地奧司明的藥物組合物及其在生物醫藥中的應用
【專利摘要】本發明公開了地奧司明的藥物組合物及其在生物醫藥中的應用，本發明提供的地奧司明的藥物組合物中含有地奧司明和一種結構新穎的天然產物化合物(Ⅰ)，地奧司明、化合物(Ⅰ)單獨作用時，對阿霉素腎病綜合征具有治療作用；地奧司明和化合物(Ⅰ)聯合作用時，對阿霉素腎病綜合征的治療效果顯著提高，可以開發成治療阿霉素腎病綜合征的藥物，與現有技術相比具有突出的實質性特點和顯著的進步。
【專利說明】
地奧司明的藥物組合物及其在生物醫藥中的應用
技術領域
[0001] 本發明屬于生物醫藥領域，設及地奧司明的新用途，具體設及地奧司明的藥物組 合物及其在生物醫藥中的應用。
【背景技術】
[0002] 地奧司明具有維生素 P樣作用，能降低血管脆性及異常的通透性，又用于防治高血 壓及動脈硬化的輔助治療，用于治療毛細血管脆性效果較蘆下、澄皮巧要強，而且具有毒性 低的特點。臨床常用于治療持瘡和慢性靜脈功能不全等。
[0003] 迄今為止，尚未見地奧司明及其藥物組合物與阿霉素腎病綜合征的相關性報道。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的在于提供一種地奧司明的藥物組合物，該藥物組合物中含有地奧司 明和一種結構新穎的天然產物，地奧司明和該天然產物可W協同治療阿霉素腎病綜合征。
[0005] 本發明的上述目的是通過下面的技術方案得W實現的：
[0006] -種具有下述結構式的化合物(I)，
[000；
[000引一種地奧司明的藥物組合物，包括地奧司明、如權利要求1所述的化合物（I)和藥 學上可W接受的載體，制備成需要的劑型。
[0009] 進一步地，藥學上可W接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、 崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑。
[0010] 進一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、 膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。
[00川上述化合物（I)的制備方法，包含W下操作步驟：（a)將四季青粉碎，用65~75%乙 醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油酸、乙酸乙醋和水飽和的正下醇萃 取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b)步驟(a)中正下醇取物用 大孔樹脂除雜，先用20 %乙醇洗脫9個柱體積，再用65 %乙醇洗脫10個柱體積，收集65 %洗 脫液，減壓濃縮得65%乙醇洗脫濃縮物；（C)步驟(b)中65%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分 離，依次用體積比為65:1、35:1、15:1和7:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步 驟山）中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為12:1、7:1和1:1的二氯甲燒-甲醇梯 度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百 分濃度為58 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集11~15個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到 化合物(I)。
[0012] 進一步地，化合物(I)的制備方法中，所述大孔樹脂為DlOl型大孔吸附樹脂。
[0013] 上述化合物(I)在制備治療阿霉素腎病綜合征的藥物中的應用。
[0014] 上述地奧司明的藥物組合物在制備治療阿霉素腎病綜合征的藥物中的應用。
[0015] 本發明的優點:本發明提供的地奧司明的藥物組合物中含有地奧司明和一種結構 新穎的天然產物，地奧司明、化合物（I)單獨作用時，對阿霉素腎病綜合征具有治療作用;地 奧司明和化合物（I)聯合作用時，對阿霉素腎病綜合征的治療效果顯著提高，可W開發成治 療阿霉素腎病綜合征的藥物。
【具體實施方式】
[0016] 下面結合實施例進一步說明本發明的實質性內容，但并不W此限定本發明保護范 圍。
[0017] 實施例1:化合物(I)分離制備及結構確證
