更昔洛韋的藥物組合物及其在生物醫藥中的應用
【專利摘要】本發明公開了更昔洛韋的藥物組合物及其在生物醫藥中的應用，本發明提供的更昔洛韋的藥物組合物中含有更昔洛韋和一種結構新穎的天然產物化合物(Ⅰ)，更昔洛韋、化合物(Ⅰ)單獨作用時，可以治療前列腺增生；更昔洛韋和化合物(Ⅰ)聯合作用時，對前列腺增生的治療效果進一步提高，可以開發成治療前列腺增生的藥物，與現有技術相比具有突出的實質性特點和顯著的進步。
【專利說明】
更昔洛韋的藥物組合物及其在生物醫藥中的應用
技術領域
[0001] 本發明屬于生物醫藥領域，涉及更昔洛韋的新用途，具體涉及更昔洛韋的藥物組 合物及其在生物醫藥中的應用。
【背景技術】
[0002] 更昔洛韋臨床用于預防及治療免疫功能缺陷病人的巨細胞病毒感染，如艾滋病患 者，接受化療的腫瘤患者，使用免疫抑制劑的器官移植病人。
【發明內容】
[0003] 本發明的目的在于提供一種更昔洛韋的藥物組合物，該藥物組合物中含有更昔洛 韋和一種結構新穎的天然產物，更昔洛韋和該天然產物可以協同治療前列腺增生。
[0004] 本發明的上述目的是通過下面的技術方案得以實現的：
[0005] 一種具有下述結構式的化合物（I)，
[0006]
1234 -種更昔洛韋的藥物組合物，包括更昔洛韋、如權利要求1所述的化合物（I)和藥 學上可以接受的載體，制備成需要的劑型。 2 進一步地，藥學上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、 崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑。 3 進一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、 膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。 4 上述化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將絲瓜絡粉碎，用85~95%乙 醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃 取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中正丁醇取物用 大孔樹脂除雜，先用35 %乙醇洗脫8個柱體積，再用90 %乙醇洗脫12個柱體積，收集90 %洗 脫液，減壓濃縮得90%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中90%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分 離，依次用體積比為120:1、60:1、30:1和15:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d) 步驟(C)中組分3用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為40:1、30:1和10:1的二氯甲烷-甲 醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體 積百分濃度為85%的甲醇水溶液等度洗脫，收集14~18個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮 得到化合物(I)。
[0011] 進一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)用90%乙醇熱回流提取，合并提取 液。
[0012] 進一步地，化合物（I)的制備方法中，所述大孔樹脂為D101型大孔吸附樹脂。
[0013]進一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯進行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0014] 上述化合物(I)在制備治療前列腺增生的藥物中的應用。
[0015] 上述更昔洛韋的藥物組合物在制備治療前列腺增生的藥物中的應用。
[0016] 本發明的優點:本發明提供的更昔洛韋的藥物組合物中含有更昔洛韋和一種結構 新穎的天然產物，更昔洛韋和該天然產物單獨作用時，對前列腺增生具有治療作用;二者聯 合作用時，對前列腺增生的治療效果進一步提高，可以開發成治療前列腺增生的藥物。
【具體實施方式】
[0017] 下面結合實施例進一步說明本發明的實質性內容，但并不以此限定本發明保護范 圍。
[0018] 實施例1:化合物(I)分離制備及結構確證
