一種綿羊ucp1等位基因型的檢測方法及其檢測試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發明提供一種綿羊UCP1等位基因型的檢測試劑盒，包括特異性引物對和綿羊UCP1等位基因標準DNA；特異性引物對為：上游引物：5’?AGATACAAGCGGAAGAGACAC?3’；下游引物：5’?TGAAGGGTTGGGTCTGTCA?3’；綿羊UCP1等位基因標準DNA為序列表中SEQ ID No.1?3。本發明還提供一種綿羊UCP1等位基因型的檢測方法。本發明的檢測方法對綿羊UCP1不同等位基因型與綿羊胴體脂肪含量性狀進行關聯分析，研究表明綿羊UCP1等位基因型對綿羊群體的胴體脂肪含量性狀具有顯著影響（P<0.05）。因此，綿羊UCP1基因能夠作為提高綿羊胴體脂肪含量性狀的分子標記。
【專利說明】
-種綿羊UCP1等位基因型的檢測方法及其檢測試劑盒
技術領域
[0001] 本發明設及基因等位基因的檢測與鑒定，具體設及一種綿羊UCPl等位基因型的檢 測方法及其檢測試劑盒。
【背景技術】
[0002] 我國是養羊大國，羊飼養量位居世界首位，隨著近年來世界養羊格局的變化，肉羊 生產逐漸成為主流，但是國內肉羊群體產肉效率較低，其生產遠不能滿足國內消費對高質 量羊肉產品的需求。加速改良綿羊肉用性狀，提高羊肉產品質量，已成為綿羊選育工作中亟 待解決的問題。脂肪含量是影響肉嫩度的關鍵因素之一。肉的脂肪特征包括禍體脂肪含量、 背腰厚度、板油率、花油率、IMF和肌間脂肪。禍體脂肪含量是研究脂肪對肉嫩度影響的主要 表型指標。
[0003] 禍體肉質性狀與很多經濟性狀或生產性狀相關聯，例如增加肉的嫩度需要選擇禍 體含脂肪量高的個體，但禍體的脂肪量增加意味著瘦肉率的下降和飼料轉化率降低，因為 和機體沉積蛋白相比，沉積相同重量的脂肪需要更多的能量，并且在能量轉化為脂肪的過 程中能量利用率低于轉化為蛋白質的利用率。W傳統的表型選擇提高肉質將是一個漫長復 雜的過程。另一方面，和歐美國家相比，我國優質肉用綿羊的培育起步晚，相對落后，如何有 效利用我國現有的優良綿羊種質資源，提高綿羊的肉質性狀是一個緊迫的問題。解決運些 問題的關鍵是在保存現有優良綿羊遺傳資源的同時，尋求一種相對快速有效的育種手段提 高綿羊肉質性狀。利用和進行分子標記輔助育種是比較實際和可行的技術方法。
[0004]羊肉禍體脂肪含量性狀作為復雜的數量性狀(quantitative化ait,QT)，其變異 由多基因控制，受遺傳和環境的共同影響。此外，大部分數量性狀表型變異，除了受微效多 基因控制外，還受一個或多個能對其產生較大效應的主效基因 (major gene)的影響。通過 傳統的表型選擇提高肉質性狀可能是漫長而低效的選種選育過程，隨著現代生物技術的發 展W及分子育種理論的不斷豐富使我們直接利用分子標記輔助選育成為可能。因此，尋找 和研究運些主效基因，是提高綿羊肉用性能的有效途徑之一。
[0005] 解偶聯蛋白 Uuncoupling protein 1，UCP1)是褐色脂肪組織（brown adipose tissue,BAT)存在的標志基因。褐色脂肪細胞中含有大量的線粒體，UCPl蛋白大量存在于線 粒體內膜上。通過質子漏的作用，UCPl蛋白消耗一部分氧化憐酸化過程中產生的質子濃度 梯度，使=憐酸腺巧的合成量降低，能量轉而W熱的形式被釋放。因此，作為一種天然耗能 型脂肪，褐色脂肪對于維持體溫和能量平衡起重要作用。
[0006] UCPl基因與脂肪代謝、能量平衡有著密切的聯系。初生黑羊脂肪組織中UCPl基因 的表達水平對黑羊出生后的成活率起重要作用。有關UCPl基因單核巧酸多態性（single nucleotide polymor曲ism，SNP)的研究表明，啟動子區-3826A>G和-1766A>G，外顯子2的 Ala64Thr和外顯子5的Met229Leu及內含子4的208T>G的突變與人的體重、身體質量指數 (body mass index,BMI)和腰臀圍比、腰圍與身高比例、體脂重、脂肪率、腹部皮下脂肪和腹 部內臟脂肪重，W及n型糖尿病的患病幾率等存在顯著關聯。
