一株防治梨輪紋病和軟腐病的甲基營養型芽孢桿菌及其應用
【專利摘要】本發明公開了一株防治梨輪紋病和軟腐病的甲基營養型芽孢桿菌及其應用。本發明從表面滅菌的霍山石斛根中分離獲得一株內生甲基營養型芽胞桿菌(Bacillus methylotrophicus)，該菌株對多種植物病原菌具有廣譜抗性，對由輪紋病和軟腐病引起的梨果實腐爛具有良好的防治效果。作為生防菌的植物內生菌具有廣譜抗菌性和高效的安全性等優勢，對梨果實安全；大規模生產原料成本低，操作方便，防治效果穩定，能有效解決梨果實病害農藥防治所帶來的農藥殘留和環境污染問題。在梨采后病害的生物防治方面具有巨大的應用潛力，為研制和開發微生物農藥提供了優良的基礎菌株。CGMCC No.1185820151210
【專利說明】
一株防治梨輪紋病和軟腐病的甲基營養型芽孢桿菌及其應用
技術領域
[0001] 本發明屬于微生物領域，具體涉及一株防治梨輪紋病和軟腐病的甲基營養型芽孢 桿菌及其應用。
【背景技術】
[0002] 梨是我國栽培歷史久、面積大、產量高的果樹之一。據統計梨是我國第3大水果，目 前全國總面積達100多萬公頃，年產量800多萬噸，分別占全世界梨栽培面積和產量的62% 和52 %。梨果實在生長發育及貯藏期間，時刻會受到病害的威脅，其中輪紋病 (Botryosphaeria dothidea)是最嚴重的果實真菌病害之一，是造成梨果實爛果的主要原 因。由于輪紋病菌是在幼果期潛伏侵染，在果實成熟及貯運期間發病，控制和防范都有很大 困難。梨軟腐病主要由匍枝根霉(Rhizopus stolonifer)和梨形毛霉(Mucor piriformis) 引起，主要危害梨果實，一般零星發生，但是果實傷口多、貯藏期溫度高時發生較重。高溫 時，5-6天內可使病果全部軟腐。
[0003] 新鮮水果采后腐爛是一個全球性的問題。我國每年因為梨輪紋病危害造成梨果減 產約25%，嚴重時爛果率高達80%以上，造成巨大經濟損失。目前生產上常采用化學藥劑防 治梨采后病害，這樣不僅嚴重污染生態環境，而且增加農產品中有毒化學物質的殘留量，對 人類健康帶來潛在危害，同時也易誘致病原菌抗藥性的產生。
[0004] 生物防治利用物種間的拮抗作用來減少病害的發生，對人畜安全、環境兼容性好、 病蟲害不易產生抗藥性，因而具有化學殺菌劑不具有的優勢，正逐步成為代替化學殺菌劑 的最佳方式。獲得高效拮抗菌是生物防治的基礎。枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis)是最 早被報道用來防治柑橘病害的細菌(Gutter and Littauer，1953)。隨著研究的深入，人們 已篩選并報道多種對果蔬采后病害具有防治效果的拮抗菌，主要是酵母菌、芽胞桿菌、假單 胞菌和木霉菌。幾株微生物詰抗菌已經被授權專利并商業應用，如Biosave(Pseudomonas syringae，USA)、"Shemer"（Metschnikowia Fructicola，Israel)、Serenade(Baci1lus subtilis，USA)和Candi fruit (Candida sake，Spain)。微生物詰抗菌可以產生具有高詰抗 活性的廣譜抗菌物質，具有極強的抗逆能力，同時具有無毒、無殘留、無致病性、對人畜安 全、環境相容性好，滿足了消費者對農產品質量和安全性的要求。
【發明內容】
[0005] 本發明的一個目的是提供一株甲基營養型芽胞桿菌Bacillus methylotrophicus RlB〇
[0006] 本發明提供的甲基營養型芽胞桿菌Bacillus methylotrophicus RIB的保藏編號 為CGMCC No.11858。
