異卡波肼的藥物組合物及其在生物醫藥中的應用
【專利摘要】本發明公開了異卡波肼的藥物組合物及其在生物醫藥中的應用，本發明提供的異卡波肼的藥物組合物中含有異卡波肼和一種結構新穎的天然產物化合物(Ⅰ)，異卡波肼、化合物(Ⅰ)單獨作用時，對糖尿病合并牙周炎具有治療作用；異卡波肼和化合物(Ⅰ)聯合作用時，對糖尿病合并牙周炎的治療效果進一步提高，可以開發成治療糖尿病合并牙周炎的藥物，與現有技術相比具有突出的實質性特點和顯著的進步。
【專利說明】
異卡波肼的藥物組合物及其在生物醫藥中的應用
技術領域
[0001] 本發明屬于生物醫藥領域，涉及異卡波肼的新用途，具體涉及異卡波肼的藥物組 合物及其在生物醫藥中的應用。
【背景技術】
[0002] 異卡波肼為非選擇性單胺氧化酶抑制劑.與單胺氧化酶A和B產生不可逆性結合作 用，影響單胺類神經遞質的代謝。單胺氧化酶受抑制后，可增加中樞神經部位單胺含量，起 到抗抑郁作用。
【發明內容】
[0003] 本發明的目的在于提供一種異卡波肼的藥物組合物，該藥物組合物中含有異卡波 肼和一種結構新穎的天然產物，異卡波肼和該天然產物可協同治療糖尿病合并牙周炎。
[0004] 本發明的上述目的是通過下面的技術方案得以實現的：
[0005] 一種具有下述結構式的化合物（I)，
[0007] -種異卡波肼的藥物組合物，包括異卡波肼、如權利要求1所述的化合物（I)和藥 學上可以接受的載體，制備成需要的劑型。
[0008] 進一步地，藥學上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、 崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑。
[0009] 進一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、 膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。
[0010] 上述化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將罌粟殼粉碎，用85~95%乙 醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃 取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中正丁醇萃取物 用大孔樹脂除雜，先用8 %乙醇洗脫10個柱體積，再用70 %乙醇洗脫12個柱體積，收集70 % 洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠 分離，依次用體積比為40:1、20:1、10:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d) 步驟(c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為8:1、5:1和2:1的二氯甲烷-甲醇 梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積 百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到 化合物(I)。
[0011] 進一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)用90%乙醇熱回流提取，合并提取 液。
[0012] 進一步地，化合物（I)的制備方法中，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0013]進一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯進行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0014] 上述化合物(I)在制備治療糖尿病合并牙周炎的藥物中的應用。
[0015] 上述異卡波肼的藥物組合物在制備治療糖尿病合并牙周炎的藥物中的應用。
[0016] 本發明的優點：
[0017] 本發明提供的異卡波肼的藥物組合物中含有異卡波肼和一種結構新穎的天然產 物，異卡波肼、化合物(I)單獨作用時，對糖尿病合并牙周炎具有治療作用;異卡波肼和化合 物（I)聯合作用時，對糖尿病合并牙周炎的治療效果進一步提高，可以開發成治療糖尿病合 并牙周炎的藥物。
【具體實施方式】
[0018] 下面結合實施例進一步說明本發明的實質性內容，但并不以此限定本發明保護范 圍。
[0019] 實施例1:化合物(I)分離制備及結構確證
[0020] 試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化 學試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學試劑有限公司。
