鹽酸普拉克索的藥物組合物及其治療偏頭痛的用圖
【專利摘要】本發明公開了鹽酸普拉克索的藥物組合物及其治療偏頭痛的用途，本發明提供的鹽酸普拉克索的藥物組合物中含有鹽酸普拉克索和一種結構新穎的天然產物化合物(Ⅰ)，鹽酸普拉克索、化合物(Ⅰ)單獨作用時，對偏頭痛具有治療作用；鹽酸普拉克索和化合物(Ⅰ)聯合作用時，對偏頭痛病的治療效果顯著提高，可以開發成治療偏頭痛的藥物，與現有技術相比具有突出的實質性特點和顯著的進步。
【專利說明】
鹽酸普拉克索的藥物組合物及其治療偏頭痛的用途
技術領域
[0001] 本發明屬于生物醫藥領域，涉及鹽酸普拉克索的新用途，具體涉及鹽酸普拉克索 的藥物組合物及其在生物醫藥中的應用。
【背景技術】
[0002] 鹽酸普拉克索被用來治療特發性帕金森病的體征和癥狀，單獨或與左旋多巴聯 用。
【發明內容】
[0003] 本發明的目的在于提供一種鹽酸普拉克索的藥物組合物，該藥物組合物中含有鹽 酸普拉克索和一種結構新穎的天然產物，鹽酸普拉克索和該天然產物可以協同治療偏頭 痛。
[0004] 本發明的上述目的是通過下面的技術方案得以實現的：
[0005] 一種具有下述結構式的化合物（I)，
[0007] -種鹽酸普拉克索的藥物組合物，包括鹽酸普拉克索、如權利要求1所述的化合物 (I)和藥學上可以接受的載體，制備成需要的劑型。
[0008] 進一步地，藥學上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、 崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑。
[0009] 進一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、 膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。
[0010] 上述化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將女貞子粉碎，用60~70%乙 醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃 取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中正丁醇萃取物 用大孔樹脂除雜，先用1 〇 %乙醇洗脫12個柱體積，再用70 %乙醇洗脫15個柱體積，收集70 % 洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠 分離，依次用體積比為50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d) 步驟(c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為10:1、5:1和2:1的二氯甲烷-甲醇 梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積 百分濃度為70 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集7~13個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到 化合物(I)。
[0011]進一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)用65%乙醇熱回流提取，合并提取 液。
[0012]進一步地，化合物（I)的制備方法中，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0013]進一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯進行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0014] 上述化合物(I)在制備治療偏頭痛的藥物中的應用。
[0015] 上述鹽酸普拉克索的藥物組合物在制備治療偏頭痛的藥物中的應用。
[0016] 本發明的優點：
[0017] 本發明提供的鹽酸普拉克索的藥物組合物中含有鹽酸普拉克索和一種結構新穎 的天然產物，鹽酸普拉克索、化合物（I)單獨作用時，對偏頭痛具有治療作用;鹽酸普拉克索 和化合物（I)聯合作用時，對偏頭痛病的治療效果顯著提高，可以開發成治療偏頭痛的藥 物。
【具體實施方式】
[0018] 下面結合實施例進一步說明本發明的實質性內容，但并不以此限定本發明保護范 圍。