[0007] 上述菌株RIB的分類命名為甲基營養型芽胞桿菌Bacillus methylotrophicus，該 菌株于2015年12月10日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（簡稱 CGMCC，地址:北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，郵編100101)，保 藏編號為CGMCC No.11858。
[0008] 本發明的另一個目的是提供上述甲基營養型芽胞桿菌RIB或其菌懸液或其培養液 或其發酵產物或含有其的菌劑的新用途。
[0009] 本發明提供了上述甲基營養型芽胞桿菌R1B或其菌懸液或其培養液或其發酵產物 或含有其的菌劑在防治輪紋病和/或軟腐病中的應用。
[0010]本發明還提供了上述甲基營養型芽胞桿菌R1B或其菌懸液或其培養液或其發酵產 物或含有其的菌劑在制備防治輪紋病和/或軟腐病的產品中的應用。
[0011] 上述應用中，所述輪紋病和/或軟腐病為梨輪紋病和/或梨軟腐病。
[0012] 本發明還提供了上述甲基營養型芽胞桿菌R1B或其菌懸液或其培養液或其發酵產 物或含有其的菌劑在抗菌和/或抑菌中的應用。
[0013] 本發明還提供了上述甲基營養型芽胞桿菌R1B或其菌懸液或其培養液或其發酵產 物或含有其的菌劑在制備抗菌和/或抑菌的產品中的應用。
[0014] 上述應用中，所述抗菌和/或抑菌是通過抑制菌絲生長體現的。
[0015] 上述應用中，所述菌為輪紋病菌Botryosphaeria dothidea和/或軟腐病菌 Rhizopus stolonifer和/或石斛黑斑病菌Alternaria tenuissima和/或棉花黃萎病菌 Verticillium dahliae和/或白菜黑斑病菌Alternaria brassicae和/或灰霉病菌 Botrytis cinerea和/或辣椒立枯病菌Rizoctonia solani和/或香蕉枯萎病菌Fusarium 〇叉5^〇1'11111和/或稻痕病菌？；[1'；[(3111&1^0獷5^&6和/或禾谷鏡抱菌？118&1'；[11111區瓜111；[116&1'11111 0
[0016] 本發明還有一個目的是提供一種產品。
[0017] 本發明提供的產品的活性成分為上述甲基營養型芽胞桿菌R1B或其菌懸液或其培 養液或其發酵產物或含有其的菌劑；
[0018] 所述產品具有如下1)或2)所述的功能：
[0019] 1)防治輪紋病和/或軟腐病；
[0020] 2)抗菌和/或抑菌。
[0021 ] 上述產品中，所述抗菌和/或抑菌是通過抑制菌絲生長體現的；
[0022] 所述菌為輪紋病菌Botryosphaeria dothidea和/或軟腐病菌Rhizopus stolonifer和/或石斛黑斑病菌Alternaria tenuissima和/或棉花黃萎病菌Verticillium dahliae和/或白菜黑斑病菌Alternaria brassicae和/或灰霉病菌Botrytis cinerea和/ 或辣椒立枯病菌Rizoctonia solani和/或香蕉枯萎病菌Fusarium oxysporum和/或稻痕病 菌Piricularia Oryzae和/或禾谷鏡抱菌Fusarium graminearum。
[0023] 本發明的最后一個目的是提供一種防治或輔助防治梨果實輪紋病和/或軟腐病的 方法。
[0024] 本發明提供的防治或輔助防治梨果實輪紋病和/或軟腐病的方法包括如下步驟： 用上述甲基營養型芽胞桿菌R1B或上述產品中的菌懸液處理梨果實。
[0025] 上述方法中，所述菌懸液中甲基營養型芽胞桿菌濃度為5 X 107CFU/ml。
