一種醋酸可的松的藥物組合物及其醫藥用圖
【專利摘要】本發明公開了一種醋酸可的松的藥物組合物及其醫藥用途，本發明提供的醋酸可的松的藥物組合物中含有醋酸可的松和一種結構新穎的天然產物化合物(Ⅰ)，醋酸可的松、化合物(Ⅰ)單獨作用時，具有抗炎鎮痛作用；醋酸可的松和化合物(Ⅰ)聯合作用時，抗炎鎮痛效果進一步提高，可以開發成抗炎鎮痛藥物，與現有技術相比具有突出的實質性特點和顯著的進步。
【專利說明】
一種醋酸可的松的藥物組合物及其醫藥用途
技術領域
[0001] 本發明屬于生物醫藥領域，涉及醋酸可的松的新用途，具體涉及一種醋酸可的松 的藥物組合物及其醫藥用途。
【背景技術】
[0002] 醋酸可的松是一種腎上腺皮質激素，為臨床常用內分泌系統用藥。
[0003] 迄今為止，尚未見醋酸可的松及其藥物組合物與抗炎鎮痛的相關性報道。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的在于提供一種醋酸可的松的藥物組合物，該藥物組合物中含有醋酸 可的松和一種結構新穎的天然產物，醋酸可的松和該天然產物可以協同抗炎鎮痛。
[0005] 本發明的上述目的是通過下面的技術方案得以實現的：
[0006] 一種具有下述結構式的化合物（I)，
[0008] -種醋酸可的松的藥物組合物，包括醋酸可的松、如權利要求1所述的化合物（I) 和藥學上可以接受的載體，制備成需要的劑型。
[0009] 進一步地，藥學上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、 崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑。
[0010] 進一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、 膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。
[0011] 上述化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將丁公藤粉碎，用70~90%乙 醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃 取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中正丁醇取物用 大孔樹脂除雜，先用20 %乙醇洗脫12個柱體積，再用80 %乙醇洗脫15個柱體積，收集80 %洗 脫液，減壓濃縮得80%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中80%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分 離，依次用體積比為80 :1、40:1、20:1和10:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得至1」4個組分；（(1)步 驟(c)中組分3用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為25:1、20:1和15:1的二氯甲烷-甲醇 梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積 百分濃度為65%的甲醇水溶液等度洗脫，收集13~17個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得 到化合物(I)。
[0012] 進一步地，化合物（I)的制備方法中，所述大孔樹脂為D101型大孔吸附樹脂。
[0013] 上述化合物(I)在制備抗炎鎮痛的藥物中的應用。
[0014] 上述醋酸可的松的藥物組合物在制備抗炎鎮痛的藥物中的應用。
[0015] 本發明的優點：
[0016] 本發明提供的醋酸可的松的藥物組合物中含有醋酸可的松和一種結構新穎的天 然產物，醋酸可的松和該天然產物單獨作用時，具有抗炎鎮痛作用；二者聯合作用時，抗炎 鎮痛作用進一步提高，可以開發成抗炎鎮痛的藥物。本發明與現有技術相比具有突出的實 質性特點和顯著的進步。
【具體實施方式】
[0017] 下面結合實施例進一步說明本發明的實質性內容，但并不以此限定本發明保護范 圍。盡管參照較佳實施例對本發明作了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解，可以對 本發明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發明技術方案的實質和范圍。
[0018] 實施例1:化合物(I)分離制備及結構確證
[0019]分離方法：（a)將丁公藤(2kg)粉碎，用80%乙醇熱回流提取（15LX3次），合并提取 液，濃縮至無醇味（3L)，依次用石油醚（3L X 3次）、乙酸乙酯（3L X 3次）和水飽和的正丁醇 (3LX3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中 乙酸乙酯萃取物用D101型大孔樹脂除雜，先用20 %乙醇洗脫12個柱體積，再用80 %乙醇洗 脫15個柱體積，收集80%洗脫液，減壓濃縮得80%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中80%乙醇 洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1 (10個柱體積）、40:1 (8個柱體積）、20:1 (8個柱體積)和10:1(9個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步驟(c)中組 分3用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為25:1(7個柱體積）、20:1(8個柱體積)和15:1(7 個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵 合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為65 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集13~17個柱體積 洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物（I) (HPLC歸一化純度大于98% )。。