[0007]前人研究綿羊UCPl基因主要集中在組織表達特征研究，但關于UCPl對禍體脂肪沉 積的研究還不多，同時針對UCPl基因對綿羊禍體脂肪含量的相關研究更少。
【發明內容】
[000引本發明解決的技術問題在于提供一種檢測綿羊UCPl等位基因的方法，尋找與經濟 性狀關聯的等位基因型作為分子標記，W加快具有優質禍體脂肪含量性狀綿羊種群的建 立。
[0009]本發明通過W下技術方案來實現： 本發明提供一種綿羊UCPl等位基因型的檢測試劑盒，所述試劑盒包括特異性引物對和 綿羊UCP1等位基因標準DNA; 所述特異性引物對為： 上游引物：5 ' -AGATACAAGCGGAAGAGACAC-3 ' ； 下游引物：5 ' -TGAAGGGTTGGGTCTGTCA-3 ' ； 所述綿羊UCPl等位基因標準DNA為序列表中SEQ ID No. 1-3。
[0010]本發明還提供一種綿羊UCPl等位基因型的檢現巧法，步驟如下： (1) 設計特異性引物對： 上游引物：5 ' -AGATACAAGCGGAAGAGACAC-3 ' ； 下游引物：5 ' -TGAAGGGTTGGGTCTGTCA-3 ' ； (2) 對待測樣本進行PCR擴增； (3) 用變性劑處理PCR擴增產物后，對變性后的擴增片段和綿羊UCPl等位基因標準DNA 樣本同步進行SSCP電泳，根據標準DNA樣本電泳結果判定待測樣本的UCPl等位基因型;所述 綿羊UCPl等位基因標準DNA為序列表中SEQ ID No. 1-3。
[001。 作為優選，步驟(2)中所述PCR擴增反應程序為:94°C預變性5min，94°C變性30s、退 火溫度60°C 30s、72°C延伸Imin，循環35次，72°C延伸5min，4°C保存。
[0012] 本發明還提供一種綿羊禍體脂肪含量性狀的分子標記輔助篩選方法，首先鑒定待 測樣本的UCPl等位基因型，然后對結果進行判定:等位基因型為UCP1*B時，綿羊禍體脂肪含 量性狀為優質；等位基因型為UCP1*A時，綿羊禍體脂肪含量性狀為合格；等位基因型為 UCP1*C時，綿羊禍體脂肪含量性狀為低劣。
[0013] 作為優選，所述鑒定待測樣本的UCPl等位基因型的方法為： (1) 設計特異性引物對： 上游引物：5 ' -AGATACAAGCGGAAGAGACAC-3 ' ； 下游引物：5 ' -TGAAGGGTTGGGTCTGTCA-3 ' ； (2) 對待測樣本進行PCR擴增； (3) 用變性劑處理PCR擴增產物后，對變性后的擴增片段和標準DNA樣本同步進行SSCP 電泳，根據標準DNA樣本電泳結果判定待測樣本的UCPl等位基因型。
[0014] 作為優選，步驟(2)中所述PCR擴增反應程序為:94°C預變性5min，94°C變性30s、退 火溫度60°C 30s、72°C延伸Imin,循環35次，72°C延伸5min，4°C保存。
[0015] 本發明還提供優質禍體脂肪含量性狀綿羊種群的建立方法，首先鑒定待測樣本的 UCPl等位基因型，然后對結果進行篩選:將禍體脂肪含量性狀為UCP1*C的綿羊個體淘汰;將 禍體脂肪含量性狀基因型為UCPl地W及基因型為UCPl地C的個體留種進行擴繁。
[0016] 作為優選，所述鑒定待測樣本的UCPl等位基因型的方法為： (1) 設計特異性引物對： 上游引物：5 ' -AGATACAAGCGGAAGAGACAC-3 ' ； 下游引物：5 ' -TGAAGGGTTGGGTCTGTCA-3 ' ； (2) 對待測樣本進行PCR擴增； (3) 用變性劑處理PCR擴增產物后，對變性后的擴增片段和標準DNA樣本同步進行SSCP 電泳，根據標準DNA樣本電泳結果判定待測樣本的UCPl等位基因型。
[0017] 作為優選，步驟(2)中所述PCR擴增反應程序為:94°C預變性5min，94°C變性30s、退 火溫度60°C 30s、72°C延伸Imin,循環35次，72°C延伸5min，4°C保存。
