氫氯噻嗪的藥物組合物及其在生物醫藥中的應用
【專利摘要】本發明公開了氫氯噻嗪的藥物組合物及其在生物醫藥中的應用，本發明提供的氫氯噻嗪的藥物組合物中含有氫氯噻嗪和一種結構新穎的天然產物化合物(Ⅰ)，氫氯噻嗪、化合物(Ⅰ)單獨作用時，能提高肺巨噬細胞吞噬的功能和AMФ內酶活力，對肺免疫功能具有改善作用；氫氯噻嗪和化合物(Ⅰ)聯合作用時，對肺免疫功能的改善效果進一步提高，可以開發成改善肺免疫功能的藥物，與現有技術相比具有突出的實質性特點和顯著的進步。
【專利說明】
氫氯噻嗪的藥物組合物及其在生物醫藥中的應用
技術領域
[0001] 本發明屬于生物醫藥領域，涉及氫氯噻嗪的新用途，具體涉及氫氯噻嗪的藥物組 合物及其在生物醫藥中的應用。
【背景技術】
[0002] 氫氯噻嗪為利尿藥、抗高血壓藥。主要適用于心原性水腫、肝原性水腫和腎性水 腫:如腎病綜合征、急性腎小球腎炎、慢性腎功能衰竭以及腎上腺皮質激素與雌激素過多引 起的水腫;高血壓;尿崩癥。長期應用時宜適當補充鉀鹽。
【發明內容】
[0003] 本發明的目的在于提供一種氫氯噻嗪的藥物組合物，該藥物組合物中含有氫氯噻 嗪和一種結構新穎的天然產物，氫氯噻嗪和該天然產物可協同改善肺免疫功能。
[0004] 本發明的上述目的是通過下面的技術方案得以實現的：
[0005] 一種具有下述結構式的化合物（I)，
[0007] -種氫氯噻嗪的藥物組合物，包括氫氯噻嗪、如權利要求1所述的化合物（I)和藥 學上可以接受的載體，制備成需要的劑型。
[0008] 進一步地，藥學上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、 崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑。
[0009] 進一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、 膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。
[0010] 上述化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將桑白皮粉碎，用65~85%乙 醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃 取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中正丁醇萃取物 用大孔樹脂除雜，先用6%乙醇洗脫8個柱體積，再用70%乙醇洗脫8個柱體積，收集70%洗 脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分 離，依次用體積比為50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步 驟(c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為10:1、5:1和2:1的二氯甲烷-甲醇梯 度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百 分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化 合物(I)。
[0011] 進一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)用75%乙醇熱回流提取，合并提取 液。
[0012] 進一步地，化合物（I)的制備方法中，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0013]進一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯進行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0014] 上述化合物(I)在制備改善肺免疫功能的藥物中的應用。
[0015] 上述氫氯噻嗪的藥物組合物在制備改善肺免疫功能的藥物中的應用。
[0016] 本發明的優點：
[0017] 本發明提供的氫氯噻嗪的藥物組合物中含有氫氯噻嗪和一種結構新穎的天然產 物，氫氯噻嗪和該天然產物單獨作用時，對肺免疫功能具有改善作用；二者聯合作用時，對 肺免疫功能的改善效果進一步提高，可以開發成改善肺免疫功能的藥物。
【具體實施方式】
[0018] 下面結合實施例進一步說明本發明的實質性內容，但并不以此限定本發明保護范 圍。
[0019] 實施例1:化合物(I)分離制備及結構確證
[0020]分離方法：（a)將桑白皮(3kg)粉碎，用75%乙醇熱回流提取(20LX 3次），合并提取 液，濃縮至無醇味（4L)，依次用石油醚(4L X 3次）、乙酸乙酯（4L X 3次）和水飽和的正丁醇 (4LX3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中 正丁醇萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用6%乙醇洗脫8個柱體積，再用70%乙醇洗脫8個 柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗脫濃 縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為50:1 (8個柱體積）、25:1 (8個柱體積）、15:1 (8個柱體 積)和5:1(10個柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步驟(c)中組分4用正 相硅膠進一步分離，依次用體積比為10:1(8個柱體積）、5:1(10個柱體積)和2:1(5個柱體 積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反 相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個柱體積洗脫液， 洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)(純度大于98% )。