[0021]分離方法：（a)將罌粟殼(2kg)粉碎，用90%乙醇熱回流提取(20LX 3次），合并提取 液，濃縮至無醇味（4L)，依次用石油醚(4L X 3次）、乙酸乙酯（4L X 3次）和水飽和的正丁醇 (4LX3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中 正丁醇萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用8%乙醇洗脫10個柱體積，再用70%乙醇洗脫12 個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗脫 濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為40:1 (8個柱體積）、20:1 (8個柱體積）、10:1 (8個柱 體積)和5:1(10個柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步驟(c)中組分4用 正相硅膠進一步分離，依次用體積比為8:1(8個柱體積）、5:1(10個柱體積)和2:1(5個柱體 積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反 相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個柱體積洗脫液， 洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)(純度大于98% )。
[0022] 結構確證:HR-ESI-MS顯示[M+H]+為m/z 469.3271，結合核磁特征可得分子式為 C30H44〇4，不飽和度為9。核磁共振氫譜數據δΗ(ppm，CDC13，600MHz): H-1 (1 · 47，m)，H-1 (2 · 90， ddd，J=13.2,7.3,4.4Hz)，H-2(2.41，ddd，J=15.8,6.4,4.4Hz)，H-2(2.65，ddd，J=15.8， ll.l，7.3Hz)，H-5(1.31，m)，H-6(1.52，m)，H-6(1.63，m)，H-7(1.78，m)，H-7(1.91，m)，H-9 (2.55，s)，H-15(5.43，d，J=10.3Hz)，H-16(5.52，d，J=10.3Hz)，H-18(2.86，d，J = 11.5Hz)，H-19(1.73，m)，H-21(1.34，m)，H-21(1.57，m)，H-22(1.66，m)，H-22(1.74，m)，H-23 (1.09，s)，H-24(1.06，s)，H-25(1.28，s)，H-26(1.26，s)，H-27(1.36，s)，H-28(0.89，s)，H-29(0.85，(1，了 = 6.3他），!1-30(1.23,8)，12-0!1(6.38,8);核磁共振碳譜數據6。（卯111，〇)(：1 3， 125MHz):39.2(CH2，1-C)，34.3(CH2,2-C)，215.6(C，3-C)，47.5(C，4-C)，55.2(CH，5-C)，19.7 (CH2,6-C)，36.4(CH2,7-C)，51.0(C，8-C)，58.7(CH，9-C)，37.2(C，10-C)，196.2(C，n-C)， 144.8(C，12-C)，143.2(C，13-C)，38.6(C，14-C)，133.4(CH，15-C)，142.3(CH，16-C)，43.7 (C，17-C)，42.3(CH，18-C)，41.7(CH，19-C)，70.5(C，20-C)，35.8(CH2,21-C)，35.8(CH2,22-C)，26.6(CH3,23-C)，21.7(CH3,24-C)，15.7(CH3,25-C)，19.7(CH3,26-C)，14.8(CH 3,27-C)， 19 · 3(CH3，28-C)，11 · 2(CH3，29-C)，29 · 4(CH3，30-C)。紅外波譜表明該化合物含有α，β-不飽 和羰基（1705cm-4，羥基（3425cm-4，羰基（1760cm-3，雙鍵（1663cm-4和偕二甲基（1380cm 一 4基團。13C-NMR、DEPT和HSQC譜中顯示有30個碳信號，包括八個甲基，六個亞甲基，六個次 甲基(兩個烯烴碳），以及十個季碳(兩個羰基，一對四取代烯烴碳，一個連氧碳），以上功能 結構再結合不飽和數表明該化合物為五環三萜結構。 1H-NMR譜結合HSQC譜顯示的七個單峰 甲基質子信號 δΗ 1.09(3H，s)，1.06(3H，s)，1.28(3H，s)，1.26(3H，s)，1.36(3H，s)，0.89 (3H，s)和1.23(3H，s)，一個雙峰甲基質子信號δ Η 〇.85(3!1，(1，1 = 6.3抱）以及1!1-匪1?