[0020] 結構確證:HR-ESI-MS顯示[M+Na]+為m/z415.2093,結合核磁特征可得分子式為 C22H32〇6，不飽和度為7。核磁共振氫譜數據δΗ(ρρπι，CDC1 3，500MHz): H-la(1 · 29，m)，H-lb (1.54，m)，H-2a(1.81，m)，H-2b(1.92，m)，H-3(5.91，s)，H-5(2.25，m)，H-6a(2.21，m)，H-6b (2.87，d，J=12.3Hz)，H-9(2.26，m，2H)，H-12(1.83，s)，H-13(2.04，s)，H-14(0.99，s)，H-15 (1.58，s)，H-3'（3.44，q，J = 6.2Hz)，H-4'（1.36，d，J = 6.2Hz)，H-5'（1.42，s)，4-Ac0(1.96， 8);核磁共振碳譜數據5。(？?111，0)(：1 3，1251他）：33.5(012，1-〇,22.8(012,2-〇,71.4(01，3-C)，83.3(C，4-C)，45.2(CH，5-C)，25.4(CH2,6-C)，130.2(C，7-C)，201.1(C，8-C)，59.8(CH2， 9-C)，36.3(C，10-C)，145.3(C，ll-C)，22.3(CH3，12-C)，23.1(CH 3，13-C)，18.8(CH3，14-C)， 18.7(CH3，15-C)，168.7(C，1'-C)，64.1(C，2'-C)，61.6(CH，3'-C)，13.1(CH3,4'-C)，18.3 (CH 3，5'-C)，169.9(C，4-AcO)，21.6(CH3,4-Ac0)。紅外波譜中的1734cm- 1 與1641cm-1 吸收帶 表明結構中存在羰基與雙鍵片段。13C_NMR、DEPT和HSQC譜中顯示有22個碳信號，包括七個甲 基(一個乙酰甲基），四個亞甲基，三個次甲基(兩個連氧碳），以及八個季碳(三個羰基碳，兩 個烯烴碳和兩個連氧季碳）。以上功能結構再結合不飽和數表明該化合物為三環結構。 1H-匪R譜結合HSQC譜顯示六個甲基質子信號δΗ 1.83(3H，s)、2.04(3H，s)、0.99(3H，s)、1.58 (3H，s)、1.36(3H，d，J = 6.2Hz)、1.42(3H，s)，一個乙酰基甲基質子信號 δΗ 1.96(3H，s)，兩 個連氧次甲基質子信號δΗ 5.91(lH，s)與3.44(1!14，1 = 6.2他）；以上~1?數據可以確認該 化合物為闊苞菊酮衍生物。HMBC譜中!1-12/(：-11、!1-13/(：-11、!1-14/(：-10、!1-15/(：-4的相關信 號可以歸屬為闊苞菊酮上的甲基片段，C-3位質子信號移向低場說明C-3羥基被酯化，通過 HMBC譜中H-3/C-1' 的相關性得到進一步確認。HMBC譜中H-3 VC-Γ/C-2'/C-4'、H-4'/C-3'、 H-5'/C-2 VC-Γ的相關性以及C-2'與C-3'碳化學位移可以確認結構中存在2'-甲基-2'， 3'-環氧-丁酰氧基邊鏈結構，而質子信號δ Η 1.42以及1.36可以歸屬為H-5'的甲基信號與 Η-4'的甲基信號。NOESY譜中Ηρ-Ι/Η-Η,Ηρ-Ι/Ηυ?/Η-Ιδ以及Η-14/Η-15相關信號表明Η- 3、Η-14和Η-15在闊苞菊酮骨架的同側，此外Ηα-1/Η-5相關信號暗示Η-5在Η-3、Η-14和Η-15 的異側。該化合物的相對構型進一步通過X-單晶衍射確認，C-3位的絕對構型通過酸解反應 與Mosher法可以確認為R構型。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和NOESY譜，以及文獻關于相關類型 核磁數據，可基本確定該化合物如下所示，立體構型進一步通過ECD試驗確定，理論值與實 驗值基本一致。該化合物化學式及碳原子編號如下：
[0022] 實施例2:藥理作用
[0023] 1、材料與方法
[0024] 1.1動物
[0025]昆明種小白鼠，雌雄各半(個別實驗用雄性），體質量(20±2)g;WiStar大鼠，雄性， 體質量(200 ± 20) g，均由黑龍江中醫藥大學實驗動物中心提供。
[0026] 1.2試劑與樣品
[0027] 醋酸可的松購自中國藥品生物制品檢定所。化合物（I)自制，制備方法見實施例1。 阿司匹林腸溶片(河南新匯制藥有限公司產品）；二甲苯、冰醋酸等化學試劑均為分析純，雞 蛋清溶液為新鮮配制。
[0028] 1.3儀器
[0029] 自制足趾腫脹測定儀
[0030] 1.4二甲苯所致小鼠耳腫脹實驗
[0031]取小鼠50只，雄性，按體質量隨機分為5組，每組10只，各組分別為空白對照組、陽 性對照組(阿司匹林，500mg · kg-4和醋酸可的松組(80mg · kg-4、化合物（I)組(80mg · kg 4)、醋酸可的松與化合物（I)組合物組【40mg · kg^1醋酸可的松+40mg · kg^1化合物（I)】。空 白對照組灌服等量生理鹽水，其余按照藥物給藥，灌胃給藥連續3天。末次給藥30min后，立 即在小鼠左耳前后兩面涂抹二甲苯0.05mL，lh后將小鼠脫頸椎處死，沿耳廓基線剪下左右 兩耳片，用6mm直徑打孔器分別在同一部位打下圓耳片，稱兩耳重量，計算耳腫脹度。