[0026] 本發明從表面滅菌的霍山石斛根中分離獲得一株甲基營養型芽胞桿菌(Bacillus methylotrophicus)，該菌株對多種植物病原菌具有廣譜抗性，對由輪紋病和軟腐病引起的 梨果實腐爛具有良好的防治效果。作為生防菌的植物內生菌具有廣譜抗菌性和高效的安全 性等優勢，用其菌體(或其產生的活性物質)作為天然保鮮劑，大規模生產原料成本低，操作 方便，防治效果穩定，能有效解決梨果實病害農藥防治所帶來的農藥殘留和環境污染問題。 在梨采后病害的生物防治方面具有巨大的應用潛力，為研制和開發微生物農藥提供了優良 的基礎菌株。
【附圖說明】
[0027]圖1為菌株R1B的形態照片。其中，圖1A為菌株R1B培養7天的菌落照片；圖1B為R1B 的菌落放大照片。
[0028]圖2為基于菌株R1B的16S rDNA構建的系統發育樹。
[0029]圖3為菌株R1B與輪紋病菌和軟腐病菌對峙培養的照片。其中，圖3A為菌株R1B與輪 紋病菌對峙培養7天的照片；圖3B為菌株R1B與軟腐病菌對峙培養10天的照片。
[0030] 圖4為菌株R1B作用下輪紋病菌菌絲形態和軟腐病菌菌絲形態。其中，圖4A為R1B處 理組的輪紋病菌菌絲形態；圖4B為對照組的輪紋病菌菌絲形態；圖4C為R1B處理組的軟腐病 菌菌絲形態；圖4D為對照組的軟腐病菌菌絲形態。
[0031] 圖5為菌株R1B對梨果實輪紋病的防治作用。
[0032]圖6為菌株R1B對梨果實軟腐病的防治作用。
[0033] 保藏說明
[0034]菌種名稱：甲基營養型芽胞桿菌
[0035] 拉丁名：Bacillus methylotrophicus
[0036] 菌株編號:RIB
[0037] 保藏機構：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心 [0038] 保藏機構簡稱:CGMCC
[0039]地址:北京市朝陽區北辰西路1號院3號
[0040] 保藏日期：2015年12月10日
[0041 ] 保藏中心登記入冊編號：CGMCC No. 11858
【具體實施方式】
[0042] 下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。
[0043] 下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。
[0044] 下述實施例中的梨品種為"水晶梨"。
[0045]下述實施例中的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基(PDA)配方:馬鈴薯200克、葡萄糖20克、 瓊脂15克，用蒸餾水定容至1升，自然pH。
[0046] 下述實施例中的馬鈴薯葡萄糖培養基(PDB)配方:馬鈴薯200克、葡萄糖20克，用蒸 餾水定容至1升，自然pH。
[0047] 下述實施例中的牛肉膏培養基配方：牛肉膏5.0g、蛋白胨10.0g、NaCl 5g，用蒸餾 水定容至1升，pH 7.2~7.4。
[0048]下述實施例中的R1B菌懸液的制備方法:將R1B接種于牛肉膏培養基中，培養48hr (30°C、150r/min)后，將菌液于4°C、10000r/min離心10min，去上清，然后用無菌水調整到需 要的濃度。
[0049]實施例1、甲基營養型芽胞桿菌株R1B的分離及鑒定
[0050] 一、菌株RIB的分離和純化
[0051 ] 1、將采自安徽六安的霍山石斛用自來水沖洗干凈后，用蒸餾水沖洗，晾干后把根、 莖和葉片剪成小段進行表面消毒。消毒方法如下：70%酒精處理40-60S，無菌水沖洗，然后 用2.5 %次氯酸鈉溶液處理2-5min，無菌水沖洗3-4次。
[0052] 2、在無菌條件下，取100yL最后一次沖洗所產生的無菌水涂布在牛肉膏培養基上， 30°C培養24-72h，觀察有無菌落產生，依此驗證此消毒方法是否殺死了供試材料表面的微 生物。