[0018] 與現有技術相比，本發明具有W下技術效果： 本發明根據已公布綿羊UCPl基因 （GenBank Accession No. JN604985.1)的序列設計 引物，W綿羊的基因組DNA為模板，進行PCR擴增，通過對擴增產物的SSCP聚丙締酷胺凝膠電 泳W及測序分析發現在綿羊UCPl基因啟動子區存在多態性與不同的等位基因型。
[0019] 針對上述綿羊UCPl基因的多態性與等位基因型，本發明還公開了基于SSCP的等位 基因辨型和檢測方法，進行PCR擴增后，用變性劑處理待測樣本和標準DNA樣本，進行SSCP聚 丙締酷胺凝膠電泳，通過與標準DNA帶型比對獲得待測樣本的等位基因型，能夠簡單、快速、 低成本、精確地檢測綿羊UCPl基因的等位基因型。
[0020] 本發明的檢測方法為綿羊UCPl不同等位基因型與綿羊禍體脂肪含量性狀進行關 聯分析，研究表明綿羊UCPl等位基因型對綿羊群體的禍體脂肪含量性狀具有顯著影響(P< 0.05)。W上研究表明，綿羊UCPl基因能夠作為提高綿羊禍體脂肪含量性狀的分子標記，W 便用于綿羊禍體脂肪含量性狀的分子標記輔助選擇，快速建立具有優質肉用性狀的遺傳資 源綿羊群體。
【附圖說明】
[0021] 附圖用來提供對本發明的進一步理解，并且構成說明書的一部分，與本發明的實 施例一起用于解釋本發明，并不構成對本發明的限制。在附圖中： 圖1為綿羊禍體脂肪含量性狀特異主效基因等位基因 SSCP帶型圖。
【具體實施方式】
[0022] W下的實施例便于更好地理解本發明，但并不限定本發明。下述實施例中的實驗 方法，如無特殊說明，均為常規方法。下述實施例中所用的試驗材料，如無特殊說明，均為市 售。
[0023] 實施例1 一種用于綿羊禍體脂肪含量性狀檢測的PCR-SSCP試劑盒 本發明的試劑盒包括： 1、 特異引物對： 上游引物：5 ' -AGATACAAGCGGAAGAGACAC-3 ' ； 下游引物：5 ' -TGAAGGGTTGGGTCTGTCA-3 ' ； 2、 生化試劑： 化qDNA聚合酶;滅菌超純水； 內含MgCl2、dNTPs的5XBuffer或者為 10XPCR緩沖液、MgCl2和dNTP。
[0024] 注意事項： (1 )DNA的提取可依據不同廠家的全血DNA提取試劑盒要求提取，但需保證DNA的純度， 若提取效果不佳，需要純化后再進行后續的試驗； (2)反應體系和反應程序可W依據不同的廠家產品要求來操作，但要保證擴增的特異 性和擴增產物的濃度，一面影響后續的試驗結果。
[0025] 實施例2篩選與地方綿羊群體肌內脂肪性狀顯著相關DNA分子標記的方法 本發明首先根據NCBI公布的綿羊基因序列(GenBank Accession No. JN604985.1)設 計引物，W綿羊基因組DNA為模板，進行PCR擴增，通過對擴增產物的SSCP聚丙締酷胺凝膠電 泳W及測序分析發現在綿羊UCPl基因啟動子區存在多態性與不同的等位基因型；其次，對 待測群體進行等位基因型的PCR-SSCP檢測;最后，根據在群體中檢測到的等位基因型，進行 群體遺傳統計分析和禍體脂肪含量性狀的關聯分析，篩選出與綿羊肌內脂肪性狀密切相關 的分子標記。
[0026] 用于選育地方綿羊群體肌內脂肪性狀的分子標記方法，利用PCR-SSCP技術篩選與 地方綿羊群體肌內脂肪性狀顯著相關DNA分子標記的方法，具體內容如下： 一、基因組DNA提取 采集待測綿羊頸靜脈血液5ml，構祿酸鋼抗凝，-20°C保存； 參照《分子克隆實驗指南》，用酪氯仿抽提法提取基因組DNA，-2(TC保存。
[0027] 配制1%瓊脂糖凝膠:瓊脂糖Ig,溶于100mL的0.5XTBE，微波爐加熱至充分溶解，待 降至室溫后倒入插有梳子的膠槽內，冷卻凝固后待用。
[0028] 利用配制的1%瓊脂糖凝膠進行電泳檢測，電壓100V，電流50mA，電泳30分鐘。經漠 化已錠染色15分鐘后，于凝膠成像儀紫外燈下照射，觀察條帶的大小和亮度，判斷DNA的提 取質量。
[0029] 二、PCR 擴增 (I)PCR擴增用引物 特異性擴增UCPl基因，所用引物對P的序列分別為： 引物P的上游引物序列5 '-AGATACAAGCGGAAGAGACAC-3 ' ； 引物P的下游引物序列5 ' -TGAAGGGTTGGGTCTGTCA-3 ' ； 擴增片段大小為35化P。
