一種用于減輕特異性自身抗體介導的細胞毒性的寡肽及其應用
【專利摘要】本發明公開了一種用于減輕特異性自身抗體介導的細胞毒性的寡肽及其應用，所述用于減輕特異性自身抗體介導的細胞毒性的寡肽命名為LoopC寡肽，所述LoopC寡肽的氨基酸序列從N端到C端依次為：CVTPPSVVGGLGVTTVHGNLTAG；所述用于減輕特異性自身抗體介導的細胞毒性的寡肽在制備診斷和治療視神經脊髓炎譜系疾病藥物及裝置中的應用。該寡肽是依據人體水通道蛋白AQP4細胞膜外抗原決定簇的氨基酸序列設計的，動物實驗證實，該序列在視神經脊髓炎譜系疾病模型中能有效減輕視神經脊髓炎譜系疾病的疾病癥狀。本發明能夠特異性地和視神經脊髓炎譜系疾病患者體液中的AQP4自身抗體結合，使其失去攻擊中樞神經系統星形膠質細胞的能力，從而起到減輕AQP4自身抗體的細胞毒性的作用。
【專利說明】一種用于減輕特異性自身抗體介導的細胞毒性的寡肽及其
應用
技術領域
[0001] 本發明涉及寡肽及其應用，具體是一種用于減輕特異性自身抗體介導的細胞毒性的寡肽及其應用。
【背景技術】
[0002] 視神經脊髓炎譜系疾病(匪OSDs)是一種嚴重的神經系統退行性疾病，在東亞地區發病率遠高于歐美。絕大多數NM0SD患者血液中能夠檢測到水通道蛋白4(AQP4)的自身抗體，這已經成為診斷該疾病的重要標志物。雖然AQP4自身抗體產生的原因尚不清楚，但其致病機制卻已經基本明了：該自身抗體穿越血腦屏障后攻擊中樞神經系統的星形膠質細胞， 通過特異性的細胞毒性作用導致星形膠質細胞凋亡，繼而引起中樞神經系統發生脫髓鞘病變。在匪OSDs2015年的診斷標準中已將AQP4自身抗體陽性列為其中一項。在臨床上，通常 AQP4自身抗體濃度較低的患者能夠獲得較好的治療效果。可見AQP4自身抗體的細胞毒性與疾病的產生和發展有著密切的關系。減輕AQP4自身抗體的細胞毒性將成為治療NM0SD的有效方法。目前臨床上常采用血漿置換的方法來降低AQP4自身抗體的有效濃度，但該方法在降低了 AQP4自身抗體濃度的同時，也降低了其他治療藥物的濃度，且該方法不能保證百分之百有效。
[0003] 目前針對NM0SD急性期患者的治療方法主要有大劑量激素沖擊，血漿置換及靜脈注射大劑量免疫球蛋白。大劑量糖皮質激素沖擊可抑制機體的免疫功能，從而減少AQP4自身抗體的產生，但長期使用降低了自身的免疫力，可誘發感染或加重感染，引起物質代謝和水鹽代謝紊亂，出現類腎上腺皮質功能亢進綜合征，如浮腫、低血鉀、高血壓、糖尿、皮膚變薄、滿月臉、水牛背、向心性肥胖、多毛、痤瘡、肌無力和肌萎縮等癥狀。血漿置換能夠通過置換血清，降低患者急性期血清內的AQP4自身抗體的水平，但是由于置換的過程中也相應清除了血清中所有其他治療藥物和一些有益的細胞因子、趨化因子等，因此在減少AQP4自身抗體的同時也降低了其他治療手段的效果。注射大劑量免疫球蛋白目前仍然缺少足夠的證據支持其治療的有效性。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的在于提供一種保護動物中樞神經系統、減少細胞毒性的用于減輕特異性自身抗體介導的細胞毒性的寡肽及其應用，以解決上述【背景技術】中提出的問題。
[0005] 為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：
[0006] —種用于減輕特異性自身抗體介導的細胞毒性的寡肽，所述寡肽的氨基酸序列從 N端到C端依次為:CVTPPSVVGGLGVTTVHGNLTAG。該寡肽命名為LoopC寡肽。
[0007] 作為本發明再進一步的方案:所述用于減輕特異性自身抗體介導的細胞毒性的寡肽在制備診斷和治療視神經脊髓炎譜系疾病藥物及裝置中的應用。
[0008] 與現有技術相比，本發明的有益效果是：
[0009]本發明能夠特異性地和視神經脊髓炎譜系疾病患者體液中的AQP4自身抗體結合， 使其失去攻擊中樞神經系統星形膠質細胞的能力，從而起到減輕AQP4自身抗體的細胞毒性的作用。【附圖說明】
[0010]圖1為使用本發明后造動物模型的大鼠的運動功能評分曲線示意圖。
[0011]圖2為使用本發明后對造模動物脊髓進行免疫熒光實驗的結果示意圖。
[0012]圖3為使用本發明后對造模動物脊髓進行免疫熒光實驗的結果示意圖。