數據表 明該化合物為烏蘇烷型三萜類化合物。在該烏蘇烷型化合物中，C-3和C-l 1位形成酮基，C-12與C-13、C-15與C-16形成雙鍵結構。HMBC譜中Me-23和Me-24與C-3的相關性以及它們的碳 化學位移進一步確證C-3位形成酮基。另HMBC譜中，H-9和H-18與C-12，H-18和Me-27與C-13， 12-OH與C-12相關信號以及它們的碳化學位移表明該化合物存在烯醇式結構，羥基連接在 C-12位與C-12和C-13形成的雙鍵構成烯醇式結構。HMBC譜中12-OH和H-9與C-11的相關信號 以及碳化學位移確認C-11位形成羰基。此外，HMBC譜中H-18、H-19、Me-29和Me-30與C-20的 相關信號以及C-20碳化學位移表明C-20位連有一個羥基。NOESY譜中Me-28和Me-29與H-18 存在相關信號，但Me-30與H-18沒有相關信號，表明C-20位的羥基為β構型。綜合氫譜、碳譜、 HMBC譜和NOESY譜，以及文獻關于相關類型核磁數據，可基本確定該化合物如下所示，立體 構型進一步通過ECD試驗確定，理論值與實驗值基本一致。該化合物化學式及碳原子編號如 下：
[0024] 實施例2:藥理作用
[0025]本實施例使用腹腔注射鏈脲佐菌素，并以直徑0.20mm的絲線結扎大鼠雙側上頌第 二磨牙頸部制備治療糖尿病合并牙周炎大鼠模型，觀察藥物降低牙齒松動度，提高大鼠外 周血白細胞介素 -2(IL-2)含量、降低白細胞介素 -Ιβ(Ι?-Ιβ)等方面的抗糖尿病合并牙周炎 作用。
[0026] 1、材料與方法
[0027] 1.1動物
[0028] 選用10月齡SD大鼠，體重(400±50)g，雌雄各半，由四川省醫學科學院實驗動物研 究所提供。實驗動物設施條件:成都中醫藥大學藥學院動物觀察室。
[0029] 1.2試劑與樣品
[0030] 異卡波肼購自中國藥品生物制品檢定所。化合物(I)自制，制備方法見實施例1。
[0031] 1.3大鼠分組及模型制備
[0032] 大鼠隨機分為5組，每組12只，分別為正常對照組、模型對照組、異卡波肼組 (180mg · kg-"、化合物⑴組（180mg · kg-Ο、異卡波肼與化合物（I)組合物組【90mg · kg-1異 卡波肼+90mg · kg-1化合物（I)】。各組大鼠均以軟食飼養，按60mg/kg腹腔注射鏈脲佐菌素溶 液，72h后測空腹血糖，高于16.7mmol/L為糖尿病模型建立成功。糖尿病模型建立成功1周 后，開始建立糖尿病合并牙周炎模型，除正常對照組外，其余組大鼠均用2%戊巴比妥鈉 30mg/kg全麻下，以直徑0.20mm的絲線結扎大鼠雙側上頌第二磨牙頸部，制造牙周炎動物模 型。正常對照組不造模，各給藥組造模后開始藥物干預，按照上述劑量連續灌胃給藥7d，正 常對照組與模型對照組大鼠灌胃給予純化水。給藥結束后，測定相關指標。
[0033] 1.4牙齒松動度測定實驗
[0034] 每只大鼠造模各2顆牙齒，頰舌向松動者計1分，頰舌向、近中遠中向均松動者計2 分;頰舌向、近中遠中向和垂直向均松動者計3分。
[0035] 1.5IL-2、IL_10 測定實驗
[0036] 5%水合氯醛全麻各大鼠，將全部大鼠經腹主動脈取血5ml(加肝素鈉抗凝）， 1000r/min離心10min，吸取上清液0.5ml，裝管標記后，用IL-2、IL-Ιβ試劑盒測定其濃度。 [0037] 1.6統計學方法
[0038]實驗數據用均數土標準差(X土s)表示，應用SPSS18.0版統計軟件進行單因素方差 分析和t檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。
[0039] 2、實驗結果
[0040] 2.1對糖尿病合并牙周炎模型大鼠牙齒松動度的影響
[0041]與正常對照組比較，模型對照組大鼠牙齒松動度評分明顯增加(P<0.01);與模型 對照組比較，異卡波肼與化合物（I)組合物組大鼠牙齒松動度評分明顯減小(P<〇.01);與 模型對照組比較，異卡波肼組、化合物（I)組牙齒松動度評分減小(P<〇.05)。結果見表1。 [0042] 2.2對糖尿病合并牙周炎模型大鼠外周血中11^-2、幾-10含量的影響 [0043] 與正常對照組比較，模型對照組大鼠的IL-2明顯降低(P<0.01)，、IL_li3含量明顯 升高（P<0.01)。與模型對照組比較，異卡波肼與化合物（I)組合物組IL-2明顯升高（P< 0.01)，IL-li3含量明顯降低(P<0.01);與模型對照組比較，異卡波肼組、化合物（I)組IL-2 升高(P<0.05)，IL-lf3含量降低(P<0.05)。結果見表1。
[0044]表1對糖尿病合并牙周炎模型大鼠牙齒松動度和外周血中IL-2、IL_li3含量的影響