[0019]分離方法：（a)將絲瓜絡(2kg)粉碎，用90 %乙醇熱回流提取（15L X 3次），合并提取 液，濃縮至無醇味（3L)，依次用石油醚（3L X 3次）、乙酸乙酯（3L X 3次）和水飽和的正丁醇 (3LX3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中 乙酸乙酯萃取物用D101型大孔樹脂除雜，先用35%乙醇洗脫8個柱體積，再用90%乙醇洗脫 12個柱體積，收集90%洗脫液，減壓濃縮得90%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中90%乙醇洗 脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為120:1 (11個柱體積）、60:1 (9個柱體積）、30:1 (9 個柱體積)和15:1 (8個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得至1」4個組分；（d)步驟(c)中組分 3用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為40:1(6個柱體積）、30:1(8個柱體積)和10:1(6個 柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合 的反相硅膠分離，用體積百分濃度為85 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集14~18個柱體積洗 脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物（I) (HPLC歸一化純度大于98% )。
[0020] 結構確證:冊431-]\^顯示[]\?^]+為111/2 533.2214，結合核磁特征可得分子式為 C29H34〇8，不飽和度為 13。核磁共振氫譜數據δΗ(ppm，DMS〇-d6，600MHz): H-1 (6 · 74，d，J = 10.0)，H-2(6.08，d，J = 9.9)，H-5(2.20，s)，H-9(2.61，s)，H-ll(4.15，d，J = 5.4)，H-12 (5.O3，s)，H-15(3.89，s)，H-16a(1.97，dd，J=13.6，11.2)，H-160(2.26，dd，J=13.9,6.6)， H-17(2.85，dd，J=11.0,6.6)，H-18(0.74，s)，H-19(1.51，s)，H-21(7.06，s)，H-22(6.02， br，s)，H-23(7.25，br，s)，H-28(1.49，s)，H-29(1.46，s)，H-30(1.32，s)，H-2,（2.21，m，2H)， H-3 '（ 1 · 04，t，J = 7 · 6);核磁共振碳譜數據δ。(ppm，DMS〇-d6，150MHz): 150 · 8 (CH，1 -C)，127 · 3 (CH，2-C)，203.2(C，3-C)，47.7(C，4-C)，59.4(CH，5-C)，187.2(C，6-C)，205.1(C，7-C)，34.5 (C，8-C)，42.7(CH，9-C)，40.1(C，10-C)，72.4(CH，11-C)，82.3(CH，12-C)，44.4(C，13-C)， 68.1(C，14-C)，56.2(CH，15-C)，31.1(CH2，16-C)，41.8(CH，17-C)，15.2(CH 3，18-C)，25.8 (CH3，19-C)，121.7(C，20-C)，140·1(CH，21-C)，110.7(CH，22-C)，142.6(CH，23-C)，26.7 (CH3,28-C)，21.1(CH3,29-C)，22.3(CH3,30-C)，173.8(C，r-C)，27.5(CH2,2'-C)，9.1(CH 3， 3'-C)<JR光譜表明該化合物含有羰基（17350^1)基團。4和13C-NMR譜表明，該化合物含有一 個〇，0-不飽和酮羰基[5冊.74(1!1，(1，1=10.0泡，!1-1)和6.08(1!1，(1，1 = 9.9取，!1-2);3 C150.8(01)，127.3(02)，203.2(03)]，兩個酮羰基[SC187.2(C-6)和205.1 (C-7)]，一個 環氧基團[5!13.89(1!1，8，!1-15)4068.1((：-14)和56.2((：-15)]，一個丙酰氧基側鏈[5!11.04 (3H，t，J = 7.6Hz，Me-3'WP2.21(2H，m，H-2'）；SC173.8(C-l'），27.5(C-2'WP9.1(C-3'）]， 以及一個6-取代呋喃環[5!17.06(1!1，8，!1-21)，6.02(1!1，1^，8，!1-22)和7.25(1!1，1^，8，!1-23) JC121.7(C_20)，140.1(021)，110.7(022)和 142.6(023)]。此外，還含有五個甲基信 號[3!10.74(3!1，8，]\^-18)，1.51(3!1，8，]\^-19)，1.49(3!1，8，]\^-28)，1.46(3!1，8，]\^-29)和 1.32 (3H，s，Me-30)]。上述數據表明該化合物為檸檬苦素類化合物。1Η」Η COSY譜中H-1與H-2的相關性，以及HMBC譜中Me-19與C-1，Η-1與C-3的相關性證實了 α，β-不飽和酮羰基結構。 HMBC譜中Η-12與C-Γ的相關性，以及4-? COSY譜中Me-3'與Η-2'的相關性表明丙酰氧基位 于C-12位上。HMBC譜中Me-18和Me-30與C-14,以及H-15與C-16的相關性表明C-14和C-15之 間存在一個環氧基團。通過核磁數據可知C-17位連有一個β-取代呋喃環;HMBC譜中，H-17與 C-20，C-21和C-22的相關性驗證了上述推論。ROESY譜中Η-12與Η-17,以及Η-17與Η-16β的相 關性，表明它們為β構型，貝IJ丙酰氧基側鏈為α構型;Η-9與Η-11，以及Η-9與Me-18很強的相關 性表明H-9、H-11和Me-18為α構型。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和ROESY譜，以及文獻關于相關類 型核磁數據，可基本確定該化合物如下所示，立體構型進一步通過ECD試驗確定，理論值與 實驗值基本一致。