[0013]圖4為使用本發明后對造模動物脊髓進行免疫熒光實驗的結果示意圖。【具體實施方式】
[0014]下面結合【具體實施方式】對本專利的技術方案作進一步詳細地說明。
[0015]—種用于減輕特異性自身抗體介導的細胞毒性的寡肽，所述寡肽的氨基酸序列從 N端到C端依次為:CVTPPSVVGGLGVTTVHGNLTAG。所述用于減輕特異性自身抗體介導的細胞毒性的寡肽在制備診斷和治療視神經脊髓炎譜系疾病藥物及裝置中的應用。
[0016]該氨基酸序列的設計依據的是水通道蛋白AQP4位于細胞膜外的一個環狀結構，由于該環狀結構位于細胞膜外，因此很容易成為其自身抗體的攻擊靶點。
[0017]對Lewis大鼠行髓鞘置管手術，隨后向大鼠鞘內注射視神經脊髓炎譜系疾病患者的血清及補體，通過患者血清中致病的AQP4自身抗體及補體聯合發揮抗體依賴的補體介導的細胞毒性，來造視神經脊髓炎譜系疾病的大鼠模型。通過事先將一定量本發明所述的寡肽與患者血清及補體共孵育處理，由于本發明依據AQP4細胞膜外環狀結構設計，因此能夠中和患者血清中特定的AQP4自身抗體，從而大大降低了其細胞毒性，在大鼠動物模型的基礎上有效地降低了行為學及組織學上的疾病癥狀。[〇〇18]采用本發明所述的寡肽中和視神經脊髓炎譜系疾病患者血清后再造模，Lewis大鼠的癥狀從行為學上得到減輕，如圖1所示。
[0019]請參閱圖2-4的免疫熒光檢測，用本發明所述的寡肽中和視神經脊髓炎譜系疾病患者血清后造模組(LoopC處理組)相比未用本發明寡肽處理組，AQP4和GFAP的表達均較多， ⑶45及Ly6明顯減少。GFAP為星形膠質細胞的標記蛋白，中樞神經系統中的AQP4絕大多數分布在星形膠質細胞的終足上，CD45和Ly6均為白細胞的標志蛋白，這表明用本發明所述的寡肽能夠中和致病的AQP4自身抗體，保護實驗動物中樞神經系統的星形膠質細胞，并減少白細胞的侵潤，減輕炎癥的影響。MBP為成熟髓鞘的標志蛋白，通過比較MBP發現，應用本發明寡肽處理組對脊髓髓鞘的保護也要明顯優于未用本發明寡肽處理組。
[0020]將本發明所述的寡肽固定于一定介質上，將患者血清通過該介質，由于本發明所述用于減輕特異性抗體介導的細胞毒性的寡肽能夠特異性與患者血清中致病的特定AQP4 自身抗體相結合，因此該固定了本發明所述用于減輕特異性抗體介導的細胞毒性的寡肽的介質便具備了清除致病自身抗體的能力，因此能夠起到類似血漿置換，但更優于血漿置換效果的過濾作用。
[0021]將本發明所述的寡肽固定于一定介質上，通過封閉處理后，將待檢測患者的血清與之混合并孵育一段時間，隨后通過多次洗滌將血清中未結合的自身抗體洗去，僅留下與該寡肽特異性結合的自身抗體，再通過與一定濃度螯合了特定酶的動物抗人二抗共孵育， 通過加入酶底物進行顯色反應來判斷該患者血清中是否有針對該寡肽的致病自身抗體。通過上述方法來診斷該患者血清中是否含有針對該寡肽的致病自身抗體，實現針對性較高的特異性診斷，方便制定更具針對性的治療方案。
[0022]本發明所述的寡肽是依據人體水通道蛋白AQP4細胞膜外抗原決定簇的氨基酸序列設計的，動物實驗證實，該寡肽在視神經脊髓炎譜系疾病模型中能有效減輕視神經脊髓炎譜系疾病的癥狀，保護中樞神經系統的髓鞘及星形膠質細胞，并減少白細胞的浸潤。 [〇〇23]本發明能夠特異性地和視神經脊髓炎譜系疾病患者體液中致病的AQP4自身抗體結合，使其失去攻擊中樞神經系統星形膠質細胞的能力，從而起到減輕AQP4自身抗體介導的細胞毒性的作用，保護中樞神經系統。
[0024]上面對本專利的較佳實施方式作了詳細說明，但是本專利并不限于上述實施方式，在本領域的普通技術人員所具備的知識范圍內，還可以在不脫離本專利宗旨的前提下作出各種變化。
【主權項】
1.一種用于減輕特異性自身抗體介導的細胞毒性的寡肽，其特征在于，所述寡肽的氨 基酸序列從N端到C端依次為:CVTPPSVVGGLGVTTVHGNLTAG。2.—種如權利要求1所述的用于減輕特異性自身抗體介導的細胞毒性的寡肽在制備診 斷和治療視神經脊髓炎譜系疾病藥物及裝置中的應用。
【文檔編號】A61P25/28GK105949304SQ201610504345
【公開日】2016年9月21日
【申請日】2016年6月30日
【發明人】魏世輝, 陳霆雋, 林大河
【申請人】中國人民解放軍總醫院