[0053] 3、在無菌狀態下，將霍山石斛根、莖、葉片切成0.2cm2的片段，置于盛有牛肉膏培 養基的平皿中，28°C條件下培養。組織塊出現菌落后，挑取菌落轉接入新牛肉膏培養基中劃 線純化培養，反復幾次即得到細菌純化菌株，將其接種于牛肉膏培養基斜面試管中，保存于 4°C冰箱中。
[0054]從霍山石斛根、莖、葉片中共分離獲得32株細菌，以梨輪紋病菌為指示菌進行拮抗 細菌的初篩和復篩，其中來自根中的1株細菌表現出強烈的拮抗活性，將該菌株命名為R1B。 [0055] 二、菌株R1B的鑒定 [0056] 1、菌株R1B的形態鑒定
[0057]菌株R1B的形態特征：革蘭氏陽性菌，在牛肉膏蛋白胨培養基上菌落扁平圓形，乳 白色不透明，邊緣鋸齒狀，表面粗糙顆粒狀(圖1A、B)。
[0058] 2、菌株RIB的生理生化的鑒定
[0059]菌株R1B的生理生化特性如表1所示，菌株R1B屬于好氧菌，甲基紅實驗陰性，接觸 酶反應、明膠水解、淀粉水解、VP實驗、硝酸鹽還原實驗均為陽性，可以很好地利用葡萄糖和 蔗糖，對甘露醇的利用較弱，在28~37°C條件下生長最好。根據《常見細菌系統鑒定手冊》， 將菌株R1B初步鑒定為芽孢桿菌屬(Bacillus)細菌。
[0060] 表1、菌株R1B的生理生化特性
[0062] *+-：生長不好**+:生長
[0063] 3、菌株R1B的分子鑒定
[0064]提取菌株R1B的總DNA作為模板，采用通用引物27f和1492r進行PCR擴增，得到含有 菌株RIB 16S rDNA保守區的片段。引物序列如下：
[0065] 27以上游引物）：5/-厶6厶61'11^丁(：0^(：1^6-3/;
[0066] 1492r(下游引物）：5' -TACGGTTACCTTGTTACGACTT-3'。
[0067] PCR擴增得到的菌株R1B的16s rDNA的序列如序列1所示。基于16S rDNA序列的系 統發育樹如圖2所不。
[0068] 4、菌株的保藏
[0069]根據形態特征、生理生化和分子鑒定結果和分析，菌株R1B的分類命名為甲基營養 型芽胞桿菌(1^(3；[11113 11161:117101：1'(^11；[(3118)，該菌株于2015年12月10日保藏于中國微生物 菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址:北京市朝陽區北辰西路1號院3號， 中國科學院微生物研究所，郵編100101)，保藏編號為CGMCC No. 11858。
[0070]實施例2、菌株RIB在抑菌或抗菌中的應用
[0071 ] -、菌株R1B對梨輪紋病菌和軟腐病菌的拮抗活性
[0072] 在FOA培養基上分別活化病原菌株梨輪紋病菌(Botryosphaeria dothidea)和軟 腐病菌(Rhizopus stolonifer)，用6mm的打孔器打取菌餅，分別得到梨輪紋病菌餅和軟腐 病菌餅。采用對峙培養法，分別將梨輪紋病菌餅和軟腐病菌餅接種在直徑為9cm的PDA平板 一側，相對的一側劃線接種菌株R1B，兩接種點相距3-4cm，并以單獨接種在PDA平板上的病 原菌株梨輪紋病菌和軟腐病菌做對照。均設3個重復，在25°C條件下培養，當對照長滿全皿 時，測量處理菌落直徑和抑菌帶寬度，抑菌活性采用抑制率=[(對照菌落半徑一處理菌半 徑)/對照菌落半徑]X 100%。
[0073]結果如圖3所示，菌株R1B對輪紋病菌表現出強烈的抑菌作用，抑菌率達到72.7% (圖3A)。軟腐病菌生長迅速，一天即可滿皿，菌株R1B周圍有明顯的抑菌帶(0.5-lcm)，十天 后依然清晰（圖3B)。說明菌株R1B對兩種梨病原菌梨輪紋病菌和軟腐病菌均有明顯的抑制 作用。
[0074] 二、菌株R1B的抗菌譜