[0047]早在1928年，William等通過研究認為，糖尿病患者與非糖尿病患者的牙周炎具有 不同特征，因此提出了 "糖尿病性牙周炎"的概念。糖尿病患者因牙周組織中糖分解代謝、蛋 白質和脂肪合成代謝減弱，對局部致病因子敏感性增高，且多合并微循環障礙，導致牙周組 織細菌繁殖加速，牙周炎已經成為糖尿病繼神經病變、視網膜病變、血管病變、腎病及傷口 愈合不良之后的第六并發癥。
[0048]近年來，眾多研究顯示牙周炎的發病過程與細胞因子的分泌異常導致促炎/抑炎 平衡失調有密切關系，多表現為Thl細胞功能相對亢進，Th2細胞功能不足。IL-2、IL-Ιβ等是 細胞免疫應答中的關鍵因子，IL-2是引起T細胞增殖的主要細胞因子，能促進T細胞的增殖 和活化，抑制T細胞的凋亡、刺激NK細胞的生長和增強其殺傷功能、激發B細胞生長及抗體產 生，已經有部分學者通過實驗證明其與牙周炎免疫狀態有關;IL-Ιβ則在牙周炎的骨破壞過 程中還發揮著重要作用，IL-Ιβ可促進骨吸收，且其水平與牙周附著喪失顯著相關。
[0049] 上述結果表明，異卡波肼、化合物（I)單獨作用時，對糖尿病合并牙周炎具有治療 作用；異卡波肼和化合物（I)聯合作用時，對糖尿病合并牙周炎的治療效果進一步提高，可 以開發成治療糖尿病合并牙周炎的藥物。
[0050] 上述實施例的作用在于說明本發明的實質性內容，但并不以此限定本發明的保護 范圍。本領域的普通技術人員應當理解，可以對本發明的技術方案進行修改或者等同替換， 而不脫離本發明技術方案的實質和保護范圍。
【主權項】
1. 一種具有下述結構式的化合物α)，2. -種異卡波肼的藥物組合物，其特征在于:包括異卡波肼、如權利要求1所述的化合 物(I)和藥學上可以接受的載體，制備成需要的劑型。3. 根據權利要求2所述的異卡波肼的藥物組合物，其特征在于:藥學上可以接受的載體 包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體 或潤滑劑。4. 根據權利要求2所述的異卡波肼的藥物組合物，其特征在于:所述劑型包括片劑、膠 囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、 栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。5. 權利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含以下操作步驟：（a)將罌 粟殼粉碎，用85~95%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙 酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b) 步驟(a)中正丁醇萃取物用大孔樹脂除雜，先用8%乙醇洗脫10個柱體積，再用70%乙醇洗 脫12個柱體積，收集70 %洗脫液，減壓濃縮得70 %乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70 %乙醇 洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為40:1、20:1、10:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度 洗脫得到4個組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為8:1、5:1和 2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反 相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個柱體積洗脫液， 洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。6. 根據權利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)用90%乙醇熱回 流提取，合并提取液。7. 根據權利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為AB-8型 大孔吸附樹脂。8. 根據權利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中用二氯甲烷代 替乙酸乙酯進行萃取，得到二氯甲烷萃取物。9. 權利要求1所述的化合物（I)在制備治療糖尿病合并牙周炎的藥物中的應用。10. 權利要求2~4任一所述的異卡波肼的藥物組合物在制備治療糖尿病合并牙周炎的 藥物中的應用。
【文檔編號】A61P1/02GK105949270SQ201610384227
【公開日】2016年9月21日
【申請日】2016年5月28日
【發明人】劉慎權
【申請人】劉慎權