[0030] (2)PCR擴增反應體系參見表1。
[0031] 表1 PCR擴增反應體系
上述特異等位基因擴增引物的PCR反應條件為:94 °C預變性5min，94 °C變性30 s、退火溫 度60°C 30s、72°C延伸Imin，循環35次，72°C延伸5min，4°C保存。
[0032] 特異性擴增的兩組PCR產物均由1%瓊脂糖凝膠電泳檢測，電壓100V，電泳30min，經 漠化已錠邸染色15min后，于Bio-RAD凝膠成像儀紫外燈下照射，觀察擴增條帶的大小和亮 度，判斷PCR產物擴增質量。
[0033] S、SSCP檢測與待測樣本的辨型 (1) 14%非變性聚丙締酷胺凝膠的配制 25ml 14%非變性聚丙締酷胺凝膠的配制方法:40%丙締酷胺溶液8.75ml、10 X T肥溶液 1.25ml，10%APS溶液15化1，TEM抓溶液13.64iU，蒸饋水14.84ml。攬拌均勻后勻速灌入制膠 器，并插入梳子，待膠凝固后，緩緩拔出梳子。
[0034] (2)PCR擴增產物和標準DNA樣本變性 取化1的PCR產物，加入7iil變性緩沖液，95%甲酯胺、lOmmol/L抓TA、0.05%漠酪蘭、 0.05%二甲苯青，瞬時離屯、后，在PCR儀中98°C變性lOmin，取出后立即置于冰上，IOmin后全 部上樣。
[00巧](3)SSCP聚丙締酷胺凝膠電泳 將適量0.5 X T邸緩沖液加入上下槽，用注射器將產生的氣泡趕出，并沖洗點樣孔;按正 負極合上電泳槽蓋，預電泳30min后，用微量進樣器吸取變性后的PCR產物加入點樣孔;點樣 完成后，在電壓250V，溫度15°C下電泳1她。
[0036] (4)染色、顯色： 從電泳槽中取出凝膠，用蒸饋水漂洗2次后，加入染色液(0.1%硝酸銀)250ml，放于搖床 避光輕輕搖15min，倒出染色液； 加入顯色液(2%氨氧化鋼+0.1%甲醒)250ml，浸沒凝膠，邊搖邊觀察，直到凝膠上顯現電 泳帶;倒出顯色液，迅速用去離子水沖洗2-3次，拍照。
[0037] 將綿羊UCPl等位基因標準DNA與待檢測DNA雙鏈樣本同步進行SSCP電泳，標樣DNA 共有=個等位基因，其核巧酸序列分別為： UCP1*A 標準 DNA: 曰g曰t曰C曰曰gcgg曰曰g曰g曰C曰C曰C曰cctttgtcttttg曰tg曰g曰gg曰曰tctgcg曰曰tetgcttt曰曰曰曰CC曰C曰t C曰邑曰t邑邑曰曰CC曰Ct邑曰邑曰曰曰邑曰C曰曰t邑C曰C曰邑邑邑tt邑邑t邑曰邑tt邑邑邑tt邑t邑邑邑tt邑邑邑邑曰tt曰tcc曰邑tt邑曰t曰邑C gattcaccttttatgcattataacgaacattcccaatctgcttagccatcatcctcacaacctaataacttcaccac agctgcactctctaaggtgaccaattatgttagagccaaatccaatagttttctttgtttttattctcttttgacat tttttctaaacattacagtatgactacttgacagacccaacccttcaa UCPl地標準DNA: 過g過t過C過過gcgg過過g過g過C過C過C過cctttgtcttttg過tg過g過gg過過tctgcg過過t過tgcttt過過過過CC過C過t cagatggaaccactgagaaagacaatgcacagggttggtgagttgggttgtgggttggggattatccagttgatagc gattcaccttttatgcattataacgaacattcccaatctgcttagccatcatcctcataacctaataacttcaccac agctgcactctctaaggtgaccaattatgttagagccaaatccaatagttttctttgtttttattctcttttgacat tttttctaaacattacagtatgactacttgacagacccaacccttcaa UCP1*C 