[0019] 實施例1:化合物(I)分離制備及結構確證
[0020] 試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化 學試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學試劑有限公司。
[0021]分離方法：（a)將女貞子(2kg)粉碎，用65 %乙醇熱回流提取(20L X 3次），合并提取 液，濃縮至無醇味（4L)，依次用石油醚(4L X 3次）、乙酸乙酯（4L X 3次）和水飽和的正丁醇 (4LX3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中 正丁醇萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫12個柱體積，再用70%乙醇洗脫 15個柱體積，收集70 %洗脫液，減壓濃縮得70 %乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70 %乙醇洗 脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為50:1 (8個柱體積）、25:1 (8個柱體積）、15:1 (8個 柱體積)和5:1(10個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步驟(c)中組分4 用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為10:1(8個柱體積）、5:1(10個柱體積)和2:1(5個柱 體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的 反相硅膠分離，用體積百分濃度為70%的甲醇水溶液等度洗脫，收集7~13個柱體積洗脫 液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)(純度大于98% )。
[0022] 結構確證:冊431-]\^顯示[]\?^]+為111/2 339.1315，結合核磁特征可得分子式為 Ci8H2〇〇5，不飽和度為9。核磁共振氫譜數據δΗ(ppm，pyridine_d5，500MHz):H-1 (2 · 44，m)，H-2 (2.57，m)，H-3(5.76，d，J = 9.9Hz)，H-4(6.08，t，J = 9.9,5.1，2.4Hz)，H-5(2.82，m)，H-7a (2.23，m)，H-7b(2.21，m)，H-8(1.45，m，2H)，H-9a(1.66，m)，H-9b(1.46，m)，H-10(2.45，m)， H-12(6.28，s)，H-16(0.91，d，J = 7.2Hz)，H-17(10.34，s)，H-18(4.15，s);核磁共振碳譜數 據Sc(ppm，pyridine-d5，125MHz) :48.1(CH，1-C)，35.5(CH，2-C)133.4(CH，3-C)，127.4(CH， 4-C)，53.2(CH，5-C)，221.6(C，6-C)，37.2(CH2,7-C)，26.3(CH2,8-C)，20.3(CH2,9-C)，37.3 (CH，10-C)，173.3(C，11-C)，94.2(CH，12-C)，172.4(C，13-C)，101.6(C，14-C)，161.5(C，15-〇,20.5(013，16-〇，189.2(01，17-〇,57.4(013，18-〇。紫外光譜顯示該化合物在228,273 和320nm處有最大吸收，以及紅外光譜顯示共輒酯羰基（Higcnf 1)和共輒醛羰基（legscnr1) 基團。該化合物的氫譜中顯不三個稀質子信號（3h5.76,6.08和6.28)，一個醛基質子信號（δ ηΙΟ.34)，一個甲氧基質子信號（δ Η4.15)以及一個雙峰甲基質子信號（δΗ〇.91)。該化合物的 碳譜結合HSQC譜顯示18個碳原子，其中包括三對烯碳信號，一個酮羰基信號，一個內酯羰基 信號以及一個醛羰基信號。HMBC譜中Η 3-16與C-l、C-2和C-3，H-5與C-3和C-6，H-4與C-6以及 H2-8與C-6的相關信號表明C-3和C-4之間為雙鍵，C-6為酮羰基以及C-2位連有一個甲基。氫 譜和碳譜表明該化合物一個吡喃酮結構，且C-13位連有一個甲氧基，C-14位連有一個醛基。 HMBC 譜中 H-12 與 C-1UC-13 和 C-14，H-17 與 C-13、C-14 和 C-15 以及 H3-18 與 C-13 的相關性驗 證了上述推論。HMBC譜中H-1與吡喃酮環C-11和C-12的相關性表明C-1與C-11相連。R0ESY譜 中，H-5/H-9a，H-5/H-10，H-10/H-9a之間的相關性說明H-5，H-10和H-9a是位于β位的。同時， H-9b/H-l以及Η-1/Η3-16之間的相關信號說明吡喃酮結構也是位于β位，而16-CH3是處于α位 的。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和R0ESY譜，以及文獻關于相關類型核磁數據，可基本確定該化 合物如下所示，立體構型進一步通過ECD試驗確定，理論值與實驗值基本一致。