[0021] 該化合物化學式及碳原子編號如下：
[0022]
[0023] 實施例2:藥理作用
[0024]本實施例采用昆明種小鼠去勢，連續3周sc丙酸睪酮5mg · kg4 · 0-1，造前列腺增 生模型，觀察藥物對前列腺增生的治療作用。
[0025] 1、材料與方法
[0026] 1.1動物
[0027]小鼠，昆明種，雄性，20~23g，80只，由河北省實驗動物中心提供。
[0028] 1.2試劑與樣品
[0029] 更昔洛韋購自中國藥品生物制品檢定所。化合物（I)自制，制備方法見實施例1。戊 巴比妥鈉，中國醫藥集團上海化學試劑公司；注射用青霉素鈉，華北制藥股份有限公司；丙 酸睪酮注射液，上海通用藥業股份有限公司；癃閉舒膠囊，石家莊科迪藥業有限公司；小鼠 睪酮(T)ELISA檢測試劑盒，北京科美東雅生物技術有限公司；小鼠雌二醇(E2)ELISA檢測試 劑盒，北京科美東雅生物技術有限公司。
[0030] 1.3儀器
[0031] FA(N)/JA(N)系列電子天平，上海民橋精密儀器有限公司；TGL-16G高速冷凍離心 機，上海安亭科學儀器廠；電動勻漿機，寧波新芝生物科技股份有限公司；Sn-895B型智能放 免γ測量儀:上海原子核研究所四環儀器一廠。
[0032] 1.4小鼠分組及模型制備
[0033]取體重20~23g雄性小鼠80只，隨機取10只作為空白對照組，做假手術處理；其余 小鼠造前列腺增生模型，小鼠稱重后腹腔注射2%戊巴比妥鈉(30mg · kg^1)麻醉，常規消毒 皮膚，于無菌條件下經陰囊摘除雙側睪丸，殘端處結扎，縫合皮膚，肌內注射青霉素20萬u· kg<;手術后第3天，取去勢成功、狀態良好的小鼠50只，隨機分為5組用于造前列腺增生模 型，分別為模型對照組、陽性對照組(癃閉舒膠囊混懸液450mg · kg<)和更昔洛韋組(80mg · kg"1)、化合物（I)組(80mg · kg<)、更昔洛韋與化合物（I)組合物組【40mg · kg<更昔洛韋+ 40mg · kg"1化合物⑴】，連續3周每日sc丙酸睪酮5mg · kg<(溶于大豆油)造模，空白組注射 等量溶媒。于造模型第1天，模型對照組ig生理鹽水；陽性對照組ig癃閉舒膠囊混懸液 (450mg · kg<);更昔洛韋組、化合物（I)組、更昔洛韋與化合物（I)組合物組ig上述劑量的藥 物，給藥體積均為20mL · kg'空白對照組灌服同體積的生理鹽水;每日給藥1次，連續給藥3 周。于末次給藥后2h(禁食不禁水12h)，小鼠稱重后眼眶取血，離心，分離血清，測血清中T， E2水平;然后脫頸椎處死小鼠，迅速取前列腺組織，對各組小鼠前列腺腺體進行立體計量學 測定，測定腺體的體密度。
[0034] 1.5血清中T的測定
[0035]用小鼠 TELISA檢測試劑盒測定血清中T的含量:試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶 聯免疫吸附試驗(ELISA)，往預先包被T抗體的包被微孔中，依次加入標本、對照品、HRP標記 的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍 色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的T呈正相關。用酶標儀在 450nm波長下測定吸光度(A)，計算樣品濃度，即得到小鼠血清中T的含量。
[0036] 1·6血清中E2的測定
[0037] 用小鼠 E2ELISA檢測試劑盒測定血清中雌二醇的含量:試劑盒采用雙抗體一步夾 心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)，往預先包被E2抗體的包被微孔中，依次加入標本、對照品、 HRP標記的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉 化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的E 2S正相關。用酶標 儀在450nm波長下測定A，計算樣品濃度，即得到小鼠血清中扮的含量。
[0038] 1.7前列腺腺體的體密度測定
[0039]采用通用立體計量學測定方法，應用測試格點分析法，計算腺體上的交叉點數與 參照系中的交叉點數的百分比，為該組織中腺體的體密度(Vv)。
[0040] 1.8統計學方法
[0041] 實驗數據采用SPSS13.0統計軟件處理。數據以i±s表示，計量資料組間比較采用單 因素方差分析。P<〇. 05有統計學意義。
[0042] 2、實驗結果
[0043] 2.1對小鼠前列腺增生模型血清T、E2水平的影響
[0044]與空白對照組比，模型組小鼠血清中T水平顯著升高（P<0.01)，E2水平顯著降低 (P<0.01)，說明造模成功。和模型對照組相比，更昔洛韋與化合物（I)組合物組及陽性對照 組小鼠血清中T水平顯著降低、E 2水平顯著升高(P<0.01);與模型對照組比，更昔洛韋組、 化合物(I)組小鼠血清中T水平降低、平升高(P<0.05)。結果見表1。
[0045] 2.2對前列腺增生模型小鼠前列腺腺體的體密度的影響