[0018] 分離方法：（a)將四季青(化g)粉碎，用70%乙醇熱回流提取（1化X3次），合并提取 液，濃縮至無醇味（3L)，依次用石油酸（化X3次）、乙酸乙醋（化X3次）和水飽和的正下醇 (化X3次）萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b)步驟(a)中 乙酸乙醋萃取物用DlOl型大孔樹脂除雜，先用20%乙醇洗脫9個柱體積，再用65%乙醇洗脫 10個柱體積，收集65%洗脫液，減壓濃縮得65%乙醇洗脫濃縮物；（C)步驟(b)中65%乙醇洗 脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為65:1(9個柱體積）、35:1(10個柱體積）、15:1(8 個柱體積)和7:1(8個柱體積)的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步驟k)中組分4 用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為12:1(6個柱體積）、7:1(7個柱體積)和1:1(6個柱 體積)的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的 反相硅膠分離，用體積百分濃度為58 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集11~15個柱體積洗脫 液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(IKHPLC歸一化純度大于98% )。
[0019] 結構確證:HR-ESI-MS顯示[M+H]+為m/z 329.1826,結合核磁特征可得分子式為 Cl訊24化〇3，不飽和度為9。核磁共振氨譜數據SH(ppm，CDCb，500MHz): H-3 (3.23，m)，H-5 (3.95，m)，H-6a(2.38，dd，J=14.1，8.2Hz)，H-^(2.08，d，J=14.1Hz)，H-9(7.63，d，J = 8.2Hz)，H-10(7.16，td，J = 8.2,2.3Hz)，H-ll(7.37，td J = 8.2,2.3Hz)，H-12(6.88，d J = 2.3Hz)，H-14a(1.87，ddd，J=14.2,8.3,3.2Hz)，H-14b(1.62，ddd，J=14.2,8.3,5.3Hz)，H- 15(2.86，m)，H-16(2.42，m)，H-17(9.85，br，s)，H-18(1.29，dJ = 6.1Hz)，H-19(3.90，m)，H- 20a( 1.72，m)，H-20b( 1.77，m)，化-Me(3.19, s);核磁共振碳譜數據 Sc(ppm，CDCl3,125MHz): 182.8(C，2-C)，63.2(CH，3-C)，46.0(CH，5-C)，41.4(afe，6-C)，57.4(C，7-C)，129.3(C，8- C)，124.7(CH，9-C)，122.5(CH，10-C)，128.4(C，11-C)，108.3(CH，12-C)，144.7(CH，13-C)， 34.3(CH2，14-C)，12.5(CH，15-C)，55.7(CH，16-C)，204.3(CH，17-C)，24.5(Ol3，18-C)，65.3 (CH，19-C)，42.3(C此，20-C)，26.3(CH3，化-Me)。紅外波譜中在3375cm-i、3282cm-i、1644cm-i 吸收峰分別由該化合物中的徑基、NH、幾基產生，在1?-醒R譜中，Sc65.3，182.8，204.3信號 確認了徑基，內酷胺與幾基片段;且UV譜圖表明在213nm、258與286nm有紫外吸收，顯示該化 合物含有徑嗎I噪發色基團。I3C-NMR、DEPT和HSQC譜中顯示有19個碳信號，包括兩個甲基，S 個亞甲基，十個次甲基(一個醒基），W及四個季碳(一個幾基），W上功能結構再結合不飽和 數表明該化合物為四環結構。Ih-NMR譜顯示一組無取代徑嗎I噪質子信號SH-97.63(lH，d，J = 8.2化）、如-1〇7.16(1山1(1，1 = 8.2,2.3化），如-117.37(1山1(1，1 = 8.2,2.3化）與如-126.88(1山 d，J = 2.3Hz);-個醒基質子信號 ?-l79.85aH，br，s);-個甲基質子信號?-l8l.29(3H，d，J =6 . IHz，Me); -個N-C曲質子信號Sh3.19(3H，S，化-Me); S組亞甲基質子信號Sh-63 2.38 (巧，(1(1^=14.1，8.2化）與如-66 2.08(1山(1^=14.1化）、如-143 1.87(1山(1(1(1^=14.2， 8.3,3.2Hz)與SH-l4bl.62aH，ddd，J=14.2,8.3,5.3Hz)W及SH-20al.72(lH，m)與SH-20b 1.77(化111)。1化-醒時普、06?1'譜顯示該化合物中存在徑嗎|噪結構片段6。-2182.8(〇、知757.4 (C)、Sc-8l29.3(C)、Sc-9l24. T(CH)、Sc-i〇122.5(CH)、Sc-iil28.4(CH)、5。-12108.3(細）與扣- 13144.7(C)，一個N-甲基信號Sc26.3(C出，化-Me)，一個醒基信號Sc-17204.3(CH)，一個連氧次 甲基信號Sc-1965.3(C)。核磁數據表明該化合物為macroline類型徑嗎I噪生物堿類。