[0075]以石斛黑斑病菌（Alternaria tenuissima)、棉花黃萎病菌（Verticillium dahliae)、白菜黑斑病菌(Alternaria brassicae)、灰霉病菌(Botrytis cinerea)、辣椒立 枯病菌（Rizoctonia solani)、香蕉枯萎病菌（Fusarium oxysporum)、稻痕病菌 (Piricularia Oryzae)和禾谷鐮孢菌(Fusarium graminearum)作為供試植物病原菌，研究 菌株R1B的抑菌譜。具體步驟如下：
[0076] 在FOA培養基上分別活化石斛黑斑病菌(Alternaria tenuissima)、棉花黃萎病菌 (Verticillium dahliae)、白菜黑斑病菌(Alternaria brassicae)、灰霉病菌(Botrytis cinerea)、辣椒立枯病菌(Rizoctonia solani)、香蕉枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、稻 痕病菌(Piricularia Oryzae)和禾谷鐮孢菌(Fusarium graminearum)，并用6mm的打孔器 打取菌餅，分別得到上述各病菌菌餅。采用對峙培養法，分別將上述各病菌菌餅接種在直徑 9cm的TOA平板一側，相對的一側劃線接種菌株R1B，兩接種點相距3-4cm，以病原菌單獨接種 在PDA平板上做對照。均設3個重復，在25°C條件下培養，當對照長滿全皿時，測量各病原菌 落直徑和抑菌帶寬度，抑菌活性采用抑制率=[(對照菌落半徑一處理菌半徑)/對照菌落半 徑]X100%〇
[0077] 結果如表2所示，菌株R1B對8種供試植物病原真菌石斛黑斑病菌（Alternaria tenuissima)、棉花黃萎病菌（Verticillium dahl iae)、白菜黑斑病菌（A1 ternar ia brassicae)、灰霉病菌(Botrytis cinerea)、辣椒立枯病菌(Rizoctonia solani)、香蕉枯 萎病菌（Fusarium oxysporum)、稻痕病菌（Piricularia Oryzae)和禾谷鏡抱菌（Fusarium graminearum)均表現出強烈的抑制效果，抑菌率均在50 %以上。說明菌株RIB具有廣譜的抑 菌能力，可用于多種病害的生物防治。
[0078]表2、R1B對不同植物病原菌的抑制結果
[0080]三、菌株RIB對梨輪紋病菌和軟腐病菌菌絲生長的影響
[0081 ]在PDA培養基上分別活化病原菌株梨輪紋病菌和軟腐病菌，用6mm的打孔器打取菌 餅，分別得到梨輪紋病菌餅和軟腐病菌餅。將梨輪紋病菌餅和軟腐病菌餅研碎后，分別接種 在l/l〇roB培養基中，25°C，150rpm/min培養2天后，加入濃度為1 X 107CFU/ml的R1B菌懸液， 并以單獨接種在接種在1/10PDB培養基中的梨輪紋病菌和軟腐病菌做對照。均設3個重復， 在25 °C條件下培養后鏡檢菌絲生長狀況。
[0082]結果如圖4所示，在菌株R1B作用下，輪紋病菌菌絲形態發生嚴重畸變，菌絲粗細不 均，有的生長菌絲的頂端畸形，形成膨脹泡后破裂，細胞內物質向外泄漏（圖4A);而對照菌 絲粗細均勻且表面光滑、生長旺盛（圖4B)。說明菌株R1B嚴重破壞了菌絲形態，具有抑制輪 紋病菌菌絲生長的作用。
[0083]在菌株R1B作用下，軟腐病菌幾乎不能生長，菌絲出現斷裂和自溶（圖4C)，而對照 病菌菌絲生長旺盛（圖4D)。說明菌株R1B可完全抑制軟腐病菌菌絲的生長。
[0084]實施例3、菌株R1B在防治梨果實輪紋病中的應用 [0085] 一、菌株R1B對梨果實輪紋病的防治作用 [0086] 1、梨預處理
[0087] 選取外觀整齊、無病蟲害、無外傷的果實，先用自來水沖洗干凈，然后用75%酒精 噴灑消毒，2min后用無菌濾紙擦干表面備用。
