙醇混合均勻，所述濃縮液與乙醇的體積比 為1:4，再于4 °C下靜置12h進行沉析； (6) 離心:取經步驟(5)后的料液在4000~5000r/min的轉速下離心15~20min，并收集沉 淀； (7) 凍干:將步驟6)所得沉淀置于冷凍干燥機中凍干成粉，制得灰樹花多糖； (8) 精制:將灰樹花多糖加入石油醚和丙酮，在140~160°C下進行回流處理2h，隨后趁熱 抽提，取抽提沉淀物于45°C ±2°C烘干40~60min，隨后利用Sevage法去除蛋白質，再于冷凍 干燥機中凍干成粉，得到精制的灰樹花多糖。
[0008] 上述一種利用微波提取灰樹花多糖的方法，其中，所述有機溶劑為乙酸乙酯或丙 酮。
[0009] 上述一種利用微波提取灰樹花多糖的方法，其中，所述灰樹花粉末的質量與有機 溶劑的體積比為1: (10~12)(g/ml)。
[0010] 上述一種利用微波提取灰樹花多糖的方法，其中，步驟（5)中攪拌速率為120~ 200r/min〇
[0011] 上述一種利用微波提取灰樹花多糖的方法，其中，所述冷凍干燥機的溫度為-10~ 1〇°(：，真空度為1.5~13?&。
[0012] 上述一種利用微波提取灰樹花多糖的方法，其中，所述灰樹花多糖的質量與石油 醚和丙酮的體積比為1:6:4(g/ml/ml)。
[0013] 本發明的有益效果為： 本發明不采用任何酸堿試劑，可有效防止多糖發生糖苷鍵斷裂，在灰樹花多糖提取方 法中，目前對其提取技術的相關研究并不多，基本上是傳統的熱水提取技術，采用乙酸乙酯 或丙酮進行索氏提取，可使灰樹花子實體脫脂，便于多糖游離提取，利用微波提取有助于充 分釋放灰樹花子實體中的多糖，以Sevage法去除蛋白質，達到多糖精制效果，提高了多糖 的提取率、節約能耗。
【附圖說明】
[0014] 圖1為表1中微波提取不同時間得到的多糖含量與得率關系圖。
[0015]圖2為表2中微波提取不同時間得到的多糖含量與得率關系圖。
【具體實施方式】
[0016]下面結合附圖對實施例的【具體實施方式】作進一步說明。
[0017] 實施例1: 一種利用微波提取灰樹花多糖的方法，其方法如下： (1) 灰樹花子實體預處理:將灰樹花子實體放入烘箱中，控制溫度為45°C烘干16h，隨后 放入粉碎機粉碎，再經200目篩網過篩制得灰樹花粉末； (2) 脫脂:將灰樹花粉末置于索氏提取器中，加入有機溶劑，控制溫度為160°C，進行索 氏提取4h脫除脂肪，所述有機溶劑為乙酸乙酯，所述灰樹花粉末的質量與乙酸乙酯的體積 比為l:l〇(g/ml)，隨后趁熱抽濾，收集提取液和殘渣，殘渣于45°C下烘干2h; (3) 配液:取步驟(2)所得提取液和殘渣配成料液，料液比即殘渣的質量和提取液的體 積比為1:20(g/ml)，并浸泡50min; (4) 微波浸提:將料液于功率560W的微波下提取3min，并重復提取4次； (5) 醇沉:將經步驟(4)的料液于水浴上蒸干進行濃縮，濃縮至原體積的三分之一得濃 縮液，隨后邊攪拌邊緩慢加入乙醇，攪拌速率為150r/min，使濃縮液與乙醇混合均勻，所述 濃縮液與乙醇的體積比為1:4,再于4°C下靜置12h進行沉析； (6) 離心:取經步驟(5)后的料液在4000r/min的轉速下離心20min，并收集沉淀； (7) 凍干:將步驟6)所得沉淀置于冷凍干燥機中凍干成粉，冷凍干燥機的溫度為-5 °C， 真空度為6pa，制得灰樹花多糖； (8) 精制:將灰樹花多糖加入石油醚和丙酮，在140 °C下進行回流處理2h，灰樹花多糖的 質量與石油醚和丙酮的體積比為l:6:4(g/ml/ml)，隨后趁熱抽提，取抽提沉淀物于45°C烘 干50min，隨后利用Sevage法去除蛋白質：加入氯仿和正丁醇混合液充分震蕩使蛋白質析 出，抽提沉淀物與混合液的體積質量比為1:5,所述氯仿和正丁醇的體積比為4:1，隨后于4 OOOr/min下離心20min去除蛋白乳化層得上清液，再將上清液重復處理2次，隨后于冷凍 干燥機中凍干成粉，冷凍干燥機的溫度為_l〇°C，真空度為4pa，得到精制的灰樹花多糖。 [0018] 將實施例1中微波提取時間改為4min或5min或7min或9min或lOmin或12min，提取 時間與精制的灰樹花多糖的得率和多糖含量關系結果如下表1:
實施例2: 一種利用微波提取灰樹花多糖的方法，其方法如下： (1) 灰樹花子實體預處理:將灰樹花子實體放入烘箱中，控制溫度為46°C烘干16h，隨后 放入粉碎機粉碎，再經200目篩網過篩制得灰樹花粉末； (2) 脫脂:將灰樹花粉末置于索氏提取器中，加入有機溶劑，控制溫度為170°C，進行索 氏提取4h脫除脂肪，所述有機溶劑為丙酮，所述灰樹花粉末的質量與丙酮的體積比為1:11 (g/ml)，隨后趁熱抽濾，收集提取液和殘渣，殘渣于47°C下烘干2h; (3) 配液:取步驟(2)所得提取液和殘渣配成料液，殘渣的質量和提取液的體積比為1: 20(g/ml)，并浸泡60min; (4) 微波浸提:將料液于功率480W的微波下提取3min，并重復提取4次； (5) 醇沉:將經步驟(4)的料液于水浴上蒸干進行濃縮，濃縮至原體積的三分之一得濃 縮液，隨后邊攪拌邊緩慢加入乙醇，攪拌速率為180r/min，使濃縮液與乙醇混合均勻，所述 濃縮液與乙醇的體積比為1:4,再于4°C下靜置12h進行沉析； (6) 離心:取經步驟(5)后的料液在4500r/min的轉速下離心18min，并收集沉淀； (7) 凍干:將步驟6)所得沉淀置于冷凍干燥機中凍干成粉，冷凍干燥機的溫度為-10°C， 真空度為l〇pa，制得灰樹花多糖； (8) 精制:將灰樹花多糖加入石油醚和丙酮，在150°C下進行回流處理2h，灰樹花多糖的 質量與石油醚和丙酮的體積比為l:6:4(g/ml/ml)，隨后趁熱抽提，取抽提沉淀物于47°C烘 干40~60min，隨后利用Sevage法去除蛋白質：加入氯仿和正丁醇混合液充分震蕩使蛋白質 析出，抽提沉淀物與混合液的體積質量比為1:5,所述氯仿和正丁醇的體積比為4:1，隨后于 4 OOOr/min下離心20min去除蛋白乳化層得上清液，再將上清液重復處理2次，隨后于冷 凍干燥機中凍干成粉，冷凍干燥機的溫度為4°C，真空度為3pa，得到精制的灰樹花多糖。 [0019] 將實施例2中微波提取時間改為4min或5min或7min或9min或lOmin或12min，提取 時間與精制的灰樹花多糖的得率和多糖含量關系結果如下表2:
結論:在灰樹花多糖提取方法中，目前對其提取技術的相關研究并不多，基本上是傳統 的熱水提取技術，而采用微波提取技術，微波提取在功率480W、560W5分鐘左右得到的多糖 含量和得率較高，可以高效釋放灰樹花中多糖的成分，提高了多糖的提取率、節約能耗。 [0020]以上所述，僅為本發明較佳的【具體實施方式】，但本發明的保護范圍并不局限于此， 任何熟悉本技術領域的技術人員在本發明揭露的技術范圍內，可輕易想到的變化或替換， 都應涵蓋在本發明的保護范圍內。因此，本發明的保護范圍應該以權利要求書的保護范圍 為準。
【主權項】
1. 一種利用微波提取灰樹花多糖的方法，其特征為，其方法如下： (1) 灰樹花子實體預處理：將灰樹花子實體放入烘箱中，控制溫度為45°C ± 2°C烘干 16h，隨后放入粉碎機粉碎，再經200目篩網過篩制得灰樹花粉末； (2) 脫脂:將灰樹花粉末置于索氏提取器中，加入有機溶劑，控制溫度為150~170°C，進 行索氏提取4h脫除脂肪，隨后趁熱抽濾，收集提取液和殘渣，殘渣于45°C±2°C下烘干2h; (3) 配液:取步驟(2)所得提取液和殘渣配成料液，殘渣的質量和提取液的體積比為1: 20(g/ml)，并浸泡60min; (4) 微波浸提：將料液于功率480W或560W的微波下提取3min或4min或5min或7min或 9min或I Omin或12min，并重復提取4次； (5) 醇沉:將經步驟(4)的料液于水浴上蒸干進行濃縮，濃縮至原體積的三分之一得濃 縮液，隨后邊攪拌邊緩慢加入乙醇，使濃縮液與乙醇混合均勻，所述濃縮液與乙醇的體積比 為1:4，再于4 °C下靜置12h進行沉析； (6) 離心：取經步驟(5)后的料液在4000~5000r/min的轉速下離心15~20min，并收集沉 淀； (7) 凍干:將步驟6)所得沉淀置于冷凍干燥機中凍干成粉，制得灰樹花多糖； (8) 精制:將灰樹花多糖加入石油醚和丙酮，在140~160 °C下進行回流處理2h，隨后趁熱 抽提，取抽提沉淀物于45°C ±2°C烘干40~60min，隨后利用Sevage法去除蛋白質，再于冷凍 干燥機中凍干成粉，得到精制的灰樹花多糖。2. 如權利要求1所述的一種利用微波提取灰樹花多糖的方法，其特征為，所述有機溶劑 為乙酸乙酯或丙酮。3. 如權利要求1所述的一種利用微波提取灰樹花多糖的方法，其特征為，所述灰樹花粉 末的質量與有機溶劑的體積比為I: (I〇~12) (g/ml)。4. 如權利要求1所述的一種利用微波提取灰樹花多糖的方法，其特征為，步驟(5)中攪 拌速率為120~200r/min。5. 如權利要求1所述的一種利用微波提取灰樹花多糖的方法，其特征為，所述冷凍干燥 機的溫度為-10~l〇°C，真空度為1.5~13pa。6. 如權利要求1所述的一種利用微波提取灰樹花多糖的方法，其特征為，所述灰樹花多 糖的質量與石油醚和丙酮的體積比為1:6:4(g/ml/ml)。
【文檔編號】C08B37/00GK105949338SQ201610344509
【公開日】2016年9月21日
【申請日】2016年5月24日
【發明人】張莉, 唐蘇陽, 沈井旺, 施磊, 周娟
【申請人】江蘇江大源生態生物科技股份有限公司