標準 DNA: 過g過t過C過過gcgg過過g過g過C過C過C過cctttgtcttttg過tg過g過gg過過tctgcg過過t過tgcttt過過過過CC過CSt cagatggaaccactgagaaagacaatgcacagggttggtgagttgggttgtgggttggggattatccagttgatagc gattcaccttttatgcattataacgaacattcccaatctgcttagccatcatcctcataacctaataacttcaccac agctgcactctctaaagtgaccaattatgttagagccaaatccaatagttttctttgtttttattctcttttgacat tttttctaaacattacagtatgactacttgacagacccaacccttcaa 綿羊UCPl等位基因標準DNA樣本的核巧酸序列與待檢樣本的等位基因在序列上完全相 同，等位基因標準DNA樣本是制備的單鏈DNA，其唯一特點是標樣的單鏈DNA在SSCP電泳時條 帶非常清晰明亮，標樣DNA與待檢測DNA雙鏈樣本同步進行SSCP電泳時，可W用肉眼直接通 過比較標樣DNA帶型與待測DNA樣本帶型差別，W此來鑒定待測樣本的UCPl等位基因型，結 果參見附圖1。
[003引四、DNA測序 選取引物P擴增基因片段中不同基因型個體的PCR產物，送往上海生物工程技術有限責 任公司進行測序，利用DNAman軟件分析對比DNA序列，確定等位基因序列。
[0039]五、關聯分析 利用軟件SPSS19.0,對不同基因型間的禍體脂肪含量性狀進行統計分析，分析方法如 下： 應用一般線性混合模型(General Linear Mixed Model,GLMM)評估UCPl等位基因存 在/缺失對肌內脂肪性狀的影響。分別將存在定義為"r，缺失定義為"0"，考慮等位基因效 應，性別效應W及出生等級（單黑、雙黑等)為固定因素 (Fixed Factors),家系效應為隨機 因素，配合下列模型進行最小二乘方差分析， Yukng=l^+Mi+Gj+Wg+Ck+Xn+eijkng 其中：Yi化ng為禍體脂肪含量性狀;ii為性狀群體平均值;Mi為UCP1基因型，等位基因效 應;Gj為出生等級效應;Wg為性別效應;Ck為家系效應;Xn為互作效應;eijkng為隨機誤差效應。 P<0.05為具有顯著效應。
[0040] 根據上述分析鑒定結果，待測樣本帶型與UCP1*B帶型一致的W及待測樣本與 UCPl地C基因型一致的其綿羊禍體脂肪含量性狀為優質;待測樣本與UCP1*A標準DNA樣本帶 型一致的綿羊禍體脂肪含量性狀為合格;待測樣本帶型與UCP1*C標準DNA樣本帶型一致的 綿羊禍體脂肪含量性狀為低劣。
[0041] 根據上述分析，將禍體脂肪含量性狀UCP1*C個體淘汰;優質禍體脂肪含量性狀基 因型UCPl地W及基因型UCPl地C的個體留種進行擴繁，將形成一個優良的肉質性狀群體。
[0042] 結果如下表2和表3。
[0043] 表2不同尊位基因間的禍體脂肪含量性狀進行差異顯著性槍騎表
*顯著性水平在0.05，較顯著水平在0.05-0.10之間。
[0044] 表3不同基因型間的禍體脂肪含量性狀進行差異顯著性檢驗表
*顯著性水平在0.05，較顯著水平在0.05-0.10之間。
[0045] 實施例3優質禍體脂肪含量性狀綿羊種群的建立 應用實施例2中的方法鑒定待測樣本的UCPl等位基因型，然后對結果進行篩選:將禍體 脂肪含量性狀為UCP1*C的綿羊個體淘汰;將禍體脂肪含量性狀基因型為UCP1*BW及基因型 為UCPl地C的個體留種進行擴繁，建立優質禍體脂肪含量性狀綿羊種群。
[0046] 最后應說明的是：W上所述僅為本發明的優選實施例而已，并不用于限制本發明， 盡管參照前述實施例對本發明進行了詳細的說明，對于本領域的技術人員來說，其依然可 W對前述各實施例所記載的技術方案進行修改，或者對其中部分技術特征進行等同替換。 凡在本發明的精神和原則之內，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發明的 保護范圍之內。