[0088] 2、R1B菌懸液處理
[0089] 用無菌打孔器(直徑6mm)在果實表面對稱打兩個深度盡可能一致的傷口，在傷口 內分別接種50yL 5X 107CFU/ml的RIB菌懸液(RIB處理組，RIB)和等量無菌水(對照組，ck)， 每處理8個果實，重復3次，室溫放置一天。
[0090] 3、接種病原菌
[0091]分別在步驟2中的R1B處理組和對照組的傷口處接種直徑6mm的輪紋病菌塊，接種 處理后放入PE密閉箱中在25°C，RH>90%條件下培養，定時觀察并記錄結果，并計算平均發 病率（％ )和平均病斑直徑(cm) 0
[0092] 菌株R1B對梨果實輪紋病的防治作用結果如圖5和表3所示，R1B處理組與對照組相 比，梨果實輪紋病的發病情況明顯減弱。在接入輪紋病菌3天后，對照組開始發病，R1B處理 可以完全抑制梨果實輪紋病的發生;接入輪紋病菌5天后，對照組100 %發病，而R1B處理依 然可以100%抑制梨果實輪紋病的發生;接入病菌7天后，R1B處理組開始出現病斑;9天后， 對照組腐爛面積大于50%，直徑在6cm左右，而R1B處理組的梨果實病斑直徑平均在2. lcm， 比對照降低了65.1%，R1B處理有效的減緩了梨輪紋病的發生和發展，具有良好的防治效 果。
[0093]表3、R1B對梨果實輪紋病的防治作用
[0095]二、不同濃度R1B菌懸液對梨果實輪紋病的防治作用 [0096] 1、梨預處理
[0097]選取外觀整齊、無病蟲害、無外傷的果實，先用自來水沖洗干凈，然后用75%酒精 噴灑消毒，2min后用無菌濾紙擦干表面備用。
[0098] 2、不同濃度的R1B菌懸液處理
[0099] 用無菌打孔器(直徑6mm)在果實表面對稱打兩個深度盡可能一致的傷口，在其中 一個傷口內分別接種 1 X l〇8CFU/ml、l X 107CFU/ml、l X 106CFU/ml和 1 X 105CFU/ml R1B菌液 50yL，并在另一個傷口內加入等量無菌水為對照。每處理8個果實，重復3次，室溫放置一天。
[0100] 3、接種病原菌
[0101]分別在步驟2中的各個R1B處理組和對照組的傷口處接種直徑6mm的輪紋病菌塊， 接種處理后放入PE密閉箱中在25°C，RH>90%條件下培養，定時觀察并記錄結果，并計算平 均發病率（％ )和平均病斑直徑(mm)。
[0102] 不同濃度R1B菌懸液對梨果實輪紋病的防治作用如表4所示。從表中可以看出：不 同濃度的R1B菌懸液處理梨果實9天，隨著R1B菌懸液濃度的降低，對梨輪紋病的防治作用逐 漸減弱，1 X l〇8CFU/ml R1B處理組效果最好，延遲和減緩梨輪紋病的發生，具有良好的防治 作用。
[0103] 表4、不同濃度R1B對梨果實輪紋病的防治作用
[0105]實施例4、菌株RIB在防治梨果實軟腐病中的應用 [0106] 1、梨預處理
[0107] 選取外觀整齊、無病蟲害、無外傷的果實，先用自來水沖洗干凈，然后用75%酒精 噴灑消毒，2min后用無菌濾紙擦干表面備用。
[0108] 2、R1B菌懸液處理
[0109] 用無菌打孔器(直徑6mm)在果實表面對稱打兩個深度盡可能一致的傷口，在傷口 內分別接種50yL 5X 107CFU/ml的R1B菌懸液(R1B處理組，R1B)和等量無菌水(對照組，ck)， 每處理8個果實，重復3次，室溫放置一天。
[0110] 3、接種病原菌
[0111] 分別在步驟2中的R1B處理組和對照組的傷口處接種1 X 105spores/ml的匍枝根霉 (Rhizopus stolonifer)懸液50yL接種處理后放入PE密閉箱中在25°C，RH>90%條件下培 養，定時觀察并記錄結果，并計算平均發病率（％)和平均病斑直徑(_)。