[0032] 1.5蛋清所致大鼠足腫脹實驗
[0033]取大鼠50只，雄性，按體質量隨機分成5組(分組同1.4)，每組10只。實驗前在各鼠 右后足踝關節處作標記，用容積測定法測定各鼠右后足容積兩次，取平均值作為正常足容 積。空白對照組灌服等量生理鹽水，其余按照藥物給藥，連續3天，末次給藥30min后每只大 鼠右后足跖部皮下注射10%新鮮雞蛋清生理鹽水溶液O.lmL致炎，于致炎后2.Oh測定大鼠 足容積，連續2次，平均值為測定值，計算各鼠致炎前后右后足跖容積變化值、腫脹率及抑制 率。
[0034] 1.6醋酸所致小鼠扭體反應實驗
[0035]取小鼠50只，雌雄各半，按體質量隨機分為5組(分組及給藥量同1.4)，每組10只， 各組連續3天灌胃給藥，末次給藥30min后腹腔注射0.3%HAc溶液0. lmL/10g，觀察注射后 15min內小鼠出現扭體的次數。
[0036] 1.7統計學方法
[0037]以均數土標準差(X土s)表示，數據處理用SPSS13.0統計軟件進行成組設計t檢驗。 [0038] 2、實驗結果
[0039] 2.1對二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響
[0040] 腫脹程度=每鼠左耳片質量一右耳片質量
[0041] 與空白對照組比，陽性對照組小鼠耳腫脹程度顯著降低(P<0.01);與空白對照組 比，醋酸可的松組、化合物（I)組小鼠耳腫脹程度降低(P<〇.05);與空白對照組比，醋酸可 的松組和化合物（I)組合物組小鼠耳腫脹程度顯著降低(P<〇.01)。結果見表1。
[0042] 2.2對蛋清所致大鼠足腫脹的影響
[0043] 腫脹率=(致炎后足跖容積一致炎前足跖容積)/致炎前足跖容積X 100% ;
[0044] 抑制率=(空白對照組腫脹率一給藥組腫脹率)/空白對照組腫脹率X 100%。 [0045]與空白對照組比，陽性對照組大鼠足腫脹度顯著降低（P<0.01);與空白對照組 比，醋酸可的松組、化合物（I)組大鼠足腫脹度降低(P<〇.05);與空白對照組比，醋酸可的 松組和化合物（I)組合物組大鼠足腫脹度顯著降低(P<〇.01)。結果見表1。
[0046] 2.3對醋酸所致小鼠扭體反應的影響
[0047] 與空白對照組比，陽性對照組小鼠扭體次數顯著降低（P<0.01);與空白對照組 比，醋酸可的松組、化合物（I)組小鼠扭體次數降低(P<〇.05);與空白對照組比，醋酸可的 松組和化合物（I)組合物組小鼠扭體次數顯著降低(P<〇. 01)。結果見表1。
[0048] 表1對小鼠耳腫脹、大鼠足腫脹、小鼠扭體反應的影響
[0050] 上述結果表明，醋酸可的松、化合物（I)單獨作用時，具有抗炎鎮痛作用;醋酸可的 松和化合物(I)聯合作用時，抗炎鎮痛效果進一步提高，可以開發成抗炎鎮痛藥物。
[0051] 上述實施例的作用在于說明本發明的實質性內容，但并不以此限定本發明的保護 范圍。本領域的普通技術人員應當理解，可以對本發明的技術方案進行修改或者等同替換， 而不脫離本發明技術方案的實質和保護范圍。
【主權項】
1. 一種具有下述結構式的化合物α)，2. -種醋酸可的松的藥物組合物，其特征在于:包括醋酸可的松、如權利要求1所述的 化合物(I)和藥學上可以接受的載體，制備成需要的劑型。3. 根據權利要求2所述的醋酸可的松的藥物組合物，其特征在于:藥學上可以接受的載 體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載 體或潤滑劑。4. 根據權利要求2所述的醋酸可的松的藥物組合物，其特征在于:所述劑型包括片劑、 膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射 劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。5. 權利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含以下操作步驟：（a)將丁 公藤粉碎，用70~90%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙 酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b) 步驟(a)中正丁醇取物用大孔樹脂除雜，先用20%乙醇洗脫12個柱體積，再用80%乙醇洗脫 15個柱體積，收集80%洗脫液，減壓濃縮得80%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中80%乙醇洗 脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1、40:1、20:1和10:1的二氯甲烷-甲醇梯度 洗脫得到4個組分；（d)步驟(c)中組分3用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為25:1、20:1 和15:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合 的反相硅膠分離，用體積百分濃度為65%的甲醇水溶液等度洗脫，收集13~17個柱體積洗 脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。6. 根據權利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為D101型 大孔吸附樹脂。7. 權利要求1所述的化合物（I)在制備抗炎鎮痛的藥物中的應用。8. 權利要求2~4任一所述的醋酸可的松的藥物組合物在制備抗炎鎮痛的藥物中的應 用。
【文檔編號】A61K31/336GK105949151SQ201610380372
【公開日】2016年9月21日
【申請日】2016年5月31日
【發明人】蔣靈錕
【申請人】蔣靈錕