[0046]與空白對照組比，模型組前列腺腺體體密度顯著升高(P<0.01)，說明造前列腺增 生模型成功。與模型對照組比，更昔洛韋組、化合物（I)組小鼠前列腺腺體的體密度降低(P <0.05);和模型對照組相比，更昔洛韋與化合物（I)組合物組、陽性對照組小鼠前列腺腺體 的體密度顯著降低(P<〇. 01)。結果見表1。
[0047] 表1對小鼠前列腺增生模型血清睪酮、雌二醇水平及前列腺腺體密度的影響
[0048]
[0049] 本實驗采用小鼠去勢后皮下注射丙酸睪酮成功建立前列腺增生模型，小鼠去勢 后，前列腺迅速萎縮，再給予外源性雄激素，可造成動物體內性激素水平紊亂，使前列腺發 生增生。睪酮(T)是人體內主要的雄激素，在5α_還原酶作用下變為雙氫睪酮(DHT)，前列腺 內的DHT濃度增加可導致腺體增生。堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)通過DHT的作用增加釋 放，促前列腺間質增生，刺激前列腺上皮細胞生長的表皮細胞生長因子(EGF)與血漿中雄激 素的含量呈正相關，導致前列腺的增生，造成前列腺增生模型。雌雄激素比例的變化是前列 腺增生的關鍵誘因，血清中睪酮、雌二醇水平對反應前列腺增生狀況有重要意義。前列腺濕 重及前列腺指數是反映前列腺增生程度最客觀的指標之一，前列腺組織形態是確定是否增 生的關鍵;前列腺增生是慢性病，長期的病理變化可能會累及相關臟器。前列腺增生可能會 累及機體免疫功能，胸腺的組織形態學變化及其淋巴細胞的個數可有效反應前列腺增生狀 況。
[0050] 上述結果表明，更昔洛韋、化合物（I)單獨作用時，可以治療前列腺增生;更昔洛韋 和化合物（I)聯合作用時，對前列腺增生的治療效果進一步提高，可以開發成治療前列腺增 生的藥物。
[0051] 上述實施例的作用在于說明本發明的實質性內容，但并不以此限定本發明的保護 范圍。本領域的普通技術人員應當理解，可以對本發明的技術方案進行修改或者等同替換， 而不脫離本發明技術方案的實質和保護范圍。
【主權項】
1. 一種具有下述結構式的化合物（I)，2. -種更昔洛韋的藥物組合物，其特征在于:包括更昔洛韋、如權利要求1所述的化合 物(I)和藥學上可W接受的載體，制備成需要的劑型。3. 根據權利要求2所述的更昔洛韋的藥物組合物，其特征在于:藥學上可W接受的載體 包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體 或潤滑劑。4. 根據權利要求2所述的更昔洛韋的藥物組合物，其特征在于:所述劑型包括片劑、膠 囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、 栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。5. 權利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含W下操作步驟：（a)將絲 瓜絡粉碎，用85~95%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油酸、乙酸乙 醋和水飽和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b) 步驟(a)中正下醇取物用大孔樹脂除雜，先用35%乙醇洗脫8個柱體積，再用90%乙醇洗脫 12個柱體積，收集90%洗脫液，減壓濃縮得90%乙醇洗脫濃縮物；（C)步驟(b)中90%乙醇洗 脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為120:1、60:1、30:1和15:1的二氯甲燒-甲醇梯度 洗脫得到4個組分；（d)步驟(C)中組分3用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為40:1、30:1 和10:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合 的反相硅膠分離，用體積百分濃度為85 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集14~18個柱體積洗 脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。6. 根據權利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)用90%乙醇熱回 流提取，合并提取液。7. 根據權利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為DlOl型 大孔吸附樹脂。8. 根據權利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中用二氯甲燒代 替乙酸乙醋進行萃取，得到二氯甲燒萃取物。9. 權利要求1所述的化合物（I)在制備治療前列腺增生的藥物中的應用。10. 權利要求2~4任一所述的更昔洛韋的藥物組合物在制備治療前列腺增生的藥物中 的應用。
【文檔編號】A61K31/522GK105906685SQ201610335083
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2016年5月19日
【發明人】王昌榮
【申請人】王昌榮