[0023]該化合物化學式及碳原子編號如下：
[0025] 實施例2:藥理作用
[0026]本實施例使用硝酸甘油制備偏頭痛大鼠模型，觀察藥物升高5-羥色胺(5-ΗΤ)、降 低降鈣素基因相關肽(CGRP)等方面的抗偏頭痛作用。
[0027] 1、材料與方法
[0028] 1.1動物
[0029] SD大鼠，雌雄各半，180~220g，清潔級，購于四川省醫學科學院實驗動物研究所。 [0030] 1.2試劑與樣品
[0031 ]鹽酸普拉克索購自中國藥品生物制品檢定所。化合物（I)自制，制備方法見實施例 1。琥珀酸舒馬普坦片(天津華津制藥廠）。硝酸甘油注射液(鄭州羚銳制藥有限公司）。大鼠 降鈣素基因相關肽(CGRP)試劑盒(北京北免東雅生物技術研究所）；大鼠5-羥色胺(5-HT)試 劑盒;大鼠5-羥基吲哚乙酸(5-HIAA)試劑盒;考馬斯亮藍試劑盒。
[0032] 1.3儀器
[0033] 電子分析天平(BP211D，賽多利斯）；酶標定量測定儀(Varioskan?，Thermo Fisher 公司）；高速冷凍離心機(LegendRT+230V，美國Thermo Fisher);低溫冰箱;組織勾衆機。 [0034] 1.4大鼠分組及模型制備
[0035] 大鼠隨機分為6組，每組12只，分別為正常對照組、模型對照組、陽性對照組（琥珀 酸舒馬普坦組，50mg · kg-4和鹽酸普拉克索組(80mg · kg-〇、化合物（I)組(80mg · kg-4、鹽 酸普拉克索與化合物（I)組合物組【40mg · kg^1鹽酸普拉克索+40mg · kg^1化合物（I)】。實驗 開始前適應環境3d。于造模前預防ig給藥3d，每天1次，正常對照組與模型對照組大鼠灌胃 純化水。
[0036]造模方法:硝酸甘油ip 1次造成大鼠偏頭痛模型，大鼠每天ig給藥1次，連續3d。于 末次給藥后，各組大鼠sc硝酸甘油注射劑(正常對照組注射生理鹽水）l〇mg · kg^1造模1次， sc定位于額區、顳區或右肩部皮下。造模后3min左右，動物出現雙耳發紅、前肢頻繁撓頭、爬 籠次數增多、煩躁不安等現象。此現象持續約3h，繼而出現蜷臥，活動減少狀態，表明偏頭痛 動物模型復制成功。
[0037] 1.5 5-HT含量測定實驗
[0038] 大鼠造模4h后，10%的水合氯醛(3mL · kg4)ip麻醉，斷頭取出腦組織，操作時在冰 臺上完成，快速取出全腦組織（剔除小腦），用冰冷的生理鹽水沖洗，除去血跡，濾紙拭干，切 取含中縫核、藍斑的腦干及下丘腦部分，立即投入液氮中固化，備用；測定時用組織勻漿機 制備腦組織勻漿液，熒光法測定腦組織中5-HT。
[0039] 1.6 CGRP含量測定實驗
[0040] 大鼠造模4h后，10%的水合氯醛(3mL · kg4)ip麻醉，斷頭取出腦組織，操作時在冰 臺上完成，快速取出全腦組織（剔除小腦），用冰冷的生理鹽水沖洗，除去血跡，濾紙拭干，切 取含中縫核、藍斑的腦干及下丘腦部分，立即投入液氮中固化，備用；測定時用組織勻漿機 制備腦組織勻漿液，熒光法測定腦組織中CGRP。
[0041 ] 1.7統計學方法
[0042]實驗數據用均數土標準差(X土s)表示，應用SPSS18.0版統計軟件進行單因素方差 分析和t檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。
[0043] 2、實驗結果
[0044] 2.1對偏頭痛模型大鼠腦組織中5-HT含量的影響
[0045]與正常對照組比，模型對照組大鼠腦組織5-HT含量明顯降低(P<0.01);與模型對 照組比，鹽酸普拉克索與化合物（I)組合物組和陽性對照組腦組織5-HT含量顯著升高(P< 〇. 〇 1);與模型對照組比，鹽酸普拉克索組、化合物（I)組腦組織5-HT含量升高(P<0.05)。實 驗結果見表1。
[0046] 2.2對偏頭痛模型大鼠腦組織中CGRP含量的影響