在Ih-Ih COSY 中，H-3/H2-14/H-15/此-20/H-19/H3-18 與 H-5/H-16/H-15/出-20/H-19/H3-18W 及 H-16/ H-17的相關信號，結合HMBC譜中的H-17與C-15和C-16的相關信號W及HSOC譜中19-OH與C- 19的相關信號構建了該化合物中的部分結構，確認了醒基連接的位置(與C-16位相連）W及 連氧次甲基的連接方式。通過觀察選擇性NOE譜中H-9與H-15的相關信號，可W判斷螺環C-7 的相對構型為S型。綜合氨譜、碳譜、HMB幻普和NOESY譜，W及文獻關于相關類型核磁數據，可 基本確定該化合物如下所示，立體構型進一步通過ECD試驗確定，理論值與實驗值基本一 致。該化合物化學式及碳原子編號如下：
[0020]
1234 實施例2:藥理作用 2 本實施例使用阿霉素（14.5mg ? kg-i)按滲透累灌注要求填充，手術植入大鼠腹腔， 通過滲透壓恒釋阿霉素誘發腎病綜合征模型制備阿霉素腎病綜合征(NS)大鼠模型，觀察藥 物減少NS大鼠尿蛋白，降低大鼠血清尿素氮(BUN)、肌酢（SCr)等方面的抗阿霉素腎病綜合 征作用。 3 1、材料與方法 4 1.1 動物
[00巧]SPF級SD大鼠，雄性，體重180~200g，購自廣東省醫學實驗動物中屯、。所有大鼠均 行動活躍、毛發光澤，兩次尿蛋白定性試驗陰性(試紙條法）。
[0026] 1.2試劑與樣品
[0027] 地奧司明購自中國藥品生物制品檢定所。化合物（I)自制，制備方法見實施例1。鹽 酸阿霉素(深圳萬樂藥業有限公司），氯化鋼(廣東總華化藥廠有限公司），水合氯醒(天津津 南區咸水沾工業園區），多項尿液檢測試紙條(干式化學法）（艾康生物科技有限公司），考馬 斯亮藍試劑盒(南京建成科技有限公司）,FITC巧光素標記兔抗大鼠 IgG(北京博奧森生物科 技有限公司）。
[002引1.3儀器
[0029] ALZET2004型滲透緩釋累(美國DURECT公司），代謝籠(蘇州市艾可林實驗動物器材 廠），T6新世紀紫外-可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司），TlOOO型電子天平 (常熟市雙杰測試儀器廠），化204型電子分析天平(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司）， 65-12manul動物無創血壓測試儀(美國IITC公司），全自動生化分析儀（日立-7180);冰凍切 片機化eicaCMlSOO);巧光倒置顯微鏡(NIK0NTE2000-S)。
[0030] 1.4大鼠分組及模型制備
[0031] 1.4.1阿霉素滲透累的準備4山6120040滲透累（0.25±5)化.11-1，28(1)。填充前稱 取各滲透累質量并記錄，按滲透累填充要求灌充阿霉素生理鹽水溶液（14.5mg ? kg-i)，稱量 灌注后各滲透累質量并記錄，W灌注前后滲透累質量的差值計算灌注體積，灌注體積小于 要求填充體積90%，抽空重新填充;填充合格的透累浸入37°C無菌生理鹽水中，備用。
[0032] 1.4.2滲透累的植入SD大鼠60只，雄性，適應性喂養1周，隨機挑選50只大鼠 W10% 水合氯醒麻醉，大鼠背部朝上固定，于右腎下方2cm位置開口并將阿霉素滲透累植入腎臟上 方，縫合肌肉層及皮層，術后每只老鼠肌注青霉素〇.2mL/只；另外10只，同樣操作，僅置入滲 透累同樣大小塑膠，假手術處置作為空白對照組。造模期間W尿蛋白試紙監測造模情況，造 模兩周后，收集24h尿液，考馬斯亮藍法測定尿蛋白含量，造模組和正常組比較無差異的予 W剔除，造模成功大鼠隨機分為空白對照組、模型對照組、陽性對照組(地塞米松組，50mg- kg-i)和地奧司明組(SOmg ? kg-i)、化合物（I)組(SOmg ? kg-i)、地奧司明與化合物（I)組合物 組【40mg ? kg-i地奧司明+40mg ? kg-i化合物（I)】。適應環境1周后，連續灌胃給藥7d，空白對 照組和模型對照組大鼠 ig等量的生理鹽水。
[0033] 1.524h尿蛋白測定實驗
[0034] 給藥4周后將各組大鼠裝入代謝籠收集24h尿液，考馬斯亮藍法定量測定24h尿蛋 白量，觀察各組大鼠尿蛋白變化。
[0(X3日]1.6血清指標測定實驗
[0036] 末次給藥后化，麻醉大鼠，腹主動脈取血，分離血清，全自動生化分析儀檢測血液 生化指標:尿素氮(BUN)和肌酢(化）。
[0037] 1.7統計學方法
[0038] 實驗數據用均數±標準差(x±s)表示，應用SPSS18.0版統計軟件進行單因素方差 分析和t檢驗，WP<0.05為差異有統計學意義。
[0039] 2、實驗結果
[0040] 2.1對NS模型大鼠對NS尿蛋白的影響
[0041] 與空白對照組比較，模型對照組大鼠24h尿蛋白顯著升高(P<0.01);與模型對照 組比較，地奧司明與化合物（I)組合物組和陽性對照組尿蛋白顯著降低(P<〇.01);與模型 對照組比較，地奧司明組、化合物（I)組尿蛋白降低(P<〇.05)。結果見表1。
[0042] 2.2對NS模型大鼠腎功能指標的影響