【主權項】
1. 一種綿羊UCPl等位基因型的檢測試劑盒，其特征在于:所述試劑盒包括特異性引物 對和綿羊UCP1等位基因標準DNA; 所述特異性引物對為： 上游引物：5 ' -AGATACAAGCGGAAGAGACAC-3 ' ； 下游引物:5 ' -TGAAGGGTTGGGTCTGTCA-3 ' ； 所述綿羊UCPl等位基因標準DNA為序列表中SEQ ID No. 1-3。2. -種綿羊UCPl等位基因型的檢測方法，其特征在于:步驟如下：（1)設計特異性引物 對： 上游引物：5 ' -AGATACAAGCGGAAGAGACAC-3 ' ； 下游引物:5 ' -TGAAGGGTTGGGTCTGTCA-3 ' ； (2) 對待測樣本進行PCR擴增； (3) 用變性劑處理PCR擴增產物后，對變性后的擴增片段和綿羊UCPl等位基因標準DNA 樣本同步進行SSCP電泳，根據標準DNA樣本電泳結果判定待測樣本的UCPl等位基因型;所述 綿羊UCPl等位基因標準DNA為序列表中SEQ ID No. 1-3。3. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(2)中所述PCR擴增反應程序為:94°C 預變性5min，94°C變性30s、退火溫度60°C 30s、72°C延伸lmin，循環35次，72°C延伸5min，4 °C保存。4. 一種綿羊胴體脂肪含量性狀的分子標記輔助篩選方法，其特征在于:首先鑒定待測 樣本的UCPl等位基因型，然后對結果進行判定:等位基因型為UCP1*B時，綿羊胴體脂肪含量 性狀為優質;等位基因型為UCP1*A時，綿羊胴體脂肪含量性狀為合格;等位基因型為UCP1*C 時，綿羊胴體脂肪含量性狀為低劣。5. 根據權利要求4所述的方法，其特征在于:所述鑒定待測樣本的UCPl等位基因型的方 法為： (1) 設計特異性引物對： 上游引物：5 ' -AGATACAAGCGGAAGAGACAC-3 ' ； 下游引物:5 ' -TGAAGGGTTGGGTCTGTCA-3 ' ； (2) 對待測樣本進行PCR擴增； (3) 用變性劑處理PCR擴增產物后，對變性后的擴增片段和標準DNA樣本同步進行SSCP 電泳，根據標準DNA樣本電泳結果判定待測樣本的UCPl等位基因型。6. 根據權利要求5所述的方法，其特征在于：步驟(2)中所述PCR擴增反應程序為:94°C 預變性5min，94°C變性30s、退火溫度60°C 30s、72°C延伸lmin，循環35次，72°C延伸5min，4 °C保存。7. 優質胴體脂肪含量性狀綿羊種群的建立方法，其特征在于：首先鑒定待測樣本的 UCPl等位基因型，然后對結果進行篩選:將胴體脂肪含量性狀為UCP1*C的綿羊個體淘汰;將 胴體脂肪含量性狀基因型為UCP1*B以及基因型為UCP1*BC的個體留種進行擴繁。8. 根據權利要求7所述的方法，其特征在于:所述鑒定待測樣本的UCPl等位基因型的方 法為： (1)設計特異性引物對： 上游引物：5 ' -AGATACAAGCGGAAGAGACAC-3 ' ； 下游引物:5 ' -TGAAGGGTTGGGTCTGTCA-3 ' ； (2) 對待測樣本進行PCR擴增； (3) 用變性劑處理PCR擴增產物后，對變性后的擴增片段和標準DNA樣本同步進行SSCP 電泳，根據標準DNA樣本電泳結果判定待測樣本的UCPl等位基因型。9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于：步驟(2)中所述PCR擴增反應程序為:94°C 預變性5min，94°C變性30s、退火溫度60°C 30s、72°C延伸lmin，循環35次，72°C延伸5min，4 °C保存。
【文檔編號】C12Q1/68GK105925701SQ201610397209
【公開日】2016年9月7日
【申請日】2016年6月7日
【發明人】楊果, 段子淵, 趙凱, 張玉寶, 王小琪, 謝忠奎
【申請人】中國科學院寒區旱區環境與工程研究所