[0021] 結構確證:冊431-]\^顯示[]\?^]+為111/2 439.1442，結合核磁特征可得分子式為 C22H24〇8,不飽和度為11。核磁共振氫譜數據 SH(ppm，DMS0-d6,400MHz):H-2(4.01，m)，H-2 (4.13，m)，H-6(5.29，d，J=9.1)，H-7(3.23，m)，H-8(5.31，m)，H-9(1.22，m)，H-9(2.30，dd，J = 13.0,4.5)，H-13(6.07，d，J = 2.9)，H-13(5.69，d，J = 2.9)，H-14(1.36，s)，H-15(1.92， s)，H-18(5.41，d，J = 6.2)，H-19(6.01，br，s)，H-19(6.42，br，s)，H-20(1.38，d，J = 6.7)，H- 22 (1 · 96，s);核磁共振碳譜數據δ。(ppm，DMS〇-d6，1 OOMHz): 7210 · 5 (C，1 -C)，51 · 3 (CH2，2-C)， 196.1(C，3-C)，130.2(C，4-C)，152.1(C，5-C)，68.8(CH，6-C)，47.7(CH，7-C)，70.4(CH，8-C)，43.5(CH2,9-C)，42.9(C，10-C)，135.8(C，11-C)，168.3(C，12-C)，121.2(CH2，13-C)，20.7 (CH 3，14-C)，10.6(CH3，15-C)，164.8(C，16-C)，139.2(C，17-C)，64.7(CH，18-C)，126.0(CH2， 19-〇，18.7(〇1 3,20-〇，169.6((：，21-〇,21.3(〇13,22-〇。11?光譜表明該化合物含有雙鍵 (1643cm-〇 和酯基（1782 和 1734cm-4 功能團。1H-NMR 譜顯示三個甲基[SH1.36(3H，s，Me-14)， 1.92(3!1，8，]\^-15)和1.38(3!1，(1，了 = 6.7取，]\^-20)]，一個乙酰甲基[3!11.96(3!1，8，]\^-22)]，兩個烯屬亞甲基質子信號[5冊.07(1!1，(1，1 = 2.9他，!1-13)，5.69(1!1，(1，1 = 2.9他，!1-13)，6.01(1!1，1^，8，!1-19)和6.42(1!1，1^，8，!1-19)]，三個含氧次甲基質子信號[5!15.29(1!1， 111，!1-6)，5.31(1!1，111，!1-8)和5.41(1!1，(1，了 = 6.2!^，!1-18)]。13(：-匪1?譜顯示22個碳信號，包括 四個甲基，四個亞甲基(兩個烯烴碳），四個次甲基(三個含氧碳）以及十個季碳(兩個酮羰基 碳，三個酯羰基碳和四個烯烴碳KHMBC譜中H 2-2和Me-15與C-3，Me-15、Me-14和H2-9與C-5的 相關性表明C-3為酮羰基，C-4和C-5形成雙鍵。氫譜顯示兩個特征性的單質子雙峰信號[δ 此.07(1!1，(1，了 = 2.9抱，!1-13)和5.69(1!1，(1，了 = 2.9抱，!1-13)]，且都與!1-7[3[13.23(1!1，111)]相 連，證實了 α-亞甲基-γ-內酯結構的存在。此外，Η-6和Η-7的耦合常數(J6,7 = 9.1Hz)以及Η-7和H-13的烯丙基耦合常數(J7,13 = 2.9Hz)表明內酯為反式連接。HMBC譜中，H-8與C-16的相 關性表明C-8位連有一個酯基。HMBC譜中H-18與C-21，Me-22與C-21的相關性表明C-18位連 有一個乙酰氧基。通過HMBC譜中H 2-19與C-17的相關性可知C-17和C-19之間存在雙鍵。 N0ESY譜中H-8與H-6,以及H-6與Me-14的相關性表明H-6、H-8和Me-14為β構型。綜合氫譜、碳 譜、HMBC譜和N0ESY譜，以及文獻關于相關類型核磁數據，可基本確定該化合物如下所示，立 體構型進一步通過E⑶試驗確定，理論值與實驗值基本一致。
[0022]該化合物化學式及碳原子編號如下：
[0024] 實施例2:藥理作用
[0025]本實施例對化合物（I )、氫氯噻嗪、氫氯噻嗪與化合物（I)組合物改善肺部免疫功 能進行研究。
[0026] 1、材料與方法
[0027] 1.1試劑
[0028] 氫氯噻嗪購自中國藥品生物制品檢定所。化合物（I)自制，制備方法見實施例1。戊 巴比妥鈉；RPMI1640(With L_glutamine;Without sodium bicarbonate)，GIBC0BRL公司； 無支原體新生小牛血清(New Born Calf Serum)，Hyclone公司；Hepes，Sigma公司；LDH試劑 盒，ACP試劑盒，南京建成生物工程研究所;氫溴鳥氨酸;印度墨汁。
[0029] 1.2實驗儀器
[0030] 752紫外分光光度計，上海第三分析儀器廠；隔水式電熱恒溫培養箱，重慶四達實 驗儀器廠醫療儀器廠;恒溫震蕩水槽，上海實驗儀器總廠;MA200電子秤;TDL-5離心機，上海 安亭科學儀器廠;生物顯微鏡，重慶光學儀器廠;JY92-II型超聲波細胞粉碎機，寧波新芝科 器研究所。
[0031] 1.3實驗動物及飼養
[0032]肺巨噬細胞實驗采用Wistar 10月齡雌性二級大鼠，由中國醫學科學院動物中心 繁育場提供。將大鼠隨機分為對照組、化合物（I)組（200mg/kg. bw)、氫氯噻嗪組（200mg/ kg · bw)和氫氯噻嗪與化合物（I)組合物組（100mg/kg · bw+100mg/kg · bw)。