[0043] 與空白對照組比，模型對照組大鼠 BUN，化水平明顯上升(P<0.0 l)。與模型對照組 比，地奧司明與化合物（I)組合物組和陽性對照組大鼠 BUN，Cr水平明顯下降（P<0.01);與 模型對照組比，地奧司明組、化合物（I)組大鼠 BUN，化水平下降(P<0.05)。
[0044] 實驗結果見表1。
[0045] 表1對NS模型大鼠尿蛋白和腎功能指標的影響 「nn/i Al
[0047]腎病綜合征常見的病理組織學改變是局灶節段性腎炎、膜性腎病和微小病變，近 年來成人腎病綜合征中微小病變腎病綜合征及膜增殖性腎炎呈減少趨勢，而系膜性IgA腎 病呈增加趨勢。阿霉素誘發大鼠腎病綜合征是一個經典模型，阿霉素在體內相關酶的作用 下，使細胞膜和細胞器生物膜脂質過氧化，對腎小球和腎小管上皮產生直接毒性作用而產 生大量蛋白尿。
[004引滲透壓緩釋累技術是一種新型的恒速緩釋給藥方式，由藥物、滲透壓劑和半透膜 組成，通過滲透壓提供藥物釋放的驅動力，將所需試劑溶液按要求持續的、定量定點緩釋到 需要給藥的部位。滲透累植入實驗動物體內針對特定部位給藥（如脊髓、煩腔、肝臟、脾臟 等），已成功運送上百種藥劑，包括蛋白質、多膚、生長因子、抗生素、化療藥、激素、類固醇、 siRNA。在動物給藥、動物模型構建、藥物篩選等眾多領域發揮著不可替代的作用。本實驗采 用微滲累技術恒釋阿霉素誘發腎病綜合征模型，將阿霉素裝入微滲累里植入到大鼠腹腔， 對阿霉素進行長期恒速微量釋放，延長阿霉素在動物體內的作用時間，避免因注射引起的 濃度波動。
[0049] 上述結果表明，地奧司明、化合物（I)單獨作用時，對阿霉素腎病綜合征具有治療 作用;地奧司明和化合物（I)聯合作用時，對阿霉素腎病綜合征的治療效果顯著提高，可W 開發成治療阿霉素腎病綜合征的藥物。
[0050] 上述實施例的作用在于說明本發明的實質性內容，但并不W此限定本發明的保護 范圍。本領域的普通技術人員應當理解，可W對本發明的技術方案進行修改或者等同替換， 而不脫離本發明技術方案的實質和保護范圍。
【主權項】
1. 一種具有下述結構式的化合物α)，2. -種地奧司明的藥物組合物，其特征在于:包括地奧司明、如權利要求1所述的化合 物(I)和藥學上可以接受的載體，制備成需要的劑型。3. 根據權利要求2所述的地奧司明的藥物組合物，其特征在于:藥學上可以接受的載體 包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體 或潤滑劑。4. 根據權利要求2所述的地奧司明的藥物組合物，其特征在于:所述劑型包括片劑、膠 囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、 栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。5. 權利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含以下操作步驟：（a)將四 季青粉碎，用65~75%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙 酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b) 步驟(a)中正丁醇取物用大孔樹脂除雜，先用20%乙醇洗脫9個柱體積，再用65%乙醇洗脫 10個柱體積，收集65%洗脫液，減壓濃縮得65%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中65%乙醇洗 脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為65:1、35:1、15:1和7:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗 脫得到4個組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為12:1、7:1和 1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反 相硅膠分離，用體積百分濃度為58 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集11~15個柱體積洗脫液， 洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。6. 根據權利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為D101型 大孔吸附樹脂。7. 權利要求1所述的化合物（I)在制備治療阿霉素腎病綜合征的藥物中的應用。8. 權利要求2~4任一所述的藥物組合物在制備治療阿霉素腎病綜合征的藥物中的應 用。
【文檔編號】A61P13/12GK105924442SQ201610474671
【公開日】2016年9月7日
【申請日】2016年6月22日
【發明人】陳露
【申請人】陳露