[0047]與正常對照組比較，模型對照組大鼠腦組織中CGRP含量明顯升高(P<0.01)。與模 型對照組比較，鹽酸普拉克索與化合物（I)組合物組和陽性對照組大鼠腦組織中CGRP含量 顯著降低(P<〇.01);與模型對照組比較，鹽酸普拉克索組、化合物（I)組腦組織中CGRP含量 降低(P<〇.〇5)。結果見表1。
[0048] 表1對偏頭痛模型大鼠腦組織中5-HT及CGRP含量的影響
[00511偏頭痛發病機制復雜，尚無定論。血管源學說認為5-HT在偏頭痛的發生中起著重 要的作用。三叉神經-血管源學說認為，在偏頭痛發作過程中CGRP和SP是關鍵性物質，中樞 神經系統功能紊亂引起CGRP含量升高，進而引起三叉神經感覺C纖維釋放CGRP，導致神經源 性炎癥。神經源性炎癥期間釋放的神經生長因子NGF可激活由絲裂素激活的蛋白激酶 (MAPK)信號轉導級聯途徑，引起偏頭痛發作。
[0052] 鹽酸普拉克索、化合物（I)單獨作用時，對偏頭痛具有治療作用；鹽酸普拉克索和 化合物(I)聯合作用時，對偏頭痛病的治療效果顯著提高，可以開發成治療偏頭痛的藥物。
[0053] 上述實施例的作用在于說明本發明的實質性內容，但并不以此限定本發明的保護 范圍。本領域的普通技術人員應當理解，可以對本發明的技術方案進行修改或者等同替換， 而不脫離本發明技術方案的實質和保護范圍。
【主權項】
1. 一種具有下述結構式的化合物α)，2. -種鹽酸普拉克索的藥物組合物，其特征在于:包括鹽酸普拉克索、如權利要求1所 述的化合物(I)和藥學上可以接受的載體，制備成需要的劑型。3. 根據權利要求2所述的鹽酸普拉克索的藥物組合物，其特征在于:藥學上可以接受的 載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附 載體或潤滑劑。4. 根據權利要求2所述的鹽酸普拉克索的藥物組合物，其特征在于：所述劑型包括片 劑、膠囊劑、□服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注 射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。5. 權利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含以下操作步驟：（a)將女 貞子粉碎，用60~70%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙 酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b) 步驟(a)中正丁醇萃取物用大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫12個柱體積，再用70%乙醇洗 脫15個柱體積，收集70 %洗脫液，減壓濃縮得70 %乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70 %乙醇 洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度 洗脫得到4個組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為10:1、5:1 和2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的 反相硅膠分離，用體積百分濃度為70%的甲醇水溶液等度洗脫，收集7~13個柱體積洗脫 液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。6. 根據權利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)用65%乙醇熱回 流提取，合并提取液。7. 根據權利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為AB-8型 大孔吸附樹脂。8. 根據權利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中用二氯甲烷代 替乙酸乙酯進行萃取，得到二氯甲烷萃取物。9. 權利要求1所述的化合物（I)在制備治療偏頭痛的藥物中的應用。10. 權利要求2~4任一所述的鹽酸普拉克索的藥物組合物在制備治療偏頭痛的藥物中 的應用。
【文檔編號】A61K31/428GK105949159SQ201610332848
【公開日】2016年9月21日
【申請日】2016年5月19日
【發明人】秦勇, 陳遠東, 徐成, 高瑞雪, 陸慶, 周自桂, 王 琦, 陳建芳
【申請人】江蘇神龍藥業有限公司