[0033]按照上述劑量連續灌喂給藥28d后進行各項指標的測定。
[0034] 1.4大鼠肺巨噬細胞(ΑΜΦ )吞噬功能的測定
[0035]末次給藥第2d，對所有大鼠進行支氣管肺泡原位灌洗(BAL)，將灌洗液進行離心洗 滌。后用生理鹽水將細胞沉淀定容于0.7ml，分別吸取0.3ml細胞懸液及0.3ml 1 %雞紅細胞 懸液在試管中混勻（做平行），然后吸取混合液滴于玻片上，鋪片37°C培養48min，用生理鹽 水沖洗，甲醇固定，Giemsa-Wright-PB染色，油鏡下觀察吞噬雞紅細胞的巨噬細胞數及被吞 噬的雞紅細胞數，計算吞噬率及吞噬指數：
[0036] 吞噬率=吞噬雞紅細胞的巨噬細胞數/計數的觀察巨噬細胞總數X 100%
[0037] 吞噬指數=被吞噬的雞紅細胞總數/計數的觀察巨噬細胞總數X 100%
[0038] 1.5大鼠肺巨噬細胞酶活性的測定
[0039] 獲得肺巨噬細胞灌洗液后，37°C培養2h，將肺巨噬細胞反復凍融，制成破碎的ΑΜΦ 懸液。測定酸性磷酸酶(ACPase)及精氨酸酶(Arginase)的酶活性。
[0040] 2、實驗結果
[0041 ] 2.1對ΑΜΦ吞噬功能的影響
[0042]由表1可見，經口給予化合物（I )、氫氯噻嗪、氫氯噻嗪與化合物（I)組合物28d后， 與對照組比較，肺巨噬細胞吞噬率和吞噬指數均顯著提高(P〈〇.01或P〈〇.05)。結果提示:化 合物(I)、氫氯噻嗪均具有提高肺巨噬細胞吞噬的功能，且兩者合用效果更強。
[0043] 實驗結果見表1。
[0044] 表1對大鼠肺巨噬細胞吞噬功能的影響
[0046] 2.2對崖〇內酶活力的影響
[0047] 由表2可見，經口給予化合物（I)、氫氯噻嗪、氫氯噻嗪與化合物（I)組合物28d后， 與對照組比較，肺巨噬細胞內酸性磷酸酶(ACPase)活性和精氨酸酶(Arginase)活性均顯著 提高(P〈〇.01或P〈〇.05)。化合物（I)、氫氯噻嗪能夠提高肺巨噬細胞內ACPase及Arginase活 性，且兩者合用效果更顯著。實驗結果見表2。
[0048] 表2對大鼠ΑΜΦ內酶活力的影響
[0051] 上述結果表明，氫氯噻嗪、化合物（I)單獨作用時，能提高肺巨噬細胞吞噬的功能 和AMΦ內酶活力，對肺免疫功能具有改善作用;氫氯噻嗪和化合物（I)聯合作用時，對肺免 疫功能的改善效果進一步提高，可以開發成改善肺免疫功能的藥物。
[0052] 上述實施例的作用在于說明本發明的實質性內容，但并不以此限定本發明的保護 范圍。本領域的普通技術人員應當理解，可以對本發明的技術方案進行修改或者等同替換， 而不脫離本發明技術方案的實質和保護范圍。
【主權項】
1. 一種具有下述結構式的化合物α)，2. -種氫氯噻嗪的藥物組合物，其特征在于:包括氫氯噻嗪、如權利要求1所述的化合 物(I)和藥學上可以接受的載體，制備成需要的劑型。3. 根據權利要求2所述的氫氯噻嗪的藥物組合物，其特征在于:藥學上可以接受的載體 包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體 或潤滑劑。4. 根據權利要求2所述的氫氯噻嗪的藥物組合物，其特征在于:所述劑型包括片劑、膠 囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、 栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。5. 權利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含以下操作步驟：（a)將桑 白皮粉碎，用65~85%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙 酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b) 步驟(a)中正丁醇萃取物用大孔樹脂除雜，先用6%乙醇洗脫8個柱體積，再用70%乙醇洗脫 8個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70 %乙醇洗 脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗 脫得到4個組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為10:1、5:1和 2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反 相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個柱體積洗脫液， 洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。6. 根據權利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)用75%乙醇熱回 流提取，合并提取液。7. 根據權利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為AB-8型 大孔吸附樹脂。8. 根據權利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中用二氯甲烷代 替乙酸乙酯進行萃取，得到二氯甲烷萃取物。9. 權利要求1所述的化合物（I)在制備改善肺免疫功能的藥物中的應用。10.權利要求2~4任一所述的氫氯噻嗪的藥物組合物在制備改善肺免疫功能的藥物中 的應用。
【文檔編號】A61K31/365GK105949155SQ201610403493
【公開日】2016年9月21日
【申請日】2016年6月7日
【發明人】黃芳
【申請人】黃芳