[0112]菌株R1B對梨果實軟腐病的防治作用如圖6和表5所不。從表中可以看出：匍枝根霉 接種后，對照組發病迅速，在接入軟腐病菌2天后，對照組病斑直徑已達6-9cm，RlB處理組可 以完全抑制梨果實軟腐病的發生;4天后，對照組梨果實全部腐爛，滲出大量的液體，且布滿 黑色菌絲和孢子;而R1B處理組依然100%抑制梨果實軟腐病的發生;直至12天后R1B處理組 才開始發病。說明菌株R1B對梨果實軟腐病的發生有很好的防治作用。
[0113]表5、R1B對梨果實軟腐病的防治作用
[0114]
【主權項】
1. 一株甲基營養型芽胞桿菌Bacillus methylotrophicus R1B，其保藏編號為CGMCC No.11859。2. 權利要求1所述的甲基營養型芽胞桿菌RIB或其菌懸液或其培養液或其發酵產物或 含有其的菌劑在防治輪紋病和/或軟腐病中的應用； 或權利要求1所述的甲基營養型芽胞桿菌R1B或其菌懸液或其培養液或其發酵產物或 含有其的菌劑在制備防治輪紋病和/或軟腐病的產品中的應用。3. 根據權利要求2所述的應用，其特征在于:所述輪紋病和/或軟腐病為梨輪紋病和/或 梨軟腐病。4. 權利要求1所述的甲基營養型芽胞桿菌R1B或其菌懸液或其培養液或其發酵產物或 含有其的菌劑在抗菌和/或抑菌中的應用； 或權利要求1所述的甲基營養型芽胞桿菌R1B或其菌懸液或其培養液或其發酵產物或 含有其的菌劑在制備抗菌和/或抑菌的產品中的應用。5. 根據權利要求4所述的應用，其特征在于：所述菌為輪紋病菌Botryosphaeria dothidea和/或軟腐病菌Rhizopus stolonifer和/或石斛黑斑病菌Alternaria tenuissima和/或棉花黃萎病菌Verticillium dahliae和/或白菜黑斑病菌Alternaria brassicae和/或灰霉病菌Botrytis cinerea和/或辣椒立枯病菌Rizoctonia solani和/或 香蕉枯萎病菌Fusarium oxysporum和/或稻痕病菌Piricularia Oryzae和/或禾谷鐮孢菌 Fusarium graminearum。6. -種產品，其活性成分為權利要求1所述的甲基營養型芽胞桿菌（Bacillus methylotrophicus )R1B或其菌懸液或其培養液或其發酵產物或含有其的菌劑； 所述產品具有如下1)或2)所述的功能： 1) 防治輪紋病和/或軟腐病； 2) 抗菌和/或抑菌。7. 根據權利要求6所述的產品，其特征在于:所述輪紋病和/或軟腐病為梨輪紋病和/或 梨軟腐病。8. 根據權利要求6所述的產品，其特征在于：所述菌為輪紋病菌Botryosphaeria dothidea和/或軟腐病菌Rhizopus stolonifer和/或石斛黑斑病菌Alternaria tenuissima和/或棉花黃萎病菌Verticil lium dahl iae和/或白菜黑斑病菌Alternaria brassicae和/或灰霉病菌Botrytis cinerea和/或辣椒立枯病菌Rizoctonia solani和/或 香蕉枯萎病菌Fusarium oxysporum和/或稻痕病菌Piricularia Oryzae和/或禾谷鐮孢菌 Fusarium graminearum。9. 一種防治或輔助防治梨果實輪紋病和/或軟腐病的方法，包括如下步驟:用權利要求 1所述的甲基營養型芽胞桿菌R1B或權利要求6所述的產品中的菌懸液處理梨果實。10. 根據權利要求9所述的方法，其特征在于:所述菌懸液中甲基營養型芽胞桿菌濃度 為5X107CFU/ml〇
【文檔編號】A23B7/155GK105936886SQ201610560361
【公開日】2016年9月14日
【申請日】2016年7月15日
【發明人】武利勤, 尚宏忠, 顧海科, 王青, 劉桂君, 周思靜, 王平
【申請人】北京市輻射中心